氨基酸分析检测方法
氨基酸检测标准方法
氨基酸检测标准方法
氨基酸检测标准方法有多种，包括分光光度法、毛细管电泳法、近红外光谱法、气相色谱法、高效液相色谱法等。
分光光度法主要利用氨基酸与衍生剂发生化学反应，产生蓝紫色化合物，该化合物在某一波长处有最大吸收峰，根据吸收值大小得到氨基酸含量。
毛细管电泳法根据分离原理的不同，可分为毛细管区带电泳、毛细管凝胶电泳、毛细管等电电泳、毛细管等速电泳以及胶束电动力学毛细管电泳。
近红外光谱法利用有机化合物的含氢基团在特定波长区域跃迁，产生光谱的变化，结合统计学方法间接地实现氨基酸的定量检测。
气相色谱法将氨基酸衍生化处理变为容易气化的物质，根据气态样品中各组分在流动相和固定相中的分配系数的不同，实现对氨基酸的定量分析。
高效液相色谱法是最常用的一种氨基酸检测方法。
由于大多数氨基酸本身没有紫外吸收和荧光反应，因此需要对样品进行衍生化处理将其转化为有紫外吸收和发射荧光的物质，衍生可分为柱前衍生和柱后衍生。
此外，还有氨基酸分析仪法，该方法是一种将色谱技术、电化学检测技术和计算机技术等有机结合在一起的氨基酸分析仪。
其原理是氨基酸与酸碱指示剂反应后，再利用光电转换器将透光度变化
为电信号，然后经过放大器输入到微处理机中，最后得到氨基酸含量。
该方法操作简便，快速准确，可以同时测定20种氨基酸。
总的来说，氨基酸检测标准方法有多种，具体选择哪种方法要根据实验要求和目标来决定。
氨基酸分析的检测方法评述_戴红
文章编号:1004-7964(2004)03-0039-05收稿日期:2003-11-05基金项目:国家高技术研究发展计划(863计划)经费资助,课题编号:2001AA 647020四川大学青年基金,课题编号:H2002[9-057]第一作者简介:戴红,女,1966年出生,副教授。
主要研究方向:分析检验。
氨基酸分析的检测方法评述戴红,张宗才,张新申(皮革化学与工程教育部重点实验室(四川大学),四川成都610065)摘 要:对氨基酸分析常用的化学方法、电化学方法、分光光度法(包括可见光分光光度法,紫外光分光光度法和荧光分光光度法)等检测方法进行综述,以期为提高氨基酸分析的灵敏度、准确性,为快速、高效的氨基酸分析方法的建立提供参考。
关键词:氨基酸;检测;分析中图分类号:Q517;Q 503 文献标识码:ADete rmination Methods of Amino Acids AnalysisDAI Hong ,ZHANG Zong -cai ,ZHANG X in -shen(Key Laboratory of Leather Chemistry and Engineering(Sichuan University ),Ministry of Education ,Chengdu 610065,China )Abstract :Determination methods for amino acids ,including chemistry determination ,elec -tric -chemistry determination ,spectrophotometer determination and co nductivity detectionmethod w ere review ed fo r the sake of improving the analysis sensitivity and accuracy .The paper aimed at providing useful reference to building a fast and effective amino acids aualy tic methods .Key words :amino acid ;analysis ;determination 氨基酸是蛋白质的基本结构单位和生物代谢过程中的重要物质,氨基酸分析技术对蛋白质化学、生物化学和整个生命科学研究以及产品开发、质量控制和生产管理等具有重要意义,广泛地应用于化工、轻工、食品加工、医药卫生行业的医药、食品、保健品等的分析,并且用于皮革化学鞣革机理的研究中[1,2,3]。
检测蛋白质中氨基酸的含量的各种方法及优劣讨论
蛋白质中氨基酸的含量测定组成蛋白质的基本单位是氨基酸，氨基酸通过脱水缩合形成肽链。
蛋白质是由一条或多条多肽链组成的生物大分子，其含量测定是生化药品研究中最常用、最基本的分析方法之一。
目前其常用的测定方法有凯氏定氮法、福林酚法、双缩脲法、BcA法、考马斯亮蓝法、紫外分光光度法及荧光法。
1凯氏定氮法1．1方法本法系依据蛋白质为含氮的有机化合物，当与硫酸和硫酸铜、硫酸钾一同加热消化时使蛋白质分解，分解的氨与硫酸结合生成硫酸铵。
然后碱化蒸馏使氨游离，用硼酸液吸收后以硫酸滴定液滴定，根据酸的消耗量乘以氮转化为蛋白质的换算系数，即为蛋白质的含量。
本法各国药典收载的方法一致。
故参照《中国药典》2005年版三部[41附录方法，按纯蛋白类供试品及添加无机含氮物质及有机非蛋白质含氮物质的供试品分别拟定各测定方法。
1．2讨论1．2．1凯氏定氮法虽耗时较长，但它是蛋白质测定方法中最经典的测定方法，本法所测的结果为蛋白质绝对浓度而非相对浓度，可用于标准蛋白质含量的准确测定。
1．2．2本法灵敏度较低，适用于O．2～2．o mg氮的测定，干扰少。
1．2．3蛋白质是复杂的含氮有机化合物，一般蛋白质的含氮量为16％，故含氮量转化为蛋白质的系数为6．25。
但由于不同蛋白质的结构差异，其换算系数会稍有区别，如乳制品为6．38，动物胶为5。
65等，因此一些特殊蛋白质应在各论中相应说吩其转化系数。
1．2．4在本法附注中起草了非蛋白氮供试品溶液制备的两种常用方法用于非氮的测定，一般采用钨酸沉淀法，但当供试品中含有氨基酸(精氨酸)时，由于其会影响蛋白质的沉淀，故建议采用三氯醋酸沉淀法方法(1)与方法(3)的线性相关系数均能达到0．999以上，较理想；方法(1)试剂配制繁琐且整个实验费时长，而方法(3)操作更简便快速。
氨基酸的测定方法
食物中氨基酸的测定方法测定食物中的胱氨酸使用过甲酸氧化-氨基酸自动分析仪法，测定色氨酸使用荧光分光光度法，测定其它氨基酸使用氨基酸自动分析仪法。
一、氨基酸自动分析仪法1.原理食物蛋白质经盐酸水解成为游离氨基酸，经氨基酸分析仪的离子交换柱分离后，与茚三酮溶液产生颜色反应，再通过分光光度计比色测定氨基酸含量。
一份水解液可同时测定天冬，苏，丝，谷，脯，甘，丙，缬，蛋，异亮，亮，酪，苯丙，组，赖和精氨酸等16种氨基酸，其最低检出限为10pmol。
2.适用范围GB/T14965-1994食物中氨基酸的测定方法。
本法适用于食物中的16种氨基酸的测定。
其最低检出限为10pmol。
本方法不适用于蛋白质含量低的水果、蔬菜、饮料和淀粉类食物的测定3.仪器和设备3.1真空泵3.2恒温干燥箱3.3水解管：耐压螺盖玻璃管或硬质玻璃管，体积20～30ml。
用去离子水冲洗干净并烘干。
3.4真空干燥器（温度可调节）3.5氨基酸自动分析仪。
4.试剂全部试剂除注明外均为分析纯，实验用水为去离子水。
4.1浓盐酸：优级纯4.26mol/L盐酸：浓盐酸与水1：1混合而成。
4.3苯酚：需重蒸馏。
4.4混合氨基酸标准液（仪器制造公司出售）：0.0025mol/L4.5缓冲液：4.5.1 pH2.2的柠檬酸钠缓冲液：称取19.6g柠檬酸钠（Na3C6H5O7.2H2O）和16.5ml浓盐酸加水稀释到1000ml，用浓盐酸或50%的氢氧化钠溶液调节pH至2.24.5.2 pH3.3的柠檬酸钠缓冲液：称取19.6g柠檬酸钠和12ml浓盐酸加水稀释到1000ml，用浓盐酸或50%的氢氧化钠溶液调节至pH至3.3。
4.5.3 pH4.0的柠檬酸钠缓冲液：称取19.6g柠檬酸钠和9ml浓盐酸加水稀释到1000ml，用浓盐酸或50%的氢氧化钠溶液调节pH至4.0。
4.5.4 pH6.4的柠檬酸钠缓冲液：称取19.6g柠檬酸钠和46.8g氯化钠（优级纯）加水稀释到1000ml，用浓盐酸或50%的氢氧化钠溶液调节pH至6.4。
氨基酸的分析方法
氨基酸的分析方法
氨基酸的分析方法主要有以下几种：
1. 比色法：利用氨基酸中的吸收光谱特性进行定量分析。
对于有色氨基酸，可以直接用此方法进行分析，如色氨酸、酪氨酸等。
对于无色氨基酸，需事先进行衍生化反应，如二羧基二氨基联苯胺(DTNB)法，测定半胱氨酸含量。
2. 氨基酸自动分析仪：常用的分析方法是自动氨基酸分析仪，其原理是利用离子交换色谱技术对氨基酸进行分离和检测。
该方法操作简便，自动化程度高，可同时分析多种氨基酸，用于生化实验和质量检测。
3. 氨基酸序列测定法：利用氨基酸测定仪测定氨基酸的相对分子质量，进而测定氨基酸的分子序列，通常用于蛋白质结构分析和生物活性研究。
4. 纸层析法：利用氨基酸的亲水性和疏水性差异进行分离，通常用于初步鉴定氨基酸的含量和组成。
该方法简便易行，但准确性较低，仅可作为定性或半定量分析方法。
5. 高效液相色谱法：利用高效液相色谱技术对氨基酸进行分离和检测。
该方法灵敏度高、重复性好、分辨率高，可用于生化分析和质量检测。
氨基酸分析检测方法
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分光光度法
• 物质对光的选择性吸收 • 只有芳香族氨基酸在紫外区有吸收。 • 通常利用氨基酸与衍生剂反应生成有色物
质。 • 常用的衍生化试剂：茚三酮 • 其它试剂：乙酰丙酮－甲醛等生为易气化的物质，利用气态 试样中各组分在两相间的分配系数不同进 行分析。
• 衍生化方法：硅烷化、酯化和酰化等 • 不能用一根色谱柱实现全氨基酸测定，应
用不广泛。 • 气质联用除了可以测定浓度外还可以发现
新的氨基酸。
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液相色谱法
• 各组分在两相间分配系数不同，经过反复的吸附 －解吸附过程对其进行分离检测。
• 柱后衍生法：高效离子交换色谱柱后茚三酮衍生 法。
• 柱前衍生法： • A、紫外可见光检测器 • B、荧光检测器 • C、质谱检测器 • D、积分脉冲安培检测技术 • E、蒸发发散射检测技术
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毛细管电泳法
• 高压电场的驱动下据各组分间分配行为上 的差异实现分离。具进样少、绝对灵敏度 及分辨率高。无须梯度洗脱，分析速度快。
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近红外光谱法
• 用统计学方法在样品待测属性值与近红外 光谱数据间建立一个关联模型而间接对待 测物质进行定量分析。
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化学发光法
• 通过分子从激发态返回基态时发出的光信 号间接对氨基酸进行分析。具有灵敏度高、 线性范围宽、仪器设备简单等优点。
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荧光光谱法
• 大多数氨基酸本身不发荧光，但与乙酰丙 酮－甲醛体系反应有强荧光。
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测定氨基酸的方法以及试剂
一采用氨基酸自动分析仪测定氨基酸1.氨基酸测定原理：食物蛋白质经盐酸水解成为游离氨基酸，经氨基酸分析仪的离子交换柱分离后，与茚三酮溶液产生颜色反应，再通过分光光度计比色测定氨基酸含量。
2.测定氨基酸所用仪器:真空泵;恒温干燥箱;水解管：耐压螺盖玻璃管或硬质玻璃管，体积20～30mL。
用去离子水冲洗干净并烘干;真空干燥器(温度可调节);氨基酸自动分析仪。
3.测定氨基酸所用试剂及其配制方法:3.1试剂：全部试剂除注明外均为分析纯，实验用水为去离子水。
浓盐酸(优级纯);苯酚(须重蒸馏); 混合氨基酸标准液(仪器制造公司出售)：0.00250mol/L; 不同pH值柠檬酸钠缓冲液；氢氧化锂(LiOH·H2O)；冰乙酸(优级纯)；二甲基亚砜(C2H6OS)；水合茚三酮(C9H4O3·H2O)；还原茚三酮(C18H10O6·2H2O);NaOH；高纯氮气（纯度99.99%）；冷冻剂：市售食盐与冰按1∶3混合。
3.2试剂配制方法：3.2.1. 6mol/L盐酸∶浓盐酸(3.1)与水1∶1混合而成。
3.2.2. pH2.2的柠檬酸钠缓冲液：称取19.6g柠檬酸钠(Na3C6H5O7·2H2O)和16.5mL浓盐酸加水稀释到1000mL，用浓盐酸或50%的氢氧化钠溶液调节pH至2.2。
pH3.3的柠檬酸钠缓冲液：称取19.6g柠檬酸钠和12mL浓盐酸加水稀释到1000mL，用浓盐酸或50%的氢氧化钠溶液调节pH至3.3。
pH4.0的柠檬酸钠缓冲液：称取19.6g柠檬酸钠和9mL浓盐酸加水稀释到1000mL，用浓盐酸或50%的氢氧化钠溶液调节pH至4.0。
pH6.4的柠檬酸钠缓冲液：称取19.6g柠檬酸钠和46.8g氯化钠(优级纯)加水稀释到1000mL，用浓盐酸或50%的氢氧化钠溶液调节pH至6.4。
3.2.3. 茚三酮溶液pH5.2的乙酸锂溶液：称取氢氧化锂(LiOH·H2O)168g，加入冰乙酸(优级纯)279mL，加水稀释到1000mL，用浓盐酸或50%的氢氧化钠溶液调节pH至5.2。
氨基酸分析检测方法的研究进展
氨基酸分析检测方法的研究进展一、本文概述氨基酸作为生命活动的基本组成单位，其检测分析在生命科学、医学、食品科学、农业科学等领域中具有至关重要的作用。
氨基酸分析检测方法的研究进展不仅关乎理论科学的发展，更直接影响到实践应用中的质量控制、疾病诊断、营养评估等多个方面。
本文旨在综述近年来氨基酸分析检测方法的研究进展，包括传统方法的优化以及新兴技术的开发和应用，以期为推动氨基酸分析领域的持续进步提供参考。
我们将首先回顾氨基酸分析的传统方法，如色谱法、电泳法等，分析它们的优缺点及适用范围。
随后，将重点关注新兴技术在氨基酸分析中的应用，如质谱技术、光谱技术、生物传感器等，探讨这些技术在提高检测灵敏度、准确性和效率方面的优势。
我们还将讨论氨基酸分析在各个领域中的实际应用案例，以及面临的挑战和未来的发展趋势。
通过本文的综述，我们期望能够为读者提供一个全面而深入的视角，了解氨基酸分析检测方法的最新研究进展，以及这些方法在实际应用中的潜力和局限性。
我们也希望借此机会激发更多科研工作者对氨基酸分析领域的兴趣和热情，共同推动该领域的创新和发展。
二、传统氨基酸分析检测方法传统氨基酸分析检测方法主要包括色谱法、电泳法、化学分析法等。
这些方法在过去的几十年中得到了广泛的应用，为氨基酸的分析检测提供了重要的手段。
色谱法是最常用的氨基酸分析方法之一，其中主要包括离子交换色谱、氨基酸专用高效液相色谱（HPLC）和气相色谱（GC）等。
离子交换色谱基于氨基酸在离子交换剂上的吸附和解吸附作用，可以对氨基酸进行定性和定量分析。
HPLC具有高分辨率和高灵敏度，是分析复杂样品中氨基酸的有效方法。
GC则通过与衍生化试剂反应，将氨基酸转化为挥发性衍生物后进行分析。
电泳法是一种基于氨基酸在电场作用下的迁移速度差异进行分离的方法。
其中，薄层电泳和毛细管电泳是常用的电泳技术。
薄层电泳通过将氨基酸在支持介质上进行分离，可以用于简单样品的分析。
毛细管电泳则具有更高的分辨率和灵敏度，适用于复杂样品的分析。
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分光光度法
物质对光的选择性吸收 只有芳香族氨基酸在紫外区有吸收。 通常利用氨基酸与衍生剂反应生成有色物
质。 常用的衍生化试剂：茚三酮 其它试剂：乙酰丙酮－甲醛等
气相色谱法
将氨基酸衍生为易气化的物质，利Байду номын сангаас气态 试样中各组分在两相间的分配系数不同进 行分析。
衍生化方法：硅烷化、酯化和酰化等
毛细管电泳法
高压电场的驱动下据各组分间分配行为上 的差异实现分离。具进样少、绝对灵敏度 及分辨率高。无须梯度洗脱，分析速度快 。
近红外光谱法
用统计学方法在样品待测属性值与近红外 光谱数据间建立一个关联模型而间接对待 测物质进行定量分析。
化学发光法
通过分子从激发态返回基态时发出的光信 号间接对氨基酸进行分析。具有灵敏度高 、线性范围宽、仪器设备简单等优点。
不能用一根色谱柱实现全氨基酸测定，应 用不广泛。
气质联用除了可以测定浓度外还可以发现 新的氨基酸。
液相色谱法
各组分在两相间分配系数不同，经过反复的吸附 －解吸附过程对其进行分离检测。
柱后衍生法：高效离子交换色谱柱后茚三酮衍生 法。
柱前衍生法： A、紫外可见光检测器 B、荧光检测器 C、质谱检测器 D、积分脉冲安培检测技术 E、蒸发发散射检测技术
荧光光谱法
大多数氨基酸本身不发荧光，但与乙酰丙 酮－甲醛体系反应有强荧光。