食品中常规致病菌快速检测(恒温扩增芯片法)
环介导等温扩增技术
谢谢欣赏！
采自奶场的125份样品进行了检测。结果表明,LAMP检 测出阳性样品81份, GB/T 4789.10- 2003检测出阳性样品84 份,LAMP阳性检出率为96.43%。
图5 金黄色葡萄球菌LAMP特异性的检测结果
M:DL2000 DNA Marker; 1:金黄色葡萄球菌ATCC25923;2:沙门氏菌 CGMCC 111552; 3:沙门氏菌ATCC13067;4:沙门氏菌HJ- 004; 5: ETEC: 44247 (6∶15∶16) ;6: EPEC: 44706 (111∶58∶- ) ; 7:荧光假单胞菌 CGMCC 111802;8:恶臭假单胞菌CGMCC111819; 9:铜绿假单胞菌 ATCC27853;
散法、免疫学方法、基因芯片法、基因探针法、 测试片法、PCR 法等。
环介导恒温扩增技术( loop -mediated isothermal amp lification, LAMP)是Notomi等2000年发明的一种 新颖的扩增技术,其特点是针对靶基因的6个区域设计4 种特异引物,在DNA聚合酶(B st DNA polymerase)的 作用下,恒温条件下进行核酸扩增,具有操作简单、特异 性强特点。另外通过环引物的添加,大大加快了反应的 速度 。国外报道,LAMP被广泛食品等病原菌的检测中, 如巴西芽生菌、锥虫病 、沙门氏菌 、虾中的白斑综合
测金黄色葡萄球菌特异性强、灵敏度高、时间 短且操作简便,有望成为快速检测金黄色葡萄 球菌的新方法。
简介：金黄色葡萄球菌( S taphy lococcus
aureus)是引起食物中毒的主要致病菌之一,也是 引起奶牛患乳房炎的重要病原菌 ,在自然界中广 泛存在,食品受污染的机会很多。近年来随着抗 生素的大量使用,耐甲氧西林金黄色葡萄球菌
食品中霉菌检测方法与标准
食品中霉菌检测方法与标准简介:食品是人们日常生活中不可或缺的一部分，然而，食品中的霉菌污染却是一个严重的问题。
霉菌不仅会降低食品的品质和口感，还可能产生毒素对人体健康造成危害。
因此，如何有效地检测食品中的霉菌成为了食品安全的重要环节。
本文将介绍食品中霉菌检测的方法和标准。
一、常用的霉菌检测方法：1. 细菌计数法细菌计数法是一种常用的传统霉菌检测方法，它通过将食品样品在适当的培养基上培养，然后通过观察和计数菌落形成单位（CFU）来确定食品中细菌的含量。
这种方法简单易行，可以得出定量结果，但需要较长的培养时间，通常需要24-48小时才能获得结果。
2. PCR法PCR法是一种基于核酸扩增技术的霉菌检测方法，它能够快速准确地检测食品中的霉菌污染。
该方法使用特定的引物和酶扩增食品样品中霉菌的特定基因序列，然后通过荧光信号的检测确定是否存在霉菌。
PCR法具有高灵敏度和高特异性，且检测时间短，只需数小时。
3. 快速测试法快速测试法是近年来发展的一种新型霉菌检测方法，它利用生物传感技术和免疫分析技术对食品中的霉菌进行快速检测。
常见的快速测试方法有免疫层析法、生物芯片技术和蛋白质酶技术等。
这些方法具有操作简便、检测时间短、灵敏度高等优点，但需要特殊设备和试剂的支持。
二、食品中霉菌污染的标准为了确保食品安全，各国针对食品中霉菌污染制定了一系列的标准，其中包括食品中霉菌的限量标准和毒素限量标准。
1. 霉菌限量标准霉菌限量标准规定了食品中霉菌的最大容许限量。
各国的限量标准不同，通常根据食品类型和使用目的进行区分。
例如，食品中霉菌限量通常为每克菌落形成单位（CFU/g），而对于某些特定食品如牛奶和奶制品，标准可能为每毫升。
2. 毒素限量标准霉菌主要通过合成毒素对食品造成危害。
因此，针对食品中霉菌合成的毒素制定了相应的限量标准。
各类毒素的限量标准根据具体毒素和食品类型进行规定，如黄曲霉素在谷类制品中的限量为每千克10微克。
食品微生物快速检验和无菌操作技术
食品微生物快速检验和无菌操作技术随着人们对食品安全的关注度不断提高，食品微生物快速检验和无菌操作技术变得越来越重要。
本文将简要介绍这两个领域的技术和应用。
食品微生物快速检验技术是指一种能够快速检测食品中微生物的技术，它能够有效地诊断食品污染问题，并且迅速定位和处理。
常见的食品微生物快速检验技术包括：1.酶联免疫吸附试验（ELISA）酶联免疫吸附试验是一种特异性高、敏感度好的检测方法，其原理是利用特异性抗体与待检物中的微生物结合，然后用一种标记有酶的次抗体与之结合，再观察酶反应产生的颜色变化。
该技术可以用于检测多种食品中的病原微生物和有害细菌。
2.聚合酶链反应（PCR）聚合酶链反应是一种高度灵敏的检测方法，可以放大微生物DNA片段，从而快速检测食品中的微生物。
该技术适用于检测各类病原微生物和有害细菌，具有高度的特异性和敏感性，且操作简便、快速。
3.荧光PCR荧光PCR是一种依靠荧光信号检测DNA扩增产物的技术。
与普通PCR相比，它不需要对扩增产物进行凝胶电泳分析，减少了处理步骤和污染风险，且能够实现自动化操作。
二、无菌操作技术无菌操作技术是指在处理食品和药品时，必须在无细菌的环境中进行操作的技术。
其原则是通过对操作环境的杀菌和消毒，有效避免微生物的污染和滋生。
常见的无菌操作技术包括：1.灭菌灭菌是指在高温、高压或紫外线等条件下杀死细菌的过程。
灭菌方法有很多种，例如热灭菌、干热灭菌、滤器灭菌、紫外线灭菌等。
2.消毒消毒是指用化学方法杀灭细菌的过程。
消毒方法有很多种，例如用银离子消毒、氧化物消毒液消毒、过氧化氢消毒等。
3.无菌操作台和无菌柜无菌操作台和无菌柜是用于进行无菌操作的工作台和柜子，其内部有特殊的过滤器和杀菌装置，并且使用空气过滤器将带菌空气过滤掉，有效防止微生物污染。
总之，食品微生物快速检验和无菌操作技术是目前食品安全领域的热点技术，可以有效保障食品安全，并且在食品生产和加工中有着重要的应用。
环介导等温核酸扩增技术快速检测食源性致病菌应用进展
１／２—１／３。直接靠扩增副产物焦磷酸镁沉淀的浊度 进行判断是否发生反应。ＬＡＭＰ技术具有高特异性、 高效率和便捷等特点１４１。 １．２引物设计ＬＡＭＰ引物的设计比常规ＰＣＲ要 复杂。一个反应至少包括４条引物，包括一对内引物 （ＦＩＰ和ＢＩＰ）和一对外引物（Ｆ３和Ｂ３）；外部引物限 定了扩增片段的大小范围，同时也为内部引物提供 了模板，如果再增加一对环引物（１００ｐ ｐｒｉｍｅｒ），会明 显加快等温扩增的速度，大大提高检测效率，检测率 比没有加环引物的高７个数量级１５，６１。国外已建立
６１
要的食源性致病菌，感染导致肠炎疾病，发病率呈逐 年上升趋势。副溶血性弧菌致病因子是其携带的ｔｄｈ 和ｔｄｌ编码毒力基因，采用常规检测方法无法解决风 险监测和评估。徐芊等“７首次报道了利用ＬＡＭＰ技 术检测副溶血性弧菌，针对副溶血性弧菌不耐热溶 血素基因（ｔｌＩＩ）设计４条特异引物进行ＬＡＭＰ扩增， 对扩增反应进行优化，最佳反应时间为６０ｍｉｎ，反应 温度为６０℃，特异性为１００％，且副溶血性弧菌基因 组ＤＮＡ和纯培养物的检测灵敏度分别为９０ｆｇ和 ２４ｃｆｕ／ｍＬ，对模拟样品检测，检测限为８９ｃｆｕ／ｇ，整个 过程ｌ小时能完成检测。 ２．５阪崎肠杆菌检测２００２年国际食品微生物标 准化委员会（ＩＣＭＳＦ）把阪崎肠杆菌列为“严重危害 特定人群，危害生命或慢性实质性后遗症或长期影 响”致病菌［１８１，该菌能引起严重的新生儿脑膜炎、菌 血症和坏死性小肠结肠炎，并可能遗留严重的神经 系统后遗症，死亡率２０％一５０％Ｉｔ９ Ｊｏ贺楠等∞参照 阪崎肠杆菌标准株（ＡＴＣＣ５１３２９）１６ＳｒＲＮＡ基因设计 ４条特异性引物。方法最低检测限可达到 ０．３ｐｇＤＮＡ，当稀释度１０５时才检测不到扩增产物，而 ＰＣＲ方法稀释度１０２时就检测不到扩增物。而胡莲 霞ｍ１则以１６Ｓ。２３Ｓ ｒＲＮＡ间区序列作为靶序列，采 用带有２条环引物（ＬＦ和ＬＢ）的改良ＬＡＭＰ方法检 测婴儿配方奶粉中的阪崎肠杆菌，灵敏度为 ０．１０１ｃｆｕ／ｍＬ，人工污染阪崎肠杆菌的婴儿配方奶粉 的检出限为１．１ｅｆｕ／ｇ，而对照ＰＣＲ方法检测阪崎肠 杆菌的灵敏度为１０１ｃｆｕ／ｍＬ，人工污染阪崎肠杆菌的 婴儿配方奶粉的检出限为１ １００ ｃｆｕ／ｇ，改良ＬＡＭＰ 方法比较ＰＣＲ方法，其灵敏度提高了ｌ ０００倍，检测 耗时仅为ｌ～３ｈ。 ２．６金黄色葡萄球菌检测 金黄色葡萄球菌是一 种常见的致病菌，导致感染性疾病是其产生的肠毒 素造成的，且耐药性金黄色葡萄球越来越广泛。申 建维等勉荆用多重ＬＡＭＰ法同时扩增金黄色葡萄球 菌耐药基因ｍｅｃＡ和ｆｅｍＡ，在反应过程中，两种分子 信标荧光探针分别与ｍｅｃＡ和ｆｅｍＡ基因的扩增产物 序列互补结合，最后检测反应管中的两种荧光值。 结果显示该方法的检测下限为１０ｃｆｕ／ｍＬ，与传统的 Ｍ２Ｈ培养基苯唑西林药敏实验结果比较，灵敏度为 ９９．９％，特异度为９０．９％。适用于直接快速检测临 床标本中的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌。 ２．７单核细胞增生李斯特氏菌单核细胞增生李 斯特氏菌是一种能够引起人畜共患疾病的食源性致 病菌，ＷＨＯ已将其列为２０世纪９０年代食品中四大
食品快速检测工作方案
食品快速检测工作方案为了确保食品的质量和安全，食品快速检测在现代社会变得越来越重要。
本文将介绍一种食品快速检测的工作方案，该方案旨在提高检测效率和准确性，以保障公众的健康和食品行业的发展。
1. 简介食品快速检测工作方案是一项涉及食品安全的重要举措。
它通过采用先进的技术和方法，快速准确地检测食品中的有害物质和微生物，以确保产品的质量和安全性。
2. 快速检测技术2.1 光谱技术光谱技术是一种常用的快速检测技术，它通过测量光的吸收、散射和发射等特性，来分析样品中的化学成分。
常见的光谱技术包括紫外可见光谱、红外光谱和拉曼光谱等。
这些技术具有快速、非破坏性和准确的特点，可广泛应用于食品快速检测领域。
2.2 生物传感技术生物传感技术利用生物体的特异性识别和信号转导机制，将目标物质与生物分子结合，并通过检测信号来判断目标物质的存在和浓度。
常见的生物传感技术包括酶传感、抗体传感和基因传感等。
这些技术具有高灵敏度和高选择性的特点，可用于食品中有害物质的快速检测。
3. 工作方案步骤3.1 样品采集首先，从食品供应链中选取代表性样品，保证样品的有效性和可靠性。
同时，保持样品的完整性和新鲜度，以保证后续的检测结果准确可靠。
3.2 样品制备将样品经过必要的预处理，如研磨、溶解或提取等，以获得适合检测的样品溶液或提取物。
样品制备过程需严格控制，以确保样品中目标物质的浓度不受干扰。
3.3 检测操作根据不同的检测目标和方法，选择合适的快速检测技术进行操作。
对于光谱技术，可以使用光谱仪进行光谱测量；对于生物传感技术，可以使用传感器进行目标物质的捕捉和信号转导。
检测操作过程需严格按照操作规程进行，保证结果的准确性与可靠性。
3.4 数据分析对检测得到的数据进行分析和解读。
根据预先设定的阈值和标准，判断样品是否符合安全质量要求。
同时，对检测结果进行统计和记录，以便于总结和分析，改进检测方案和控制食品安全风险。
4. 工作方案改进为了进一步提高食品快速检测工作方案的效率和准确性，可以通过以下途径进行改进：4.1 技术改进不断引入新的检测技术和方法，提高检测的灵敏度、准确性和速度。
环介导恒温扩增法检测肉制品中致病微生物
摘 要 ： 目的 ：建 立一种 食 品中微生物 核酸快速 检测 技术 ，在此 基础上 开发 的简 便 、快速 、灵敏 ，不依赖仪器 适 合基层应 用的核酸快速 检测试剂 盒 ；并探 索该试剂盒 在 肉及 肉制 品微生物检 测 中的应用 。方法 ：根据 单核细胞 增 生李斯特 氏菌特有 的靶序列 ｖｒＲ基 因设计 引物，采用 环介导恒温 扩增技 术构建检 测体系 ，优化 、验 证检测 的 ｉ
关键 词 ：恒温 核酸扩 增 ；环介 导恒温 扩增 （ ＡＭＰ ； 肉制 品；微 生物 ；食 品安全 Ｌ ）
Ｒａ ｉ ｔ ｃ ｉ ｎ ｏ ｓ ｅ ｉ ｎ ｃ ｔ ｇ ｎ ｓｉ ｅ ｔ ｒ ｄ ｃ ｉ ｇ Ｌｏ ｐ Ｍ ｅ ｉｔ ｄ Ｉｏ ｈ ｒ ａ ｐ ｄＤｅ ｅ ｔ ｆ ｔｒａ ｍｏ ｏ ｙ ｏ ｅ ｅ Ｍ ａ ｏ ｕ ｔ ｏ Ｌｉ ｎ Ｐ Ｕｓｎ ｏ — ｄ ａｅ ｔ ｅ ｍ ｌ ｓ Ａｍｐ ｉ ｃ ｔ ｎＭ ｅ ｏ ｌ ａ ｏ ｔ ｄ ｉ ｆ ｉ ｈ
ｒ ｓ ｌ ｏ ｔ ｅ ｌ ｔｄ ｓ ｅ ｉ ｓ Ｔ ｅｌ ｔ ｆ ｅ ｃ ｉ ｎ ｗａ ． １ × １ ＣＦ ｍＬ． ｄｔ ｅｓ ｎ ｉ ｖ ｔ ｓ ｏ ｓｓ ｎ ｔ ａ ｅ ｕ ｔ ｆ ｒ ｈ ｒ ｅ ａｅ ｐ ｃ ｅ ． ｈ ｍｉ ｏ ｔ ｔ ｓ １８ ｓ ｏ ｒ ｉ ｄｅ ｏ ０ Ｕ／ ｎ ａ ｅ ｓｔ ｉ ｗａ ｎ ｉｔ ｔ ｈ ｔ ｔ ｈ ｉ ｙ ｃ ｅ ｗｉ ｈ ｏ ｅ ｃ ｎ ｅ ｔ ｎ ｔ ｏ ｓ Ｏｔ ｅ ｄ ａ ｔｇ ｓｓ ｃ ｓｓｍｐ ｅ ａ ｄ ｒ ｐ ｄ ｄ ｔ ｃｉ ｎ ａ ｄ ｆ ｗ ｅ ｄ ｏ ｎ ｔ ｍｅ ｔ ｒ Ｓ ｆｔ ｏ ｖ ｎ ｉ ａ ｍｅ ｄ ． ｈ ｒａ ｖ ａ ｅ ｕ ｈ ａ ｉ ｌ ｎ ｉ ｅｅ ｔ ｎ ｅ ｎ ｅ ｓｆ ｒｉ ｓ ｕ ｎ ｓｗｅ ｅ ａ Ｏ ｈ ｏｌ ｈ ｎ ａ ｏ ｒ ｌ ａ ｈ ｅ ｅ ， ｅ ｅ ｙｄ ｓ ｒ ｉ ｇ ｔ ｅｐ ｐ ｌ ｒｚ ｄ ｃ ｉｖ ｄ ｔ ｒｂ ｅｅ ｖｎ ｂ ｏ ｕａｉｅ ． ｈ ｏ
PCR技术在食品微生物检测中的应用研究
PCR技术在食品微生物检测中的应用研究作者：王迪来源：《食品安全导刊》2024年第05期摘要：PCR技术因具有高灵敏度、高特异性和快速性的特点，在食品微生物检测领域广泛使用。
本文阐述食品中常见的致病微生物、PCR技术的基本原理、食品中常见致病微生物的PCR检测方法，探讨PCR技术在食品微生物检测中的应用，并介绍PCR技术在食品微生物检测中的发展趋势。
关键词：PCR技术；食品微生物；致病微生物；实时荧光定量PCR；多重PCRStudy on the Application of PCR Technique in Food Microbiological DetectionWANG Di（Center for Disease Control and Prevention， Wujin District， Changzhou City， Jiangsu Province，Changzhou 213100， China）Abstract： PCR technology is widely used in the field of food microbiological detection because of its high sensitivity， high specificity and rapidity. This paper describes the common pathogenic microorganisms in food， the basic principle of PCR technology， the PCR detection method of common pathogenic microorganisms in food， discusses the application of PCR technology in food microbial detection， and introduces the development trend of PCR technology in food microbial detection.Keywords： PCR technology; food microorganism; pathogenic microorganism; real-time fluorescence quantitative PCR; multiplex PCR隨着食品工业的快速发展和人们生活水平的不断提高，食品安全问题日益受到政府和公众的高度关注。
分子生物技术在食品检测中的应用
分子生物技术在食品检测中的应用作者：刘爽，师晶晶来源：《现代食品》 2018年第8期近年来，我国食品安全问题频频发生。
随着人们对于食品安全的不断重视，传统食品检测方法因成本高、周期长等缺点，已不能满足食品检测的需要。
分子生物技术具有灵敏度高、简便快捷等优点，在食品检测领域已经得到了广泛的应用。
本文将重点介绍PCR 技术、ELISA 技术、基因芯片技术在食品检测中的应用。
1 PCR 技术在食品检测中的应用聚合酶链式反应（PCR）又称体外DNA 扩增技术，是一种用于扩增特定的DNA 片段的分子生物学技术，具有灵敏度高、特异性强、重复性好、检测速度快等优点。
1.1 转基因食品的检测近年来，转基因食品的安全性问题受到越来越广泛的关注，PCR 技术是一种在核酸水平上检测转基因食品的重要技术。
李忆等[1] 建立了抗除草剂转基因油菜的四重PCR 检测方法，该方法可以实现在一个反应体系中同时检测抗除草剂转基因油菜T45 内源参照基因和多个外源基因成分，节约了模板和试剂，缩短了检测时间，为转基因油菜T45 提供了一种有效的检测手段。
常丽娟等[2] 利用实时荧光定量PCR 检测技术，建立了转基因玉米MIR604 的检测方法。
该方法可检测最低含量为5 个拷贝的MIR604 分子片段，是一种适合我国实验室的定量检测方法。
1.2 食品中微生物的检测与传统的食品中微生物检测方法相比，PCR 技术具有特异性强、灵敏度高、检测速度快等特点，适合用于食品中致病菌的快速筛选。
王大勇等[3] 利用多重PCR 技术，建立了13 种致病菌的检测方法，该方法极大地缩短了检测时间，提高了检测灵敏度，检测下限可以达到103 CFU/mL。
霍胜楠等[4] 建立了3 种食源性致病菌的实时荧光PCR 快速检测技术，该方法可以同时检测食品中金黄色葡萄球菌、沙门氏菌和志贺氏菌，3 种致病菌的检测灵敏度分别可以达到10-6、10-6、10-7 ng/μL。
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取本品1包，撕开包装袋，将培养基粉末倒入1000ml三角瓶中，加入蒸馏水或去离子水180ml，搅拌 至完全溶解，定容到450ml，获得母液。母液121 ℃高压蒸汽灭菌15 min，冷却至室温即可使用或4 ℃ 储存，并在1个月内使用完。每次使用时，量取37.5ml母液于500ml三角瓶，添加187.5ml灭菌的蒸馏水 或去离子水，混合均匀，即可使用。
6.5 恒温扩增
5
T/CSPSTC X-2018 将离心后的芯片固定在恒温扩增微流控核酸分析仪上，根据软件提示步骤进行操作，按照表3的核 酸扩增反应程序进行检测。
步骤
1
温度（℃） 37
时间（分钟） 3
表 2 核酸扩增反应程序
2 65 47
7 结果判读
检测完成后软件将自动进行数据处理和分析，自动生成检测报告。 7.1 结果判读标准
食品中常规致病菌的快速检测程序，见图2。 样本
样本前处理
25 g（mL）样品+225 mL 食源性共増菌培养基 36 ℃±1 ℃，16 h～20 h
取 100ul 共増菌培养液收集菌体，提取核酸 浓度范围 50pg/ul~50ng/ul
配置反应体系，上芯片 芯片离心
上机
4
T/CSPSTC X-2018
a) 信号值>背景信号平均值，且 Tp 值≤Tp 阈值，且扩增倍数值≥扩增倍数阈值，该种情况下判 定为阳性；
b) 信号值>背景信号平均值，且 Tp 值>Tp 阈值，且扩增倍数值<扩增倍数阈值，该种情况下判定 为阴性；
c) 信号值<背景信号平均值，该种情况下判定为异常。
注：Tp值（Time Positive）：扩增曲线开始起峰的位置（扩增开始位置）； 扩增倍数值：扩增曲线最高点与基线区平均值的比值。
6.4 扩增反应
6.4.1 配置恒温扩增反应体系 将提取的基因组DNA与恒温扩增反应试剂混合进行扩增,见表2。
表 1 恒温扩增反应体系
反应物
体积（ul）
恒温扩增试剂
13
模板 DNA
13
共计
26
6.4.2 芯片加样
使碟式芯片恢复至室温，吸取25ul配置好的核酸扩增反应体系，从Ⅰ区进样口加入到芯片主通道中，
如为冷冻产品，应在45 ℃以下不超过15 分钟，或2 ℃～5 ℃不超过18 h解冻。
6.2 样本处理
吸取食源性增强型培养液100ul，12000 r/min，离心2 min，完全吸弃上清，加入700ul生理盐水， 震荡混匀，12000 r/min，离心2 min，弃上清，获得的菌体即可进行后续的基因组DNA提取。
待其充满芯片主通道即可停止加样。用擦镜吸纸轻轻擦掉多余的液体；Ⅱ区操作同Ⅰ区，取1张封口膜，
覆盖于进出样口上，再取一支洁净吸头，向一个方向按压封口膜至贴合紧密。
6.4.3 芯片离心
将加样后的芯片固定在低速离心机上，以6 000 r/min离心30 s后取下，如果芯片“V”型通道中仍
有气泡，可适当延长离心时间，直至气泡消失。
A.1.1.1 方法一
取本品1包，撕开包装袋，将培养基粉末倒入2000ml三角瓶中，加入蒸馏水或去离子水900ml，搅拌 至完全溶解，定量到1500ml，从中分别量取500ml于2个2000ml三角瓶中。分别向上述3个三角瓶添加400ml 蒸馏水或去离子水，混合均匀。121 ℃高压蒸汽灭菌15 min，冷却至室温即可使用或4 ℃保存待用（有 效期1个月）。
2 术语与定义
下列术语和定义适用于本文件。 2.1
微流控芯片 microfluidic chip 利用微加工技术，在硅、石英玻璃或高分子材料等基质上加工出各种微细结构，如管道、反应池、 微泵、微阀等功能单元，进行样品的处理和分子的微系统。
3 设备和材料
除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下： 3.1 冰箱：2℃~5℃、-20℃±5℃。 3.2 恒温培养箱：36℃±1 ℃。 3.3 均质器。 3.4 漩涡震荡仪。 3.5 电子天平：感量 0.1g。 3.6 水浴锅：能升温至 95℃。 3.7 高速离心机：12000rpm/分钟。 3.8 瞬时离心机。 3.9 生物安全柜。 3.10 微型分光光度计。 3.11 恒温扩增仪。 3.12 微流控芯片。 3.13 低速离心机。 3.14 微量移液器。 3.15 无菌离心管：1.5ml、200ul。 3.16 无菌吸管：50ml。 3.17 锥形瓶：容量 1000ml、500ml。 3.18 量筒：容量 500ml。 3.19 擦镜纸。
输出报告
图 2 食品中常规致病菌的快速检测程序
6 操作步骤
6.1 增菌
称取25 g（mL）样品放入盛有225mL食源性増强型养基的无菌均质杯中，以8 000 r/min～10 000 r/min 均质1 min～2 min，或置于盛有225mL食源性增强型培养基的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1 min～ 2 min。若样品为液态，不需要均质，振荡混匀。无菌操作将样品转至500mL锥形瓶中，如使用均质袋， 可直接进行培养，于36 ℃±1 ℃培养16 ～20 小时。
T/CSPSTC X-2018
食品中常规致病菌快速检测（恒温扩增芯片法）
1 范围
本标准规定了食品中沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、单核细胞增生李斯特氏菌、大肠埃希氏菌O157： H7、阪崎肠杆菌、副溶血性弧菌、志贺氏菌和侵袭性大肠埃希氏菌的快速检测方法。
本标准适用于食品中沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、单核细胞增生李斯特氏菌、大肠埃希氏菌O157： H7、阪崎肠杆菌、副溶血性弧菌、志贺氏菌和侵袭性大肠埃希氏菌的快速检测。
A.2 生理盐水
A.2.1 成分
氯化钠 蒸馏水
0.9g 100ml
A.2.2 制法
将氯化钠加入蒸馏水中，搅混均匀，121 ℃高压灭菌15 min。
7
7.2 质量控制 每测试芯片内均设有1个阳性质控和3个阴性质控。根据结果判读标准，阳性质控检测结果应为阳性，
同时3个阴性质控结果均为阴性。若任一结果错误，则判定本次样本检测结果无效，需要进行复检。
ห้องสมุดไป่ตู้
6
附录A （规范性附录）
培养基及试剂
T/CSPSTC X-2018
A.1 食源性共増菌培养基
A.1.1 制法
6.3 基因组 DNA 提取
6.3.1 6.3.2 6.3.3 6.3.4 6.3.5
向所收集菌体中加入50~100ul核酸提取试剂，充分震荡混匀，使沉淀完全悬浮； 将悬浮液转移至核酸提取管中，旋紧管盖，使用漩涡振荡仪剧烈震荡5 min； 使用水浴锅，95 ℃加热5 min； 高速离心机，12000 r/min，离心5 min，将上清液转移至洁净离心管中，-20 ℃保存备用； 利用微型分光光度计进行核算浓度测定：50pg/ul-50ng/ul；
3
4 培养基和试剂
T/CSPSTC X-2018
4.1 食源性致病菌加强型培养基：配置方法见附录 A 中 A.1。 4.2 适用型核酸提取试剂盒。 4.3 生理盐水：配置方法见附录 A 中 A.2。 4.4 适用型核酸检测试剂盒（生物芯片法）：碟式芯片结构示意图，见图 1。
图 1 碟式芯片结构示意图 5 检测程序