人用鼠源性单克隆抗体中鼠源性病毒的检测
Rb Gene Protein抗体试剂说明书
Rb Gene Protein抗体试剂说明书APA111【产品名称】通用名称：Rb Gene Protein抗体试剂英文名称：Anti Human Rb Gene Protein MonoclonalAntibody【检测原理】本抗体试剂基于抗原抗体特异性结合原理，样品组织经过抗原修复后，暴露抗原决定簇的目标靶蛋白与一抗结合，形成抗原与一抗的复合物。
然后加入HRP酶标多聚物二抗与一抗结合，最后二抗上的HRP催化DAB显色液中的H2O2分解，使联苯胺氧化变成联苯亚胺，使组织切片中抗原位点上出现棕色或棕褐色沉积物。
借助光学显微镜，通过观察颜色的变化以此判定目标抗原的表达情况。
【主要组成成分】Rb Gene Protein鼠源性单克隆抗体；缓冲液。
【储存条件及有效期】本产品2~8℃储存，有效期为12个月。
采用泡沫箱加冰袋密封的运输方式，时间不大于7天，开箱温度不超过30℃，产品性能无影响。
（使用时应即拿即用，使用后立即放回冰箱。
）【适用范围】适用于人工手动操作或全自动免疫组化染色机自动操作。
【样本要求】新鲜活检或10%中性福尔马林固定的病人组织，参照病理技术规范要求取材、固定（8-24小时为宜）、脱水、石蜡包埋并制成蜡块。
建议组织切片厚度为3~5μm，室温下保存并于10天内完成实验检测以确保组织中抗原分布情况的良好重现。
【使用方法】1.准备工作：1)仪器设备：电磁炉，不锈钢高压锅，孵育盒，计时器，免疫组化笔，移液器，全自动免疫组化染色机，光学显微镜等；2)溶液配制：PBS溶液（7.2-7.6）、抗原修复液、DAB显色液等，各溶液的配制可参见相关说明书；3)反应温度：室温（18℃~37℃）；4)抗体工作液：浓缩型抗体建议稀释比例1：100-1：400（注：该稀释比例为建议参数，实际使用时会由于实验室差异而有所不同，建议客户在使用前对该浓缩抗体进行检测，以确定最佳稀释度。
）；2.操作步骤：2.1.用于全自动免疫组化染色机：1)在软件上按照推荐的染色方案设制相应的染色程序；2)将抗体工作液（浓缩液按推荐稀释比例稀释后）放至相应的机用一抗开放容器中；3)打印切片信息标签，并将贴好标签信息的载玻片载入染色机；4)准备好相关实验耗材，将实验所需试剂放至仪器对应位置，并确认所有试剂余量充足；5)点击开始，运行染色程序；详细实验操作步骤及要求请参照全自动免疫组化染色机操作手册。
单克隆抗体药物研制的关键技术之一：抗体药物靶标筛选
白作 为 抗 体 药 物 靶 标 来研 发 抗 体 药 物 。 这 种 方 法 的缺
点 主 要 集 中在 两 方 面 ：一 是 所 能 得 到 的抗 体 药 物 靶标 的 数 量 极 其 有 限 ，并 且 这 些 靶 标 都 是 十 多年 前 就 已经 发 现 的 ：二 是 历 时 长 ，一 般 需 要 十 到 二 十 年 的 时 间 。 随着 人 类 基 因组 计 划 的完 成 和 蛋 白组 学 研 究 的开 展 ， 发 现 的 新 基 因 和 新 蛋 白 越 来 越 多 ， 人 们 从 中 看 到
克 隆 抗 体 在 疾 病 治 疗 方 面 的作 用 越 来 越 受到 人 们 的重 视 。 目前 美
国Ｆ ＤＡ 已 批 准 了 ３ 种 抗 体 治 疗 药 ２ 物 及 ７ 抗 体 融 合 蛋 白药 物 ， 其 中 种 鼠 单 抗 ３ ，嵌 合 抗 体 ６ ，人 源 化 抗 体 １ 种 ， 人 抗 体 种 种 ３ ９ ， 抗 体 融 合 蛋 白７ ， 有 １ 个 用 于 治 疗 肿 瘤 ， 另 外 种 种 ３
单 克 隆抗 体 药 物 引 导 了生 物 技 术 的 第 二 次 革 新 浪
了希 望 ，但 是 如 何 尽 快从 众 多 的 基 因 中挑 选 出可 用 来
中 国 医药 技术 经 济 与 管理 Ｉ２ １ ． ０２４
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国
研 发 新 药 的 基 因 ， 如 何 选 择 最 佳 的 技 术 方 法 来 挑 选 这 些 基 因 ，如 何 在 基 因和 蛋 白功 能 尚 未 充 分 了解 之前 开 发 药 物 ，如 何 建 立 抗 体 药 物 靶 标 筛 选 和 抗 体 药物 筛 选 技 术 ， 降 低 研 发 成 本 和 风 险 ， 这 些 都 是 生 物 医 药 产 业 所 面 临 的 重 大挑 战 。
人源化单克隆抗体研究进展
人源化单克隆抗体研究进展人源化单克隆抗体是一种具有高度特异性和亲和力的生物药物，通过杂交瘤技术将鼠源单克隆抗体的可变区与人类抗体的恒定区进行交换，以减少免疫原性，提高治疗效果。
近年来，随着科技的不断进步，人源化单克隆抗体研究取得了显著的进展，为肿瘤、自身免疫性疾病、神经系统疾病等治疗领域提供了新的思路和方法。
研究现状：人源化单克隆抗体方法、成果与不足人源化单克隆抗体研究主要包括抗体库的建立、抗体筛选和优化、以及抗体生产等多个环节。
目前，研究人员已成功建立了多种人源化单克隆抗体，并应用于临床试验，取得了一定的疗效。
例如，针对肿瘤治疗的人源化单克隆抗体药物能够特异性地识别肿瘤细胞，并通过激活免疫反应来杀死肿瘤细胞。
然而，人源化单克隆抗体研究仍存在一定的不足之处，如抗体药物的免疫原性、毒副作用等问题需要进一步解决。
研究方法：人源化单克隆抗体研究实验设计与数据分析人源化单克隆抗体研究的实验设计主要包括建立人源化抗体库、筛选和优化抗体，以及进行药效和毒理试验等。
在实验过程中，需要采集和处理大量的实验数据，并进行深入的统计分析和比对，以获得抗体的最佳配对组合和最佳治疗剂量等参数。
成果和不足：人源化单克隆抗体研究的成果与不足人源化单克隆抗体研究在肿瘤、自身免疫性疾病、神经系统疾病等多个治疗领域取得了显著的成果。
例如，针对肿瘤治疗的人源化单克隆抗体药物已经成功应用于临床试验，并显示出较好的疗效和安全性。
在自身免疫性疾病和神经系统疾病治疗领域的人源化单克隆抗体药物也在研发和试验阶段。
然而，人源化单克隆抗体研究仍存在一定的不足之处，如抗体药物的免疫原性、毒副作用等问题需要进一步解决。
同时，抗体药物的生产成本较高，限制了其在临床上的广泛应用。
尽管人源化单克隆抗体研究取得了一定的成果，但仍存在许多问题需要进一步解决。
未来，研究人员需要进一步探索人源化单克隆抗体的作用机制和优化方法，以获得更高效、安全、低成本的药物。
同时，需要加强抗体药物的工艺研究，提高生产效率和降低生产成本。
医学免疫学练习题1
医学免疫学练习题1200题型：A11.CD2分子又称为ALFA-1BLFA-2CLFA-3DICAM-1EICAM-2正确答案: B学生答案：未作答题型：A12.T细胞共受体A包括CD3分子B包括CD28分子C参与T细胞活化信号转导D只表达于T细胞表面E包括MHC分子正确答案: C学生答案：未作答题型：A13.以下不属于外源性抗原的主要特性的是A从细胞外部摄取B经溶酶体降解C经MHCⅠ类分子提呈D主要被CD4 T细胞识别E主要激活Th细胞应答正确答案: C学生答案：未作答题型：A14.NK细胞所不具备的生物学功能是A非特异杀伤某些病毒感染的靶细胞B非特异杀伤肿瘤靶细胞C通过ADCC作用杀伤肿瘤和病毒感染的靶细胞D通过释放蛋白水解酶杀伤病毒感染的靶细胞E通过释放穿孔素杀伤肿瘤靶细胞正确答案: D学生答案：未作答题型：A15.因研究过敏反应而获得诺贝尔奖的学者是ABehringBBordetCLandsteinerDRichetEKabat正确答案: D学生答案：未作答题型：A16.维持自身免疫耐受的机制之一是ATh1细胞缺陷B巨噬细胞功能障碍C补体系统功能不全DT和B细胞发育不全E自身反应性T、B细胞的清除正确答案: E学生答案：未作答题型：A17.关于Rh血型不合导致的新生儿溶血症，下列哪项是错误的A补体参与该病的发生B分娩后72小时内给母体注射抗Rh血清，可成功预防该疾病C母亲在孕育第2胎Rh+胎儿时发生D引起溶血的抗体为新生儿体内IgM抗体E引起溶血的抗体为母体IgG抗体正确答案: D学生答案：未作答题型：A18.Ⅲ型超敏反应又称为A细胞溶解型超敏反应B细胞毒型超敏反应C速发型超敏反应D免疫复合物型超敏反应E迟发型超敏反应正确答案: D学生答案：未作答题型：A19.B1细胞接受多糖抗原刺激后，相应抗体可在A24小时之内产生B一周之内产生C72小时之内产生D96小时之内产生E48小时之内产生正确答案: E学生答案：未作答题型：A110.初始T细胞表达的CD分子是ACD45RABCD44CCD45RODCD40ECD28正确答案: A学生答案：未作答题型：A111.临床上可见一种慢性荨麻疹，是由体内产生的抗FcεRIα链的抗体引起的，属Ⅱ型超敏反应。
鼠源单克隆抗体技术
单克隆抗体McAb
廖振林 食品学院
单克隆抗体McAb
免疫脾细胞：处于免疫状态脾脏中B淋巴 母细胞-浆母细胞。一般取最后一次加强 免疫3天后的脾脏。
融合比例： 骨髓瘤细胞：脾细胞=1：5或1：10 融合剂：40%PEG（分子量1000-2000） 融合24小时后加HAT培养液 2周后
免疫方案也不断有所更新，如①将可溶性抗原 颗粒化或固相化，一方面增强了抗原的免疫原 性，另一方面可降低抗原的使用量。②改变抗 原注入的途径，基础免疫可直接采用脾内注射。 ③使用细胞因子作为佐剂，提高机体的免疫应 答水平，促进免疫细胞对抗原反应性。
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单克隆抗体McAb
骨髓瘤细胞系选择要点： 稳定易培养、自身不分泌Ig、融合率高、HGPRT
骨髓瘤-骨髓瘤杂交细胞
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单克隆抗体McAb
免疫动物
培养骨髓瘤细胞
收集致敏的B淋巴细胞 收集骨髓瘤细胞
细胞融合
HAT选择培养基筛选杂交瘤细胞
检测筛选阳性细胞
克隆化培养（反复3-5次）
获得稳定分泌McAb的杂交瘤细胞株
McAb的制备（杂交瘤培养上清或诱生腹水）
McAb 纯化及鉴定
廖振林 食品学院
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单克隆抗体McAb
鼠和人的单克隆抗体
抗体分泌杂交瘤是由生长是不确定的骨髓瘤细胞得到 的。一些不能分泌的骨髓瘤细胞系缺乏次黄嘌呤-鸟 嘌呤磷酸核糖基转化酶(HGPRT), 被确定作为融合配 偶。 为了选择成功的融合细胞,细胞须在一个含有次黄嘌呤, 氨基喋呤和胸腺嘧啶脱氧核苷的介质中培养,这样只有 融合细胞可以增生。 噬菌体的发展加强了抗体库的筛选,从而为获得人类单 克隆抗体提供了新的手段.
鼠源单克隆抗体人源化进展
自1975年单克隆抗体杂交技术问世以来，鼠源单克隆抗体（mAb）被誉为神奇的子弹，广泛用于肿瘤检测与治疗。
然而，鼠源单抗作为异源性蛋白在人体内可诱鼠单抗人源化成为最早出现的基因工程抗体。
发抗鼠抗体的生成（HAMA），可产生毒性反应，并使mAb在体内消除加快，这严重影响了鼠单抗的治疗效果。
为解决这一难题，从80年代初期发展到现在，鼠单抗人源化经历了如下历程：恒定区人源化→可变区人源化→利用抗体库技术获得完全人源序列（如图）。
1．恒定区人源化--鼠/人嵌合抗体（chimeric antibody）由于异源性Ab的免疫反应约有90%是针对恒定区（C区），要降低mAb的抗原性，必须对Ab的恒定区进行人源化[1]。
其原理使从分泌某mAb的杂交瘤细胞基因组中分离和鉴别出重排的功能性可变区（V区）基因，经基因重组与Ig恒定区基因相拼接，插入到适宜的表达载体中，构成鼠/人嵌合的轻重链基因表达质粒，经转染骨髓瘤细胞，通过筛选即可制备出鼠/人嵌合抗体。
这种嵌合抗体同鼠源抗体比较至少有以下两个优点：首先，它可以按需要对抗体的效应基因进行选择或剪切。
例如人Ig的同种型IgG1和IgG3对介导补体依赖及细胞介导的溶解作用具备优势，因而利用该技术可以拼接不同亚类的人C区基因，来改变抗体的效应功能，使原细胞毒性较低的IgG2a和IgG2b变成细胞毒性较高的IgG1和IgG3，增强抗体的免疫治疗功能，可用来杀死肿瘤细胞。
其次，在治疗中使用人而不是鼠mAb的同种型，大大减小了鼠源mAb作为异种蛋白对人体的免疫原性，它通过避免抗同种型抗体的产生，减少了HAMA的生成。
例如，当鼠对鼠Ig互补决定区（CDR）产生免疫耐受时，用鼠抗-淋巴细胞Ab可以激发抗独特型反应，但相对那些对可变区不耐受的动物来说，该鼠的抗独特型反应被推迟并很微弱[2]。
Lobulio 对鼠/人嵌合抗体在人体内的动力学和免疫反应的研究表明，鼠/人嵌合抗体在人体内的半衰期比mAb长6倍以上。
医学检验技术 (军队文职)及答案
医学检验技术 (军队文职)⏹考生必须用现行规范的语言文字答题。
⏹作答时须保持答题卡整洁，不得破损、折皱、沾水（汗）。
⏹考试结束，考生要按照监考员的指令有序、错峰离开考场一、客观选择题（每小题2 分，共 100分）1、用于尿糖、尿蛋白定量检查的防腐剂是A、甲醛B、甲苯C、麝香草酚D、浓盐酸E、冰乙酸【答案】B【解析】甲醛能固定细胞和管型等成分，常用于有形成分的检验；甲苯能阻止标本与空气接触，保护化学成分，常用作尿糖、尿蛋白检查的防腐剂；麝香草酚抑制细菌的生长、保护有形成分，常用于结核杆菌的检验；浓盐酸保护激素等成分，可用于17-ONCS、17-KS的检验；冰乙酸能保护5-HT、VMA。
2、粪便为果酱样，镜检红细胞满视野，少量白细胞，应注意查找A、巨噬细胞B、真菌C、癌细胞D、阿米巴滋养体E、呈鱼群穿梭样运动活泼的弧菌【答案】D 【解析】考点：粪便一般性状改变的临床意义。
[解析]阿米巴痢疾的大便性状为暗红色果酱样，红细胞多；大便镜检到巨噬细胞最常见于急性菌痢；霍乱弧菌感染大便性状为米泔水样。
3、INR作为口服抗凝剂治疗时抗凝浓度的适用范围为A、1～3B、2～4C、3～5D、2～5E、3～4【答案】B【解析】PT及INR是监测抗凝剂用量的首选指标，国人的INR值以2～3为宜，口服抗凝剂治疗时抗凝浓度的适用范围为2～4。
4、某患者血肌酐浓度为88.4μmol/L，尿肌酐浓度为4420μmol/L,24小时尿量为1584ml，则内生肌酐清除率为A、25ml/minB、50ml/minC、55ml/minD、75ml/minE、155ml/min【答案】C【解析】内生肌酐(Cr)清除率=单位时间尿中排出Cr总量／血浆Cr的浓度，由公式计算：4420μmol/L*1584ml/(24*60min*88.4μmol/L)=55ml/min。
5、导致神经末梢麻痹性食物中毒的病原菌是A、破伤风梭菌B、产气荚膜梭菌C、肉毒梭菌D、艰难梭菌E、霍乱弧菌【答案】C【解析】梭状芽孢杆菌属有致病性的主要有破伤风梭菌、产气荚膜梭菌、肉毒梭菌与艰难梭菌，引起的人类疾病有破伤风、气性坏疽、食物中毒和假膜性肠炎。
简介单克隆抗体技术及其人源化技术
简介单克隆抗体技术及其人源化技术摘要：单克隆抗体从问世到目前广泛应用于临床，经历了一段曲折的发展历程，其中人源化抗体是一个重要的里程碑。
鼠源性mAb由于可引起免疫反应而削弱其疗效，因而逐渐被人源化mAb所取代，甚至出现全人mAb取代人源化mAb的趋势。
本文主要介绍了全人mAb的生产方法之一，转基因小鼠技术，并对该项技术的应用作了些展望。
关键词：单克隆抗体；人源化；转基因小鼠；Cre/LoxPAbstract:After its advent, monoclonal antibody has gone an uneven way to its present wide applications in clinical practices, during which the humanized antibody set an important milestone. Murine mAbs are trended to be replaced by humanized mAbs or even human mAbs as murine mAbs’ immuno-side effects may reduce therapeutic effects. The paper briefly introduces tansgenic mice technology as one of generating human mAbs methods as well as share some prospects.Key Words:Monoclonal Antibody(mAb); Humanization; Transgenic Mice; Cre/LoxP一、单克隆抗体背景介绍从1975年英国学者Milstein和德国学者Kohler利用小鼠骨髓瘤细胞和绵羊红细胞免疫的小鼠脾细胞融合[1]，形成了可产生单克隆抗体的杂交瘤细胞，该细胞既能产生抗体，又可无限增殖，从而创立了单克隆抗体杂交瘤技术。
鼠源性单克隆抗体的应用原理
鼠源性单克隆抗体的应用原理一、简介鼠源性单克隆抗体是一种能够特异性识别和结合抗原的蛋白质分子。
它由一种特殊的细胞线通过克隆技术生产出来，具有高度的结构稳定性和亲和性。
鼠源性单克隆抗体在医学研究和临床实践中具有广泛的应用。
二、原理鼠源性单克隆抗体的应用基于其结构和功能上的特点：1.特异性结合：鼠源性单克隆抗体可以与特定的抗原结合，形成抗原-抗体复合物。
这种特异性结合是由抗体的可变区域决定的，可变区域能够识别和结合抗原的特定表位。
这使得鼠源性单克隆抗体能够用于特定抗原的检测和分离。
2.亲和力：鼠源性单克隆抗体通常具有较高的亲和力，即与抗原的结合强度。
这种亲和力可以通过克隆和筛选的过程中进行优化，以选择出具有最佳结合能力的抗体。
高亲和力的鼠源性单克隆抗体能够在低浓度的抗原中快速、稳定地结合，从而提高检测和治疗的灵敏度和效果。
3.多功能性：鼠源性单克隆抗体不仅可以结合抗原，还可以激活免疫细胞，介导细胞毒性，促进细胞凋亡等。
这使得鼠源性单克隆抗体在抗体治疗、免疫研究和癌症治疗等领域具有广泛的应用。
三、应用领域鼠源性单克隆抗体在以下领域有重要的应用：1.诊断和治疗：鼠源性单克隆抗体可以用于特定抗原的检测和诊断。
例如，通过检测特定抗原的单克隆抗体，可以快速、准确地确定疾病的诊断结果。
此外，鼠源性单克隆抗体还可以用于治疗。
它们可以与抗原结合并介导免疫细胞的激活，从而抑制疾病的进展。
2.药物研发：鼠源性单克隆抗体在药物研发中具有重要的作用。
通过使用鼠源性单克隆抗体，可以快速筛选和识别潜在的药物靶点，并评估药物的疗效和安全性。
此外，鼠源性单克隆抗体还可以用作药物的载体，将药物靶向到特定的组织和细胞。
3.生物学研究：鼠源性单克隆抗体在生物学研究中广泛应用。
它们可以用于抗原的定位、蛋白质的表达与鉴定、细胞分型和分离等。
鼠源性单克隆抗体还可以用于免疫组织化学、免疫印迹和免疫沉淀等实验技术。
4.癌症治疗：鼠源性单克隆抗体在癌症治疗中具有重要的应用。
迫切需要加强鼠源性性传染病的监测与控制工作
前 ， 兜发现疾病在动物问的流行。我国 目前在这 类疾病的 首
监测中 ， 存在 重 大 缺 陷 ： 以 鼠疫 为例 ，９＇ 以 来 所 发 生 的 ［９ ０年
征—— 以鼠类作 为主要的 宿 主。 由于啮齿 动物在 世 界上 几
乎 无处 不 在 ， 类疾 病 在 自然 界 的 舒 布 极 为 广 泛 一 在 这 类 疾 这 病中 ， 鼠疫 最 为 突 出 ． 南 极 和 大洋 制 外 ． 世 界上 各 个 大 洲 除 在
财 力 和 技术 条 件 均 有 限 的情 况 下 ， 怎样 才 能 尽 快 地 改善 监 测
病也在迅速 上升 ， ２ 从 ０世 纪 ８ ０年 代 年发 病不 足 Ｌ ０倒 、 到 ２０ ００年 已超 过 ２０倒 － ０ 。印度的苏拉特 鼠疫事件 ， 最终 证实 的病＿ 不过 ２ ０余倒 ， 凡也 ０ 但却 造成了 ｌ 美元 的经济损 失 ７亿 钩端螺旋 体病 在我 国的流行 也非常严 重 ， 曾引起过 多次重 大
式 ： 当将 这 类 疾 病 的监 测 联 台 起 来 。 应 以 往 ， 国 的 自然疫 源 性 疾 病 ， 我 多采 取 单 病 监 测 的方 式 。
综合征 出血 热流行最为严重 的国家 之～ ， 全世 界一半 以上 的 病例发生在 藕国， 这是 一种相 当难 于救治 的疾病 ． 病死 率一 度非常之高 除这 些现 实的威 胁之外 ， 还有一 些疾 病 ， 如斑 点热和 鼠型斑 疹伤寒 ， 在特殊条件下也有可 能酿成大规模 流
行。
各病的监测 网络 ， 均反映 资金、 ＿ 凡力资源 和技术 手段远 不能 满足需要。而所有鼠源性捧染病的 监测 ， 都需要捕 获鼠类标 本， 并使用 类 似的检 测技 术。若把 这 些疾 病 的监 测 联 合起 来， 争取用 同一支技术 队伍 ， 获一 批 鼠类 标本 ， 捕 同时对多种