大鼠肝组织RNA提取策略与注意事项
RNA提取实验操作步骤、注意事项及问题指南
RNA提取实验操作步骤、注意事项及问题指南准备试剂：氯仿，异丙醇，75℅乙醇，无RNase的水或0.5℅SDS（溶液均需用DEPC处理过的水配制）。
操作步骤：1. 匀浆处理a. 植物组织:以叶片RNA提取为例.取新鲜叶片在液氮中充分研磨或将叶片剪碎后直接在Trizol中研磨,研磨要迅速,最好不要超过1min.，大约100mg 叶片使用1 ml Trizol.b. 动物组织:以鼠肝脏RNA提取为例.取新鲜或-70℃冻存组织,每50-100mg组织加1ml Trizol,用匀浆仪进行匀浆处理.样品体积一般不要超过Trizol体积的10%.c. 单层培养细胞.直接在培养板中加入Trizol裂解细胞,每10cm2面积加1ml Trizol.用取样器吹打几次.注意:Trizol加量根据培养板面积决定,不是由细胞数决定.如果Trizol加量不足,可能导致提取的RNA中有DNA污染.d.细胞悬液:离心取细胞，每5-10×106动物、植物和酵母细胞或每107细菌细胞加1ml Trizol。
加Trizol 前不要洗涤细胞，以免降解mRNA。
一些酵母和细菌细胞可能需要匀浆仪处理。
e.血液处理:直接取新鲜的血液,加入3倍体积红细胞裂解液，混匀后室温放置10min，10 000rpm 离心1min。
弃上清，收集白细胞沉淀。
每1ml血液收集的白细胞沉淀中加入1ml Trizol。
2. 将匀浆样品在15-30℃放置5mim，使得核酸蛋白复合物完全分离。
3. 可选步骤:4 ℃10 000rpm离心10min，取上清。
如果样品中含有较多蛋白、脂肪、多糖或肌肉、植物结节部分等，可离心去除。
离心得到的沉淀中包括细胞外膜、多糖、高分子量DNA，上清中含有RNA。
处理脂肪组织样品时，上层是大量油脂，应除去。
取澄清的匀浆溶液进行下一步操作。
4. 每使用1ml Trizol加0.2ml氯仿，盖好管盖，剧烈震荡15s，室温放置3min。
RNA提取准备工作及注意事项
一、枪头和EP管等的消毒灭菌1、用去离子水配制0.1%（千分之一）的DEPC（剧毒物），须在通风橱中小心使用，避光，密闭4℃保存;DEPC水是用DEPC(diethypyrocarbonate，焦碳酸二乙酯)处理过并经高温高压消毒的MiliQ纯水。
经检测不含 RNase、DNase和proteinase。
2、将枪头和EP管放入0.1%的DEPC内，保证枪头和EP管内都充满0.1%的DEP,3、避光、静置、过夜（12-24 h）4、装枪头和EP管的盒子不需要用DEPC浸泡，将枪头或者EP管内的DEPC水大致去除干后，装起，包好5、121摄氏度，30min6、180摄氏度，干燥数个钟头（至少3小时以上）。
注意：a、处理DEPC时需要戴乳胶手套、口罩！b、或者不用DEPC消毒，130℃，90min高压灭菌（许多实验室高温灭菌两次）二、RNA提取注意事项1、组织 RNA 抽提失败的两大现象是： RNA 降解和组织内杂质的残留。
关于降解问题，首先看一下为什么从培养细胞中抽提 RNA 不容易降解。
现有的RNA 抽提试剂，都含有快速抑制 Rnase 的成分。
在培养细胞中加入裂解液，简单的混匀，即可使所有的细胞与裂解液充分混匀，细胞被彻底裂解。
细胞被裂解后，裂解液中的有效成分立即抑制住细胞内的 Rnase，所以 RNA 得以保持完整。
也就是说，培养细胞由于很容易迅速与裂解液充分接触，所以其 RNA 不容易被降解；反过来讲，组织中的 RNA 之所以容易被降解，是因为组织中的细胞不容易迅速与裂解液充分接触所致。
因此，假定有一种办法，在抑制 RNA 活性的同时能使组织变成单个细胞，降解问题也就可以彻底解决了。
液氮碾磨就是最有效的这样一种办法。
但是，液氮碾磨方法非常麻烦，如果碰到样品数比较多的时候更加会有此感觉。
这样就产生了退而求其次的方法：匀浆器。
匀浆器方法没有考虑细胞与裂解液接触前如何抑制 Rnase 活性这个问题，而是祈祷破碎组织的速度比细胞内的 Rnase 降解 RNA 的速度快。
RNA提取的操作步骤、注意事项和常见问题分析
RNA提取的操作步骤、注意事项和常见问题分析RNA的提取准备试剂：氯仿，异丙醇，75�G乙醇，无RNase的水或0.5�GSDS(溶液均需用DEPC处理过的水配制)操作步骤:1. 匀浆处理:a.组织将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。
样品体积不应超过TRIzol体积10�G。
b.单层培养细胞直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞，每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml，用移液器吸打几次。
TRIzol的用量应根据培养板面积而定，不取决于细胞数。
TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。
c．细胞悬液离心收集细胞，每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol，反复吸打。
加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。
一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。
2．将匀浆样品在室温（15-30℃）放置5分钟，使核酸蛋白复合物完全分离。
3．可选步骤：如样品中含有较多蛋白质，脂肪，多糖或胞外物质（肌肉，植物结节部分等）可于2-8℃10000×g离心10分钟，取上清。
离心得到的沉淀中包括细胞外膜，多糖，高分子量DNA，上清中含有RNA。
处理脂肪组织时，上层有大量油脂应去除。
取澄清的匀浆液进行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml氯仿，剧烈振荡15秒，室温放置3分钟。
6. 2-8℃10000×g离心15分钟。
样品分为三层：底层为黄色有机相，上层为无色水相和一个中间层。
RNA主要在水相中，水相体积约为所用TRIzol 试剂的60�G。
7. 把水相转移到新管中，如要分离DNA和蛋白质可保留有机相，进一步操作见后。
用异丙醇沉淀水相中的RNA。
每使用1ml TRIzol加入0.5ml异丙醇，室温放置10分钟。
8. 2-8℃10000×g离心10分钟，离心前看不出RNA沉淀，离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。
RNA提取准备工作及注意事项
一、枪头和EP管等的消毒灭菌1、用去离子水配制0.1% （千分之一）的DEPC（剧毒物），须在通风橱中小心使用，避光，密闭4C保存；DEPC水是用DEPC（diethypyrocarbonate ，焦碳酸二乙酯）处理过并经高温高压消毒的MiliQ纯水。
经检测不含RNase、DNase 和proteinase。
2、将枪头和EP管放入0.1%的DEPC内，保证枪头和EP管内都充满0.1%的DEP,3、避光、静置、过夜（12-24 h ）4、装枪头和EP管的盒子不需要用DEPC浸泡，将枪头或者EP管内的DEPC水大致去除干后，装起，包好5、121 摄氏度，30min6、180摄氏度，干燥数个钟头（至少3小时以上）。
注意：a、处理DEPC时需要戴乳胶手套、口罩！b、或者不用DEPC消毒，130C, 90min高压灭菌（许多实验室高温灭菌两次）二、R NA提取注意事项1、组织RNA抽提失败的两大现象是：RNA降解和组织内杂质的残留。
关于降解问题，首先看一下为什么从培养细胞中抽提RNA不容易降解。
现有的RNA抽提试剂，都含有快速抑制Rn ase的成分。
在培养细胞中加入裂解液，简单的混匀，即可使所有的细胞与裂解液充分混匀，细胞被彻底裂解。
细胞被裂解后，裂解液中的有效成分立即抑制住细胞内的Rnase,所以RNA得以保持完整。
也就是说，培养细胞由于很容易迅速与裂解液充分接触，所以其RNA不容易被降解；反过来讲，组织中的RNA之所以容易被降解，是因为组织中的细胞不容易迅速与裂解液充分接触所致。
因此，假定有一种办法，在抑制RNA 活性的同时能使组织变成单个细胞，降解问题也就可以彻底解决了。
液氮碾磨就是最有效的这样一种办法。
但是，液氮碾磨方法非常麻烦，如果碰到样品数比较多的时候更加会有此感觉。
这样就产生了退而求其次的方法：匀浆器。
匀浆器方法没有考虑细胞与裂解液接触前如何抑制Rn ase活性这个问题，而是祈祷破碎组织的速度比细胞内的Rnase降解RNA的速度快。
大鼠肝脏总RNA的提取(液氮研磨法)
大鼠肝脏总RNA的提取（液氮研磨法）
1）从-80℃冰箱中取出保存的大鼠肮脏样品，用液氮速冻后迅速研磨成细粉，取约0.1g细粉于1.5ml离心管中（动作尽量迅速，避免RNA降解）；
2）加入1ml TRIzol，用力摇动使混合均匀，室温下放置5min；
3）12,000g，4℃离心10min，将上清液（800μl）吸入一新的1.5ml离心管中；4）加入0.2ml氯仿（按照0.2mL氯仿/1mL TRIzol），用力振荡15sec，室温放置2~3min，12,000g，4℃离心15min；
5）将离心管倾斜成45度，将上清液（约400μl）吸入一新的1.5ml离心管中，加入等体积的异丙醇后，颠倒混匀，室温放置10min；
6）12,000g，4℃离心10min，弃上清；
7）加入1ml 75%乙醇洗涤沉淀，7,500g，4℃离心5min，弃上清；再重复此步骤1~2次；
8）沉淀室温下干燥5~10min，加50µl RNase-free water溶解RNA，55~60℃水浴10min，使RNA充分溶解；
9）吸取部分RNA进行电泳和检测浓度等，其余的贮存于-80℃冰箱中备用。
最全的RNA提取与RT-PCR实验步骤以及注意事项
在做Northern等杂交实验、构建cDNA文库、获取能够编码真核生物蛋白的基因、获得RNA 病毒基因时，会用到RNA提取和RT-PCR技术。
真核生物的基因组是DNA，为什么不直接从DNA PCR得到我们需要的基因呢？因为真核生物的基因含有大量的非编码区，称为内元（intron），真正编码蛋白的区段是被这些内元隔开的，这些编码区叫做外元（exon）。
真核生物的DNA转录成为RNA之后，经过剪切和拼接，去掉这些非编码区，才形成成熟的mRNA，由mRNA再翻译成蛋白质。
所以，如果直接从真核生物的基因组DNA获取目的基因，克隆再表达，试图获取目的蛋白的思路是行不通的，因为获取的DNA里面会含有非编码区。
要表达真核生物的基因并表达出相应的蛋白，只能通过提取其mRNA并RT-PCR这条颇费周折的途径。
1.RNA的提取RNA的提取其实原理很简单：通过变性剂破碎细胞或者组织，然后经过氯仿等有机溶剂抽提RNA，再经过沉淀，洗涤，晾干，最后溶解。
但是由于RNA酶无处不在，随时可能将RNA 降解，所以实验中有很多地方需要注意，稍有疏忽就会前功尽弃。
1.1 分离高质量RNA成功的cDNA合成来自高质量的RNA。
高质量的RNA至少应保证全长并且不含逆转录酶的抑制剂，如EDTA或SDS。
RNA的质量决定了你能够转录到cDNA上的序列信息量的最大值。
一般的RNA纯化方法是使用异硫氰酸胍／酸性酚的一步法。
一般不必使用oligo(dT)选择性分离poly(A)+RNA。
不管起始模板是总RNA还是poly(A)+ RNA，都可以检测到扩增结果。
另外，分离poly(A)+RNA会导致样品间mRNA丰度的波动变化，从而使信息的检出和定量产生偏差。
然而，当分析稀有mRNA时，poly(A)+RNA会增加检测的灵敏度。
1.2 RNA提取的最大影响因素-RNA酶在所有RNA实验中，最关键的因素是分离得到全长的RNA。
而实验失败的主要原因是核糖核酸酶（RNA酶）的污染。
RNA提取准备工作及注意事项
RNA提取准备工作及注意事项RNA提取是分子生物学实验中常用的操作步骤之一，它是从细胞或组织中提取RNA分子的过程。
在进行RNA提取前，需要进行一系列的准备工作以及注意事项，以确保提取出的RNA质量好、纯度高。
下面是RNA提取的准备工作及注意事项的详细介绍。
一、实验前准备1.实验器材准备：常用的器材有离心管、离心机、恒温水浴器、pH计、显微镜等，根据实验的需要选择相应的器材，并确保所有器材都经过充分的洗涤和消毒。
2.试剂准备：RNA提取试剂盒通常包括缓冲液、酚-氯仿、异丙醇等，根据试剂盒的说明书准备相应的试剂溶液，并保证试剂的纯度和保存状态。
3.工作区准备：RNA提取实验应在清洁、干净的台面上进行。
实验室湿度应保持在50-60%之间，温度保持在20-25°C之间，以防止RNA降解和污染。
二、实验注意事项1. 避免污染：RNA易受到RNase的污染，因此，实验操作时应避免污染源。
严格控制实验室环境的清洁程度，使用无RNase酶的试剂和离心管，避免直接接触RNase。
2. 快速操作：RNA易被RNase降解，因此在提取过程中应尽量减少操作时间。
在每一个步骤中，应迅速进行，尽量避免长时间的搅拌和振荡。
4.酚-氯仿提取法：酚-氯仿法是一种经典的RNA提取方法，但需要注意的是，该方法中酚对人体有毒，因此在操作时应注意避免接触皮肤和吸入。
5.商业试剂的选择：市场上有许多RNA提取试剂盒可供选择，根据实验需求和预算，选择可靠的商业试剂。
确保试剂的批次一致，并严格按照说明书操作。
6.RNA样品的保存：提取得到的RNA样本应立即保存在低温条件下，如-80°C冰箱中，以避免RNA的降解和污染。
7.评估RNA质量：提取得到的RNA样品可以通过吸光光度计检测A260/A280比值来评估其纯度。
通常来说，纯度好的RNA样品A260/A280比值应在1.8-2.0之间。
总结：RNA提取是一项关键的实验步骤，准备工作和注意事项的严格执行对RNA提取的结果和后续实验的顺利进行非常重要。
RNA提取注意事项
RNA提取心得/经验/体会/纪律（RNA提取注意事项）！纪律一：杜绝外源酶的污染。
注意一：操作环境干净无灰尘，严格戴好口罩，手套。
注意二：实验所涉及的离心管，Tip 头，移液器杆，电泳槽，实验台面等要彻底处理。
注意三：实验所涉及的试剂/溶液，尤其是水，必须确保 RNase-Free。
纪律二：阻止内源酶的活性注意四：选择合适的匀浆方法。
注意五：选择合适的裂解液。
注意六：控制好样品的起始量。
纪律三：明确自己的抽提目的注意七：任何裂解液系统在接近样品最大起始量时，抽提成功率急剧下降。
注意八：RNA 抽提成功的唯一经济的标准是后续实验的一次成功，而不是得率。
Rnase 污染的10大来源1：手指头–手指头是外源酶的第一来源，所以必需戴手套并且频繁更换。
另外，口罩也必需戴，因为呼吸也是一个重要的酶来源。
戴手套口罩的另外的好处是保护实验人员。
2：枪头，离心管，移液器–单纯的灭菌是不能灭活 Rnase 的，所以枪头和离心管要用 DEPC 处理，即使是标明为 DEPC 处理过的。
移液器最好是专用的，用前用 75% 的酒精棉球搽拭干净，尤其是杆子；另外，一定不要使用褪头器。
3：水/缓冲液–一定要确保无 Rnase 污染。
4：实验台面–最起码要用 75% 的酒精棉球搽拭干净。
5：内源 Rnase –所有组织均含内源酶，故组织用液氮速冻是降低降解的最好办法。
液氮保存/碾磨方法的确不方便，但对有一些内源酶含量很高的组织，却是唯一的办法。
6：RNA 样品– RNA 抽提产物可能都会含痕量的 Rnase 污染。
7：质粒抽提–质粒抽提往往用到 Rnase 降解 RNA，残留的 Rnase 要用Proteinase K 消化，PCI 抽提。
8：RNA 保存–即使低温保存，痕量的 Rnase 亦会导致 RNA 降解。
长期保存RNA 的最好办法是盐/醇悬液，因为醇在低温时抑制所有的酶活性。
9：阳离子 (Ca, Mg) –在含这些离子时，80C 加热 5 分钟会导致 RNA 被剪切，故如果 RNA 需要被加热，保存液需要含螯合剂 (1mM Sodium Citrate, pH 6.4)。
rna提取过程中的关键步骤及注意事项
一、概述RNA提取是生物学研究中的重要步骤，它涉及到从细胞或组织中提取出RNA分子，为后续的分子生物学实验和分析提供基础数据。
在RNA提取过程中，有许多关键步骤和注意事项需要注意，才能确保提取到高质量的RNA样品。
本文将重点介绍RNA提取过程中的关键步骤及注意事项。
二、样品采集和保存1. 样品的采集要尽量避免受到外界环境的污染，采集器具要事先经过严格的消毒处理。
2. 采集后的样品应立即冷藏或置于液氮中保存，避免RNA降解。
三、细胞破碎1. 细胞破碎是RNA提取的第一步，直接影响到RNA的得率和质量。
常用的方法包括酚-氯仿法、超声波法和离心破碎法等。
2. 选择合适的细胞破碎方法，要充分破碎细胞膜，释放出RNA分子，同时避免RNA的降解。
四、蛋白质沉淀1. 蛋白质沉淀的目的是去除DNA和蛋白质，以纯化RNA。
常用的方法包括酚-氯仿法和硅胶柱法。
2. 在进行蛋白质沉淀时，要注意去除酚相和混合相中的DNA和蛋白质，以免对RNA纯化产生影响。
五、RNA沉淀和洗涤1. RNA沉淀的方法有乙醇沉淀法和硅胶柱法等，选择合适的方法要根据样品的特点和后续实验的需要进行。
2. 在RNA洗涤的过程中，要充分去除盐和其他杂质，以保证提取到干净的RNA样品。
六、RNA溶解和质量检测1. RNA溶解的过程要充分溶解RNA，并保证溶解液的质量纯净。
2. 对提取得到的RNA样品进行浓度和完整性的检测，以确保RNA的质量达标。
七、总结RNA提取是分子生物学研究中的重要步骤，本文介绍了RNA提取过程中的关键步骤和注意事项。
通过严格控制每个步骤，可以保证提取到高质量的RNA样品，为后续的实验和分析提供可靠数据。
希望本文能够帮助读者更好地理解RNA提取过程，并在实验操作中取得更好的效果。
八、RNA存储和稳定性1. 存储RNA样品时，应尽量避免反复冻融，因为这样容易导致RNA 降解。
合适的储存温度通常为-80摄氏度。
2. 另外，干燥的RNA样品更容易保存，因此可以考虑使用适当的稳定剂，如DEPC水或RNAlater等，来保护RNA在样品采集至提取过程中的稳定性。
组织RT-PCR注意事项
1.抽提RNA都是为了得到其mRNA，而mRNA和组织的状态密切相关，因此需要超低温的状态，一般选择用液氮保存组织。
而且去的时候要尽可能的新鲜，动作要快，取后立即放入液氮罐中。
2.提取RNA前要对脑组织进行研磨，切记要在液氮中进行，也是为了防止rna的降解。
研磨要充分，使组织块变小。
3.加入trizol后要充分吹打开，目的是使组织中的核蛋白体，多糖等与rna分离。
4.其次是注意外源性的rna酶污染，操作全过程要戴口罩，手套。
操作速度要快，冰上进行。
我做过大鼠下丘脑组织的RT-PCR，在动物房将组织取好先放在RNa－free的EP管中，放在冰盒内，然后再转移到实验室的－70°冰箱内，在抽RNA的时候，脑组织最好要氯仿抽提两次，这个是我在别的地方看到的，但是真的很好用，可以改善RNA抽提的质量。
用生理盐水或PBS冲洗掉血液，分切成50-100mg大小的组织块，早点把提RNA的试剂盒买过来就可以根据说明书加入变性液中（ep管内），－80储存，到时候拿出来组织就很容易撵碎了。
如果试剂盒没到，那就直接放在EP管中，提RNA的时候再拿出来再加也可以。
就是组织可能会不容易撵碎一些。
我觉得你可以用高压过的EDPC处理的水进行清洗（2－3次），后迅速切成合适的大小的组织（具体大小与RNA提取方法相关，我用的是TRNZOL法，一般取50－100mg，）于EP管中，直接放到－80度冰箱，不需要液体浸泡！到时直接取出提取RNA即可！建议你的剪刀、镊子等物品最好DEPC处理过！1.组织块若没有很多血液，可直接冻存；2.若有较多血液，可用生理盐水冲洗；3.我以前取小肠组织时，先剪开自来水冲洗，再生理盐水冲洗；4.一般1cm左右就可以，根据标本将来的用途。
5.直接原组织冻存。
本实验室做过人子宫内膜FGF基因的克隆，方法是从子宫肌瘤切除的人子宫中撕下新鲜内膜组织，冻存与液氮总备用，实验前在液氮中充分研磨后提取总RNA。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
第一部分RNA 提取策略
1、RNA降解的原因内源性RNAase是造成RNA降解的最重要原因，因为人体细胞自身就是几十分钟（20min？）mRNA被降解一轮，所以不管是组织还是细胞还是液体状样本在离开其中细胞的最佳生活状态后都应该尽快的被妥善的方法保存起来。
外源性RNA酶也是一个需要注意的因素，最常见的就是毛发尤其头发，灰尘，唾液，塑料手套这四个兄弟。
针对它们我们应该戴帽子，口罩，橡胶无菌手套，在清洁灰尘少的地方提取RNA。
我上面说了内源性RNAase污染才是关键，所以有些同志没有注意这些对外源性RNAase的防护RNA也提取的很出色。
但是如果你运气不太好的话外源性RNAase污染影响很大的。
2、样品的取材我们抽提RNA往往都是需要其mRNA，而mRNA的表达量和细胞或者组织的生长状态息息相关，我们取组织块应该避免取到坏死组织，而细胞我们应该在其处于生长旺盛的时期收集（贴壁细胞消化要迅速，离心要稍为快些，甚至可以不消化下来直接进入裂解步骤；此外还可以采取先震荡敲击培养瓶的方法使细胞和培养瓶的结合下降，然后用吸管吹打培养基地方法把细胞吹打下来，这样细胞的代谢不会明显的受到抑制。
注意在平时传代的时候就要注意观察细胞除了用胰酶消化下来以外是否还有其他比较简单的方法）（此外还可以把培养液倒掉后迅速的加入裂解试剂开始抽提ＲＮＡ）。
3、待提取样品保存方法这些保存方法温度从4度到零下196度不等，选择哪一种保存方法关键是要对这些保存方法的优缺点有清醒的认识。
根据你需要的RNA种类可以做简单的分类。
包括RNA病毒RNA ，mRNA（各种），rRNA 等其中最容易降解或者破坏的就是mRNA，最不容易损失的就是RNA病毒RNA （因为有蛋白壳保护）。
超低温保存：特指液氮保存不管组织还是细胞如果需要其中的mRNA必须在液氮中保存，-70度等方法都是错误的方法，在很短的时间内或许可以，但是长期是不可能的。
-20~~~-70摄氏度保存：RNA病毒的RNA 可以在这个温度段安全的保存。
但是其产生的mRNA还是必须超低温保存。
4度保存：有特殊的保护试剂存在地情况下组织的保存：应该是离体后在1min 内就放入液氮或者保护试剂中。
由于提取RNA对组织块有一定量的要求，大约100mg居多（脂肪细胞需要的量多的多，因为细胞是大大膨胀的），所以在取材前就需要明确到底你需要的组织大概多大是100mg，令少勿多。
如果是取临床的标本，就应该带上液氮罐子，DEPC处理的器械，锡箔纸，线等在手术室外等候，标本一切下就尽快进行切割（大概100mg一块），包装（锡箔纸内），捆扎（方便在液氮罐子中寻找），迅速丢入液氮罐子中，最好是1min内完成（所以大家取材前一定要好好联系一下，不要到时候手忙脚乱的^_^）细胞的保存：比较麻烦些，所以大多都是直接提取RNA再保存。
建议离心收集后用特殊保护试剂重悬后保存。
4、RNA提取提取RNA可以分为总RNA，mRNA，Virus RNA（RNA病毒）几类Trizol即异硫氰酸胍-苯酚法，这种方法的原理是：首先用强变性剂异硫氰酸胍裂解细胞，同时使核蛋白复合体中的蛋白变性，释放出核酸。
释放出来的DNA 和RNA由于在特定pH时溶解度不同，分别位于整个体系中的中间相和水相，
从而使DNA和RNA分离开来。
进一步通过有机溶剂来抽提沉淀RNA，就可以得到纯净的RNA；
Trizol最早是MRC实验室的科学家发明的方法，后来把专利卖给了
invitrogen/Gibco，invitrogen/Gibco将此方法推广到世界。
他的trizol曾经由其他公司OEM制作，现在已经自己生产。
本来Trizol是一个专利的品牌，但是国内也有不少仿制的品牌，基本的原理是一样，配方稍有不同。
RNeasy kit：Qiagen 的王牌产品，号称适用于各种RNA抽提，其实在特殊的组织比如大脑，肌肉，脂肪组织还是选择特殊抽提试剂为佳。
此外细菌RNA抽提也最好使用专用抽提试剂盒。
这些产品Qiagen都提供。
注意凡是Qiagen的试剂盒抽提应该是没有5S 带的，因为它将5S破坏掉了。
其他的比如roche，promega等都很好的是的。
尤其promega性价比最高！
注意各种方法对于组织都需要先碾磨，应该用陶瓷碾磨器，同时一定要在碾磨同时不断的加入液氮。
（少数牛人号称从来不加液氮也提取的很好，我只能说他运气实在不错）。
特殊的RNA抽提试剂盒---mRNA抽提试剂盒：单纯的抽提mRNA的试剂盒很少见到有人在使用，但是其具有一般RNA抽提试剂盒没有的优点，在一些实验中有出奇致胜的效果，推荐promega的总RNA提取KIT，效果与Qiagen差不多，价格便宜多了，性价比最高的好东东！
试剂盒提取的其优点有以下几点：
1、提取得mRNA纯度高，因为对于很多实验rRNA其实也是一种污染，我们只想RT我们需要的mRNA，但是如果用特异性引物或者随机引物就会连rRNA 一起RT，造成大量的我们不需要的cDNA出现。
2、鉴定时观察是否有严重的DNA污染时非常方便。
mRNA抽提后电泳只是看到淡淡的一条短拖影带，此时如果有DNA污染可以很容易发现，因为背景很浅。
3、RNA的鉴定RNA抽提出来之后，首先做的工作是分装保存，然后取其中一管用于鉴定。
鉴定方法如下：对RNA的鉴定包括几个方面，第一是数量的鉴定，第二是质量的鉴定，重点是质量的鉴定。
一般的琼脂糖凝胶电泳，注意不要用甲醛变性电泳（又不是做northern，实在没有必要）。
电泳槽注意一定不要用DEPC处理，一定要保证电泳体系中有少量的RNAase存在。
分别在加样孔中加入1，2，3μlRNA抽提溶液。
在旁边加入DNA marker。
1%琼脂糖凝胶，10V/cm的电压，电泳10min成像一次，看电泳情况，如果28s和18s还没拉开，继续电泳10min成像，如果任没有拉开再次电泳5min。
如果还没有分开多半28s已经遭到破坏，不可能看到典型的3条带了。
好的RNA的特征：
A、RNA应该呈现出3条rRNA带。
分别是5，18，28SrRNA的带。
5s最好是要可见，除非抽提步骤中故意将其破坏
B、28s亮度是18s亮度的一倍，其他比例关系均提示RNA有一定程度的破坏。