膨化大豆的掺假鉴别法及脲酶活性的专业控制
大豆制品脲酶活性测定
（2）仪器与器皿
酸度计（pH计）：具有玻璃电极、 甘汞电极
恒温水浴：须能保持温度30±0.5℃ 试管：20×150mm并配有橡皮塞
（50mL）
（3）试剂
磷酸缓冲液0.05mol/L：称取 3.403gKH2PO4溶于100mL蒸馏水中。 再称取4.355gK2HPO4溶于100mL蒸馏 水中，合并两者并配成1000mL，用 强酸或强碱调节pH=7.0。
此时溶液应具有明亮的琥珀色； （过 段时间溶液会变为深橘红色，
可滴入稀硫酸溶液搅拌之，直至溶 液再次变为琥珀色）
（3）方法：
将一满匙样品放入表面皿中， 摊平，将以调好的尿素-酚红试剂滴 入表面皿中的样品上，直至完全浸 湿，停留5min，观察样品的颜色反 应。
如果红斑面积多于20%，则认为 该样品脲酶活性超标，为不合格产 品。
三、测定原理： 脲酶活性测定实际上是在一定条件
下(pH=7.0，T=30℃)，测定每克试 样、每分钟分解尿素所产生的氨的 量。
脲酶 NH2CONH2→→2NH3↑+CO2
•
四、测定方法： （一）定性法： 1、酚红法 （1）原理：
酚红指示剂在pH 6.4-8.2时由黄变 红，大豆制品中所含的脲酶pH=7.0， T=30℃时可将尿素水解产生氨，释 放的氨可使酚红指示剂变红，根据 变红的时间长短来判断脲酶活性的 大小。
空白试验：不加尿素，其他同上。
品质判定：如果溶液为明显的粉红 色，则认为该大豆制品脲酶活性超 标，为不合格产品。
•0-1min变红，活性非常强（＞ 1.0）；
•1-2min变红，活性大概0.5-1.0； • 2-5min变红，活性大概0.3-0.5。
（4）注意事项： • 1.粉碎样品时，不应产生大量热，
大豆制品中脲酶活性的测定
制作人：刘力、李亚杰
背景
大豆制品中含有大量抗营养因子，影响到动物的正常生长 发育。其中最主要的是胰蛋白酶抑制因子，不耐热，但在 点击添加标题 生产加工过程中，过度的加热在灭活抗营养因子的同时， 导致蛋白质变性，特别是赖氨酸、精氨酸和胱氨酸等严重 点击添加标题 变性，大大降低了大豆制品的消化率和生物学价值。抗胰 蛋白酶活性是直接反映大豆制品中抗营养因子水平及加热 程度的可靠指标，但由于该法费时、所用试剂昂贵，在生 点击添加标题 产上不适用。而脲酶活性与抗胰蛋白酶活性呈高度正相关， 方法较简便、快速、经济，国内外常用脲酶活性作为检验 点击添加标题 大豆制品加热程度和抗营养因子水平的判断指标。
注意事项
若样品粗脂肪含量高于 点击添加标题 10%，则应先进行不 加热的脱脂处理后，在测定脲酶活性； 点击添加标题 称量样品时，一定要将样品混合均匀，否则 会造成试验误差； 点击添加标题 试样和空白试验同时操作，过程要迅速，防 止时间影响。 点击添加标题
问题
反应时间（30min ）对脲酶活性是否有影响？ 点击添加标题
仪器设备
粉碎机：粉碎时应不生强热，如球 点击添加标题 磨机。
点击添加标题 点击添加标题
点击添加标题
测定步骤
样品中脲酶活性的测定：称取0.2 g（准确至0.0001 g）样品（如果活性很
高，可称取0.05 g试样）玻璃试管中，加10 mL尿素缓冲液，立即盖好试管 盖剧烈振摇后，马上置于30±0.5 ℃水浴锅内，准确计30 min±10 s。取下 点击添加标题 后立即加入10 mL盐酸（0.1 mol/L），振摇后迅速冷却至20℃，将试管内容 物全部转入50 mL烧杯中，用20 mL蒸馏水冲洗数次，以0.1 mL的氢氧化钠 标准滴定溶液用酸度计滴定至 pH 4.70。记录氢氧化钠标准滴定溶液消耗量。 点击添加标题 如果选用指示剂，试管中内容物全部移入250 mL锥形瓶中，滴加8~10滴混 合指示剂，以0.1 mol/L氢氧化钠标准滴定溶液滴定至蓝绿色，记录氢氧化 点击添加标题 钠滴定溶液消耗量。 空白测定：称取样品后立即加入10 mL盐酸溶液，之后不加。
大豆中脲酶活性的测定
e.结果计算
UA＝14×C(V0-V)/(30×m) C——氢氧化钾标准溶液浓度， mol/L； V0——空白试验消耗氢氧化钾的体 积， ml； V——测定试验消耗的氢氧化钾的 体 积，ml； m——试验质量，g。
比色法
原理：向含有EDTA二钠盐的PH=7的缓 冲液的分析悬浮液中加入尿素溶液，在 30℃下保温5min，加入磷钨酸终止酶作 用并沉淀蛋白质。产生的氨在次溴酸钠和 麝香草酚作用下形成蓝色的靛麝香草酚， 借以比色。
大豆饼粕中脲酶活性的测定
豆粕的蛋白质含量为45%左右，是一 种优质的蛋白质饲料，但是由于其中的抗 营养因子较多，极大的限制了豆粕在饲料 中的应用。
大豆中的抗营养因子
胰蛋白酶抑制剂 植物红细胞凝集素 皂甙 胃肠胀气因子 植酸 抗维生素 致甲状腺肿因子
这些抗营养因子大多是不耐热的，
在大豆饼粕的加工过程中由于加热而失 活，从而降低或者失去其有害作用 ，因 此，在大豆加工生产饲用饼粕时，必须 对大豆粕进行充分而又适当的加热，这 样才能使其中的抗营养因子失活 。
评价大豆饼粕的指标
脲酶活性： 检测豆粕的加热程度是否足以 破坏其中的抗营养因子的指标。 蛋白质溶解度：反映豆粕是否加热过度的 一个指标。
快速测定方法2
在培养皿上放入少量的豆饼粕，在样品上 滴入少量指示剂并搅拌，将其平铺于培养皿中， 放置5min后观察结果。 无任何红点出现，再放置25min仍然无红点出 现，说明豆粕过熟； 有少量红点出现，说明脲酶活性较低，豆粕可 用； 样品表面有25％被红点覆盖，豆粕可用； 样品表面有50％被红点覆盖，应慎用； 样品表面有75％－100％被红点覆盖，脲酶活 性过高，豆粕过生，不可用；
大豆中的抗营养因子?胰蛋白酶抑制剂?植物红细胞凝集素?皂甙?胃肠胀气因子?植酸?抗维生素?致甲状腺肿因子这些抗营养因子大多是不耐热的在大豆饼粕的加工过程中由于加热而失活从而降低或者失去其有害作用因这些抗营养因子大多是不耐热的在大豆饼粕的加工过程中由于加热而失活从而降低或者失去其有害作用因此在大豆加工生产饲用饼粕时必须此在大豆加工生产饲用饼粕时必须对大豆粕进行充分而又适当的加热这样才能使其中的抗营养因子失活
大豆制品中尿素酶活性测定方法_1
大豆制品中尿素酶活性测定方法中华人民共和国专业标准蛋白酶活力测定法ZBX66030-87Measurementofproteinaseactivity本方法适用于酿造酱油时在制品菌种、成曲的蛋白酶活力测定。
1福林法试剂及溶液:以下试剂都为分析纯福林试剂(Folin试剂):于2000mL磨口回流装置内,加入钨酸钠(Na2WO4·2H2O)100g,钼酸钠(Na2MoO4·2H2O)25g,蒸馏水700mL,85%磷酸50mL,浓盐酸100mL,文火回流10h。
取去冷凝器,加入硫酸锂(Li2SO4)50g,蒸馏水50mL,混匀,加入几滴液体溴,再煮沸15min,以驱逐残溴及除去颜色,溶液应呈黄色而非绿色。
若溶液仍有绿色,需要再加几滴溴液,再煮沸除去之。
冷却后,定容至1000mL,用细菌漏斗(No4～5)过滤,置于棕色瓶中保存。
此溶液使用时加2倍蒸馏水稀释。
即成已稀释的福林试剂。
碳酸钠溶液:称取无水碳酸钠(Na2CO3),定容至1000mL。
三氯乙酸(TCA)溶液:称取三氯乙酸(CCL3COOH),定容至1000mL。
磷酸盐缓冲液:称取磷酸二氢钠(NaH2PO4·2H2O),定容至1000mL,即成溶液(A液)。
称取磷酸氢二钠(Na2HPO4·12H2O),定容至1000mL,即成溶液(B液)。
取A液28mL和B液72mL,再用蒸馏水稀释1倍,即成的磷酸盐缓冲液。
2%酪蛋白溶液:准确称取干酪素2g,称准至,加入氢氧化钠10mL,在水浴中加热使溶解(必要时用小火加热煮沸),然后用磷酸盐缓冲液定容至100mL即成。
配制后应及时使用或放入冰箱内保存,否则极易繁殖细菌,引起变质。
100μg/mL酪氨酸溶液:精确称取在105℃烘箱中烘至恒重的酪氨酸,逐步加入6mL1N盐酸使溶解,用盐酸定容至100mL,其浓度为1000μg/mL,再吸取此液10mL,以盐酸定容至100mL,即配成100μg/mL的酪氨酸溶液。
豆粕脲酶活性相关资料
V：消耗氢氧化钠体积，ml。
滴定法（续）
操作方法
称取0.2000g试样，转入比色管中，加入10ml尿素缓冲液， 立即盖好盖子并剧烈摇动。置于30±0.5℃恒温水浴上准确保 持30min后立即加入10ml0.1mol/l盐酸，迅速冷却到20℃， 将比色管内容物全部转入烧杯，用水冲洗比色管2～3次，立 即用标准氢氧化钠溶液滴定至PH＝4.7。
大豆中脲酶活性测定
为什么要测定脲酶？
脲酶毒性
一般脲酶并没有毒性作用，但在一定温度和pH值条件下，生 大豆的脲酶遇水迅速将含氮化合物分解成氨，引起氨中毒。 大豆中的抗营养因子：胰蛋白酶抑制剂最重要
评估胰蛋白酶抑制剂活性
大豆饼粕中胰蛋白酶抑制剂抑制动物的生长和引起胰腺肥大。 而直接测定大豆饼粕中的胰蛋白酶抑制剂的活性比较困难、 耗时。脲酶和胰蛋白酶抑制剂在加热时有相近的速率变性， 并且脲酶对热的抵抗力比胰蛋白酶抑制剂强，又易于测定， 所以常用脲酶活性指标来判断大豆饼粕加热的程度和估计大 豆饼粕中胰蛋白酶抑制剂是否已经被破坏。
另取比色管做空白试验，加入10ml尿素缓冲液，10ml0.1 mol/l盐酸。称取与上述试样量相当的试样，迅速加入比色管中，
立即盖好比色管并剧烈摇动，在30±0.5℃恒温水浴上准确保 持30min，冷却到20℃，将比色管内容物全部转入烧杯，用 水冲洗比色管2～3次，用标准氢氧化钠溶液滴定至PH＝4.7。
滴定法（续）
仪器与器皿 pH计 恒温水浴 比色管 10ml移液管
滴定法（续）
试剂
尿素：分析纯 尿素缓冲液：4.45g磷酸氢二钠和3.40g磷酸二氢钾溶于水并
稀释至1000ml，再将30g尿素溶于此缓冲液中。 0.1mol/l盐酸 0.1mol/l氢氧化钠标准溶液
膨化大豆的掺假鉴别法及脲酶活性的专业控制
膨化大豆掺假鉴别方法感官特征：鲜黄亮泽，粉细蓬松，豆香浓郁。
询问法：①询问膨化大豆的原料：是进口大豆还是国产大豆膨化大豆的蛋白和脂肪含量因产地不同而异，但两者一般呈负相关； 国产大豆膨化大豆，蛋白36-38%、脂肪17-19%，色泽金黄色； 进口大豆膨化大豆，蛋白34-36%、脂肪19-21%，色泽较暗；色泽除因大豆品种、产地区别外，还与杂质含量有关，杂质多则颜色偏暗。
理化指标：要求膨化大豆供应商提供蛋白、脂肪含量和尿酶活性等指标。
水分 % 粗蛋白 %粗脂粉 % 粗纤维% 粗灰分 % 脲酶活性 Mg/g.m in 蛋白质溶解度 % 猪消化能 兆卡/千克 鸡代谢能兆卡/千克 ≤12 ≥35 ≥16 ≤7.0 ≤6.0 0.02-0.272-85 4.22 3.75价格比较法：膨化大豆价格比大豆原粮一般会高出350-500元，如低于大豆原料肯定是有问题的膨化大豆。
膨化大豆参考价位阈值自行估算法：Waldroup (1982)A = (0.874 X B) + C (1.256 x D)B = 1吨 44% CP 豆粕价C = 全脂大豆含油量D = 1吨植物油价格后端加油的辨别方法：油厂不合格低蛋白豆粕+油厂大豆油精炼过程中的下脚油，感观上呈，粗蛋白粗脂肪化验合格。
眼观法：如多次处理过的油条鼻嗅法：没有豆香浓郁的感觉吸油纸法：膨化大豆外边油份大镜检法：显微镜下油脂分子分布不均匀筛下豆、豆瓣、劣质豆加工膨化大豆：毒素检测法：毒素超标灰分检测法：灰分值偏高价格测算法：与膨化大豆使用价值公式偏离较大第二页膨化大豆的脲酶的专业控制（已设计好）。
全脂膨化大豆的加工及品质检测
全脂膨化大豆的加工及品质检测在上世纪60年代末，人们已在肉鸡饲喂中进行了熟化全脂大豆的应用研究。
随着人们对全脂膨化大豆营养价值的认识加深和膨化工艺的逐步完善，全脂膨化大豆作为高能高蛋白饲料资源越来越多地应用于畜禽饲料中，在饲料生产中使用全脂膨化大豆来降低成本，提高效益，具有十分重要的意义。
一、全脂膨化大豆的概念及其特点大豆蕴藏着极其丰富的营养物质，但由于生大豆内含有许多抗营养因子，如胰蛋白酶抑制因子、尿素酸、血球凝集素等不利于动物消化吸收的成分，所以不能直接用来饲喂动物。
通过热处理加工可以很容易地使这些有害因子的含量降低到可以饲用的安全范围之内。
所谓的全脂膨化大豆是将整粒大豆或粉碎后的大豆经过热处理加工，通常是经过膨化机，在加工的过程中不添加或提取任何物质而加工的产品，呈金黄色，多微孔、细粒状具有高能高蛋白的特性。
全脂膨化大豆在高能高蛋白饲料中有较高的使用价值，并且进行了140－170℃高温处理，降低了胰蛋白酶抑制因子、尿素酶等抗营养因子的活性，提高了利用率，而且它所含脂肪的热能比牛油、猪油高，且多属不饱和脂肪酸，饲料中可以减少添加的脂肪量，大豆在挤压膨化过程中，其物理、化学组成和性质都发生了不同程度的变化，其代谢能值及蛋白质和脂肪的消化率明显提高，各种氨基酸的消化率都在90％以上。
膨化以后，大豆具有较好的适口性和诱食性，提高畜禽的采食量。
膨化后的全脂大豆粉在去掉毒素的同时，保全了大豆的营养成分，权衡配合饲料中能值与蛋白质的限制性影响，可使蛋能比例维持在一个理想的水平上，使用全脂膨化大豆可以节省添加油脂设备和减少饲料中添加油脂的数量，避免了混合加油的不均匀现象，可以改善饲料外观，提高畜禽对饲料的适口性，并且可以减少饲料加工的粉尘浓度，减少混合机、制粒机的磨损，便于随时生产加工以及生产效率的提高。
二、全脂膨化大豆的加工工艺及工作原理常规的膨化加工工艺为：原料－筛选除杂－粉碎－膨化－冷却－成品打包。
不同方法测定大豆脲酶活性的比较研究
不同方法测定大豆脲酶活性的比较研究杨奇慧舒璐钟剑锋摘要：用滴定法和增值法测定大豆粉在85℃和140℃下分别热处理0、45、90、135、180min的脲酶活性，并用0.2%KOH溶解法测定大豆粉在不同热处理下的蛋白质溶解度。
结果表明：在85℃条件下，处理0～180min 大豆粉的脲酶活性和蛋白质溶解度随着时间延长无明显变化；而在140℃条件下，大豆粉的脲酶活性和蛋白质溶解度随着处理时间的延长显著降低。
通过测定结果可见，同一样品用滴定法和增值法测得的脲酶活性在数值上不相等，不能互用，但蛋白质溶解度更能反映大豆粉受热过度的程度。
关键词：大豆粉；脲酶活性；蛋白质溶解度；pH增值法；滴定法众所周知，大豆含有较丰富的蛋白质、脂肪、碳水化合物等，是饲料生产中主要的植物蛋白质源之一，具有较高营养价值。
但是，大豆中含有多种抗营养因子，如蛋白酶抑制因子、植物凝集素、胃肠胀气因子、抗维生素因子、抗原蛋白等，这些抗营养因子阻碍营养物质在动物体内的利用，尤其是胰蛋白酶抑制因子的存在不仅会降低饲料营养成分的消化率和适口性，而且也会影响动物对蛋白质的消化吸收，对动物生长发育也产生不良的影响。
但是，胰蛋白酶抑制因子的测定较困难，而豆粕中脲酶活性与胰蛋白酶抑制因子活性呈正相关，所以通常通过测定脲酶活性来反映蛋白酶抑制因子的活性。
目前，脲酶活性的测定方法有滴定法（国标法）、pH增值法等，目前，对脲酶活性不同测定方法差异性的研究较少，本文拟对两种方法进行研究，以比较不同方法对测定结果的影响，为实际生产和理论研究提供依据和参考。
1 材料和方法1.1 实验材料大豆粉：将生大豆粉碎，过60目标准筛。
在85℃和140℃下分别处理0、45、90、135和180min冷却后装入封口袋保存备用。
1.2 化学试剂本实验所用试剂均为分析纯（AR），实验用水为蒸馏水。
1.3 测定方法1.3.1 pH增值法实验原理：将研细的试样与尿素缓冲液混合，尿素在尿素酶作用下水解产生氨，使溶液pH 值改变，改变的程度与脲酶活性大小相关，因此可以用其与空白溶液的差值表示脲酶活性高低，单位为△pH值。
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膨化大豆掺假鉴别方法
感官特征：鲜黄亮泽，粉细蓬松，豆香浓郁。
询问法：
①询问膨化大豆的原料：是进口大豆还是国产大豆
膨化大豆的蛋白和脂肪含量因产地不同而异，但两者一般呈负相关； 国产大豆膨化大豆，蛋白36-38%、脂肪17-19%，色泽金黄色； 进口大豆膨化大豆，蛋白34-36%、脂肪19-21%，色泽较暗；
色泽除因大豆品种、产地区别外，还与杂质含量有关，杂质多则颜色偏暗。
理化指标：要求膨化大豆供应商提供蛋白、脂肪含量和尿酶活性等指标。
水分 % 粗蛋白 %
粗脂粉 % 粗纤维
% 粗灰
分 % 脲酶活性 Mg/g.m in 蛋白质溶解度 % 猪消化能 兆卡/千克 鸡代谢能兆卡/千克 ≤
12 ≥35 ≥16 ≤7.0 ≤6.0 0.02-0.2
72-85 4.22 3.75
价格比较法：膨化大豆价格比大豆原粮一般会高出350-500元，如低
于大豆原料肯定是有问题的膨化大豆。
膨化大豆参考价位阈值自行估算法：Waldroup (1982)
A = (0.874 X B) + C (1.256 x D)
B = 1吨 44% CP 豆粕价
C = 全脂大豆含油量
D = 1吨植物油价格
后端加油的辨别方法：
油厂不合格低蛋白豆粕+油厂大豆油精炼过程中的下脚油，感观上呈，粗蛋白粗脂肪化验合格。
眼观法：如多次处理过的油条
鼻嗅法：没有豆香浓郁的感觉
吸油纸法：膨化大豆外边油份大
镜检法：显微镜下油脂分子分布不均匀
筛下豆、豆瓣、劣质豆加工膨化大豆：
毒素检测法：毒素超标
灰分检测法：灰分值偏高
价格测算法：与膨化大豆使用价值公式偏离较大
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