实验六 过氧化氢酶活性的测定
过氧化氢酶活力的测定实验报告
一、实验目的1. 了解过氧化氢酶的作用和特性。
2. 掌握过氧化氢酶活力的测定原理和方法。
3. 通过实验，验证过氧化氢酶在催化过氧化氢分解过程中的活力。
二、实验原理过氧化氢酶（Catalase，简称CAT）是一种广泛存在于生物体内的酶，其主要功能是催化过氧化氢（H2O2）分解为水（H2O）和氧气（O2），从而降低过氧化氢对生物体的毒害作用。
过氧化氢酶活力的测定通常通过测量在一定时间内过氧化氢的分解量或氧气的生成量来进行。
本实验采用碘量法测定过氧化氢酶活力。
碘量法的基本原理是：在一定条件下，过氧化氢酶将过氧化氢分解，生成氧气，使溶液中的碘离子（I-）氧化成碘单质（I2）。
然后，用硫代硫酸钠滴定溶液中的碘单质，根据消耗的硫代硫酸钠的量计算出过氧化氢的分解量，从而推算出过氧化氢酶的活力。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：新鲜植物叶片（如青菜、萝卜叶等）、蒸馏水、碘液、硫代硫酸钠溶液、盐酸、氢氧化钠溶液、0.1 mol/L过氧化氢溶液等。
2. 实验仪器：分析天平、研钵、漏斗、容量瓶、移液管、滴定管、锥形瓶、水浴锅、计时器等。
四、实验步骤1. 酶液提取：- 称取0.5 g新鲜植物叶片，置于研钵中，加入2 mL pH 7.0磷酸缓冲液和少量石英砂，研磨成匀浆。
- 将匀浆转入25 mL容量瓶中，用磷酸缓冲液冲洗研钵数次，合并冲洗液，并定容至刻度。
- 将容量瓶置于4℃冰箱中静置10 min，取上清液即为过氧化氢酶粗提液。
2. 测定过氧化氢酶活力：- 取4个锥形瓶，分别编号为1、2、3、4。
- 向1、2、3号锥形瓶中分别加入0.5 mL过氧化氢酶粗提液，向4号锥形瓶中加入0.5 mL蒸馏水。
- 向各锥形瓶中分别加入1 mL 0.1 mol/L过氧化氢溶液，立即开始计时。
- 当加入0.1 mL 1 mol/L盐酸时，停止计时，此时溶液中剩余的过氧化氢量即为酶促反应所分解的过氧化氢量。
- 向各锥形瓶中加入1 mL碘液，充分振荡，静置3 min。
【高中生物】高中生物实验：过氧化氢酶活性的测定
【高中生物】高中生物实验：过氧化氢酶活性的测定高中生物实验：过氧化氢酶活性的测定原理过氧化氢酶广泛存在于所有植物组织中。
它能将过氧化氢分解为氧气和水，保护生物体免受过氧化氢的毒性影响。
测定过氧化氢酶的方法包括测压法、滴定法和分光光度法。
氧电极法是一种灵敏、快速的氧释放速率测量方法。
氧释放速率与过氧化氢酶活性成正比。
仪器药品氧电极记录仪电磁搅拌器超级恒温水浴注射器、微量注射器和容量瓶反应杯亚硫酸钠过氧化氢酶50mmol/l磷酸缓冲液，ph7.0(见附表2)。
50mmol/L过氧化氢溶液：取30%过氧化氢1.4ml，用磷酸缓冲液稀释至250ml。
标准过氧化氢酶溶液：称取过氧化氢酶(sigma)1.0mg(110u/mg)，溶于50mmol/l磷酸缓冲液(ph7.0)11ml中，使酶浓度为10u/ml。
操作步骤1.仪器的标定按照实验步骤88校准仪器，以获得记录纸上每个小网格的等效氧含量。
2.绘制酶活性标准曲线（1）在反应杯中加入过氧化氢磷酸缓冲液，打开电磁搅拌器搅拌10分钟，插入电极，吸收电极外溢出的溶液，调整换档旋钮，使记录笔约满刻度的10-20%，使记录纸四处移动，温度在1-2分钟后达到平衡，记录笔画出一条直线。
(2)用微量注射器从电极塞小孔中注入10μ110u/ml过氧化氢酶，立即记录最初90秒钟内的氧释放曲线。
（3）按照上述相同步骤，注入不同浓度的过氧化氢酶10μL（例如，浓度为20、30、40、50U/ml），并记录氧释放曲线。
(4)取放氧曲线的直线部分，根据其斜率及走纸速度，计算每分钟氧的释放量。
（5）以过氧化氢酶活性单位为横坐标，以每分钟释放的氧气量为纵坐标绘制标准曲线。
3.样品测定（1）将50mmol/L过氧化氢磷酸缓冲液注入反应室，搅拌10分钟，插入电极，记录10分钟后，以直线μL注入适当浓度的待测酶溶液样品，立即记录前90秒内的析氧曲线。
(2)根据样品的放氧曲线，计算得到每分钟的放氧量，在标准曲线上查得酶活性大小。
过氧化氢酶活力的测定实验报告doc
过氧化氢酶活力的测定实验报告篇一：过氧化氢酶活性测定实验29 过氧化氢酶活性测定（高锰酸钾滴定法）过氧化氢酶普遍存在于植物的所有组织中，其活性与植物的代谢强度及抗寒、抗病能力有一定关系，故常加以测定。
一、原理过氧化氢酶（catalase）属于血红蛋白酶，含有铁，它能催化过氧化氢分解为水和分子氧，在此过程中起传递电子的作用，过氧化氢则既是氧化剂又是还原剂。
可根据H2O2的消耗量或O2的生成量测定该酶活力大小。
在反应系统中加入一定量（反应过量）的过氧化氢溶液，经酶促反应后，用标准高锰酸钾溶液（在酸性条件下）滴定多余的过氧化氢。
即可求出消耗的H2O2的量。
二、材料、仪器设备及试剂（一）材料：小麦叶片（二）仪器设备：1. 研钵；2. 三角瓶；3. 酸式滴定管；4. 恒温水浴；5. 容量瓶。
（三）试剂：1. 10%H2SO4；2. 0.2 mol/L pH7.8磷酸缓冲液；3. 0.1mol/L 高锰酸钾标准液称：取KMnO4（AR）3.1605g，用新煮沸冷却蒸馏水配制成1000ml，再用0.1mol/L 草酸溶液标定；4. 0.1mol/L H2O2市售30%H2O2大约等于17.6mol/L，取30%H2O2溶液5.68ml，稀释至1000ml，用标准0.1mol/L KMnO4溶液（在酸性条件下）进行标定；5.0.1mol/L 草酸：称取优级纯H2C2O4.2H2O 12.607g，用蒸馏水溶解后，定容至1000ml。
三、实验步骤（一）酶液提取：取小麦叶片2.5g加入pH7.8的磷酸缓冲溶液少量，研磨成匀浆，转移至25ml容量瓶中，用该缓冲液冲洗研钵，并将冲洗液转至容量瓶中，用同一缓冲液定容，4000rpm离心15min，上清液即为过氧化氢酶的粗提液。
（二）取50ml三角瓶4个（两个测定，另两个为对照），测定瓶加入酶液2.5ml，对照加煮死酶液2.5ml，再加入2.5ml 0.1mol/L H2O2，同时计时，于30℃恒温水浴中保温10min，立即加入10%H2SO42.5ml。
过氧化氢酶活性的测定
A 空 10 5 白
B 反 10 应
55 - 1
分 钟
5
51
医学课件ppt
3
5 VA(空白)
=
VB(反应
35
液)
=
8
五、实验结果与计算：
1、被分解的H2O2量（mg） = （空白滴定值-样品滴定值）×Na2S2O3摩尔浓度×17
2、CAT活性（mg.g-1.min-1）= 被分解的H2O2量（mg）×(总体积÷测定取液量) 样品重（g）×时间（min）
H2O2（余）+2KI+H2SO4----→I2+K2SO4+2H2O
I2 +2Na2S2O3 --→2NaI+Na2S4O6（连二硫酸钠）
用硫代硫酸钠分别滴定空白液(可求出总的H2O2量)和反应
液(可求出未分解的H2O2量)，再根据二者滴定值之差求出分
解的H2O2量。
医学课件ppt
5
三、实验材料、仪器和试剂：
医学课件ppt
6
四、实验步骤：
1、酶液提取：
称取0.5g三叶草，加少量石英砂，CaCO3，2ml水，研成匀浆， 移入50ml容量瓶，冲洗研钵数次，定容，静置，过滤。
2、酶促反应：
（1）取锥形瓶2个，编号A，B，各加入10ml酶液，之后立即向A瓶 中加入1.8mol/L H2SO45ml，终止酶活性，作空白滴定。
医学课件ppt
9
六、思考题：
1、本实验中影响CAT活性测定的因素有哪些？
医学课件ppt
10
记录两次消耗Na2S2O3的体积医VA学(课空件白p)p，t VB(反应液)。
7
酶活性测定
管 号
酶 液
过氧化氢酶活性的测定
过氧化氢酶活性的测定过氧化氢酶（catalase）是一种重要的酶类，在多种生物体和植物中广泛存在。
其主要作用是将氧化还原反应中产生的过氧化氢（H2O2）转化成水（H2O）和氧气（O2）。
这个反应是非常重要的，因为H2O2是一种有害物质，会破坏细胞内的蛋白质、脂质和DNA等结构。
因此，过氧化氢酶不仅保护生物体内部结构的完整性，还保护它免受外部环境的伤害。
本文将介绍过氧化氢酶活性的测定方法。
实验材料：1. 1.5 mL离心管；2. 10% 过氧化氢溶液；3. 100 mM 磷酸缓冲液（pH 7.0）；4. 视网膜素（1 mg/mL）。
实验步骤：1. 将取自动物或植物的新鲜组织（例如肝脏、叶片、果实）切成小块，加入绞肉机中充分研磨，随后用冷水冲洗，挤出汁液，离心5分钟，去除颗粒，收集上清液作为酶提取物；2. 准备一组试管，分别加入0.1 mL酶提取物、0.5 mL100 mM磷酸缓冲液和0.4 mL 10% 过氧化氢溶液，并加入0.1 mL纯水作为对照试验管；3. 在试管中迅速混合，放在37℃恒温水浴中反应15分钟；4. 反应结束后，加入1 mL苯酚酐试剂，盖上盖子，轻轻颠倒，立即读取吸光度A405，并计算过氧化氢酶活性。
计算过氧化氢酶活性的公式为：过氧化氢酶活性（U/mg）= [（对照A405 - 试验A405）/ 对照A405] × 1000/ [反应体系总反应时间（分钟）÷ 酶提取体积（mL）] × 酶提取物的蛋白质浓度（mg/mL）其中，对照是不加入酶提取物的试验管，试验则是加入酶提取物的试验管。
以对照的A405为100%活性，试验管的活性则为相对活性。
过氧化氢酶的活性单位为U/mg，也可以表示为U/g或U/L。
本实验中，苯酚酐试剂可以与酶提取物中产生的H2O2发生氧化反应，形成深蓝色产物，进而测量吸光度，从而计算出过氧化氢酶的活性。
总之，本实验的目的是测定过氧化氢酶的活性，以此来了解生物体内的氧化还原反应是否正常，并研究它在细胞生物学中的作用。
过氧化氢酶活性测定实验报告
过氧化氢酶活性测定实验报告
《过氧化氢酶活性测定实验报告》
实验目的：
本实验旨在通过测定过氧化氢酶活性，探究该酶在生物体内的重要作用，并了解其在氧化还原反应中的作用机制。
实验方法：
1. 提取过氧化氢酶：将待测样品（如动植物组织、细胞等）在低温下破碎，利用离心等手段分离出过氧化氢酶。
2. 过氧化氢酶活性测定：将提取的过氧化氢酶与过氧化氢底物反应，通过监测底物消耗速率或产物生成速率来测定酶的活性。
实验结果：
通过实验测定，我们得到了不同样品中过氧化氢酶的活性数据。
观察到在不同条件下，过氧化氢酶活性呈现出明显的差异，这表明过氧化氢酶的活性受到环境条件的影响。
实验结论：
通过本实验，我们深入了解了过氧化氢酶在生物体内的重要作用，以及其在氧化还原反应中的作用机制。
同时，我们也发现了过氧化氢酶活性受到环境条件的影响，这为进一步研究酶的调控机制提供了重要的参考。
总结：
过氧化氢酶活性测定实验为我们提供了深入了解生物体内氧化还原反应的重要手段，为进一步研究酶的功能和调控机制提供了重要的参考。
希望通过这一实验，能够加深我们对生物体内酶的认识，为生物医学领域的研究和应用提供更
多的可能性。
过氧化氢酶的活性测定
过氧化氢酶的活性测定方法一：高锰酸钾滴定法1、实验目的：掌握高锰酸钾滴定法测定过氧化氢酶的活性的原理和方法。
2、实验内容：实验原理：过氧化氢酶属于血红蛋白酶，含有铁，它能催化过氧化氢分解为水和分子氧，在此过程中起传递电子的作用，过氧化氢则既是氧化剂又是还原剂。
据此，可根据H2O2的消耗量或O2的生成量测定该酶活力大小。
在反应系统中加入一定量的H2O2溶液，经酶促反应后，用标准高锰酸钾溶液(在酸性条件下)滴定多余的H2O2。
即可求出消耗的H2O2的量。
试剂：10％H2SO4；0.2mol／L磷酸缓冲液pH7.8；0.02mol／L高锰酸钾标准液：称取KMnO4(AR)3.1605g，用新煮沸冷却蒸馏水配制成1000mL，用0.1mol／L草酸溶液标定；0.1mol／L H2O2：市售30％H2O2大约等于17.6mol／L，取30％H2O2溶液5.68mL，稀释至1000mL，用标准0.02molKMnO4溶液(在酸性条件下)进行标定；0.1mol／L草酸：称取优级纯H2C2O2·2H2O 12.607g，用蒸馏水溶解后，定容至1L。
操作步骤：3.1酶液提取：取高羊茅草叶片2.5g加入pH7.8的磷酸缓冲液少量，研磨成匀浆，转移至25mL 容量瓶中，用该缓冲液冲洗研钵，并将冲洗液转入容量瓶中，用同一缓冲液定容，4000r／min离心15min，上清液即为过氧化氢酶的粗提液。
3.2酶反应过程取50mL三角瓶4个(3个测定，1个对照)，测定瓶中加入酶液2.5mL，对照瓶中加入煮死酶液2.5mL，再加入2.5mL 0.1mol／L H2O2，同时计时，于30℃恒温水浴中保温10min，立即加入10％H2SO4 2.5mL。
3.3标定用0.02mol／L KMnO4标准溶液滴定H2O2，至出现粉红色(在30s内不消失)为终点。
3.4结果计算酶活性用每克鲜重样品1Min内分解H2O2的毫克数表示：酶活(mg／g·min)＝（A-B）×V T×1.7FW×V1×t（3-2）式中:A:对照KMnO4滴定毫升数(mL)；B:酶反应后KMnO4滴定毫升数(mL)；V T:酶液总量(mL)；V1:反应所用酶液量(mL)；W:样品鲜重(g)；1.7:1mL 0.1mol／L的KMnO4相当于1.7mg H2O2。
(完整word版)过氧化氢酶(CAT)活性的测定.doc
过氧化氢酶（ CAT ）活性的测定：紫外吸收法一、目的与要求过氧化氢酶普遍存在于植物的所有组织中，其活性与植物的代谢强度及抗寒、抗病能力有一定关系，故常加以测定。
二、原理过氧化氢酶（ catalase）属于血红蛋白酶，含有铁，它能催化过氧化氢分解为水和分子氧，在此过程中起传递电子的作用，过氧化氢则既是氧化剂又是还原剂。
可根据 H2O2的消耗量或 O2的生成量测定该酶活力大小。
过氧化氢在 240nm波长下有强烈吸收，过氧化氢酶能分解过氧化氢，使反应溶液的吸光度（ A 240）随反应时间而降低。
根据测量吸光率的变化速度即可测出过氧化氢酶的活性。
三、材料、仪器设备及试剂（一）材料：小麦或其它叶片（二）仪器设备： 1. 研钵； 2.紫外分光光度计； 3. 离心机； 4. 恒温水浴；5.容量瓶。
（三）试剂：1. 0.2 mol/L pH7.8 磷酸缓冲液（ pH7.8: 0.2mol/L Na 2HP04 91.5 ml; 0.2mol/LNaH2P04 8.5 ml ）；2． 0.1 mol/LH2 O (30%的 H O 溶液 5.68ml 稀释至 1000ml) 2 2 2二、实验步骤：1、酶液提取称取新鲜植物叶片或其它组织0.5g，置于研钵中，加入2～ 3ml 4℃下预冷的 pH7.0 磷酸缓冲液和少量石英砂研磨匀浆后，转入 25ml 容量瓶中，并用缓冲液冲研钵数次，合并冲洗液，并定容到刻度。
混合均匀，将容量瓶置 5℃冰箱中静置 10min ，取上清液在 4000r/min 下离心 15min，上清液即为过氧化氢粗提液， 5℃下保存备用。
2、测定 10ml 试管 3 支，其中 2 支为样品测定管， 1 支为空白管，按表 1-1 顺序加入试剂。
25℃预热后，逐管加入 0.6ml0.1mol/l 的 H2O2,每加完 1 管立即记时，并迅速倒入石英比色杯中， 260nm 下测定吸光度，每隔 1min 读数 1 次，共测 4min，待 3 支管全部测完后，按式（ 1-1）计算酶活性。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
过氧化氢酶(catalase；CAT)可以清除H2O2、分解氢氧自由基，
植物体内重要的酶促防御系统之一，其活性高低与植物的抗
逆性密切相关。
二、实验原理:
CAT活性大小以一定时间内分解的H2O2量来表示：
在一定条件下，CAT能把H2O2分解为H2O和O2。当CAT与 H2O2反应一定时间(t)后，再用碘量法测定未分解的H2O2，以 钼酸铵作催化剂，H2O2 与KI反应，放出游离碘，然后用硫代 硫酸钠滴定碘，反应式为： H2O2（余）+2KI+H2SO4----→I2+K2SO4+2H2O I2 +2Na2S2O3 --→2NaI+Na2S4O6（连二硫酸钠） 用硫代硫酸钠分别滴定空白液(可求出总的H2O2 量)和反应 液(可求出未分解的H2O2 量)，再根据二者滴定值之差求出分 解的H2O2量。
1.8M 20% 酶 1.8M 钼酸 淀粉 0.05M 保 管 H2SO4 液 H2O2 温 H2SO4 KI溶 铵溶 溶液 号 (ml) 液(ml) 液(滴) (滴) (ml) (ml) 0.2M Na2S2O3 溶液的 滴定量
A 空 10 白 B 5 5
5
分 钟
-
1
3
5
VA(空白)
=
VB(反应
5 1 3 5
二、实验原理:
植物在逆境下或衰老时，由于体内活性氧代谢加强而使H2O2
发生累积。H2O2可进一步生成氢氧自由基（OH˙）。 氢氧自由基（OH˙）是化学性质最活泼的活性氧，可以直接 或间接地氧化细胞内核酸，蛋白质等生物大分子，并且有非 常高的速度常数，破坏性极强，可使细胞膜遭受损害，加速 细胞的衰老和解体。 保护机体细胞稳定的内环境及细胞的正常生活，因此CAT是
三、实验材料、仪器和试剂：
1、实验材料：三叶草 2、仪器： (1) 滴定管 (2)研钵 (3) 容量瓶 (4)移液管 (5)三角瓶(100ml) 3、试剂：
（1）0.05M H2O2 （2）0.2M Na2S2O3 （3）1.8M H2SO4 （4）1.5%淀粉溶液 （5）10%（NH4)6Mo7O24 （6）20% KI （7）CaCO3，石英砂
四、实验步骤：
1、酶液提取：
称取0.5g三叶草，加少量石英砂，CaCO3，2ml水，研成匀浆， 移入50ml容量瓶，冲洗研钵数次，定容，静置，过滤。 2、酶促反应： （1）取锥形瓶2个，编号A，B，各加入10ml酶液，之后立即向A瓶 中加入1.8mol/L H2SO45ml，终止酶活性，作空白滴定。 （2）向A，B两瓶各加H2O2 5ml，摇匀，在加入B瓶那一刻起，记录
时间，5分钟后迅速向B瓶中加入1.8mol/LH2SO45ml，终止酶活性。
3、滴定：
向A，B两瓶各加1ml 20% KI和3滴（NH4）6Mo7O24，摇匀后迅 速加入5滴1.5%淀粉溶液，用Na2S2O3 进行滴定至蓝色恰好消失， 记录两次消耗Na2S2O3的体积VA(空白)，VB(反应液)。
酶活性测定
液) =
反 10 应
-
5
五、实验结果与计算：
1、被分解的H2O2量（mg） = （空白滴定值-样品滴定值）×Na2S2O3摩尔浓度×17 2、CAT活性（mg.g-1.min-1）=
被分解的H2O2量（mg）×(总体积÷测定取液量)
样品重（g）×时间（min）
六、思考题：
1、本实验中影响CAT活性测定的因素有哪些？
Please be quiet, 上课了！！
实
验
三
过氧化氢酶活性的测定 ——碘量法
学时：3
生物体内重要的三种氧化酶类，其作用均是
清除体内自由基：
POD：过氧化物酶 SOD：超氧化物歧化酶
CAT：过氧化氢酶
一、实验目的：
1、掌握碘量法测定过氧化氢酶活性的原 理和方法； 2、了解过氧化氢酶的作用。