抗体偶联药物课件
抗体药物偶联物的制备研究PPT课件.
◆考察样品中加入不同硫酸铵含量对分析结果的影 响。加入不同比例2 M硫酸铵缓冲液(2.0 mM Na2HPO4-NaH2PO4磷酸缓冲液中加入2M硫酸铵调 pH 7.0)和PB(20 mM pH 7.0 Na2HPO4-NaH2PO4磷 酸缓冲液），最终浓度硫酸铵分别为0.5、0.8、 1.0、1.3、1.5M。 ◆考察流速为0.2、0.4、0.6、0.8、1mL/min时，系 统压力的变化，分析柱对抗体与药物偶联后生成 产物的情况，室温检测，检测波长为280nm，进样 体积为50pL，浓度1mg/mL，总蛋白进样量为50昭 。
2.3实验药品和仪器
实验药品及其规格
2.4.1、蛋白浓度测定
蛋白浓度采用BCA方法测定。具体步骤为：分别在96 孔板的每个孔中加入20pL 不同浓度（0.2mg/mL、 0.4mg/mL、0.6mg/mL、0.8mg/mL 和 1.0mg/mL)的蛋 白标准品(BSA标准溶液2mg/mL)和待测样品和空白对 照，然后加入200pL工作液（A液:B液=50:1)，将96孔 板放置于37C的恒温培养箱中反应0.5h。将酶标仪的 检测波长设为562nm，在该波长下检测每个孔中蛋白 质的吸光值。然后根据标准蛋白的浓度和测出的吸光 值，绘制蛋白质浓度标准曲线。从标准曲线计算得到 检测样品的浓度。
抗体偶联药物
抗体偶联药物（ADC的涅槃重生抗体偶联药物（antibody-drug conjugate, ADC ）是将抗体与细胞毒性药物连接起来，通过抗体的靶向作用将细胞毒药物靶向肿瘤，进而降低化疗中常见的药物非特异性的全身毒性。
抗体偶联药物（antibody-drug conjugate, ADC ）的研究可以追溯到1980s，，但是直到2000年，首个抗体偶联药物gemtuzumaboz ogamicin （商品名Mylotarg，Pfizer研发）才被FDA B准用于治疗急性粒细胞白血病，但由于偶联技术、靶向性、有效性等受限，完整的抗体偶联药物在血液不稳定，导致致死性毒性的产生，于2010年撤市。
这使得本就不明朗的ADC药物研究，更蒙上了一层阴影。
但是随着Takeda/Seattle Genetics 通过对原有技术的改进，利用自己的新型抗体偶联技术开发了brentuximabvedotin （SGN-35商品名Adcetris ，）新型抗体偶联药物，并与2011年被FDA批准用于治疗霍奇金淋巴瘤和系统性间变性大细胞淋巴瘤。
2013年抗体偶联药物再次取得突破，Ge nen tech/Immu noGen 联合开发的Ado-trastuzumabemtansine （T-DM1,商品名Kadcyla ）被FDA批准用于HER2阳性乳腺癌，这是首个针对实体瘤的抗体偶联药物。
随着这两个药物的研发成功，ADC药物再次以火热的状态进入人们的研究视野。
1、进入临床阶段ADC药物截至目前大概有30多种ADC药物进入临床开发阶段（表1），统计表中30 种药物针对适应症发现，其中仅有4种药物针对实体瘤。
主要原因：抗体难于透过毛细管内皮层和穿过肿瘤细胞外间隙到达实体瘤的深部。
而使用抗体片段，如Fab,制备分子量较小的偶联物，可能提高对细胞外间隙的穿透性，增加到达深部肿瘤细胞的药物量。
因此“抗体的小型化或适度的小型化将会是研制ADC药物的重要途径”。
抗体偶联药物的概念
抗体偶联药物的概念一、引言抗体偶联药物（ADCs）是一种新型的肿瘤治疗药物，其通过将单克隆抗体与毒素结合来实现对癌细胞的靶向杀灭。
近年来，ADCs已成为肿瘤治疗领域的一个热点话题，其在临床上的应用也越来越广泛。
二、抗体偶联药物的构成1. 单克隆抗体ADCs中最重要的组成部分是单克隆抗体。
单克隆抗体是一种能够特异性识别癌细胞表面标志物的蛋白质分子，其通过与癌细胞表面标志物结合而实现对癌细胞的靶向识别和杀灭。
2. 毒素毒素是ADCs中另一个重要组成部分。
毒素可以是化学合成的小分子化合物，也可以是天然存在于生物界中的毒素。
毒素在ADCs中起到了杀死癌细胞的作用。
3. 连接剂连接剂是将单克隆抗体和毒素连接起来的关键组成部分。
连接剂需要具有足够强度和稳定性，以确保ADCs在体内的稳定性和活性。
三、抗体偶联药物的制备ADCs的制备过程包括以下几个步骤：1. 单克隆抗体的筛选和制备2. 毒素的选择和修饰3. 连接剂的设计和合成4. ADCs的组装和纯化四、抗体偶联药物的作用机制ADCs通过将单克隆抗体与毒素结合，实现了对癌细胞的靶向杀灭。
具体来说，ADCs首先通过单克隆抗体识别并结合到癌细胞表面标志物上，然后将毒素释放到癌细胞内部，从而杀死癌细胞。
五、抗体偶联药物在临床上的应用ADCs已经被广泛应用于肿瘤治疗领域。
目前已经有多种ADCs被批准上市，并且还有许多正在进行中的临床试验。
ADCs在肿瘤治疗中具有以下优点：1. 靶向性强：ADCs能够特异性地识别并结合到癌细胞表面标志物上，从而实现对癌细胞的靶向杀灭。
2. 毒副作用小：ADCs的毒素只在癌细胞内释放，降低了对正常细胞的毒副作用。
3. 适应症广泛：由于ADCs能够特异性地识别不同类型的癌细胞表面标志物，因此适用于多种不同类型的肿瘤治疗。
六、抗体偶联药物的未来发展趋势随着对ADCs机制和应用的深入研究，未来ADCs在肿瘤治疗中将有更广泛的应用前景。
同时，ADCs也将面临一些挑战，如制备工艺和质量控制等方面。
ADCs药物的DAR
百泰派克生物科技
ADCs药物的DAR
抗体偶联药物（Antibody-Drug Conjugates，ADCs）是将具有高度靶向性的单克隆抗体与具有强效杀伤力的细胞毒素通过特定的偶联剂连接在一起的新型药物，对靶标细胞同时具有高度选择性和杀伤力，在癌症以及肿瘤等疾病的治疗中具有重要作用。
抗体偶联药物的制备一般是先将重组抗体与特殊的连接子结合形成抗体-偶联剂复
合物，再将其与化学药物——细胞毒素相连。
然而在这个过程中可能会由于连接不成功产生未偶联的裸抗和细胞毒素，或由于结合位点发生错配造成产品成分的不均一性，导致抗体偶联药物的药效和安全性得不到保证。
因此，在ADCs药物的生产
过程中必须对其质量进行严格的监控，药物抗体偶联比（Drug to antibody ratio，DAR）是评价ADCs药物的药效、清除率和安全性的重要指标，在保证ADCs药物的
生产工艺和产品质量方面发挥着至关重要的作用。
百泰派克生物科技使用Thermo公司最新推出的Obitrap Fusion Lumos质谱仪结合Nano-LC纳升色谱技术以及专业生物信息学分析团队，能快速、准确的为您提供专
业系统的ADCs药物DAR分析服务技术包裹，还可对ADC药物结构、药效和安全性
等进行全面评估，欢迎免费咨询。
抗体药物偶联物结构
抗体药物偶联物结构抗体药物偶联物（ADCs）是一种特殊的生物医药分子，由三个主要组成部分构成：靶向抗体、药物负载物和连接物。
靶向抗体是ADCs的关键组分，它能够特异性地结合到肿瘤细胞表面的抗原，将药物负载物精确地送到目标细胞，并释放药物以实现治疗效果。
药物负载物通常是具有细胞毒性的化学物质，可以杀死肿瘤细胞。
ADCs的结构可以分为线性结构和环状结构两类。
线性结构ADCs由药物负载物直接连接到抗体上，形成单一的连接点。
而环状结构ADCs是通过一个或多个架桥分子链接药物负载物和抗体，形成多个连接点。
这些连接点的位置可以是抗体上的氨基酸残基（如赖氨酸、丝氨酸、半胱氨酸等）、药物负载物上的官能团（如羧基、氨基等）或连接物上的官能团。
靶向抗体是ADCs的核心组成部分，它通常是一种单克隆抗体，具有对肿瘤细胞表面抗原的特异性结合能力。
这些抗原可以是肿瘤特异性抗原（TSAs）、肿瘤相关抗原（TRAs）或表达在肿瘤细胞表面的其他分子。
常用的抗体包括IgG1、IgG2、IgG4等，它们通过免疫系统的Fcγ受体介导吞噬作用，增强了ADCs的抗肿瘤作用。
药物负载物是ADCs的活性成分，它可以是各种细胞毒性药物，如紫杉醇类（Paclitaxel）、顺铂（Cisplatin）、毒蕈碱类（MMAE、DM4）等。
这些药物可以选择性地杀死目标细胞，减少对正常细胞的毒性作用。
此外，一些药物负载物还具有免疫调节作用，能够增强宿主免疫系统对肿瘤的免疫应答。
连接物是将抗体和药物负载物连接起来的分子。
它在ADCs中起到稳定药物负载物和抗体结构的作用，并能够在肿瘤细胞内部释放药物。
连接物可以使用非氨基酸的化学键（如烷基醚、硫醇醚等），以确保连接的稳定性和可逆性。
同时，连接物还必须具有足够的化学稳定性，以在体内维持ADCs的活性。
ADCs的研发和设计过程中需要考虑许多因素，例如靶向抗体的选择、药物负载物的适应性和连接物的稳定性。
近年来，ADCs在肿瘤治疗领域取得了重要的突破，如Brentuximab vedotin和Trastuzumab emtansine等已经成功上市并被广泛应用于临床。
抗体偶联药物SEC是什么
百泰派克生物科技
抗体偶联药物SEC是什么
抗体偶联药物（antibody-drug conjugate，ADC）是一种新型的生物药，是治疗肿瘤和癌症等疾病的有力武器，它由单克隆抗体和小分子细胞毒药物组成，将抗体的高度特异性和小分子药物的强杀伤性结合起来，有目的性的攻击肿瘤细胞，提高肿瘤药物靶向性的同时降低了药物的副作用，在临床治疗中具有重要意义。
SEC（Size Exclusion Chromatography）体积排阻色谱，或称为凝胶过滤色谱、凝胶渗透色谱，其根据待测物质的体积和质量差异导致的在色谱柱中的洗脱速度和时间差异实现待测物质的多种表征，如分子量、分子量分布和纯度等，SEC在表征蛋
白生物药的体积异构体中广泛应用。
抗体偶联药物SEC就是利用体积排阻色谱对ADC药物进行分析，以表征其关键质量属性如体积异构体等。
蛋白生物药在开发、
生产、运输和储存等过程中容易形成高分子量（HMW）聚集体和低分子量（LMW）
片段，这些体积异构体可能导致蛋白药物出现免疫原性反应、药代动力学或效价
差异等，因此需要对这些关键质量属性（CQA）进行表征，SEC 是分析ADC药物体
积异构体的标准技术。
百泰派克生物科技基于高分辨率色谱技术提供抗体偶联药物SEC分析一站式技术服务，多种不同性能的色谱柱可满足不同的检测需求，还可免费提供定制化检测方案，欢迎垂询！
相关服务：抗体偶联药物（ADCs）分析。
生物制药分析。
蛋白质纯度分析（分子筛/反相色谱）。
蛋白质结构鉴定。
抗体偶联药物基础知识
抗体偶联药物基础知识
抗体偶联药物（antibody-drug conjugates，简称ADCs）是一种结合了单克隆抗体和载药物的复合物。
其工作原理是通过特异性识别靶向细胞表面的抗原，将药物直接传递给目标细胞，从而提高药物的靶向性和疗效。
ADCs的结构通常由三部分组成：单克隆抗体、连接剂和药物。
单克隆抗体可以特异性地结合在肿瘤细胞表面的抗原上，从而使ADCs能够选择性地识别和结合目标细胞。
连接剂则用于将药物与抗体连接起来，常见的连接方式有化学偶联、放射性标记或基因工程技术等。
药物部分则是ADCs的主要疗效成分，常见的药物包括化疗药物、毒素、放射性物质等。
ADCs的优势在于提高了药物的靶向性和疗效，并减少了对正
常细胞的毒性。
相比传统化疗药物，ADCs可以更精确地靶向
肿瘤细胞，并释放药物以发挥治疗效应。
此外，ADCs还可以
通过抗体的FC端与免疫系统相互作用，促进免疫细胞介导的
抗肿瘤效应。
然而，ADCs也面临一些挑战和限制。
制备ADCs的过程相对
复杂，需要确保抗体、连接剂和药物之间的稳定性和正确配比，以及避免抗体的免疫原性。
在临床应用方面，ADCs可能面临
药物耐受性、药物代谢和排泄问题，以及药物达到肿瘤细胞内部的难题。
尽管存在一些挑战，ADCs仍然被广泛应用于肿瘤治疗领域，
并被认为是一种有潜力的治疗方法。
随着对ADCs的进一步研究和技术改进，相信其在肿瘤治疗中的应用前景将会更加广阔。
抗体药物偶联体在癌症治疗中的应用ppt课件
Catalogue：
1·抗体药物偶连体（ADCs）如何 进攻癌细胞 2·TARGET SELECTION其中 Expression profiling（表达性能分 析）是关键方面然后讲了 Immunohistochemistry（免疫蛋 白组化学）和 Flow cytometry （流细胞计数法）来做表达性能 分析都有缺点，然后又讲了 mRNA水平的表达性能分析被广 泛应用于靶点评估 3.Tumor Expression of Antigen （肿瘤抗原的表达）
Antibody Specific for a tumorassociated antign that has restricted expression on nomal cells.
Cytotoxic agent Designed to kill target cells when intemalized and released.
Linker Attaches the cytotoxic agent to the antibody.Newer linker systems are designed to be stable in circulation and release the cytotoxic agent inside targeted cells.
Drugs and linkers commonly used in ADCs. Conventional chemotherapeutics such as doxorubicin（阿霉素） were once used for ADCs but have been superseded for this purpose by more po
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药物分子
溶 解
药物
度 分子
• 必须位于细胞内,若ADC无法转 运至细胞内将严重影响药物的 有效性和毒性。在细胞外还可 能影响，药物解离后可能对旁 边的正常细胞有害。
药物分子
溶 解
药物
度 分子
药物的分子量较小，从而减少发生免疫原性的 风险；抗体的分子量也要很小，IgG抗体的分 子量约为150kD，毛细管内皮层和细胞外间隙 难以透过如此巨大的抗体或偶联分子，抗体的 分子量太小，会影响其在体内的半衰期。
要求
④有合适的内吞转运
途径
SUCCESS
THANK YOU
2019/9/9
（四）理想化的抗体
靶向功能，能够有效地将 细胞毒分子输送到靶细胞；
具有较低的免疫原性。 具有合适的连接位点，偶
联毒素后，不影响ADC的 稳定性、亲和力、內吞及 药效
④与靶细胞表面的抗原结合后，能够诱导细胞进行内 吞作用，进入胞内，最终进入溶酶体并导致细胞毒分 子在胞内的有效释放；（内化-流式细胞术检测；细 胞内化后定位检测-共聚焦显微镜） ⑤保持裸抗体全部或部分功能，如细胞介导的抗体依 赖性细胞毒作用（ADCC)、补体依赖性细胞毒作用 (CDC)，即裸抗体也是有效的药物。
药物分子
• 应在水性缓冲溶液中具有适 当的溶解度，以便于偶联抗 体
溶 解
药物
度 分子
药物分子
• 负载应在血浆中具有充 分的稳定性。
溶 解
药物
度 分子
美登素类化合物
1 作用机制：通过抑制 微管组装来抑制细胞的 分裂
2 DM1 临 床 研 究 发 现 ： 稳定、非裂解的硫醚键 连接子（MCC)具有高效 的疗效
抗体偶联药物
目录
定义 原理 对Ag、Ab、连接子和药物分子的要求 抗体的突变 几种ADC定点偶联方法的比较 连接方式 ADC偶联比的测定方法 上市的药品 前景 挑战
一、什么是ADC
二、原理
三、对抗体、药物、连接子、靶标和抗原的要求
药物分子
溶 解
药物
度 分子
药物分子
溶 药物
解 度
分子
因为IgG有限的肿瘤穿透能力、 低抗原表达性、内化效率不足 和连接子代谢，均可能使细胞 内的毒素浓度降低。通常为 IC50：0.01-0.1nmol/L
挑战
ADCs产业化制备工艺复杂，包括重组抗体制备、化学药 物与抗体的偶联反应、ADCs的制剂与质控等环节，任一环 节出现问题，都会影响其安全性和有效性。
抗体与药物 的偶联比不确 定，影响药物 的疗效
挑战
ADCs中连接臂、抗 体和药物三者的连接 效率和稳定性
④开发不同作用机 制的新型细胞毒素
⑤ADCs药物特殊 靶点的寻找
作用微管的ADC药物的缺陷
毒素主要在细 胞增殖过程中 发挥作用，对 其非分裂和静 息的细胞没有 作用
与分子的疏水性有 关（连接子也是疏 水性的：在血液或 代谢器官（肝脏、 肾脏）中意外释放 游离型毒素可穿透 细胞膜，并可能引 起严重的副作用
耐药肿瘤细胞可 能 会 限 制 ADC 的 活性（由药物转 运蛋白表达或活 性增加，加快疏 水性化合物外排 造成
SUCCESS
THANK YOU
2019/9/9
4.连接子的分子量和极性escription
of the sub contents
5、亲- D和es素cri和pt生ion物o素f t能he否su作b 为co连nte接nt臂s ？
理想化的抗原
①抗原大量特异性的表 达在靶细胞表面在正常 组织或细胞表面不表达 或少表达
③一定的内吞 速率
②抗原应尽量不分泌，因为 分泌型抗原可与血液循环中 抗体结合，从而导致与肿瘤 细胞结合的抗体减少
2.液质联用测定ADC药物的偶联比
利用Ab、连接臂和药物极性 的不同，选用合适的流动相， 使其彼此分开，然后分别流 入质谱仪，各样品被离子化 后，经质谱的质量分析器将 离子碎片按质量数分开，经 检测器得到质谱图，读出其 相对分子质量，进而测定其 偶联比。
八、上市ADC药品
九、前景与挑战
用于精确治疗疾 病，减少药物在体 内的毒副作用 用于肿瘤的治疗， 特别是后期，减少 对人体的伤害
药物直接连接到 肽连接子上，会 导致蛋白水解释 放出细胞毒素药 物的氨基酸加合 物，会降低细胞 毒活性
血液的pH高于溶酶体内的pH，溶
酶体内的蛋白水解酶在血液中的
活性很低，ADC在胞内被蛋白水解
酶水解，释放药物
加入间隔基，常用是
机制
双功能性对氨基苄醇 基团，他通过氨基与
肽连接，形成酰胺键
缺点 肽链接
目前开发带有负电荷α-磺酸基或极性短PEG的 高度水溶性亲水性连接子，以增加溶解性
连接子
1
4
- Description of the sub contents
1.在血浆中稳定，避免细胞毒素提前释
放损伤正常的组织或细胞
ption of the sub contents
2.当ADCs被内吞到靶细胞后，能够快
四、抗体的突变
缺点：偶联的药物分子数目不定、位置不定和各种产 物在体内的药物代谢动力学、药效、安全性等问题。
方法：抗体进行诱导突变，现有报道在抗体的特定部位 设计丙氨酸定点突变成半胱氨酸、引入非天然氨基酸、 酶法和二硫键改造法等，可以获得固定偶联比的ADC。
五、几种ADC定点偶联的方法比较
连接方式
2
速释放药物（非必须） -
Description of the sub contents
- Description of the sub contents
3.抗体的连接位点和连接位点的数量
要明确且合适
- Description of the sub contents - Description of the sub contents
而含胺细胞毒性药物
改进 侧通过氨基甲酸酯官
能团与连接子（PABC)
的苄基羟基相连。
应用
SGN-75(抗CD70，Val-Cit-MMAF）
七、ADC药物偶联比的测定方法
1、紫外可见分光光度法 抗体为蛋白质, 其含有苯环的 氨基酸在 280 nm有其特征性的 吸收峰；若药物有紫外吸收其 在特定的波长产生消光系数， 产生特征性的吸收峰。可以用 双波长发测定药物的偶联比。