GAPDH内参抗体,抗GAPDH单抗,GAPDH小鼠源单克隆抗体
gapdh分子量 内参 wb
gapdh分子量内参 wb
GAPDH（糖酵解酶磷酸化酶-巯基磷酸化酶）是一种常用的内参蛋白，用于Western Blot（免疫印迹）实验中。
GAPDH分子量约为36 kDa。
在进行Western Blot实验时，GAPDH常被用作内参蛋白的选择，用来校正样品之间的蛋白负荷差异。
通过对GAPDH的检测，可以确定蛋白表达的相对水平，并将其与其他目标蛋白的表达进行比较。
要探究特定蛋白在不同条件下的表达变化，首先需要提取细胞或组织中的总蛋白，并经过电泳分离。
然后，将蛋白转移到膜上，并使用特定的抗体进行免疫反应。
最后，使用二抗结合的荧光标记或酶标记的二级抗体来识别并可视化蛋白。
在Western Blot实验中，将样品中的蛋白质进行电泳分离后，通过转移至膜上进行免疫检测。
GAPDH作为内参蛋白的存在，可以作为加载和转移效果的标准。
其分子量为约36 kDa，因此可以作为控制带的选择，帮助确定蛋白负荷的相对水平。
免疫试验必备 内参抗体
品名 货号 价格 宿主
应用
His, HRP Labeled
CB101001 ￥3000/100ug
Rabbit
WB 1:1000 IHC 1:200 IP 1:200
北京西美杰科技有限公司 上海 电话：021-63599871 传真：021-63599873 Email：shanghai@
货号 25-01-01 24-01-01 25-00-01 24-00-02 24-00-01
品名 HisDetector Nickel-AP HisDetector Nickel-HRP HisDetector Western Blot Kit, AP Colorimetric HisDetector Western Blot Kit, HRP Chemiluminescent HisDetector Western Blot Kit, HRP Colorimetric
检测物种 Human, Mouse, Rat
品名 货号 价格 宿主
Rubisco Large Subunit AS03 037 ￥4770/100ug Rabbit
应用
WB 1:5000-1:10000 IF 1: 250
检测物种 plant and algal
北京西美杰科技有限公司 上海 电话：021-63599871 传真：021-63599873 Email：shanghai@
品名 货号 价格 宿主
β-actin CB100996 ￥1500/100ug Rabbit
应用
WB 1:1000 IP 5ug/mg lysate
检测物种 Human, Mouse
品名 货号 价格
β-actin 60008-1-Ig ￥1548/150ul
内参Beta-actin和GAPDH使用的局限性
内参Beta-actin和GAPDH使用的局限性大部分科研新手接触到的第一个实验就是蛋白免疫印迹(Westernblot e Immunoblotting)。
做这个实验最基本的步骤就是内参的选择，但是各位小伙伴有没有想过你为什么要用Beta-actin，又或者是GAPDH。
我相信你一定听师兄师姐说过“都一样”，“哪个能和目的蛋白分开就用哪个”、要么就是“以前一直用的哪个所以就用哪个”。
那么小伙伴你们觉得，真的是这么随意选择的吗？今天我就跟大家一起探讨一下两大内参 Beta-actin 和 GAPDH 使用的局限性。
Beta-actin: 脊椎动物 actin 分为α、β 和γ 三种类型，α 型主要表达于心肌和横纹肌细胞中，β 及γ 型主要表达于非肌细胞中 (这句来自百度百科)。
那么Beta-actin 的局限性具体体现在哪里呢？Angela Dittmer 等人通过使用不同抗体配比浓度 Beta-actin (1:1000, 1:2000, or 1:4000, Cell Signaling #4967) 以及不同的总蛋白质量（3.8 μg、7.5 μg、15 μg）进行实验，结果发现：1:1000 稀释时，三种总蛋白浓度的条带区别不大；而当1:4000 稀释时，才能看到Beta-actin蛋白表达会随着总蛋白质量的升高而变化（Figure 1）。
之后作者采用不同蛋白质量（0.06 μg、0.12 μg、0.23 μg、0.47μg、0.94 μg、1.88 μg、3.75 μg、7.5 μg）继续进行实验，结果显示，当总蛋白超过一定质量时，Beta-actin 条带的灰度值将不会再随着总蛋白质量的升高而升高。
换而言之，你一个样品的总蛋白质量是1.88 μg，另一个样本的总蛋白质量是7.5 μg，结果两个样本的Beta-actin 条带一摸一样（Figure 2）[1]。
怎么样，意不意外，惊不惊喜。
WB检测抗体如何选择(下)
WB检测抗体如何选择WB检测之二抗二抗选择二抗是用一抗免疫动物制备的抗一抗的抗体，选择范围较窄，基本是商品化的，在不考虑二抗修饰类型的前提下，二抗的选择需要遵循以下原则：二抗来源种属、一抗来源种属和抗原来源种属互不相同。
例如如果研究对象是人的蛋白X，选择了鼠抗X一抗，则可选择兔抗鼠二抗或者羊抗鼠二抗。
二抗选择要考虑的问题有：①对单抗类一抗，二抗需与一抗的类别或亚类相匹配（多抗类一抗主要是IgG类免疫球蛋白故相应二抗就是抗IgG F(ab’)2二抗，避免各种Ig保守结构域导致的交叉反应。
然而各种Ig仍具有保守的轻链结构域，因此还是有一定程度的交叉反应。
WB检测之内参抗体Western Blot检测方法不仅能检测靶蛋白存在与否，还能比较不同条件下或者不同组织中靶蛋白的相对表达量，可作为蛋白表达水平最直接的证据。
在WB实验中有众多不确定因素影响靶蛋白表达水平的测定，如方法学本身性质、操作误差等。
为准确衡量靶蛋白表达水平，需要精确一致的上样量，使用内参的意义即是保证上样量的一致。
内参即内部参照（Internal Control），对哺乳动物细胞一般指管家基因的表达蛋白(Housekeeping Proteins)。
此类蛋白在各组织和细胞中的表达相对恒定，可作为检测蛋白表达水平变化的参照物。
当内参条带亮度基本一致时，基本可以确定上样量是一致的，通常采用比较靶蛋白和内参蛋白条带亮度比值来进行相对定量。
WB实验中涉及到的蛋白-抗体结合是一个复杂的活性生物大分子间的相互作用，众多因素都会影响实验的结果。
例如时间、温度、浓度、离子强度等，在实验设计时就需要有严谨的对照方案，通过对照就容易判断问题所在，严谨的WB实验中需要设立蛋白分子量标准、空白载体对照、未诱导对照、已知量标准物正对照和内参。
内参使用方法1.标记内参：酶标的内参抗体可避免二抗结合总蛋白中某些免疫球蛋白产生的杂带，使用时只需在二抗孵育时加入酶标内参抗体，按照正常操作即可。
常用的标签抗体丨myc、HA、Flag、His、GST等
常用的标签抗体丨myc、HA、Flag、His、GST等三大内参：beta Actin，肌动蛋白，细胞骨架蛋白。
它们在各组织和细胞中的表达相对恒定，在检测蛋白的表达水平变化时常用它来做参照物。
beta Actin 作为内参是得到公认的，针对大多数组织和细胞来说的，它广泛分布于细胞质内，表达量非常丰富。
但是在一些少量特殊的情况下比如脂肪组织和细胞内，beta Actin 的表达量就很少。
GAPDH，甘油醛-3-磷酸脱氢酶，该酶是糖酵解反应中的一个酶，几乎在所有组织细胞中都高水平表达，在同种细胞或组织中的表达量一般是恒定的，且很少受外部诱导物的影响。
但比如缺氧和糖尿病等疾病存在下，会增加 GAPDH 在特定细胞和组织中的表达。
beta Tubulin，微管蛋白，细胞骨架蛋白。
β-Tubulin小鼠单克隆抗体(3G6) 作为内参抗体，beta Tubulin 表达通常不会发生改变，因此被广泛用于 Western Blot 内参，也常被用于免疫染色观察细胞的微管结构。
标签抗体：Flag抗体-抗Flag标签抗体融合标签，如Flag、GST等标签的使用可以简化蛋白质的纯化过程、控制蛋白质固定的空间取向及方便检测、使体内生物事件可视化、提高重组蛋白质的产量、增强重组蛋白质的可溶性和稳定性等。
常用的标签包括myc、HA、Flag、His、GST等。
其中Flag标签系统利用一个短的亲水性八氨基酸肽（DYKDDDDK）融合到目标蛋白。
His抗体-抗His标签抗体融合标签根据其相对分子质量大小可以分为两大类：大的蛋白质分子和小的多肽片段。
融合标签的使用可以简化蛋白质的纯化过程、控制蛋白质固定的空间取向及方便检测、使体内生物事件可视化、提高重组蛋白质的产量、增强重组蛋白质的可溶性和稳定性等。
GST抗体-抗GST标签抗体随着越来越多的新基因的发现，基因融合蛋白表达体系以其在新发现蛋白研究中的显著优势已得到广泛应用。
其中GST标签体系具有蛋白表达产率高、表达产物纯化方便，以及利于GST抗体制备等特点。
GAPDH抗体说明书
GAPDH抗体WB, Western blot; IF, Immunofluorescence; IHC, Immunohistochemistry.Mam, mammalian, including human, mouse, rat, pig, rabbit, dog, cat; C, chicken; Fi, fish; Fr, frog. 不能用于检测bovine和yeast样品。
本GAPDH抗体(GAPDH antibody，也称为G3PDH antibody)为进口分装，用从兔肌肉纯化获得的GAPDH作为抗原制备而成的抗GAPDH小鼠单克隆抗体。
克隆号为6C5。
GAPDH (Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase)是糖酵解(glycolysis)过程中的关键酶之一。
GAPDH由4个分子量约为36kD的亚基组成，总的分子量为146kD。
在SDS-PAGE凝胶电泳时解聚为单体，显示的分子量约为36kD。
哺乳动物的GAPDH除了在糖酵解过程中起作用外，还和membrane fusioin，microtubule bundling, RNA出核运输，DNA复制和DNA修复等有关，并和前列腺癌、神经细胞凋亡、神经退行性疾病等相关。
GAPDH几乎在所有组织和细胞中组成性高表达。
只有缺氧和糖尿病等情况可以在某些细胞中上调GAPDH的蛋白水平。
GAPDH在各种组织和细胞中都组成性高表达，因此被广泛用于Western时上样量是否一致的参照(loading control)。
配套提供了Western一抗稀释液，可以用于Western检测时的一抗稀释。
)：保存条件：GAPDH抗体-20℃保存，Western一抗稀释液-20℃或4℃保存，一年有效。
Western一抗稀释液优先推荐4℃保存，长期不使用可以考虑-20℃保存，但冻融可能会导致出现轻微的浑浊和少量不溶物。
小鼠常用内参基因
小鼠常用内参基因
小鼠常用内参基因是进行实验研究时非常重要的工具，内参基因是一种用于标准化实验结果的参照基因，用于减少实验中因样本差异和反应效率的影响。
在小鼠实验中，常用的内参基因包括GAPDH、β-actin和18S rRNA等。
GAPDH（糖酵解酶）是一种广泛存在于细胞中的酶，参与细胞内的糖酵解代谢过程，同时也是常用的内参基因。
在小鼠实验中，GAPDH 的mRNA水平是相对稳定的，因此可以作为实验中的内参基因使用。
另一个常用的内参基因是β-actin（β-肌动蛋白），β-actin
是构成细胞骨架的主要成分之一，也是一种常用的内参基因。
在小鼠实验中，β-actin的mRNA水平也是相对稳定的，因此可以用来进行实验结果的标准化。
18S rRNA是小鼠细胞中的核糖体RNA，也是常用的内参基因之一。
18S rRNA的mRNA水平在细胞中是相对稳定的，因此可以用来进行实验结果的标准化。
除了上述几种常用的内参基因外，还有许多其他的内参基因可以用于小鼠实验中。
但无论选择哪种内参基因，都需要进行验证，确保其在实验条件下的稳定性和可靠性。
只有选择合适的内参基因，才能保证实验结果的准确性和可靠性。
- 1 -。
western 内参选择 大讨论
在western blot 实验中，内参的使用是个很重要的部分，看到很多站友对内参的选择经常有些疑问，鉴于此，希望能在一个帖子里面综合所有相关问题，展开讨论，共同学习。
我先提几个，抛砖引玉，希望大家继续。
1。
为什么一定需要内参？内参的重要性。
2。
常用的几种内参。
3。
不同的情况如何选择不同的内参。
支持一下！1：用内参照是为了评价你的各个上样孔内蛋白的总量是否基本一致，通常使用一些看家蛋白，比如β-actin、GAPDH等等。
这些蛋白在所有细胞中的表达量基本一致，所以用他们来作为你加样量的对照。
这样western结果中你的目的蛋白经过处理后发生变化，而内参的条带基本均匀一致。
这样才有说服力，表明的确是处理因素造成目的蛋白的变化而不是加样误差或是人为造成目的条带浓度的变化。
严格意义上说，内参事必须做的。
2：常用的内参有：b-actin，GAPDH，近2-3 年，更详细的研究发现，β-Tubulin (球管蛋白)，被广泛应用于Western Blotting，β－Tubolin分子量为55KD左右。
3：一般我们选择内参与要检测的目的蛋白的分子量最好相差5KD以上。
因此你要知道你检测的蛋白的分子量来选择合适的内参！个人一些见解，供参考！内参的重要性，必要性：要检测一个基因的表达产物是否正确，或者比较表达产物量的相对变化，首选方法是Western Blot。
因为Western Blot操作相对简单方便，既可以定性分析表达产物，同时还可以指示目的蛋白量的相对变化。
虽然，顺利的时候Western Blot做起来很简单，可不顺的时候也很令人心烦――做不出结果啦、假阳性啦、结果出现多条带啦、到底是一抗有问题还是二抗有问题啦……毕竟，作为一种有活性的生物大分子，抗体和抗原的反应毕竟不象1+1那么明确，而用这种不确定的试剂来测定同样知之甚少的表达产物，确实是有一定的不确定性的。
所以，严谨的Western Blot实验设计中要求有良好的参照体系，对实验结果分析是非常有用。
硕士GAPDH作为原核及真核生物通用型内标蛋白的研究及相关生物技术研发,毕业范文,毕业专题,.doc
硕士：GAPDH作为原核及真核生物通用型内标蛋白的研究及相关生物技术研发,毕业,毕业专题,硕士：GAPDH作为原核及真核生物通用型内标蛋白的研究及相关生物技术研发GAPDH作为原核及真核生物通用型内标蛋白的研究及相关生物技术研发吴永红；【导师】张成岗；【基本信息】中国人民解放军军事医学科学院，生物化学与分子生物学，2013，硕士【摘要】甘油酸-3-磷酸脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase, GAPDH)是生物体内一类十分保守的重要多功能酶类，广泛存在于原核及真核生物体内，如大肠杆菌、酵母、秀丽线虫、大鼠和小鼠等模式生物，主要参与生物体内糖代谢中糖酵解的第六步反应，即催化甘油醛-3-磷酸转化为1,3-二磷酸甘油酸并释放出能量(ATP)的过程。
生物界中GAPDH单体分子量大小在30kD-40kD之间，天然状态的GAPDH主要以四聚体形式存在，其氨基酸编码序列在原核及真核生物体内均高度保守，同源性高达76%。
原核及真核生物体内GAPDH蛋白是一类功能上十分保守的重要蛋白酶超家族，在不同的物种中分别由不同的基因编码，如微生物的gapA, gapB和gapC基因、酵母菌的TDH-1, TDH-2和TDH-3基因、秀丽线虫的gpd-1,gpd-2, gpd-3和gpd-4基因、大鼠的G3PDH基因等。
不同物种中多种编码基因的存在一方面提示了不同GAPDH变体之间的功能代偿性，另一方面反映了个体应对环境压力的高度可调控性，为其作为管家蛋白的功能保守性提供了重要依据。
内标蛋白是生物体内一类重要的管家蛋白，具有序列保守性高、组织分布广等特点。
目如常见的内标蛋白主要包括：细胞骨架蛋白肌动蛋白actin、微管蛋白Tubulin、细胞代谢相关蛋白GAPDH等。
其中，GAPDH在同种细胞或组织中的蛋白表达量相对恒定，且很少受外部应激因素的影响，已被广泛用作RT-PCR和Western blot等分子生物学实验标准化的内参分子，特别是其作为内标蛋白在组织或细胞内蛋白相对表达定量中的应用。
GAPDH抗体大全
GAPDH抗体大全——总有一款合适的GAPD H抗体在Weste rn Blotin g实验中，可能存在总蛋白浓度测定不准确，或者蛋白质样品在电泳前上样时产生的样品间的操作误差；这些误差可以通过测定每个样品中实际转到膜上的内参，比如内参GA PDH的含量来进行校正。
当然除了GA PDH抗体，β-Actin抗体、β-Tubuli n抗体等也是最常见的内参抗体。
GAPDH（甘油醛-3-磷酸脱氢酶）是参与糖酵解的一种关键酶，由4个30-40kDa的亚基组成，分子量146kDa，检测条带大约在36kD a。
GAPDH基因几乎在所有组织中都高水平表达，广泛用作We stern blot蛋白质标准化的内参。
选择合适的G APDH抗体显得尤为重要，首先GAPD H的WB检测条带大约为36kD a，因此对于一些待检测分子量大于40kDa或者小于30k Da的目的蛋白尤为合适。
一般来说，国产的抗体在质量稳定性、效价等方面存在不足，但是进口品牌如Abca m、Millip ore、CST等价格偏高，一般在￥3000/100ul左右。
下面我们为您推荐三款G APDH原装进口抗体，分别是美国E arthO x和Pro teinT ech的产品。
EarthO x 的Ant i-GAPDHMonocl onalAntibo dy（货号E021010）是小鼠源的单抗，其效价很高，厂商推荐的W B起始稀释比率为1:1000，实际应用过程中，有使用1:10000或更高的报告，远远高于此稀释比率，说明其免疫效价很高，另外，其检测种属也很多，包括人、牛、猪、小鼠、大鼠等。
右图为Ear thOx的Anti-GAPDHMonocl onalAntibo dy（货号E021010）在不同细胞系内WB的检测结果。
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GAPDH内参抗体，抗GAPDH单抗，GAPDH小鼠源单克隆抗体
Anti-GAPDH Mouse Monoclonal Antibody （ 2B5）
在Western Bloting实验中，可能存在总蛋白浓度测定不准确，或者蛋白质样品在电泳前上样时产生的样品间的操作误差；这些误差可以通过测定每个样品中实际转到膜上的内参，比如内参GAPDH的含量来进行校正。
GAPDH（甘油醛-3-磷酸脱氢酶）是参与糖酵解的一种关键酶，由4个30-40kDa的亚基组成，分子量146kDa，检测条带大约在36kDa。
GAPDH基因几乎在所有组织中都高水平表达，广泛用作Western blot蛋白质标准化的内参。
应用类型：WB（1:1000-1:10,000）、IHC（1:100-1:800）
Fig.Western blot analysis (1:10,000) of GAPDH expression in Rat brain (lane A), HeLa cell lysate (lane B), Mouse brain (lane C), Rabbit muscle (lane D), Chicken muscle (lane E) and Pig heart (lane F) with Anti-GAPDH mouse monoclonal antibody (2B5).
免疫原：KLH偶联的GAPDH部分多肽序列
来源宿主：小鼠
反应性：该GAPDH内参抗体可识别人、小鼠、兔、大鼠、猴、狗、鸡、猪和绵羊等种属的GAPDH蛋白。
保存建议：能在-20℃保存1年。
为最大限度的避免损失，请在打开管盖之前融化抗体并离心。
建议使用前分装以避免反复冻融，分装后可在4℃保存1个月。
GAPDH（甘油醛-3-磷酸脱氢酶）是参与糖酵解的一种关键酶，由4个30-40kDa的亚基组成，分子量146kDa，检测条带大约在36kDa。
GAPDH基因几乎在所有组织中都高水平表达，广泛用作Western blot蛋白质标准化的内参。
因为GAPDH 作为看家基因在同种细胞或者组织中的蛋白质表达量一般是恒定的，因此在使用GAPDH内参抗体时，将每个样品测得的目的蛋白含量与本样品的GAPDH含量相除，得到每个样品目的蛋白的相对含量，然后才进行样品与样品之间的比较。
如何选择合适的GAPDH抗体？
内参抗体虽然选择较多，但是也需要遵循一定的原则，并契合实际的应用要求。
首先，需要考虑目的蛋白的大小，我们推荐内参要与检测的目的蛋白的分子量最好相差5KD以上，因此你需要根据你目的检测蛋白的分子量来选择合适的内参，由于GAPDH的检测分子量大约在36kD，因此该内参抗体不是很适合用于检测30kD-40kD大小目标蛋白的WB实验中。
另外，不同的组织来源的样本在选择内参时还有一定的区别。
比如某些细胞中，由于组织缺氧、糖尿病等因素会导致GAPDH的表达增高，不适合做内参。