实验六 过氧化氢酶活性的测定

四、实验步骤：
1、酶液提取：
称取0.5g三叶草，加少量石英砂，CaCO3，2ml水，研成匀浆， 移入50ml容量瓶，冲洗研钵数次，定容，静置，过滤。 2、酶促反应： （1）取锥形瓶2个，编号A，B，各加入10ml酶液，之后立即向A瓶 中加入1.8mol/L H2SO45ml，终止酶活性，作空白滴定。 （2）向A，B两瓶各加H2O2 5ml，摇匀，在加入B瓶那一刻起，记录
二、实验原理:
植物在逆境下或衰老时，由于体内活性氧代谢加强而使H2O2
发生累积。H2O2可进一步生成氢氧自由基（OH˙）。 氢氧自由基（OH˙）是化学性质最活泼的活性氧，可以直接 或间接地氧化细胞内核酸，蛋白质等生物大分子，并且有非 常高的速度常数，破坏性极强，可使细胞膜遭受损害，加速 细胞的衰老和解体。 保护机体细胞稳定的内环境及细胞的正常生活，因此CAT是
Please be quiet, 上课了！！
实
验
三
过氧化氢酶活性的测定 ——碘量法
学时：3
生物体内重要的三种氧化酶类，其作用均是
清除体内自由基：
POD：过氧化物酶 SOD：超氧化物歧化酶
CAT：过氧化氢酶
一、实验目的：
1、掌握碘量法测定过氧化氢酶活性的原 理和方法； 2、了解过氧化氢酶的作用。
液) =
反 10 应
-
5
五、实验结果与计算：
1、被分解的H2O2量（mg） = （空白滴定值-样品滴定值）×Na2S2O3摩尔浓度×17 2、CAT活性（mg.g-1.min-1）=
Fra Baidu bibliotek
被分解的H2O2量（mg）×(总体积÷测定取液量)
样品重（g）×时间（min）
六、思考题：
1、本实验中影响CAT活性测定的因素有哪些？
过氧化氢酶(catalase；CAT)可以清除H2O2、分解氢氧自由基，
植物体内重要的酶促防御系统之一，其活性高低与植物的抗
逆性密切相关。
二、实验原理:
CAT活性大小以一定时间内分解的H2O2量来表示：
在一定条件下，CAT能把H2O2分解为H2O和O2。当CAT与 H2O2反应一定时间(t)后，再用碘量法测定未分解的H2O2，以 钼酸铵作催化剂，H2O2 与KI反应，放出游离碘，然后用硫代 硫酸钠滴定碘，反应式为： H2O2（余）+2KI+H2SO4----→I2+K2SO4+2H2O I2 +2Na2S2O3 --→2NaI+Na2S4O6（连二硫酸钠） 用硫代硫酸钠分别滴定空白液(可求出总的H2O2 量)和反应 液(可求出未分解的H2O2 量)，再根据二者滴定值之差求出分 解的H2O2量。
三、实验材料、仪器和试剂：
1、实验材料：三叶草 2、仪器： (1) 滴定管 (2)研钵 (3) 容量瓶 (4)移液管 (5)三角瓶(100ml) 3、试剂：
（1）0.05M H2O2 （2）0.2M Na2S2O3 （3）1.8M H2SO4 （4）1.5%淀粉溶液 （5）10%（NH4)6Mo7O24 （6）20% KI （7）CaCO3，石英砂
时间，5分钟后迅速向B瓶中加入1.8mol/LH2SO45ml，终止酶活性。
3、滴定：
向A，B两瓶各加1ml 20% KI和3滴（NH4）6Mo7O24，摇匀后迅 速加入5滴1.5%淀粉溶液，用Na2S2O3 进行滴定至蓝色恰好消失， 记录两次消耗Na2S2O3的体积VA(空白)，VB(反应液)。
酶活性测定
1.8M 20% 酶 1.8M 钼酸 淀粉 0.05M 保 管 H2SO4 液 H2O2 温 H2SO4 KI溶 铵溶 溶液 号 (ml) 液(ml) 液(滴) (滴) (ml) (ml) 0.2M Na2S2O3 溶液的 滴定量
A 空 10 白 B 5 5
5
分 钟
-
1
3
5
VA(空白)
=
VB(反应
5 1 3 5