8第八章重组讲义体的筛选
重组体筛选和鉴定PPT课件
标志基因筛选
免疫学筛选
利用载体上的标志基因对重组 体进行筛选，如利用lacZ基因进 行β-半乳糖苷酶活性检测。
利用抗体与目的蛋白的特异性 结合，通过免疫学方法对重组 体进行筛选。
荧光标记筛选
利用荧光标记的目的基因或蛋 白质进行筛选，通过荧光检测 仪检测荧光信号。
重组体在生物工程中的应用
生物制药
利用重组技术生产具有治疗价 值的重组蛋白、抗体或细胞因 子等生物药物。
基因工程菌构建
通过基因重组技术构建具有特 定功能的基因工程菌，用于工 业微生物发酵和物质转化。
农作物改良
通过基因重组技术改良农作物 性状，提高产量、抗逆性和品 质等。
重组体在医学中的应用
诊断试剂开发
剂的安全性。
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重组体的未来发展
重组体技术的发展趋势
基因编辑技术的进步
随着CRISPR等基因编辑技术的不断完善，重组体的构建将更加高 效和精确。
人工智能与大数据的结合
人工智能和大数据技术的应用将有助于提高重组体筛选和鉴定的准 确性和效率。
细胞工厂的构建
利用重组技术构建细胞工厂，实现微生物生产的高效转化，为生物 制药等领域提供有力支持体的环境安全性评估
评估重组体在环境中的存活、繁殖和扩散能力，以及可能对生态环 境造成的影响。
重组体的食品安全性评估
对重组体作为食品或食品添加剂的安全性进行评估，确保其食用安 全。
重组体的安全性检测方法
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01
03
生物学检测
通过生物学实验检测重组体的生物学特性、遗传稳定 性等。
环境适应性检测
检测重组体在环境中的存活、繁殖和扩散能力。
【有机化学讲义】第八章 立体化学
山东理工大学教案第次课教学课型：理论课□ 实验课□ 习题课□实践课□ 技能课□ 其它□主要教学内容（注明：* 重点 # 难点 ）：第八章 立体化学§8-1 手性和对映体*§8-2 旋光性和比旋光度*§8-2 含一个手性碳原子的化合物的对映异构*§8-4 构性表示法确定和标记*§8-5 含多个手法碳原子化合物的立体异构#§8-6 外消旋体的拆分(自学)§8-7 手性合成§8-8 环状化合物的立体异构教学目的要求：1．掌握偏振光、旋光性、比旋光度。
2．掌握手性、对映性、非对映性，内消旋体、外消旋体和不对称性等概念。
3．掌握fischer投影的规则和使用，以及fischer投影式和Newman式，楔形式的转换。
4．掌握含有一个和二个手性碳原子的手性分子的R/S标记法。
5．理解对称元素和对称操作，识别指定结构的对称元素。
6．理解对映异构体理化性质差异及外消旋体的化学拆分原理。
7．了解构型的D、L标记法及手性在自然界的意义。
8．了解手性合成、环状化合物的立体异构。
9．能运用立体化学知识解释烯烃亲电加成反应历程。
教学方法和教学手段：本课程以课堂讲授为主，结合必要的课堂讨论。
教学手段以板书和多媒体相结合。
讨论、思考题、作业：教材：1、①③⑤⑦；3；6、①②；9。
思考：7参考资料：1．邢其毅等，《基础有机化学》.高等教育出版社，19932．胡宏纹主编《有机化学》高等教育出版社19903．王积涛等《有机化学》 南开大学出版社 19934（美）莫里森、博伊德编《有机化学》（第二版），复旦大学化学系有机化学教研室译，科学出版社，1993年。
第八章立体化学对映异构现象的发现早在十九世纪就发现许多天然的有机化合物如樟脑、酒石酸等晶体有旋光性，而且即使溶解成溶液仍具有旋光性，这说明它们的旋光性不仅与晶体有关，而且与分子结构有关。
1848年巴斯德（L.Pasteur）在研究酒石酸钠铵的晶体时发现，没有旋光性的酒石酸钠铵在一定条件下结晶时可生成外形不同的两种晶体，它们之间的关系相当于右手和左手的关系，外形相似，但不能互相重叠。
生物氧化讲义(8)讲解
第八章生物氧化（6学时）第一节概述生物氧化的一般过程在葡萄糖的分解代谢中,1分子葡萄糖共生成10个NADH和2个FADH2.总的△Gˊ0=-2564.8KJ/mol在燃烧时,1分子葡萄糖可释放出的热 2870.23KJ/mol，因此可推算葡萄糖分子所释放自由能的90%贮存在还原型辅酶中.还原辅酶的再氧化在电子传递过程中,还原辅酶借助O2得以氧化的过程可用下式表示:NADH+H++1/2O2 →NAD++H2O △Gˊ0=-220.07KJ/mol →ATPFADH2 +1/2O2→ FAD+ H2O △Gˊ0=-181.58KJ/mol →ATP产能物质在不同的分解代谢过程中,都伴有代谢物的脱H和辅酶NAD+或FAD的还原.这些携带着H+和e 的还原型辅酶NADH和FADH2,最终将H+和e传递给氧时,都经历相同的一系列电子载体传递过程.第二节线粒体氧化体系（呼吸链）生物体内存在多种氧化体系，其中最重要的是存在与线粒体中线粒体氧化体系。
此外还有微粒体氧化体系、过氧化体氧化体系、细菌的生物氧化体系等。
一、线粒体氧化体系（呼吸链）在生物氧化过程中，代谢物的氢由脱氢酶激活，脱下来的氢经过几种传递体的传递，将电子传递到细胞色素体系，最后将电子传递给氧，活化的氢（H+）和活化的氧（O2-）结合成水，在这个过程中构成的传递链称为电子传递链，或呼吸链。
（一）呼吸链的组成构成呼吸链的成分有20多种。
大致可将它们分成五类。
即以NAD+或NADP+为辅酶的脱氢酶类；以FAD或FMN为辅基的黄素蛋白酶类；铁硫蛋白类；泛醌和细胞色素类。
依具体功能又可分为递氢体和递电子体。
1．递氢体在呼吸链中即可接受氢又可把所接受的氢传递给另一种物质的成分叫递氢体，包括：（1）NAD+NAD+是不需氧脱氢酶的辅酶。
它们分别可与不同的酶蛋白组成多种功能各异的不需氧脱氢酶。
辅酶分子能可逆地加氢和脱氢。
NAD++2H++2e-→NADH+H+（2）FAD和FMNFAD和FMN是黄素蛋白（又称黄素酶）类的辅基。
应税收--注册会计师考试辅导《税法》第八章讲义2
正保远程教育旗下品牌网站美国纽交所上市公司(NYSE:DL)中华会计网校会计人的网上家园注册会计师考试辅导《税法》第八章讲义2应税收二、确定增值额的扣除项目（一）对于新建房地产转让，可扣除：1.取得土地使用权所支付的金额，包括：（1）纳税人为取得土地使用权所支付的地价款；（2）纳税人在取得土地使用权时按国家统一规定缴纳的有关费用。
2.房地产开发成本：是指纳税人房地产开发项目实际发生的成本，包括6项：（1）土地征用及拆迁补偿费（2）前期工程费（3）建筑安装工程费（4）基础设施费（5）公共配套设施费（6）开发间接费用等地价款、开发成本，一般情况下，按实际发生额扣除。
另外，要注意和应税收入进行配比，地价款配比时，根据“总支出×开发的项目占用土地面积的比例×出售的部分所占建筑面积的比例”计算扣除项目。
【例题·综合题】（2011年节选）府城房地产开发公司为内资企业，公司于2008年1月～2011年2月开发“东丽家园”住宅项目，发生相关业务如下：（1）2008年1月通过竞拍获得一宗国有土地使用权，合同记载总价款17000万元，并规定2008年3月1日动工开发。
由于公司资金短缺，于2009年5月才开始动工。
因超过期限1年未进行开发建设，被政府相关部门按照规定征收土地受让总价款20%的土地闲置费。
（2）支付拆迁补偿费、前期工程费、基础设施费、公共配套设施费和间接开发费用合计2450万元。
（3）2010年4月开始销售，可售总面积为45000m2，截止2010年8月底销售面积为40500 m2，取得收入40500万元；尚余4500m2房屋未销售。
要求：（1）在计算土地增值税和企业所得税时，对缴纳的土地闲置费是否可以扣除？（2）计算2010年9月进行土增值税清算时可扣除的土地成本金额。
（3）计算2010年9月进行土增值税清算时可扣除的开发成本金额。
[答疑编号3941080104]『正确答案』（1）房地产开发企业逾期开发缴纳的土地闲置费在土地增值税税前不得扣除，但在企业所得税税前可以扣除。
第八章二元一次方程组讲义
二元一次方程组讲义题型一：二元一次方程（组）的概念①二元一次方程： 含有两个未知数，并且含有未知数项的次数都是1的方程。
注意：满足的四个条件：1、都是整式方程；2、只含有两个未知数；3、未知数的项最高次数都是一次；4、含有未知数的项的系数不为0.②二元一次方程组：含有两个未知数的两个一次方程所组成的一组方程叫二元一次方程组。
注意：1）满足的三个条件：1、每个方程都是一次方程；2、方程组具有两个未知数；3、每个方程均为整式方程。
2）方程组的各个方程中，相同字母必须代表同一数量，否则不能将两个方程合在一起，组成方程组。
①二元一次方程：例1、下列方程①x x 263=+，②3=xy ，③42=-x y ，④y y x 2410=-，⑤21=+y x ，⑥532=+xy x ，⑦03=+-z y x ，⑧1332=+y x 中，二元一次方程有 个。
例2、方程14-=-x y ax 是二元一次方程，则a 的取值范围为 .例3、已知方程()132-=++m y m mx 是关于y x ,的二元一次方程，则m 的取值范围是 . 例4.若关于x ，y 的方程021=+-+n m y x是二元一次方程，则n m +的和为 . 例5、若1342=+--b a y x 是关于x ，y 的二元一次方程，其中3≤+b a ，则=-b a ．②二元一次方程组：例1、下列方程组中，二元一次方程组的个数是 .（1）⎪⎩⎪⎨⎧=+=+21122y x y x ；（2）⎪⎩⎪⎨⎧=-=+211y x y x ；（3）⎪⎩⎪⎨⎧=-=211y x xy ；（4）⎩⎨⎧==+01x y x ；（5）⎪⎪⎩⎪⎪⎨⎧=+=+2111y x y x ；（6）⎩⎨⎧=+=+212z y y x ； （7）⎪⎩⎪⎨⎧=+=+9114yx y x ；（8）⎩⎨⎧=-=-1y x xy y x .；（9）()⎪⎩⎪⎨⎧-=-=+-2312y y x x y x 例5、若方程组()⎩⎨⎧=-=+-+-43332b a y x xy c x 是关于y x ,的二元一次方程组，则代数式c b a ++的值是 ． 题型二：二元一次方程（组）的解的概念①二元一次方程:注意：1)二元一次方程的每一个解，都是一对数值，而不是一个数值；2）二元一次方程的解使方程左右两边相等；3）一般情况下，一个二元一次方程有无数多组解，但并不是说任意一对数值都是它的解，当对解有限制条件时，二元一次方程的解的个数为有限个。
08第八章 平面向量【讲义】
第八章 平面向量一、基础知识定义1 既有大小又有方向的量，称为向量。
画图时用有向线段来表示，线段的长度表示向量的模。
向量的符号用两个大写字母上面加箭头，或一个小写字母上面加箭头表示。
书中用黑体表示向量，如a. |a|表示向量的模，模为零的向量称为零向量，规定零向量的方向是任意的。
零向量和零不同，模为1的向量称为单位向量。
定义2 方向相同或相反的向量称为平行向量（或共线向量），规定零向量与任意一个非零向量平行和结合律。
定理1 向量的运算，加法满足平行四边形法规，减法满足三角形法则。
加法和减法都满足交换律和结合律。
定理2 非零向量a, b 共线的充要条件是存在实数0，使得a= f≠λ.b λ定理3 平面向量的基本定理，若平面内的向量a, b 不共线，则对同一平面内任意向是c ，存在唯一一对实数x, y ，使得c=xa+yb ，其中a, b 称为一组基底。
定义3 向量的坐标，在直角坐标系中，取与x 轴，y 轴方向相同的两个单位向量i, j 作为基底，任取一个向量c ，由定理3可知存在唯一一组实数x, y ，使得c=xi+yi ，则（x, y ）叫做c 坐标。
定义4 向量的数量积，若非零向量a, b 的夹角为，则a, b 的数量积记作a ·b=|a|·|b|cos θθ=|a|·|b|cos<a, b>，也称内积，其中|b|cos 叫做b 在a 上的投影（注：投影可能为负值）。
θ定理4 平面向量的坐标运算：若a=(x 1, y 1), b=(x 2, y 2)， 1．a+b=(x 1+x 2, y 1+y 2), a-b=(x 1-x 2, y 1-y 2)， 2．λa=(λx 1, λy 1), a ·(b+c)=a ·b+a ·c ，3．a ·b=x 1x 2+y 1y 2, cos(a, b)=(a, b 0),222221212121yx y x y y x x +⋅++≠4. a//b x 1y 2=x 2y 1, a b x1x2+y 1y 2=0.⇔⊥⇔定义5 若点P 是直线P 1P 2上异于p 1，p 2的一点，则存在唯一实数λ，使，λ叫P 分21PP P P λ=21P P 所成的比，若O 为平面内任意一点，则。
七下数学第8章完整讲义.docx
第八章二元一次方程 二元一次方程组（1）1、 如果2/讪讥3严曲心10是一个二元一次方程，那么数d ・Z? = _______2、 己知x,y,z 满足方程组£一¥ + ：° 求x:y:z 的值是 _________ 。
3、 已知方程12（兀+1）=7©・1）,写出用Y 表示的x 的式子的 ___4 .方程x=3y=9的解是 ________ ・ 5.己知方程组却"不解方程组则x =, y =I3x = 2 y = 156 若(2x — 3y + 5尸 + |x + y — 2| =()则 x= __ Y= ____x+红97.己知二元一•次方程组＜ 4的解为x=a y 二b 则| a-b |的值二 _________-x + y = 17〔5二.解答题8.解下列二元一次方程组:x + y = 7 3(x + y)_7y = 79. 若(3x-y+l)2与|2x+3y —25|互为相反数,求(x-y)2的值.10. 已知a 、b 满足『d + 3b = 3a + 2b = ii •甲、乙两任同求方程，竜i”的整数解，甲正确的求出一个解为和n ,乙把：唸診一看成ax-by = l,求得另一个解为\X = l，试求出a, b 的值. y = 212. 根据下列语句，分别设适当的未知数，列出二元一次方程或方程组（不解答） （1）小明、小芳两人的年龄之和为27岁，且小明比小芳大1岁；(1)1213的值.（2）现有而额为100元和20元的人民币共40张，共计2000元;13•养猴场里的饲养员提了一筐桃来喂喉，如果他给每个猴子14个桃，还剩48个；如果每个猴子18个桃，就还差64个，请问：这个猴场养了多少只猴?饲养员提了多少个桃？4x_2・15•如图5所示，在课间活动屮，小英、小丽和小敏在操场上画出A 、〃两个区域，一起玩投沙包游戏.沙包落在A 区域所得分值与落在〃区域所得分值不同.当毎人各投沙包四次时，其落点和四次总分如图所示.请求出 小敏的四次总分.14•让我们來规定一种运算:=ad 一 be o 例如:3=2x5-3x4 = 10-12 = -2 5x 2再如：1 4按照这种运算的规定解题: 若X 、 y 同时满足x(-6)(-)9=13,3 (一 y)4=4, x 的值。
2018版数学(理)大复习讲义第八章立体几何与空间向量8
1.两条异面直线所成角的求法设a,b分别是两异面直线l1,l2的方向向量，则l1与l2所成的角θa与b的夹角β范围（0，错误!][0，π]求法cos θ＝错误!cos β＝错误!2。
直线与平面所成角的求法设直线l的方向向量为a，平面α的法向量为n，直线l与平面α所成的角为θ，a与n的夹角为β，则sin θ＝｜cos β|＝错误!.3.求二面角的大小（1）如图①，AB，CD分别是二面角α－l－β的两个面内与棱l垂直的直线，则二面角的大小θ＝〈错误!，错误!〉.（2）如图②③，n1，n2分别是二面角α－l－β的两个半平面α,β的法向量，则二面角的大小θ满足｜cos θ｜＝|cos<n1，n2〉|，二面角的平面角大小是向量n1与n2的夹角(或其补角)。
【知识拓展】利用空间向量求距离（供选用）(1）两点间的距离设点A(x1，y1，z1),点B（x2，y2，z2）,则AB＝｜错误!｜＝错误!。
(2）点到平面的距离如图所示，已知AB为平面α的一条斜线段，n为平面α的法向量，则B到平面α的距离为|错误!|＝错误!.【思考辨析】判断下列结论是否正确(请在括号中打“√”或“×”)(1）两直线的方向向量所成的角就是两条直线所成的角.(×)（2)直线的方向向量和平面的法向量所成的角就是直线与平面所成的角。
（×)（3)两个平面的法向量所成的角是这两个平面所成的角。
(×)(4)两异面直线夹角的范围是(0,错误!］，直线与平面所成角的范围是［0,错误!］，二面角的范围是［0，π］.(√)（5）直线l的方向向量与平面α的法向量夹角为120°,则l和α所成角为30°.(√)（6）若二面角α－a－β的两个半平面α，β的法向量n1，n2所成角为θ,则二面角α－a－β的大小是π－θ。
（×)1.（2016·南通模拟)已知两平面的法向量分别为m＝（0，1,0)，n＝(0,1,1），则两平面所成的二面角为________.答案45°或135°解析cos<m，n>＝错误!＝错误!＝错误!，即〈m，n>＝45°.∴两平面所成的二面角为45°或180°－45°＝135°。
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色的底物转变为有色的物质（或发光），再 通过比色测定有色物质的含量（或光强度）， 从而推测目标分子的含量。
待测基因 产物蛋白
一抗
待测基因 产物蛋白
一抗 二抗
酶
二抗
酶
无色的底物
有色的产物比ຫໍສະໝຸດ 观察2.ELISA的局限性 有效，但准确性稍差（主要取决于一抗 的特异性）。 必须与其他方法一起综合考虑。
对于不能被分泌到菌体外的蛋白质可先进行 原位溶菌处理（溶菌酶、原噬菌体诱发）。
三、酶联免疫吸附测定（ELISA）
Enzyme-linked immunosorbant assay
1. 原理：
一抗（primary antibody）: 与目标分子的特异结合。
二抗（secondary antibody）： 与一抗的特异性结合。
待测基因 产物蛋白
二抗
125I 标记的二 抗结合蛋白
固相支 持滤膜
待测基因 产物蛋白
一抗 125I标记的二抗
固相支 持滤膜
待测基因 产物蛋白
一抗 二抗
125I 标记的二抗 结合蛋白
2. 放射性抗体检测法过程
二、免疫沉淀检测法
检测分泌型产物。 1. 原理
抗原——抗体凝集反应。
2. 方法
把非放射性抗体加到平板培养基中， 当插入基因的表达产物被细菌分泌到 菌落周围时，就会与抗体反应形成 “沉淀圈”。
合成某一aa的基因 连接
酶切
重组
转化 缺少该aa合成 酶基因的菌株
载体
重组子
生长、获得
筛选
只缺少该aa的 基本培养基
二、核酸分子的物理检测法
原理： 碱基配对
杂交双方： 待测的核酸序列 插入片段基因制备的DNA或RNA探针
核酸杂交方法：
菌落印迹原位（in situ）杂交
斑点（dot）印迹杂交
Southern印迹杂交
对表达产物的检测。蛋白——蛋白“杂交” 利用抗体作为“探针”来检测转入受体 菌并且表达出相应的蛋白质的外源基因。
一、放射性抗体检测法
1. 抗体与产物的结合方式 根据第一抗体（一抗）和第二抗体（二抗） 的性质可分为几种作用方式：
固相支 持滤膜
一抗
待测基因 产物蛋白
125I标记的二抗
固相支 持滤膜
一抗
直接 筛选
重组子 的筛选
间接 筛选
DNA 鉴定
载体 筛选
重组子大小鉴定
重组子酶切图谱鉴定
DNA序列分析 同源性分析鉴定（原位杂交）
质粒载体的抗性标记筛选 噬菌体包装容量的正性筛选
质粒载体的α互补筛选（蓝白色斑
筛选法） 标记补救筛选
翻译产物 Western blotting
转录产物 其他方法
Northern blotting （报告基因等）
的靶序列灵敏度高 – 能准确反映组织细胞的相互关系及功能状态
实验步骤
Smad2 mRNA在系膜增生型IgA肾病肾小球的表达 原位杂交×200
肺腺癌β-cat mRNA 原位杂交法×400
2、斑点印迹杂交
★斑点印迹杂交与菌落原位杂交的原理相同 ★将RNA或DNA变性后直接点样于NC膜或尼龙 膜上 ★优点：简单、快速、可同时检测多个样品 ★常用于病毒核酸的定量检测
5、酶切电泳筛选法 原理 根据已知的外源DNA序列的限制性酶切 图谱，选择一两种内切酶切割质粒，电 泳后比较电泳结果（DNA带数和长度）
用合适的内切酶切下插入片断，再用其 它酶切这个片断，电泳后比较结果。
A
B
A或B
不同克隆的酶切结果
筛选A 过A程T T
TA AT
表型筛选加酶切筛选
第二节 免疫化学与核酸分析法
限制片段
DNA分子
琼脂糖电泳
带有DNA片段的凝胶
实 验
用缓冲液转移DNA 至膜（尼龙膜或硝酸 纤维素滤膜）上
步 骤
凝胶 滤膜
转膜
吸附有DNA 片段的膜
杂交、显影
凝胶
滤
玻 璃
纸板
白瓷盘
尼龙膜
滤纸
吸水纸
玻璃板
重物
吸水纸转膜
用途
用于分析混合DNA样品中是否存 在能与特定探针杂交的序列。
Southern杂交由于滤膜是从凝胶 上原位印迹而来，因而能够显示出与 探针杂交的DNA片段的大小。
8第八章重组体的 筛选
精品
将目的DNA片段与载体连接形 成重组子，然后通过各种方法将重 组子导入宿主细胞，得到所需要的 带有重组DNA的转化子，这是基因 工程的目的所在。
转化子：导入外源DNA后获得了新的遗传标志 的细菌细胞或其他受体细胞。
重组子的鉴定可以从直接和间接两个方 面分析，可以从DNA、RNA和蛋白质三个不 同水平进行鉴定。
Southern杂交定位kan抗性基因
4、直接凝胶电泳检测法
利用有插入片段的重组载体的分子量比 野生型载体分子量大。
从转化后的菌体克隆
中分离质粒，电泳、
比较其分子量。
重
分子量
组 克
Marker 隆
载体
实 验 步 骤
A
B
C
M
bp
—1534
— 994 — 695
— 515
— 377 — 237
都是通过一定的物理方法将菌落（噬菌斑） 或突起的DNA从平板或凝胶上转移到固体支持 物上，然后同液体中的探针进行杂交。
1、菌落印迹原位杂交
• 将标记的核酸探针与细胞或组织中的核 酸进行杂交，称为原位杂交。
• 特点
– 能在成分复杂的组织中进行单一细胞的研究 – 不需从组织或细胞中提取核酸，对含量极低
实验原理与步骤
提取
点样
加热
RNA或DNA
变性
NC膜
碱溶液
放射性探针
固定
杂交
X-底片
放射自显影
一定条件
显影、定影
标记斑点
检测
3、Southern 印迹杂交
★1975年，英国Southern创建 ★ DNA与DNA的杂交，即将DNA电泳、 转印到固相支持物上，用探针进行检测的 方法。
限制性酶切割
第一节 核酸分子的遗传学与物理检测法 一、遗传学检测法
1、根据载体表型特征的筛选
（1）抗药性标记插入失活筛选法
Kan
克 隆
抗 性 基 因
（2）β -半乳糖苷酶显色反应筛选法
蓝 白 菌 落
蓝白菌落
筛选白色菌落
2、根据插入基因遗传性状的筛选
重组体DNA分子转化到大肠杆菌受体细胞 之后，如果插入在载体分子上的外源基因能够 实现其功能性的表达，而且表达的产物能与大 肠杆菌菌株的营养缺陷突变形成互补，那么就 可以利用营养突变株进行筛选。
最好用单克隆抗体（monoclonal antibody）
四、Western blotting
① Western（转膜）
电泳胶里的蛋白质带可以用电转的方法， 转到膜上（硝酸纤维素膜、PVDF膜、 中性尼龙膜等）。