大鼠取材方案
大鼠灌注固定取脑,解剖取材
9
大鼠脑组织取材步骤
1.剪开皮肤
10
2.用钩镊再眼眶处固定大鼠颅骨，用组织剪再颅骨和颈椎 连接处剪断
11
3.组织剪头部伸入枕骨大孔，尽量贴着骨头（不能插太深伤到脑组织）。
12
4.组织剪从枕骨大孔处伸入，朝向同侧眼眶方向，贴着骨 头剪，剪到眼眶
13
5.从大鼠眼眶之间剪断
14
6.左手持钩镊插入大鼠的眼眶固定颅 骨，用弯钳直接夹住枕骨大孔处的骨 头直接就掀起来了
6
1.多聚甲醛的配臵： 一般方法为：4％多聚甲醛PBS缓冲液配法：称取40g PFA溶于装 有500mlDEPC水的玻璃容器烧杯或烧瓶）中，持续加热磁力搅 拌至60～65℃，使成乳白色悬液。用1.0mol/L的NaOH值至7.4， 使呈清亮状（滴加），再加入约500ml PBS，充分混匀（在冰浴 或冷水浴中），可再检测一下pH，过滤后定容至1000ml，室温 或4℃保存备用。
3
必要性Байду номын сангаас
1.脑组织较软，且细胞成分不易保留，脑组织是较易软化的组织之一，血供
也较为丰富，所以最好是在取脑组织前用4％多聚甲醛灌注固。
2.经前固定后，取脑操作时，可减少脑组织损伤。
3.脑内血液都在，HE染色后，可去除红细胞背景影响
4
流程 麻醉 开胸 心尖向左心室穿针
剪开右心耳
4%多基甲醛固定
生理盐水冲洗
18
常见问题
19
1.灌注取脑不可用于Western blot及PCR的原因
多聚甲醛使组织蛋白发生交联，以保持蛋白的原位和表面结构不 变，从而能使其对应的抗体，准确检测其表达的位臵和量。 Western中，要用去污剂使各种蛋白发生变性、解聚，并变成统一 的线性肽链，从而能够用凝胶电泳进行分子量的梯度分离。多聚 甲醛会影响蛋白的解聚，从而使其无法用凝胶分离。 另外，WB和 免疫组化所使用抗体的抗原表位也不同，WB的抗体一般识别蛋白 的一级结构，所以可能也无法识别甲醛处理的蛋白。 PCR要提RNA，RNA非常容易降解，必须新鲜取组织，然后尽快超 低温冷藏或者马上抽提，否则非常容易降解。灌注固定的组织， 原则上是能够提得出DNA和RNA的，但是肯定会有较多的降解， 一般不会这样做。
大鼠灌注固定取脑解剖取材讲义
• 或4℃保存备用。
• 2.制作灌注装置，用两瓶塑料包装的输液瓶 装灌注液。同时配好输液器备用。
• 3.10％水合氯醛按4mL/100g的剂量腹腔注射 麻醉动物。
• 4.沿两侧肋弓剪开皮肤，打开腹腔，用止血 管钳夹持剑突并向上提拉，用弯
5.体循环与肺循环的鉴别
• 体循环时大鼠肝脏变白现象出现较早,在灌 注多聚甲醛后,四肢会出现明显的抽搐现象, 尾巴和四肢明显僵硬。若灌流针误插入右 心室,会导致灌流液沿肺循环途径灌流,这时 肝脏变白出现的较慢,四肢的抽搐现象没有 体循环明显,且鼻腔中有时会有灌流液流出。 因肺循环会影响组织器官的灌流效果,因此 进针时要准确,避免肺循环的发生。一旦出 现肺循环指征,应及时调整进针角度。
• 短期灌注：采用心脏穿刺快速灌注20 min, 其中生理盐水灌注50~100mL,4 %多聚甲醛 缓冲液灌注150 mL。
• 长期灌注：灌注时间延长到1 h,其中生理盐 水灌注200mL,4 %多聚甲醛缓冲液灌注400 mL。
• 短期灌注组脑组织结构保留基本良好,与长 期灌注组相比稍差,研究皮层和海马结构损 伤基本可以满足;长期灌注组结构保留最好, 但是耗时长、固定液用量大,致使试验进度
大鼠脑组织取材步骤
1.剪开皮肤
• 2.用钩镊再眼眶处固定大鼠颅骨，用组织剪 再颅骨和颈椎连接处剪断
• 3.组织剪头部伸入枕骨大孔，尽量贴着骨头 （不能插太深伤到脑组织）。
• 4.组织剪从枕骨大孔处伸入，朝向同侧眼眶 方向，贴着骨头剪，剪到眼眶
5.从大鼠眼眶之间剪断
6.左手持钩镊插入大鼠的眼眶固 定颅骨，用弯钳直接夹住枕骨大 孔处的骨头直接就掀起来了
大鼠灌注固定取脑解剖取材
必要性
1.脑组织较软，且细胞成分不易保留，脑组织是较易软化的组织之一，血供 也较为丰富，所以最好是在取脑组织前用4％多聚甲醛灌注固。
2.经前固定后，取脑操作时，可减少脑组织损伤。 3.脑内血液都在，HE染色后，可去除红细胞背景影响
麻醉
流程
开胸
心尖向左心室穿针
剪开右心耳
• 3.经心脏灌注，有时穿刺针会误进右心室，那样灌注主要在肺 循环起作用，体循环的血液影响不大。所以观察将穿刺针插入 到主动脉内可以确保起到体循环灌注冲洗血液的效果，脑组织 的血液冲干净后，才不会影响免疫组化的效果，不然到处都是 红细胞造成的背景染色。
• 4.灌注时注意排空输液管中的气泡，不然容易气栓，影响灌注 效果。一定要看到大鼠较剧烈抽搐，不然证明灌注不好。
• 简便方法：先配好PBS，称好相应的多聚甲醛，37℃水浴或温箱 • 密封放置2天，就能全溶。若是很急，55去除小
的杂质,避免心脏灌流时造成栓塞影响灌流效果。
• 也可用10%福尔马林溶液，甲醛1：10稀释 甲醛100ml 磷酸二氢钠4g 磷酸氢二钠6.5g 蒸馏水900ml 或甲醛100ml加900mlPBS缓冲液。
大鼠脑组织取材步骤
1.剪开皮肤
• 2.用钩镊再眼眶处固定大鼠颅骨，用组织剪 再颅骨和颈椎连接处剪断
• 3.组织剪头部伸入枕骨大孔，尽量贴着骨头（不能插太深伤到脑组织）。
• 4.组织剪从枕骨大孔处伸入，朝向同侧眼眶 方向，贴着骨头剪，剪到眼眶
5.从大鼠眼眶之间剪断
6.左手持钩镊插入大鼠的眼眶固定颅 骨，用弯钳直接夹住枕骨大孔处的骨 头直接就掀起来了
• 5.快速滴注生理盐水(室温)，同时剪开右心耳。约注入100~150mL，至流出液 • 体血色较浅基本澄清，停止灌注。肝脏、眼珠、爪子迅速变白是排出血液的 • 有效观察指标。
实验大鼠常见脏器形态学取材方法和注意事项
实验大鼠常见脏器形态学取材方法和注意事项[取材内容]大鼠肺组织、大鼠肝脏组织、大鼠胰腺组织、大鼠胃部组织、大鼠空场回肠组织、大鼠肾组织、门静脉血、淋巴组织、大鼠心脏。
[试剂及药品]戊巴比妥钠或10%水合氯醛、75%酒精、生理盐水、多聚甲醛或福尔马林液、3戊二醛磷酸盐缓冲液(PBS0.01mol/LP pH7.4)或4戊二醛、肝素钠、器械液器械清洗消毒液[器材]备皮刀、解剖台、弯盘、组织剪、眼科剪、手术刀柄、刀片、小号弯式血管钳、蚊式血管钳、眼科镊、无损伤血管夹、聚乙烯管、三通管、丝线、培养皿、天平、一次性离2ml、1.5ml 、冻存管、肝素锂真空采血管、微量移液器、高速离心机、注射器10ml、5ml、2ml、无菌手套、冰箱、冰盒、液氮罐[取材动物]大鼠[取材步骤]1. 取材前夜禁食，自由饮水。
2. 小鼠称重，按照50mg/kg的比例用5ml的注射器配合针头抽取戊巴比妥钠备用。
3. 正左手的小指和无名指抓住大鼠的尾巴，另外三个手指抓住大鼠的颈部，使大鼠头部向向下。
这样腹腔中的器官就会自然倒向胸部，防止注射器刺入时损伤大肠、小肠等器官。
右手持注射器，从腹部近腿根处刺入后再腹部皮下穿行深入，动作轻柔，缓慢注射。
注射完药物后，缓缓拔出针头，手指按住针口对小鼠腹部轻柔按摩，促进麻醉药物的吸收，掐小鼠尾部检测小鼠麻醉程度。
4.将小鼠四肢固定于解剖台上，暴露小鼠整个胸部和腹部，修剪去腹部毛发，75%酒精消毒。
5.沿腹侧正中线自阴茎上源由下而上剪开腹部皮肤直至剑突，向两侧钝性剥开皮肤与皮下组织，暴露腹壁浅肌层。
沿白线钝性分离腹壁肌肉，剪开腹膜，暴露腹腔，将肝脏向上翻起，显露肝门。
6.门静脉血采集：将剪成斜口的聚乙烯管尖端背向肝门方向插入门静脉，抽取门静脉血2ml，无创血管夹夹闭门静脉止血。
将抽取门静脉血加入一次性离心管低温静置过夜，4℃离心，3000-3500/min，10分钟，吸出上清液，分装，-80摄氏度保存备用。
一种大鼠腰膨大背根神经节取材的改良方法
一种大鼠腰膨大背根神经节取材的改良方法为了获得高质量的大鼠神经节样本，本文提出了一种改良的取材方法。
通过对大鼠腰椎进行解剖，切除脊柱并暴露出神经节，使用显微镊子和显微注射器进行取材，避免了常规方法中可能出现的神经节损伤和污染，同时保证了样本的完整性和纯度。
本方法在研究神经退行性疾病等方面具有应用前景。
关键词：大鼠腰椎；神经节；取材；改良方法引言神经节是神经系统中重要的组成部分，其功能与神经元的生存和发展密切相关。
因此，研究神经节的结构和功能对于理解神经系统的发育和疾病具有重要意义。
大鼠是神经科学领域中常用的实验动物，其神经节样本的获取对于研究神经退行性疾病等具有重要意义。
然而，传统的取材方法存在一些问题，如神经节损伤、污染等，影响了样本的完整性和纯度。
因此，本文提出了一种改良的大鼠神经节取材方法，以期提高样本的质量和可靠性。
材料与方法1. 实验动物本研究使用雄性Sprague-Dawley大鼠，体重250-300g，由实验动物中心提供。
2. 取材工具显微镊子、显微注射器、手术刀、剪刀、镊子、无菌手套、无菌巾等。
3. 取材步骤3.1 麻醉和解剖将大鼠置于麻醉盒中，用异氟醚气体麻醉2-3分钟，待大鼠完全麻醉后，将其移至手术台上。
用无菌巾将大鼠的四肢固定，用手术刀在腰部进行皮肤切开，剪开腹肌，暴露出腰椎。
3.2 切除脊柱用剪刀将腰椎两侧的肌肉和韧带剪开，用镊子将椎弓切除，将脊柱暴露出来。
用剪刀将脊柱切开，切除椎体和椎间盘，暴露出神经节。
3.3 取材用显微镊子将神经节取出，放置在无菌PBS缓冲液中。
用显微注射器将PBS缓冲液注入神经节，使其膨胀，便于后续的分离和处理。
将取出的神经节进行离心，去除PBS缓冲液，即可得到纯净的神经节样本。
结果本方法成功地获得了大鼠腰膨大背根神经节样本，样本完整、纯净。
与传统的取材方法相比，本方法避免了神经节的损伤和污染，取材效率高，样本质量好。
讨论本文提出的大鼠神经节取材方法具有一定的优势。
DRG的取材
DRG的取材
DRG的取材，已经有很多⽂献报道，因为我最近也培养了DRG细胞，所以谈谈⾃⼰的经验：新⽣⼤⿏（红⽪）浸⼊酒精5min 处死，断头后剥开脊髓周围⽪和肌⾁，⽤显微镊剪开脊髓椎管，去除脊髓，使整个脊髓腔暴露，在解剖镜下，椎孔间的DRG 可以清晰看到，⼀个⿏应该有很多对DRG，⽤超细⼿术镊取DRG，动作要轻柔，不能将DRG夹坏。
取下的DRG放在冰PBS ⾥。
取好⾜够的DRG后，还需仔细将每个DRG的包膜剥去，这⼀步很重要，对下⼀步的组织块培养或消化培养时减少杂细胞都很关键。
这种⽅法要点就是要操作快，去除脊髓过程尽量减少出⾎，个⼈经验出⾎过多使DRG浸在⾎中会影响其活⼒。
实在有出⾎应该⽤冰PBS清洗⼀下。
还有就是剥好膜后也要放在新的冰PBS中去除⾎和杂质。
接下来就可以进⾏下⼀步操作了。
大鼠标本制备
先买40只大鼠，在实验室适应一段时间{一周到两周}，实验开始前准备2ml、20ml注射器，一次性手套、口罩、50ml广口瓶，购买试剂卵清蛋白（OV A）、氢氧化铝，再去3号楼4楼找老师要PBS缓冲液（PH7.2-7.4）
第一步配置致敏剂，40只大鼠每只腹腔注射1ml，最好配置50毫升制剂（包括浪费的10毫升），每只大鼠OV A10毫克，氢氧化铝20毫克，把两种成分（OV A10mg×50=500mg，氢氧化铝20mg×50=1000mg）溶解在50毫升PBS液中或生理盐水中，制成OV A浓度为10mg/ml、氢氧化铝20mg/ml。
制成之后，每只小鼠1ml腹腔注射（腹中线左侧，大鼠头部朝下，回抽有无液体和空气，避免注入膀胱、肠管）。
隔天注射一次，或其他方案，致敏两周，大鼠产生抗体，两周之后，用PBS溶液配制滴鼻液开始激发大鼠。
SD大鼠背根神经节细胞新取材和培养方法
华中科技大学硕士学位论文SD大鼠背根神经节细胞新取材和培养方法姓名：艾玛AmmarAliAhmed申请学位级别：硕士专业：外科学（手外科）指导教师：康皓2011-05SD大鼠背根神经结细胞的新取材和培养方法华中科技大学同济医学院附属协和医院血液病研究所 硕士研究生：艾玛 指导教师： 康皓 教授 中文摘要 【目的】：探讨有效摘取ＳＤ大鼠背根神经结（ＤＲＧ）的方法，为实验取材奠定基础。
方法①取材 选择为三周ＳＤ大鼠，提取ＤＲＧ神经元。
用显微解剖获取足够数量的ＳＤ大鼠背根神经结，通过胰蛋白酶＋Ⅳ型胶原酶消化②分离：ＰＢＳ洗涤吸干液体，加入０．２％Ⅳ型胶原酶和０．２５％胰蛋白酶放入３７０Ｃ温箱边消化边用眼科剪剪碎背根神经结重复数次，直到消化液变得粘稠后就可以用滴管吹打，吹打后就可以完全的把背根组织彻底的消化掉，加入含有血清的ＮＢＬ培养基终止消化，用１０００转离心，③原代培养将细胞悬液加入底面铺有Ｌ一多聚赖氨酸的培养皿（ＰＰ ）中，放人３７℃、体积分数为０．０５的ＣＯ２培养箱中，让其自然贴壁。
定期在倒置相差显微镜下观察。
【结果】背根神经结细胞原代贴壁生长较慢，一个月以后才能长满瓶底生长二天后２０倍光镜下背根神经结细胞。
细胞成簇生长，向四周放射状排列，细胞核圆形透亮，细胞形态多边型，向四周伸出较长的触须，其他类型细胞基本上已经死掉而悬浮在培养基里。
【关键词】背根神经结；细胞培养 New method in extracting and culture of dorsal rootganglion neurons of SD ratDepartment of Hand surgery, Union Hospital, Tong Ji Medical School, HuazhongUniversity of Science and TechnologyPostgraduate: Ammar Ali Ahmed TaherSupervisor: Pro. KangHaoAbstract【Objectives】To explore the effective method applied in extracting of dorsal root ganglion (DRG) of SD rats, thus lay a foundation for obtainment of the experimental materials.【Methods】①Obtainment of materials: Select 3-week SD rats to extract DRG neuron. Sufficient dorsal root ganglions of SD rat may be obtained via microdissection and digested using trypsin + collagenase IV. ② Isolation:The liquid is washed and sucked up with PBS, add 0.2% collagenase IV and 0.25% trypsin, after that it is placed in 37℃incubator for digestion, during which the dorsal root ganglion should be sheared with ophthalmic scissor for several time until the digestive juice becomes thick, and then a pipette is used to blow, the dorsal root tissue may be digested totally after blowing, add NBL medium containing serum to terminate the digestion process, and centrifuged at 1000r. ③Culture of primary generation of cells: Add cellular suspension in Petri dish (PP) with L-poly-lysine laid down at its bottom, and placed in incubator (37℃, 0.05 volume fraction of CO2) to allow natural adherent growth. The inverted phase contrast microscope is used regularly to perform the observation.【Results】The adherent growth of the primary generation of dorsal root ganglion cells isso slow that a month is needed to cover the bottom of the flask. The dorsal root ganglion cells under 20 x optical microscope grow for two days. The cluster of cells grows in radial arrangement to the surrounding; the nucleus appears round and transparent and cellular morphology in shape of polygon while the longer tentacles expand around the cell; other types of cell have been basically dead and suspend in the medium.【Keywords】Dorsal root ganglion; Cell culture独创性声明本人郑重声明，本学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果的总结。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
实验大鼠取材方案［取材内容］1. 取大歸脉血分离血衆血清-80 C保存。
2. 取大鼠门静脉血分离血清-80 C保存。
3. 取大鼠甲状腺组织.制备甲状腺电镜观察标本其余组织液氮冰冻保存备用〃4. 取大鼠胸腺组织制备胸腺组织电镜观察标本、免疫组化孵标本其余组织液氮冰冻保存备用。
5. 取大鼠肺组织制备肺组织电镜观察标本，免疫组化观察标本其余组织分装液氮冰搽保存备用。
6. 取大鼠肝脏组级制备肝脏组织电镜观察标本、免疫组化观察标本其余组织分装液氮冰冻保存备用。
7. 取大鼠觴组级制备康腺组织电镜观察标芯免疫组化观察标本其余组织分装液氮冰冻保存备用。
8. 取大鼠肠系膜淋巴结组织制备肠系膜淋巴结免疫组化观察标本其余组织液氮冰冻保存。
9. 取鳩胃部组级制备胃粘膜组织电飙察标本免疫组化观察标本其余组织分装液氮冰冻保存备用。
10. 取大鼠空肠组级制备肠道粘膜组级电镜观察标本■免疫组化观集标本其余组级分装液氮冰冻保存备用。
11. 取大鼠回肠组织制备肠道粘膜组织电镜观舉标技免疫组化观察标本其余组织分装液氮冰冻保存备用。
12. 取大關组织制备左肾组级电镜观察标本、免疫组化观察标本右肾组织液氮冰探保存备用。
13. 取大嵐肾上腺组织左侧制备肾上腺组级免疫组化观察标本右侧肾上腺液氮冰冻保存备用。
14. 取大鼠睾丸组级左侧制备电镜观察标本、免疫组化观察标本右侧睾丸液氮冰冻保存备有。
［试剂及药品］戊巴比妥钠或10%水合氯醛、75%酒精、生理盐水、多聚甲醛或福尔马林液、 3 应二醛磷酸盐缓冲液（PBS0.01mol/LP pH7.4）或 4 戍二肚肝素撤m器械清洗消毒液［器材］备皮刀、解剖台、弯盘、组织剪、眼科剪、手术刀柄、刀片、小号弯式血管钳、蚊式血管钳、眼科镊、无损伤血管夹、聚乙烯管、三通管、丝线、培养皿、天平、一次性离2ml、1.5ml 、冻存氤肝麹真空采血管、微量移液議高速敲杠注射器10ml、5ml、2ml 、无菌手貳冰箱、冰盒、液氮罐［取材动物］Wistar大鼠［取材步骤］1. 取材大鼠前夜禁食自由飮扎2. 腹腔注射戊巴比妥钠（45mg/kg）或10%水合氯醛（300mg/kg）将动物麻醉。
用5ml的注射器配合5.5 7号针头。
腹腔注卿右手持注射器左手的小指和无名訓住大餉尾巴釧三个手馴住大鼠的颈部使大鼠粮部向下。
这样腹腔中的器官就会自細向胸部防止注射器刺入时损伤大肠、小肠等器官。
进针的动作轻柔防止刺伤腹部器官勺尤其是对于体重较小的大鼠腹腔注射时针头可以在腹部皮下穿行-小段瞬最好是从腹部-侧进针穿过腹中线后在腹部的另-侧进入腹腔注射完药物后缓缓拔出针头并轻微旋转针头防止漏液。
待动物麻醉成功后仰卧位固定于解剖台。
3•修剪去颈部及腹部毛拔75%酒精消毒。
4. 沿腹侧正中线自孵上缘由卞而上剪开腹部皮肤直至剑突礪侧钝性剥开皮肤与虾组织暴露腹壁浅肌鼠沿白线钝性分齡壁肌肉剪开腹膜暴露腹腔将肝脏向上翻起显露门并游舗腺将剪成斜口的聚乙烯管尖端背向肝门方丽入门静脉抽取门静脉血2ml无创血管夹牺门删止血.将抽取门静脉血仙入-次性离心管低温静置过夜4&C离心3000-3500/min 10分钟吸出上清液分装-80摄氏度保存备用。
5. 把胃与脾之间的薄膜除去可见到在其卞方有胴枝状的肉色组织分为左、右两叶钝税结台歸取下觴组织及脾脏组织结扎止血胰腺放置于盛有无菌生理盐水的培养皿中涮洗去血迹。
①切取胰腺体部约1mm X1mm ximm组织3 块戊二翱鶴媛冲液(PBS0.01mol/LP pH7.4)或 4 戊二軽固定②胰腺体部相邻部位组织浸入多聚甲醛或福尔马林液中固定③其余姐织全部液氮冰冻保存备用。
生理盐水冲洗換作器械。
6. 剔除脾周组织放置脾脏于盛有无菌生理盐水的培养皿中涮洗去血迹。
①从脾脏一端切取 5 >5mm 脾组织浸入多聚甲醛或福尔马林液中固定②继续切取脾约1mm X1mm X1mm 织3块3戍•二靡磷酸盐媛冲液(PBS0.01mol/LP pH7.4)或4戊二醛固定③其余组织液氮冰冻保存备用。
7. 从剑突继续向上剪开皮肤自颌下陋侧钝性剥开皮肤与皮下组织暴露胸廓及颈浅肌层。
沿正中剪开胸廓、胸膜避免损崩腺的胸腔脏議暴露心脏找到上下腔静脉后确认右心层5ml注射器直接穿刺右心房最大量抽取外周回心静脉血。
加4ml静脉血入肝素锂真空采血管摇勻室温静置10井钟4饰心3000-3500/min 5分卿吸出上清液分装-80 摄氏度保存备用。
2ml 加入普通真空采血管低温静置过夜 4 C离心3000-3500/min 5分钟吸出上清液分装-80摄氏度保存备用。
8. 展开肠系膜于肠系膜根部寻找淡蓝色结节样淋巴结组织剔取肠系期耙结数枚故置于盛有无菌生理盐水的培养皿中涮洗去血迹。
①取部分淋巴结组织浸入多聚甲醛或福尔马林菠中固定②其余组织放置于无菌冻存管液氮冰冻保存备肌心管5ml、9•上端于贾门上端结扎食管下端于直肠远端结扎直肠末端钝瞬合完整取下胃肠直10. 离断胃放置于无菌培养皿践端结扎。
①沿胃大弯剖开生理盐水洗涤切取约1mmX1mm X1mm胃窦和胃体黏膜组织各3块3戊二醛磁酸盐缓冲液(PBS0.01mol/LPpH7.4)或4戊二匯固定②剪取宽约0.5-1.0cm包含胃窦、胃体组织1条浸入多聚甲醛或福尔马林液中固定③其余胃组织放置于无菌冻存管液氮冰冻保存备用。
11. ①距treitz韧带10cm 处切取空肠10cm 距回盲部10cm 处切取回肠10cm 生理盐水洗涤切取约1mm X1mm X1mm空肠和回肠黏膜组织各块戊二漲鯛缓冲液(PBS0.01mol/LP pH7.4) 或4 戊二醛固定②剪取宽的0.5-1.0cm包含全层的空肠和回肠组织各1条做标记浸入多聚甲醛或福尔马林液中固定③其余空肠和回肠组织全部販置于无菌冻存管液氮冰赫存备乩12. 结扎剪断肝门管道系统钝税结合完整取出大鼠肝脏故置于无菌培养皿生理盐水冲洗称重并记录。
①切取肝左叶妁1mm ximm ximm组织3块3戊二鞫酸盐慶冲液(PBS0.01mol/LP pH7.4)或4戊二醛固定②左叶肝组织浸入多聚甲醛或福尔马林液中固定③右叶肝组织称重记录分装后全部放置于无菌冻存管液氮冰冻保存备用/13. 于腹膜外腰瞞寻找到肾脏表面光冰背腹略扁呈蚕豆胰在肾脏的前方内侧和腰下肌的腹面相接处寻找到肾上腺。
右侧肾上腺呈豆状长轴指向后内删左侧呈卵圆形长轴指向腹外亂賊结合摘取顒肾上胰①左侧肾上腺浸入多聚甲醛或福尔马林液中固定②右叶肾上腺赦置于无菌冻存管液氮冰冻保存备用。
14. 剪开后腹膜结扎剪断双侧肾门钝税结合取下双侧肾脏剔除肾周筋膜组织放置于盛有无菌生理盐水的培养皿中涮洗去血迹。
①于中间肾门部横行切开左侧肾脏切取上端肾脏1mm X1mm X1mm 组织3 块3戊二曜瞒殿盐媛冲液(PBS0.01mol/LP pH7.4)或4戊二醛固定②下端脾脏浸入多聚甲匯或福尔马林液中固定③右侧肾脏放置于无菌冻存管液氮冰冻保存备用。
15. 大鼠的阴囊是由肛门腹侧会阴部皮肤下垂所形成的囊袋。
性成熟的大鼠睾丸和附睾下降入阴囊使表面凸出并突向后方。
小心剪开贼阴囊可见橢圆形睾丸触结合摘取双侧睾九附睾放置于盛有无菌生理盐水的培养皿中涮洗去血返16. 颈白线純悦齡分离颈前机群直至气管向上显露甲状巖仔细操作切取包括甲状软骨在内的甲状腺。
①切取约1mm x imm ximm组织各3块3戊二醛磷酸盐缓冲液(PBS0.01mol/LP pH7.4)或4戊二輕固定②其余组织全部浸入多聚甲醛或福尔马林液中固定。
切取左侧睾丸下端1mm ximm ximm组织3 块戊二醛磷殴盐缀冲液(PBS0.01mol/LP pH7.4)或4戊二匯固定②余左侧睾丸组织浸入多聚甲醛或福尔马林液中固定③右侧睾丸组织；O于无菌冻存管液氮冰冻保存备艮17. 大翩腺由便叶组成似等边三角肢大部分位于胸腔前纵膈顶端近喉部基底部附着于心包腹面的前上方。
钝悅结合完整取下胸腺放置于盛有无菌生理盐水的培养皿中涮洗去血迹。
①切取胸腺1mm X mm X1mm组织块戊二醛磷殴盐缓冲液(PBS0.01mol/LP pH7.4)或4 戊二醛固定②切取胸腺5mm X5mm X5mm 组织1块浸入多聚甲曜或福尔马林液中固定③其余姐织置于无菌冻存管液氮冰冻保存备用。
18. 整体取下大鼠心肺组织剪开分舰侧肺脏置于盛有无菌生理盐水的培养皿中涮洗去血迹。
①切取左肺1mm X1mm X mm组织3块3戊二醛磷酸盐缓冲液(PBS0.01mol/LP pH7.4) 或4戊二醛固定②余左肺浸入多聚甲醛或福尔马林液中固定济存管液氮冰冻保存备用。
19. 各取样标本细致编号登记。
20. 大鼠废弃尸体处理。
［注意事项1.戍巴比妥抽配成1% 生理盐水溶液平均每只大鼠用量12.6mg 1.2ml 左右o2.大鼠腹腔注射可以大鼠腹腔注射的给药容积一般为 5 10ml/kg。
3. 完整取下胃肠道后已将肠系膜撕碎不易寻找肠系膜淋巴结所以先取淋巴叙取下胃肠道由专人操作取胃肠道及胃肠道取下后取林的操作器械单用-套勺4. 取材时三人同时操作取一只大鼠结合取材方案多脏器并行取材缩短取材时间。
③右肺组织置于无菌1、解剖后应迅速将脏器称重，以免水分蒸发造成差异，特别是肾上腺等小器官的称重。
2、脏器称重前应尽量将周围脂肪组织和结缔组织剔除，并用滤纸吸去脏器表面血液及体液，特别是肾上腺、甲状腺、前列腺等较小的器官，更要新鲜称重，防止器官干燥失水而重量减轻。
3、空腔器官称重前，应清除其腔内液体，如心脏应除去血块。
THANKS !!!致力为企业和个人提供合同协议，策划案计划书,学习课件等等打造全网一站式需求欢迎您的下载，资料仅供参考。