乙肝病毒核酸定量SOP
乙型肝炎病毒抗体诊断(胶体金法SOP)标准操作程序
乙型肝炎病毒抗体诊断（胶体金法SOP）测定标准操作程序编写者：宿金涛日期：2012年3月1日一. 原理：乙型肝炎病毒表面抗原、表面抗体、e抗原、e抗体、核心抗体检测试剂盒（胶体金法）采用胶体金免疫层析分析技术、将五个诊断意义相关的试剂通过一个包装组合在一起，同时进行乙型肝炎病毒五项标志物的检测，在不影响各自性能的情况下，便于客户的储存和使用。
HBsAg检测试剂采用双抗体夹心法，试剂含有被事先固定于膜上测试区(T)的抗体。
测试时，标本滴入试剂加样处，标本与预包被的胶体金颗粒结合的抗HBsAg抗体反应。
然后，混合物随之在毛细效应下向上层析。
如是阳性，胶体金抗体在层析过程中先于标本中的HBsAg结合，随后家何物会被固定在膜上的抗HBsAg抗体结合，在测试区内（T）会出现一条紫红色带。
这条带是HBsAg抗体-HBsAg-HBsAg抗体金标粒子的复合物在膜上结合形成的。
如是阴性，则测试区内（T）将没有紫红色带。
无论HBsAg是否存在于标本中，一条紫红色带都会出现在指控内（C）。
质控区内（C）所显现的紫红色条带是判定是否有足够标本，层析过程是否正常的标准，同时也作为试剂的内控标准。
HBsAb检测试剂双抗原夹心法，试剂含有被事先固定于膜上测试区（T）的乙肝表面抗体。
测试时，标本滴入试剂加样处，标本与预包被的胶体金颗粒结合的HBsAg反应。
然后，混合物随之在毛细效应下向上层析。
如是阳性，胶体金抗体在层析过程中先于标本中的HBsAg结合，随后结合物会被固定在膜上的HBsAg抗体结合，在测试区内(T)会出现一条紫红色条带。
这条带是HBsAg-HBsAb-HBsAg金标粒子的复合物在膜上结合形成的。
如果阴性，则测试区内(T)将没有紫红色条带。
无论HBsAg是否存在于标本中，一条紫红色条带都会出现在质控区内(C)。
质控区内(C)所显现的紫红色条带是判定是否有足够标本，层析过程是否正常的标准，同时也作为试剂的内控标准。
HBeAg检测试剂采用双抗体夹心法，试剂含有被事先固定于膜上测试区（T）的乙肝e抗体。
乙型肝炎病毒核酸定量检测标准作业指导书
乙型肝炎病毒核酸定量检测标准作业指导书-模板1.目的采用PCR技术、实时荧光探针技术，用于临床血清或血浆标本中的乙型肝炎病毒核酸的定量检测，或用于乙型肝炎的辅助诊断和抗病毒药物治疗中的疗效观察。
2.范围适用于乙型肝炎病毒核酸（HBV DNA）定量检测（PCR-荧光探针法）。
3.职责3.1操作人员：负责标本制备检测、仪器操作、报告发送。
3.2专业组组长：负责本组耗材的请购，监督本组标本检测、仪器操作、报告发送、质控管理等各方面工作。
3.3实验室主任：负责监督和指导实验室各方面工作。
4.原理采用荧光PCR技术，以HBV基因组中相对保守区为靶区域，设计特异性引物及荧光探针，在样品核酸纯化之后，通过荧光定量PCR对HBV DNA进行扩增，并检测荧光信号，仪器软件系统自动绘制出实时扩增曲线，根据阈循环值（CT）实现对未知样品的检测。
另外，本试剂盒带有内标物质，用于对核酸提取的整个过程进行监控，减少假阴性结果的出现。
5.样品要求5.1适用样品类型：血清或血浆。
5.2样品采集：5.2.1血清用一次性无菌注射器抽取受检者静脉血2:^，注入无菌的真空采血管中（未加抗凝剂），室温（22-25℃）放置30-60min血标本可自发完全凝集析出血清，或直接使用水平离心机，1500rpm离心5min，吸取上层血清，转移至1.5ml灭菌离心管。
5.2.2血浆用一次性无菌注射器抽取受检者静脉血2ml，注入含EDTA （乙二胺四乙酸二钠）抗凝剂的真空采血管，立即轻轻颠倒混匀5-10次，使抗凝剂与静脉血充分混匀，5-10min后分离血浆于无菌的1.5ml 灭菌离心管。
5.3样品保存和运送使用专用样品0c冰壶送检，温度约维持在4℃左右。
分离后的血清或血浆可立即用于测试，也可以保存于-20℃待测，保存期为6个月。
5.4拒收样品：拒绝重度溶血样品、肝素抗凝的血浆。
6.仪器和试剂6.1仪器AB7500核酸扩增仪、恒温金属浴、生物安全柜、低温离心机等。
乙型肝炎病毒抗体诊断(胶体金法SOP)标准操作程序
乙型肝炎病毒抗体诊断（胶体金法SOP）测定标准操作程序编写者：宿金涛日期：2012年3月1日一.原理：乙型肝炎病毒表面抗原、表面抗体、e抗原、e抗体、核心抗体检测试剂盒（胶体金法）采用胶体金免疫层析分析技术、将五个诊断意义相关的试剂通过一个包装组合在一起，同时进行乙型肝炎病毒五项标志物的检测，在不影响各自性能的情况下，便于客户的储存和使用。
HBsAg检测试剂采用双抗体夹心法，试剂含有被事先固定于膜上测试区（T）的抗体。
测试时，标本滴入试剂加样处，标本与预包被的胶体金颗粒结合的抗HBsAg抗体反应。
然后，混合物随之在毛细效应下向上层析。
如是阳性，胶体金抗体在层析过程中先于标本中的HBsAg结合，随后家何物会被固定在膜上的抗HBsAg抗体结合，在测试区内（T）会出现一条紫红色带。
这条带是HBsAg抗体-HBsAg-HBsAg抗体金标粒子的复合物在膜上结合形成的。
如是阴性，则测试区内（T ）将没有紫红色带。
无论HBsAg是否存在于标本中，一条紫红色带都会出现在指控内（C）。
质控区内（C）所显现的紫红色条带是判定是否有足够标本，层析过程是否正常的标准，同时也作为试剂的内控标准。
HBsAb检测试剂双抗原夹心法，试剂含有被事先固定于膜上测试区（T）的乙肝表面抗体。
测试时，标本滴入试剂加样处，标本与预包被的胶体金颗粒结合的HBsAg反应。
然后，混合物随之在毛细效应下向上层析。
如是阳性，胶体金抗体在层析过程中先于标本中的HBsAg结合，随后结合物会被固定在膜上的HBsAg抗体结合，在测试区内（T）会出现一条紫红色条带。
这条带是HBsAg-HBsAb-HBsAg金标粒子的复合物在膜上结合形成的。
如果阴性，则测试区内（T）将没有紫红色条带。
无论HBsAg是否存在于标本中，一条紫红色条带都会出现在质控区内（C）。
质控区内（C）所显现的紫红色条带是判定是否有足够标本，层析过程是否正常的标准，同时也作为试剂的内控标准。
HBeAg检测试剂采用双抗体夹心法，试剂含有被事先固定于膜上测试区（T）的乙肝e抗体。
乙型肝炎病毒核酸定量检测操作程序
乙型肝炎病毒核酸定量检测操作程序
标本编号：操作时间：操作者：
1、将浓缩液及样品从-20℃取出，平衡至室温（ - ）。
2、用移液器加（）ul血清到（）ul浓缩液，振荡混匀。
3、将混匀好的标本放入高速冷冻离心机（）转离心（）分钟。
4、弃上清，沉淀中加入（）ul DNA提取液混匀。
5、（）℃恒温（）分钟（10±1分钟）。
6、（）转离心（）分钟，备用。
7、吸取（）ul上清到反应管，瞬时离心（）秒。
8、将反应管通过传递窗到产物扩增区准备扩增。
9、用ABI 7500扩增仪进行扩增.
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乙型肝炎病毒(HBV)核酸定量检测标准操作规程
乙型肝炎病毒（HBV）核酸定量检测标准操作规程（PCR-荧光探针法）1.目的: 规范乙型肝炎病毒（HBV）核酸定量检测操作流程，保证检测结果的准确性。
2.应用范围: HBV DNA 荧光定量检测。
3.职责:3.1 文件编写：实验室技术员。
3.2 文件审核：实验室主管。
3.3 文件审批：实验室主任。
3.4 执行：PCR实验室所有工作人员。
4. 参考文献：4.1 中山大学达安基因股份有限公司乙型肝炎病毒（HBV）核酸定量检测试剂盒（PCR-荧光探针法）说明书。
4.2 中山大学达安基因股份有限公司核酸扩增荧光检测系统DA7600型使用说明书。
5. 内容：5.1 检测方法：PCR-荧光探针法。
5.2 实验原理：用一对乙型肝炎病毒特异性引物和一条乙型肝炎病毒特异性荧光探针，配以PCR反应液、耐热DNA聚合酶（Taq酶）、核苷酸单体（dNTPs）等成分，通过PCR体外扩增法，即高温变性、低温退火、适温延伸进行DNA扩增，并对PCR全过程进行实时监测，从而定量检测乙型肝炎病毒DNA。
5.3 性能参数：5.3.1 精密度：检测下限为5.0x102IU/ml。
5.3.2 线性范围：1.0x103～1.0x108IU/ml。
5.4 标本采集：由合作单位按照以下要求进行采集5.4.1 标本类型：血清。
5.4.2 标本采集：用一次性无菌注射器抽取受检者静脉血2毫升，注入无菌的干燥玻璃管，室温（22～25℃）放置30～60 min，全血标本可自发完全凝集析出血清，或直接使用水平离心机，1500 rpm离心5min；吸取上层血清，转移至1.5ml灭菌离心管。
5.4.3 标本保存：标本可立即用于测试，也可以保存于-20℃待测，保存期为6个月，应避免反复冻融。
5.4.4 运送条件：标本运送采用0℃冰壶。
5.4.5 标本拒收标准：污染、严重溶血、脂血类或肝素抗凝剂标本。
5.5 设备和试剂：5.5.1 设备： DA7600荧光定量PCR仪、低速水平离心机、生物安全柜、台式高速离心机、移液器、混匀器、恒温水浴箱/干式恒温器、冰箱（4℃、-20℃）、移动/固定紫外灯、冷冻离心机。
乙型肝炎病毒抗体诊断 胶体金法SOP 标准操作程序
乙型肝炎病毒抗体诊断（胶体金法SOP）测定标准操作程序编写者：宿金涛日期：2012年3月1日一. 原理：乙型肝炎病毒表面抗原、表面抗体、e抗原、e抗体、核心抗体检测试剂盒（胶体金法）采用胶体金免疫层析分析技术、将五个诊断意义相关的试剂通过一个包装组合在一起，同时进行乙型肝炎病毒五项标志物的检测，在不影响各自性能的情况下，便于客户的储存和使用。
HBsAg检测试剂采用双抗体夹心法，试剂含有被事先固定于膜上测试区(T)的抗体。
测试时，标本滴入试剂加样处，标本与预包被的胶体金颗粒结合的抗HBsAg抗体反应。
然后，混合物随之在毛细效应下向上层析。
如是阳性，胶体金抗体在层析过程中先于标本中的HBsAg结合，随后家何物会被固定在膜上的抗HBsAg抗体结合，在测试区内（T）会出现一条紫红色带。
这条带是HBsAg抗体-HBsAg-HBsAg抗体金标粒子的复合物在膜上结合形成的。
如是阴性，则测试区内（T）将没有紫红色带。
无论HBsAg是否存在于标本中，一条紫红色带都会出现在指控内（C）。
质控区内（C）所显现的紫红色条带是判定是否有足够标本，层析过程是否正常的标准，同时也作为试剂的内控标准。
HBsAb检测试剂双抗原夹心法，试剂含有被事先固定于膜上测试区（T）的乙肝表面抗体。
测试时，标本滴入试剂加样处，标本与预包被的胶体金颗粒结合的HBsAg反应。
然后，混合物随之在毛细效应下向上层析。
如是阳性，胶体金抗体在层析过程中先于标本中的HBsAg结合，随后结合物会被固定在膜上的HBsAg抗体结合，在测试区内(T)会出现一条紫红色条带。
这条带是HBsAg-HBsAb-HBsAg金标粒子的复合物在膜上结合形成的。
如果阴性，则测试区内(T)将没有紫红色条带。
无论HBsAg是否存在于标本中，一条紫红色条带都会出现在质控区内(C)。
质控区内(C)所显现的紫红色条带是判定是否有足够标本，层析过程是否正常的标准，同时也作为试剂的内控标准。
HBeAg检测试剂采用双抗体夹心法，试剂含有被事先固定于膜上测试区（T）的乙肝e抗体。
乙肝核糖核酸定量标准
乙肝核糖核酸定量(HBV-DNA)是衡量乙型肝炎病毒在血液中的病毒载量的一种方法。
它可以帮助医生评估病毒复制的活跃程度，从而判断疾病的活动状态和治疗的需要。
乙肝核糖核酸定量的标准值因实验室和测量方法的不同而略有差异。
通常，以下是一些常见的参考范围：
1. 不可检测:HBV-DNA 的浓度低于实验室检测的下限，通常表示病毒复制非常低或没有病毒复制。
2. 低病毒载量:HBV-DNA 的浓度低于 2，000 IU/mL 或 10^4 copies/mL。
3. 中等病毒载量:HBV-DNA 的浓度在 2，000 IU/mL 至 20，000 IU/mL 或 10^4 copies/mL 至 10^5 copies/mL 之间。
4. 高病毒载量:HBV-DNA 的浓度高于 20，000 IU/mL 或 10^5 copies/mL。
需要注意的是，即使在高病毒载量的情况下，也不意味着疾病的活动性就一定很高。
治疗决策通常还会考虑其他因素，如ALT(丙氨酸氨基转移酶)水平、肝脏组织学改变等。
如果您或您认识的人被诊断为乙型肝炎，建议与肝病专家或感染病专家进行详细咨询，以获取更具体和个体化的建议。
最新实验室病毒检查标准操作规程SOP
精品资料实验室病毒检查标准操作规程S O P........................................病毒检测标准操作规程1 目的制定外源病毒检测标准操作规范，确保公司角膜基质细胞检测的规范性。
2 范围干细胞产品。
3 职责干细胞质检操作人应严格执行此操作规程。
4 程序4.1 主要试剂人抗人类免疫缺陷病毒抗体（HIV）ELISA检测试剂盒、人乙型肝炎病毒（HBV）ELISA检测试剂盒、人丙型肝炎病毒（HCV）ELISA检测试剂盒、人抗人类疱疹病毒抗体（EBV）ELISA检测试剂盒、人巨细胞病毒（CMV）ELISA检测试剂盒4.2试验步骤4.2.1样品的处理：取客户血液上清1ml或细胞培养液1mL，3000rpm离心20min，收集上清。
4.2.2从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。
4.2.3设置阴、阳性对照孔和样本孔，阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照各50μL。
4.2.4待测样本孔加待测样本50μL。
4.2.5随后阴、阳性对照孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
4.2.6弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次。
4.2.7每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。
4.2.8每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。
4.2.9计算和结果判定：试验有效性：阳性对照孔平均值≥1.00；阴性对照平均值≤0.15临界值（CUT OFF）计算：临界值＝阴性对照孔平均值＋0.15阴性判定：样品OD值< 临界值（CUT OFF）者为阴性阳性判定：样品OD值＞临界值（CUT OFF）者为阳性4.3 注意事项4.3.1五种病毒检测的方法稍有差别，详细方法请参见各试剂盒的说明书。
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1、目的
采用PCR技术、实时荧光探针技术，用于临床血清或血浆标本中的乙型肝炎病毒核酸的定量检测，或用于乙型肝炎的辅助诊断和抗病毒药物治疗中的疗效观察。
2、原理
本试剂盒采用乙型肝炎病毒(HBV)-核酸释放剂快速裂解、释放血清或血浆样本中的乙型肝炎病毒(HBV)DNA,利用针对乙型肝炎病毒(HBV)核酸保守区设计的一对特异性引物、一条特异荧光探针，配以PCR反应液，在荧光定量PCR仪上，应用实时荧光定量PCR检测技术，通过荧光信号的变化实现乙型肝炎病毒(HBV) DNA的定量检测。
整个试验过程无须单独提取样本中的DNA，只需将血清或血浆样本直接加入PCR反应管中与乙型肝炎病毒(HBV) -核酸释放剂充分混合即可作为PCR扩增的模板，避免了常规样本核酸提取过程中的环境污染。
PCR检测体系含有UNG酶+dUTP防污染措施，将可能的产物污染充分降解，避免假阳性结果。
PCR检测体系含有阳性内对照（乙型肝炎病毒（HBV）内标），通过检测内标是否正常来监测待测样本中是否具有PCR抑制物，避免PCR假阴性。
PCR检测体系含有内参比荧光ROX，用于校正加样误差和管间差异，便于仪器自动分析报告荧光与内参比荧光ROX的比值，使定量更准确。
3、试剂保存及有效期
试剂应避光密闭保存于-20±5℃。
试剂盒有效期为12个月，避免反复冻融。
采用泡沫加冰运输5天不会影响产品效期。
4、样本要求
4.1. 适用样本类型:血清或血浆样本。
4.2. 样本采集:
4.2.1 血清样本采集:用无菌注射器抽取受检者静脉血2ml, 注入无菌收集管，室温不超过4小时，待样本自行析出血清，或直接室温1600rpm离心5分钟分离出血清，转移到1.5ml灭菌离心管中备用；
4.2.2血浆样本采集:用无菌注射器抽取受检者静脉血2ml,注入含有EDTA或枸橼
酸钠抗凝剂的无菌收集管，立即轻轻颠倒混匀，室温不超过4小时，待样本自行析出血浆，或直接1600pm离心5分钟分离出血浆，转移到1.5ml灭菌离心管中备用。
5、样本保存
经上述处理后的待测血清或血浆样本可立即用于检测，或-20±5℃保存（3个月），长期保存请置于-70℃以下。
以避免反复冻融。
标本运送采用冰壶加冰或泡沫箱加冰密封进行运输。
6、检验方法
6.1.试剂准备( 在试剂准备区进行)
6.1.1取出包装盒中的各组分，室温放置，待其温度平衡至室温后，混匀后备用；
6.1.2根据待测样本、阴性对照、阳性对照以及定量参考品A~D数量，按比例(反应液38μl/人份+酶混合液2μl/人份+内标0.2μl/人份)
取相应量的反应液、酶混合液及内标，充分混匀成PCR混合液，瞬时离心后备用。
6.2样本处理及加样(在样本处理区进行) (阴性对照、阳性对照、定量参考品与待测样本同步处理)
6.2.1建议推荐使用湖南圣湘生物科技有限公司生产的样本释放剂提取样本核酸（八联管中加入5μl样本+5μl样本释放剂）；
6.2.2每管再加入PCR混合液40μl,盖上管盖(可用手指弹击，去除气泡)，2000rpm 离心30秒。
6.3.PCR扩增(在扩增与分析区进行) (请参照各仪器使用说明书进行设置)
6.3.1 将PCR反应管放入扩增仪样品槽，按对应顺序设置阴性对照、阳性对照、定量参考品A~ D以及未知样本，并设置样本名称及定量参考品浓度；
6.3.2 荧光检测通道选择
以ABI 7300仪器为例: 1)选择FAM通道(Reporter: FAM, Quencher:none)检测乙型肝炎病毒(HBV) DNA; 2)选择HEX/VIC通道(Reporter: HEX/VIC, Quencher:none)检测乙型肝炎病毒(HBV)内标: 3)参比荧光( Passive Reference)设置为ROX；
6.3.3 循环参数设定(不同仪器，时间参数不同，见下表):
步骤温度时间循环
数
ABI/Stratagene仪器Roche仪器
1 UNG酶反应50℃2分钟2分钟 1
2 Tag酶活化94℃5分钟2分钟 1
3 变性94℃15秒5秒45
57℃30秒* 30秒退火，延伸，及
荧光采集
4 仪器冷却25℃10秒10秒 1 （*注：由于ABI7500仪器原因，不能设置为30秒，可以设置为31秒。
）
设置完毕，保存文件，运行反应程序。
7、检测结果解释
7.1对于测定值在1.0×102~5.0×109IU/ml之间的样本,且扩增曲线
成明显S型,报告相应的测定结果。
7.2对于测定值>5×109U/ml的样本,且扩增曲线成明显S型,报告注明>50×109IU/ml。
若需精确定量可根据结果,将样本稀释至5.0×109IU/ml以下再复测。
7.3对于测定值≥30IU/ml,而<1.0×1021U/ml的样本,且扩増曲线成明显S型,同时,内标检测为阳性且Ct≤40,表明病毒载量低,可直接报告测定值,但注明:所测定量结果仅供参考。
7.4对于测定值30IUml的样本,同时,内标检测为阳性(Ct值≤40),则报告乙型肝炎病毒(HBV)DNA含量低于试剂盒检测下限:若内标Ct值>40或无显示,则该样本的检测结果无效,应査找并排除原因,并对此样本进行重复实验(若重复试验的检测结果仍无效,请与本公司联系)。
8、检测方法的局限性
样本检测结果与样本收集、处理、运送及保存质量有关，其中任何失误都将会导致结果不准确。
如果样本处理时没有控制好交叉污染，可能出现假阳性结果。
9、质量控制
9.1乙型肝炎病毒（HBV）阴性对照：无Ct值显示；但乙型肝炎病毒（HBV）-内标检测为阳性（Ct值≤40）。
9.2乙型肝炎病毒（HBV）阳性对照：检测浓度值介于1.26×105~1.26×106IU/ml。
9.3四个乙型肝炎病毒（HBV）定量参考品：均检测为阳性，且标准曲线相关系数│r│≥0.98。
9.4以上要求需在同一次实验中同时满足，否则，本次实验无效，需重新进行。
10、注意事项
10.1.本品仅用于体外诊断,使用前请仔细阅读本说明书。
10.2.试验前请熟悉和掌握需使用的各种仪器的操作方法和注意事项,对每次实验进行质量控制。
10.3.实验室管理应严格按照PCR基因扩增实验室的管理规范,实验人员必须进行专业培训,实验过程严格分区进行,所用消耗品应灭菌后一次性使用,实验操作的每个阶段使用专用的仪器和设备,各区各阶段用品不能交叉使用。
10.4.所有检测样品应视为具有传染性物质,实验过程中穿工作服,戴一次性手套并经常替换手套以避免样品间的交叉污染;样本操作、废弃物处理均需符合相关法规要求:卫生部《微生物生物医学实验室生物安全通用准则》和《医疗废物管理条例》。
10.5.所有的试剂在使用前,均需在室温下充分融化、混匀后使用。