一株具有乙酰胆碱酯酶抑制剂活性的细菌菌株的分离与鉴定
一株产纤维素酶益生芽孢杆菌的筛选与鉴定
株产纤维素酶益生芽孢杆菌的筛选与鉴定
但 言 陈元坤 朱杰 马跃刚
（ 重庆市水产科 学研 究所 ，重庆 ４ ０ １ １ ２ １ ）
摘
要 ：从 健康 大 鳍 鲮 （
）肠 道 菌群 分离 得 到 的２ ５ 株 细 菌 ，通过 平 板 筛
选 、发酵 液酶活力 测定和菌株 安全性检 测 ，筛选 出一株具有较 高产纤维 素酶能力 的益生 芽孢杆 菌 Ｄ Ｑ Ｈ Ｙ 一 ７ 菌株 。通 过 对 Ｄ Ｑ Ｈ Ｙ 一 ７ 菌 株 形态 观 察 、生理 生 化 试 验 ，对 Ｄ Ｑ Ｈ Ｙ 一 ７ 菌 株进 行 了分 类鉴 定 。结果 显示 ：Ｄ Ｑ Ｈ Ｙ一 ７ 菌株 具有较 强 的分 泌纤维素 酶能力 ，水解 圈／ 菌落直径 比为 ｌ ２ ． ７ ７ ，２ ０ ｈ 发
３ ０ ｍｉ ｎ。
１ ． ２ ． ４安全性试验 取１ ０ ０ ｃ ｍ ×５ ０ ｃ ｍ×６ ０ ｃ ｍ的 水族 缸 ５ 只 ，充 入曝气 自来水 ，每缸￣． ／ Ｎ ． ２ ０ 只健康大鳍鲮（ ２ ０ ±
１ ． ２ 方 法
０ ． ５ ） ｇ ，取４ 只缸 进行 动物 毒 性试 验 ：将最 符合 益生 菌条件菌株 接种在 营养 肉汤 ，２ ８ ℃培养２ ４ ｈ 后 ，用０ ． ８ ５ ％无菌生理盐水稀释菌悬液至浓度
度接 种 ３ 个 平板 ，最 后将 平板 置 于２ ８ ℃恒温 培
Ｃ Ｆ Ｕ ／ Ｅ 。将 不 同稀 释度 的 菌悬 液用 无菌 注射 ｍ 器对 每尾 大 鳍鲮 注射 ０ ． ３ ｍＬ 作 为试验 组 。对照
组则注射 同体积 的无菌生理 盐水 。注射后放 回
水族箱 中继续饲 养 ，每 日记录死亡情 况 ，连续
观察７ ｄ 。
实验2 乙酰胆碱酯酶抑制法快速测定果蔬中的残留农药
K 0K t 吸光度A实验二乙酰胆碱酯酶抑制法快速测定果蔬中的残留农药目前有机磷、氨基甲酸酯类农药是我国大量使用的杀虫剂，虽然这类农药与过去使用的有机氯农药相比，降解速度较快，但在果蔬中的残留仍然较为严重。
由于该类农药能抑制人体内乙酰胆碱酯酶的生理活性，神经传导因此受阻，引起神经麻痹乃至死亡，对人类健康造成极大危害。
对于果蔬中的农药通常采用气相色谱等方法进行分析，但分析时间长，操作步骤烦琐，适用于实验室分析。
长期以来在大部分果蔬市场中，通常采用乙酰胆碱酯酶抑制法进行快速检测，即以乙酰胆碱酯酶作为检测试剂，采用农药残留检测仪，根据乙酰胆碱酯酶活性变化的程度来测定果蔬样品中的残留农药。
一、 实验目的1． 了解果蔬中残留农药的分析方法；2． 掌握酶抑制分析方法的原理及操作方法； 3． 理解农药残留性评价的意义。
二、 实验原理有机磷和氨基甲酸酯类农药能抑制昆虫中枢和周围神经系统中乙酰胆碱酯酶的活性，造成神经传导介质乙酰胆碱的积累，影响正常传导，使昆虫中毒致死，酶抑制法就是根据这一昆虫毒理学原理，对农药残留进行检测。
以乙酰胆碱为底物，在乙酰胆碱酯酶（ACHE ）的作用下，乙酰胆碱水解成胆碱和乙酸，胆碱和二硫双对硝基苯甲酸（DNTB ）产生显色反应，使反应液呈黄色（于410nm 处有最大吸收峰）。
根据酶促反应动力学原理，在没有有机磷和氨基甲酸酯类农药存在时，底物在酶的催化作用下发生水解，反应速率可以用吸光度值随时间的变化率K 0来表示。
当有机磷和氨基甲酸酯类农药加入到酶的显色体系中时，农药抑制了酶的活性，影响显色体系的反应速度，此时体系吸光度随时间的变化率为K t ，则有机磷和氨基甲酸酯类农药对酶的活性的抑制率Y 的计算公式如下：%10000⨯-=K K K Y tK 0：空白样品的吸光度随时间变化曲线的斜率值K t ：样品溶液的吸光度随时间变化曲线的斜率值其中K 0和K t 都可通过以下过程进行推导和计算。
2020年湛江市霞山区妇幼保健院医药护技人员考试试题及解析
2020年湛江市霞山区妇幼保健院医药护技人员考试试题及解析说明：本题库收集历年及近期考试真题，全方位的整理归纳备考之用。
一、单项选择题（在下列每题四个选项中只有一个是最符合题意的，将其选出并把它的标号写在题后的括号内。
错选、多选或未选均不得分。
）1、关于抗结核药物副作用，错误的是（）。
A、利福平：肝功损害B、乙胺丁醇：视神经炎C、链霉素：耳鸣耳聋D、吡嗪酰胺：肝功损害、肾功损害【答案】D【解析】吡嗪酰胺的副作用主要是高尿酸血症、肝损害、食欲缺乏、关节痛和恶心。
2、弥漫性膜性增生性肾小球肾炎的病理特点是（）。
A、毛细血管壁呈双轨状B、毛细血管内皮细胞增生C、肾小球内新月体形成D、系膜细胞和内皮细胞增生【答案】A【解析】弥漫性膜性增生性肾小球肾炎的病理特点是系膜细胞及基质增生并向毛细m管内插入，使毛细血管基底膜增厚，并呈双轨状。
3、前列腺素（）。
A、肥大细胞产生B、血管内皮细胞产生C、淋巴细胞产生D、中性粒细胞产生【答案】B【解析】前列腺素主要有血管内皮细胞产生。
4、反馈信息是指（）。
A、控制部分发出的信息B、受控变量的改变情况C、外界干扰的强度D、调定点的改变【答案】B【解析】由受控部分发出的信息发过来影响控制部分的活动，称为反馈。
反馈分为正反馈和负反馈两种形式。
故选B。
5、参与构成交感干的神经节是（）。
A、终节B、器官内节C、椎前节D、椎旁节【答案】D【解析】交感干位于脊柱两侧，由椎旁节和节间支连接而成，呈串珠状，上至颅底，下至尾骨前方。
6、急性炎症可以分为（）。
A、浆液性炎、纤维性炎、化脓性炎和出血性炎B、纤维性炎和化脓性炎C、浆液性炎和化脓性炎D、浆液性炎和纤维性炎【答案】A【解析】急性炎症所发生的器官组织的不同、组织反应的轻重程度不同以及炎症性致病因子的不同，急性炎症可分为浆液性炎、纤维素性炎、化脓性炎和出血性炎。
故选A。
7、白色血栓的特点是（）。
A、灰白色小结节或赘生物状B、表面光滑、质实C、镜下观可见红细胞D、又称纤维素性血栓【答案】A【解析】在静脉性血栓中，白色血栓位于延续性血栓的起始部，即血栓的头部。
广东省深中、华附、省实、广雅四校联考2023-2024学年高三最后一卷生物试卷含解析
广东省深中、华附、省实、广雅四校联考2023-2024学年高三最后一卷生物试卷注意事项:1．答题前，考生先将自己的姓名、准考证号码填写清楚，将条形码准确粘贴在条形码区域内。
2．答题时请按要求用笔。
3．请按照题号顺序在答题卡各题目的答题区域内作答，超出答题区域书写的答案无效；在草稿纸、试卷上答题无效。
4．作图可先使用铅笔画出，确定后必须用黑色字迹的签字笔描黑。
5．保持卡面清洁，不要折暴、不要弄破、弄皱，不准使用涂改液、修正带、刮纸刀。
一、选择题：（共6小题，每小题6分，共36分。
每小题只有一个选项符合题目要求）1．下列关于细胞内蛋白质与核酸的叙述，错误的是（）A．有的蛋白质具有催化功能，有的核酸也具有催化功能B．含有蛋白质和核酸的结构，有的可作为遗传物质的载体，有的具有合成蛋白质的功能C．蛋白质和核酸的合成都需要搬运各自组成单位的工具D．分化程度不同的细胞内核酸和蛋白质的种类均有差异2．下列动物细胞的生命活动中，不是由单层膜的细胞器完成的是（）A．合成磷脂B．对蛋白质进行分拣C．发出纺锤丝形成纺锤体D．消化细胞自身产生的碎渣3．下列选项中不符合含量关系“c=a+b，且a>b”的是（）A．a非必需氨基酸种类、b必需氨基酸种类、c人体蛋白质的氨基酸种类B．a线粒体的内膜面积、b线粒体的外膜面积、c线粒体膜面积C．a各细胞器的膜面积、b细胞核的膜面积、c生物膜系统的膜面积D．a叶肉细胞的自由水、b叶肉细胞的结合水、c叶肉细胞总含水量4．阿托品是一种常见的麻醉药物。
某实验小组将离体的神经一肌肉接头处置于生理盐水中，并滴加阿托品，用针刺神经纤维后肌肉不收缩；再滴加乙酰胆碱酯酶抑制剂后，阿托品的麻醉作用降低甚至解除(突触间隙中的乙酰胆碱酯酶能水解乙酰胆碱)。
据此判断，阿托品抑制突触处的兴奋传递的机制可能是A．破坏突触后膜上的神经递质受体B．阻止突触前膜释放神经递质C．竞争性地和乙酰胆碱的受体结合D．阻断突触后膜上的钠离子通道5．细胞增殖与细胞凋亡都影响到人体内细胞的数量，下列有关叙述错误的是（）A．两者都受到严格的遗传机制控制B．两者进行的速率都不受外界影响C．两者的顺利进行都需要有关酶的催化D．两者均能对多细胞生物体的生长发育起作用6．下列说法正确的是（）A．环境容纳量是指一定空间中所能维持的种群最大数量B．调查土壤小动物类群丰富度可以用标志重捕法进行采集和调查C．演替过程中草本植物逐渐取代苔藓，主要原因是苔藓寿命较短D．生态系统的能量流动包含能量的输入、传递、转化和散失二、综合题：本大题共4小题7．（9分）酵母菌是单细胞真菌，在自然界中分布广泛，在人类的生活和生产中应用也很多。
蛇足石杉体内抑制乙酰胆碱酯酶活性物质的内生真菌的分离
蛇足石杉体内抑制乙酰胆碱酯酶活性物质的内生真菌的分离凌庆枝;董丽辉;范三微;何军邀;高莉莉;黄贝贝;魏兆军【摘要】[目的]从蛇足石杉体内分离筛选出具有体外抑制乙酰胆碱酯酶活性的内生真菌.[方法]取野外采集的蛇足石杉的叶、茎和根进行表面消毒后接种于PDA培养基,分离出内生真菌后进行摇瓶发酵,超声提取其发酵产物,以DTNB法检测其发酵产物在体外抑制乙酰胆碱酯酶的活性.[结果]从根、茎、叶中分离得到194株内生真菌,在马铃薯葡萄糖液体培养基(PDB)中发酵后,对内生真菌发酵提取液进行体外AChE抑制活性检测；共有31株内生真菌显示出体外AChE抑制活性,抑制活性较强的有13株,抑制率在50.2％～80.5％.其中从蛇足石杉茎部位分离得到9株,叶部位分离得到4株.[结论]从蛇足石杉体内可分离出内生真菌,该内生真菌的发酵产物在体外有较强的抑制乙酰胆碱酯酶活性,这可能是寻找乙酰胆碱酯酶抑制药物的有效途径之一.%[Objective] To isolate endophytic fungi with acetylcholinesterase (AChE) inhibitory activities from Huperziaserrata(Thunb. ) Trev. [Method] Stems, leaves and roots of H. serrata were collected from the open field. Then, they were inoculated on PDA culture medium after the surface sterilization. Based on the isolation of endophytic fungi, shaking flask fermentation was conducted; and fermentation products were extracted by ultrasound. Inhibitory effects in vitro of fermentation products on AChE were detected by DTNB method. [ Result] A total of 194 endophytic fungi were isolated from the roots, stems and leaves. After the fermentation in potato glucose liquid medium (PDB), in vitro AChE inhibitory activity was detected in endophytic fungi fermentation extracting liquid. 31 endophytic fungi showed in vitro AChEinhibitory activity. Among them, 13 strains had relatively strong inhibitory activity, with the inhibitory rate being 50. 2% -80.5%. 9 strains were isolated from the H, serrata stems; and 4 strains were isolated from leaves. [ Conclusion ] Endophytic fungi could be isolated from the H. serrata. The fermentation products of the endophytic fungi showed relatively strong in vitro inhibitory activity to AChE, which might be one of the effective approaches to find the inhibitory drugs of AChE.【期刊名称】《安徽农业科学》【年(卷),期】2012(000)030【总页数】3页(P14706-14707,14712)【关键词】蛇足石杉[Huperzia serrata(Thunb.)Trev.];内生真菌;乙酰胆碱酯酶;抑制【作者】凌庆枝;董丽辉;范三微;何军邀;高莉莉;黄贝贝;魏兆军【作者单位】浙江医药高等专科学校,浙江宁波315100;浙江医药高等专科学校,浙江宁波315100;浙江医药高等专科学校,浙江宁波315100;浙江医药高等专科学校,浙江宁波315100;浙江医药高等专科学校,浙江宁波315100;浙江医药高等专科学校,浙江宁波315100;合肥工业大学生物与食品工程学院,安徽合肥230009【正文语种】中文【中图分类】S567蛇足石杉［Huperzia serrata(Thunb.)Trev.］是石杉科(Huperiaceae)石杉属(Huperzia)的蕨类植物，又名千层塔、山芝、蛇足草等，分布于东北、福建、广东、广西、云南和贵州等地。
16SrDNA克隆法分析小曲优势细菌
16SrDNA克隆法分析小曲优势细菌2011No.844SerialNo.233ChinaBrewingResearchReport16SrDNA克隆法分析小曲优势细菌戴诗皎,翟平平,程颖源,王学峰,李睿(武汉工业学院生物与制药工程学院,湖北武汉430023)摘要:用16SrDNA克隆法对某酒厂小曲中优势细菌进行分析,以期探讨强化酵母菌制曲后酒体风味变差的问题.用SDS.酶裂解法提取小曲总DNA,采用细菌通用引物对用PCR方法扩增其16SrDNA,并对PCR产物进行克隆与测序分析.结果表明,小曲中的优势细菌种类是以植物乳杆菌为主的乳酸菌.故强化制曲后发酵生产的白酒中乳酸乙酯含量增加,乙酸乙酯含量下降,造成酒整体风味变差.关键词:小曲;优势细菌;16SrDNA克隆法;聚合酶链反应中图分类号:TS261.1文献标识码:A文章编号:0254—5071(2011)08—0044—02 IdentificationofsuperiorbacteriainXiaoquby16SrDNAcloninglibraryanalysis DAIShijiao,ZHAIPingping,CHENGYingyuan,W ANGXuefeng,LIRui (CollegeofBiologicalandPharmaceuticalEngineering,WuhanPolytechnicUniversRy,W uhan430023,China)Abstract:ToinvestigatethereasonswhyyeastadditiontoXiaoquresultsinliquorflavorloss,t hesuperiorbacteriainXiaoqufromadistillerywerei—dentifiedbysequenceanalysisof16SrDNAcloninglibrary.ThetotalgenomicDNAofXiaoq uwasextractedbySDS-proteaseKmethod.The16S rDNAfragmentswereamplifiedbyPCRwithuniversalprimers.Then,thePCRproductswer eclonedandsequenced.TheresultsshowedthattheSU.periorbacteriainXiaoquweremainlylacticacidbacteria,representedessentiallybyLactoba cillusplantarum.Therefore,withtheadditionofyeasttoXiaoqu,thecontentofethyllactateincreasedwhilethecontentofethylacetatedecreasedduri ngfermentation,whichcausedflavorlossofliquor.Keywords:Xiaoqu;superiorbacteria;16SrDNAcloninglibraryanalysis;PCR乳酸乙酯是白酒四大酯类之一.白酒香味成分之间的关系复杂,白酒的香味物质是一个量的平衡.适量的乳酸乙酯可增加酒的醇厚感,但如果生成的乳酸乙酯较多,反而导致白酒发涩,口感较差[1].小曲白酒在湖北和湖南等地的厂家均有生产.目前国内采用DGGE,RAPD,PCR.克隆分析等分子生物学技术对大曲白酒微生物的研究比较深入[2-51,小曲白酒的微生物区系的研究则相对滞后.某小曲白酒生产厂家在采用强化酵母菌制曲工艺后,出酒率虽然提高,但发酵生产的白酒中乳酸乙酯含量增加,乙酸乙酯含量下降,造成酒整体风味变差.本研究采用16SrDNA克隆法对该厂使用的小曲优势细菌进行分析,以期为上述问题寻找到答案.1材料与方法1.1试剂DNAma~er,PCR产物纯化试剂盒:日本Takara公司;pGEM.TEasy~体系统:美[]Promega公司;质粒快速提取试剂盒:美国Omega公司;Taqmix预混合PCR试剂盒:武汉华顺生物技术有限公司;GoldView核酸染料:上海赛百盛基因技术有限公司.引物委托武汉鼎国生物技术公司合成.1.2仪器与设备SW.CJ.mV超净工作台:苏州安泰空气技术有限公司;TGRAD~NTPCR/t~:德国WhatmanBiometra公司;GBOX.H12.E.M自动凝胶成像分析系统:英[]Syngene公司;DYY.2C电泳仪:北京六一仪器厂;台式高速冷冻离心机:德国Eppendorf公司.1-3方法1.3.1SDS.酶裂解法提取DNA按照参考文献[6]进行.1.3.216SrDNAPCR扩增本实验采用文献报道的细菌通用引物对r刀一上游引物为:5.AGAGTTTGATCCTGGCTCAG一3下游引物为:5一AAGGAGGTGATCCAGCC一3预期PCR产物大小为1600bp左右.PCR体系:10xbuffer5.0~L,dNTP4.OIxL,上下游引物各1.01xL,模板1.01xL,ExTaqDNA聚合酶0.51xL,补ddH20至501~L.PCR反应条件:94℃预变性5min;94oC,45s,55oC,45s,72℃,1.5min,循环扩增30次;72oC,10min.取5LPCR产物用1.5%琼脂糖凝胶电泳分析.1.3.3PCR产物克隆与测序分析PcR产物用Pc物纯化试剂盒纯化后,连接到pGEM.TEasy载体系统上进行TA克隆,用含X.Gal/IPTG和氨苄青霉素的LB琼脂平板进行蓝白斑筛选阳性重组子.阳性菌于含氨苄青霉素的LB培养基中37~C过夜培养后抽提质粒,经EcoRI酶切验证,用1.2%琼脂糖凝胶电泳分析.将验证确认的重组质粒,送生工生物工程(上海)有限公司武汉收稿日期:2011-04—08基金项目:湖北省自然科学基金重点项目(2009CDA118)作者简介:戴诗皎(1988一),女(壮族),广西南宁人,在读硕士研究生,研究方向为食品安全;李睿?,副教授,通讯作者.研究报告中国酿造2011年第8期总第233期?45?测序部双向测序.用DNAstar软件将测序得到的16SrDNA基因序列进行拼接,得到完整的16SrDNA序列,提交~ONCmGenBank 数据库()进行序列比对.选择与待检菌株同源性最高的典型菌株,用mega4.1软件采用邻位相连法(Neighbor-joining)构建16SrDNA进化树.根据基本的进化树拓扑结构,采用1000次Bootstrap抽样对树进行评价分析.l-3.4醋酸菌16SrDNAPCR扩增从NCBIGenBank数据库下载醋酸菌16SrDNA序列,用ClustalX2进行序列比对,根据其保守区设计醋酸菌16S rDNA特异性引物.上游引物为:5'.CGCTGTAAACGAT GTGTGC.3'下游引物为:5'一AAGGTCAAACCAACTCC—CA T.3'预期PCI物大小为627bp.PCR体系为:12.51xLTaqmix,101xmol/L上下游引物各0.5txL,lLDNA模板,补枷20至25txL.PCR反应条件:94℃预变性5min;94℃,60s,55oC,30s,72℃,45s,循环扩增30次;72℃,lOmin.取5txLPCR产物用1.5%琼脂糖凝胶电泳分析.2结果与分析2.116SrDNAPCR扩增与克隆测序用SDS一酶法提取的小曲总DNA大于15kb,获得的DNA 非常完整.将该法获得的DNA进行16SrDNAPCR扩增,结果见图l.将PCR产物纯化后,进行TA克隆,随机选取11 个克隆送生物公司进行双向测序.将测序结果在NCBI GenBank数据库进行同源性比较分析.将11个克隆与其同源序列进行系统发育分析,结果见图2.2000bp1000bp500bp100bp2M:DL2000DNA分子量标准;1:小曲DNAPCR扩增产物;2:阴性对照图116SrDNAPCR产物电泳图Figure1.ElectrophoresisofPCR-amplified16SrDNA图2中菌株NCBI序列号:AY675256为植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum),菌株NCBI序列号:CP000416为短乳杆菌(Lactobacillusbrevis),菌株NCBI序列号:EF059987为乳酸片球菌(Pediococcusacj删ac如j).可以看出,克隆B属于短乳杆菌,克隆B.,BB.,B,BB,B.,BB.等都属于植物乳杆菌,克隆B为乳酸片球菌.U5图216SrDNA进化树Figure2.Phylogenetictreeof16SrDNA2.2醋酸茵16SrDNAPCR扩增取纯种醋酸菌DNA,作为阳性对照,验证提取的小曲总DNA是否包含醋酸菌DNA;无菌双蒸水作为阴性对照.将小衄DNA,醋酸菌DNA和无菌双蒸水同时扩增,结果见图3.750bp500bp250bp100bp1000bp500bp250bpN:阴性对照;M1:DL2000分子量标准;1:小曲DNAPCR扩增产物2:阳性对照;M2:DL10000分子量标准图316SrDNAPCR产物电泳图Figure3.ElectrophoresisofPCR-amplified16SrDNA以小曲DNA为模板扩增醋酸菌16SrDNA,得到的PCR产物与预期大小一致,表明SDS一酶法提取的总DNA中包含了醋酸菌DNA.3讨论小曲白酒发酵生产过程中,会产生乳酸乙酯和乙酸乙酯.研究表明,乳酸乙酯含量随发酵温度的升高而升高,此外糖化醅中含糖量也是影响酒中乙酸乙酯和乳酸乙酯的重要因素嘲.乙酸乙酯主要由醋酸菌产生的乙酸通过酯化作用形成,此外酵母菌也能合成乙酸乙酯.某厂在强化酵母菌制曲后,发现发酵白酒中的乙酸乙酯含量反而下降,而乳酸乙酯含量增高.采用细菌通用引物扩增16SrDNA2011No.846SerialNo.233ChinaBrewingResearchRepo~兔血清对氧磷酶基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达纯化谷立坤,张建云(河南工程学院资源与环境工程系,河南郑州451191)摘要:利用RT-PCR扩增新西兰大白兔肝脏PON.编码区全长序列,克隆入表达载体pET32aq~,构建了重组表达载体pET32a.PON.,转化大肠杆菌获得表达菌株.SDS-PAGE表明该重组表达蛋白具有部分可溶性,酶活测定结果显示该可溶性蛋白具有降解芳香酯酶和内酯酶的活性.该研究实现了兔血清对氧磷酶在大肠杆菌中的功能性表达,并获得了纯化的蛋白,为下一步对氧磷酶PON,的功能研究奠定基础.关键词:逆转录PCR;原核表达;对氧磷酶;可溶性蛋白中图分类号:Q93—33文献标识码:A文章编号:0254—5071(2011)08—0046—04 Cloning,expressionandpurificationofrabbitserlll/1paraoxonaseinEscherichiacoli GULikun,ZHANGJianyun (CollegeofResourceandEnvironmentScience,HenansdmteofEngineedng,Zhengzhou451191.China)Abstract:TheparaoxonasegenePoNlwasclonedfromrabbitliverbyRTPCR,andclonedinto PET32avectorandconstructedthePET32a—PONlrecombinantplasmid.wasedintocomponentcellsofandtheExpressionstrainwasobtainedb ytransformationofPET32a—PON1plasmidintoE.coilSDS-PAGEanalysisrevealedthattherecombinantproteinscouldbepartiallysoluble.Enzy meassayindicatedthattherecombinantproteinshad arylestemseandlactonaseactivities.Theresultsmadeagoodbaseforstudyingthefunctionso fpurifiedPON1.Keywords:RT-PCR;prokaryoticexpression;paraoxonase;solubleprotein有机磷或有机磷酸酯化合物作为神经性毒剂和杀虫剂的历史从第二次世界大战已经开始,主要通过抑制体内胆酯酶的活性,致使胆碱酯酶不能水解乙酰胆碱,造成乙酰胆碱大量蓄积,从而引起中枢和外周胆碱能神经系统功能严重紊乱.近年来,有机磷杀虫剂的使用已经有所减少,但中毒和自杀事件依然时有发生.据WHO统计,世界范围内有机磷农药中毒的人数超过300万/年,死亡率达15%【".血清对氧磷酶(paraoxonase,简称PON1)是一类能催化水解磷酸酯键的芳香酯酶,可降解有机磷酸酯,芳香羧酸酯及氨基甲酸酯等多种有机磷酸酯类化合物.对氧磷酶对多种有机磷农药(对氧磷,毒死蜱,二嗪哝,敌敌畏,对硫磷等)均有良好的水解作用.因此,对氧磷酶有望成为有机磷中毒预防和治疗的新途径[2-3].血清对氧磷酶由355个氨基酸组成,主要由肝脏分泌,在哺乳动物体内广泛分布于肝脏,血液,肾脏,脾脏等组织中,其中肝脏和血液中的血清对氧磷酶活性最高.不同种属哺乳动物血清对氧收稿日期:2011-04.26基金项目:河南省科技攻关项目(092102210212):河南工程学院工程技术研究中心建设项目资助(2009ETRCHNIE02)作者简介:谷立坤(1978.),男,河南郑卅1人,讲师,研究方向为微生物资源开发与利用.并克隆测序,对该厂使用的小曲菌种进行分析,发现小曲中的优势细菌种类主要是以植物乳杆菌为主的乳酸菌.虽然提取的小曲DNA中包含醋酸菌DNA,但醋酸菌含量很少,因此采用16SrDNA克隆法无法得到其阳性克隆.可能在小曲菌种中强化了酵母菌后,醋酸菌的生长受到一定抑制.另外,制曲过程中环境和操作方式的波动,造成曲种中乳酸菌大量繁殖,也是醋酸菌生长受到抑制的可能原因之一.参考文献:【l】李维青.浓香型白酒与乳酸菌,乳酸,乳酸乙酯【J】_酿酒,2010,37(3):90.93.[2]施思,张文学,邓宇,等.用DGGE技术构建白酒酿造微生物指纹图谱的初步研究【J】.中国酿造,2010(1):118.120.[3】罗惠波,李浩,黄治国.浓香型大曲微生物群落结构的PCR-SSCP分析条件优化[J].四川理工学院:自然科学版,2009,22(4):72—74.【4】张文学,乔宗伟,胡承,等.PCR技术对浓香型白酒糟醋细菌菌群的解析[J].四川大学:工程科学版,2005,37(5):82—87.【5]张文学,向文良,乔宗伟,等.浓香型白酒窖池糟醅原核微生物区系的分类研究[J].酿酒科技,2005,139(7):22.25.[6】李睿,许芳,刘晓红,等.观音土曲功能细菌的分子鉴定[J】_中国酿造,2010,225(12):124.126.【7]MUYZERG,W AALEC,UITTERLINDENAG,eta1.Profilingofcom—plexmicrobialpopulationsbydenaturinggradientgelelectrophoresis analysisofpolymerasechainreaction—amplifiedgenescodingfor16SrRNA[J].ApplEnvironMierobiol,1993,59(3):695—700.[8]罗高建,纪大鹏-,J,曲白酒生产中乙酸乙酯,乳酸乙酯影响因素的探讨[.,】.酿酒科技,2004,126(6):47_49.。
山东省2023年普通高中学业水平等级考试抢分生物密卷(二)(无答案)
山东省2023年普通高中学业水平等级考试抢分生物密卷（二）学校:___________姓名：___________班级：___________考号：___________一、未知1．生物体内蛋白质的合成、加工是一个十分复杂的过程，其中多肽链的正确折叠对其正确构象的形成至关重要。
如果蛋白质折叠发生错误，蛋白质的构象就会发生改变，影响其功能，严重时会导致疾病发生，此类疾病称为蛋白质构象病。
有些蛋白质错误折叠后相互聚集，形成抗蛋白水解酶的淀粉样纤维沉淀，产生毒性而致病。
下列相关叙述正确的是（）A．多肽链的形成以及折叠过程均发生在核糖体上B．蛋白质构象病均可遗传给后代，属于遗传病C．题述淀粉样纤维沉淀的主要成分是淀粉和蛋白质D．蛋白质构象发生改变后，仍可与双缩脲试剂产生紫色反应2．细胞质基质中的Ca2﹢浓度较低主要与细胞膜或细胞器膜上的Ca2﹢泵有关，Ca2﹢泵又称Ca2﹢-ATP酶。
肌肉细胞的内质网上富含Ca2﹢泵，其运输Ca2﹢时与ATP的水解相偶联。
当肌肉细胞受到刺激后，内质网腔中的Ca2﹢释放出来，参与肌肉细胞收缩的调节。
下列相关叙述错误的是（）A．Ca2﹢泵既具有转运功能，也具有催化功能B．Ca2﹢泵向内质网腔中运输Ca2﹢时会发生蛋白质的磷酸化C．运输Ca2﹢的过程中Ca2﹢泵的空间结构不会发生变化D．Ca2﹢泵向胞外运输Ca2﹢的方式与K﹢进入神经细胞的方式相同3．心肌细胞（一般不能增殖）中基因ARC控制合成的蛋白质是一类凋亡抑制因子，细胞中存在一种链状小分子RNA——miR-223，其可与基因ARC的mRNA结合，当心肌细胞缺血、缺氧时，细胞会产生过多的miR-223，最终导致心肌细胞凋亡，从而引起心力衰竭；心肌细胞中还存在一种环状RNA——HRCR，一个HRCR分子可特异性结合多个miR-223分子，下列说法错误的是（）A．HRCR分子中每个核糖上连接着两个磷酸基团B．心肌细胞中HRCR含量增多时会加速心肌细胞凋亡C．基因ARC的mRNA分子中可能存在与HRCR分子相同的碱基序列D．miR-223在翻译水平上阻止基因ARC的表达4．女娄菜有宽叶和窄叶两种叶型，受X染色体上的一对基因B、b控制。
细菌分类鉴定规程
细菌分类鉴定规程细菌分类鉴定规程杜艳、余翔、罗国升新菌鉴定主要流程：1、潜在新菌的确定拿到拼接好的16Sr RNA gene序列后，进入NCBI blastN ()或EzTaxon server 2.1() 进行比较，同源性低于98%的序列(同源性处于98-97%之间的序列最好少于3株)，可初步判断存在新菌的可能。
2、选择标准菌株构建进化树选择参考菌株构建三种进化树(NJ、MP和ML)，构建进化树是需要注意以下几点：1）所选择的序列必须都是在IJSEM上正式发表的序列，2）所选择的参考菌株必须包含新菌所在属的所有标准菌株，3）需要选择新菌所在科的一些与新种所在属相近的属的type species作为参考菌株，4）需要选择一个远源的菌株作为参考菌株，如：E. coli。
3、购买标准菌株根据进化树位置和同源性高低选择标准菌株作为参考菌株，联系相关保藏机构购买标准菌株。
具体信息可以在上查找。
标准菌株的选择需遵循以下几点：1) 如果要用到不同的属但不是用这些属的所有的种，则要选择这些属的模式种，并且要选择模式种的模式菌株。
2) 一个属的模式种是最重要的参照微生物，如果一个新种被认为属于这个属，就一定要与该属的模式种进行比较，而其他的种可能分类时出现错误，可能将来会被重新分类。
总之，进行种、属、甚至是科的比较研究时，都要用模式微生物，这就涉及到模式属的模式种，模式种的模式菌。
4、表型特征实验培养特征：菌落特征(如菌落的形状、大小、颜色、隆起、表面状况、质地、光泽、水溶性色素等)。
细胞形态：形态(球形、杆状、弧形、螺旋形、丝状、分枝及特殊形状)，大小，排列(单个、成对、成链或其他特殊排列方式)。
特殊的细胞结构：鞭毛(着生位置、数量)，芽胞(形状、着生位置、是否膨大)，孢子(孢子形状、着生位置、数量、排列)，其它 (荚膜、细胞附属物为柄、丝状物、鞘、蓝细菌的异形胞、静止细胞和连鞘体等)。
超微结构：细胞壁、细胞内膜系统、放线菌抱子表面特征等。
南疆梨园有机磷降解菌的分离及其降解谱研究
降解 已有报道 ， 降解菌 包括木 霉［ ６ ］ 、 尼 古丁节 杆菌［ ７ ］ 、 鞘 氨醇单胞菌等 ］ ， 不 同 的菌株 降解 的能力及 特性 不 同 ，
第一 作 者简 介 ： 杨瑞 ￣ （ １ ９ ８ ０ － ） ， 女， 博士 研 究 生 ， 讲师 ， 现 主要 从 事 生物 学等基 础教 育研 究 工作 。Ｅ － ｍａ ｉ １ ： ｙ ａ ｎ ｇ ｒ ｕ ｉ ｈ ｏ ｎ ｇ ９ ９ ＠１ ６ ３ ． ｃ ｏ ｎ － １ ． 责任 作 者 ： 王 纯利 （ １ ９ ５ ９ － ） ， 男， 副教 授 ， 现 主要 从 事 环 境 微 生物 研
这３ 株 菌株分别为假单孢茵 、 芽孢 杆 菌和 土壤杆 菌； 不 同菌株 对有机磷 农 药的降解谱存 在差异 ， 其 中假单孢 茵 Ｄ Ｙ Ｙ － ３的降解能力较其它 ２ 株 茵 高。 该研 究结果 为今后 关 于菌株 复配制剂及 其 田
间应 用奠 定 了 良好 的 基 础 。
关键词 ： 生物降解 ； 有机磷 ； 土壤细菌 ； 降解谱
理的使 用 ， 给环境 和人类健康 带来 了极大 的危 害ｌ ＿ １ ］ 。有
机磷化 合物是一类 与人 类 和昆虫 中枢 神经 系统有 关 的 胆碱酯酶的抑制剂 ， 而胆碱 酯酶与神 经递质 乙酰胆碱 的
以南疆 常年使用有机 磷农药 的梨 园土壤为研究对 象， 分 离其中对有机磷农药有降解作用的细菌， 同时检测所获得
很多 ， 毒性及残 留期 因种类 而有所 不 同。Ｏ ｐ ｓ 组 分的 降 解可 由生物学因子介 导＿ ２ ］ ， 如Ｏ ｐ ｓ 杀 虫剂 的降解 受到生 物作用而加速降解 ， 在其 中起重要作 用的不 同种类 的微 生物已被发现 ＿ ３ ］ 。有 机磷在 自然条件 下 可通 过环 境 降 解， 然 而降解效率 不高 ， 而且 不能 完全 降解［ ４ ］ 。近几年 来， 人们试 图通过结合微生 物降解 的方法来 提高土壤 中
乙酰胆碱酯酶抑制剂
上海应用技术学院研究生课程《高等天然产物化学》试卷2014 / 2015 学年第1 学期课程代码：NX0702013论文题目：乙酰胆碱酯酶抑制剂的研究进展姓名：芮银146061414康满满146061409专业：制药工程学院：化工学院乙酰胆碱酯酶抑制剂的研究进展芮银，陈祎桐，康满满摘要：本文阐述了乙酰胆碱酯酶抑制剂(AChEI)的研究进展，介绍了用于药物治疗的乙酰胆碱酯酶抑制剂的各种来源如植物、微生物等，及其抑制乙酰胆碱的活性物质。
在此基础上，总结了几种现代分析技术，对AChEIs进行筛选，大大加快AD药物资源的开发利用进程。
这些方法主要有基于比色法的Ellman's法及相关的改进方法、薄层显色法、荧光显色法、电喷雾质谱法等。
但是，到目前为止，现代分析技术在AD药物资源中的应用还处在起步阶段。
关键词：乙酰胆碱酯酶抑制剂，筛选方法，薄层显色法，荧光显色法The progress of acetylcholinesteraseinhibitorsRui Yin, Chen Yitong, Kang ManmanAbstract：In this artical, the research elaborates progress of acetylcholinesterase inhibitors (AChEI), and introduces a variety of sources for drug treatment acetylcholinesterase inhibitors such as plants, microorganisms, and its active ingredients. On this basis, the review summarizes several modern analytic techniques such as Ellman's method which based on the colorimetric method, TLC chromogenic method, fluorescent color method, Electrospray ionization mass spectrometry and so on. However, at present, the application of modern analytic techniques in AD drug resources is still in infancy.Key word: Acetylcholinesterase inhibitors, Screening Methods, TLC chromogenic method, Fluorescent color method目录摘要.................................................................................................错误!未定义书签。
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ＡＢＳ ＴＲＡ ＣＴ Ｉｈｂｔ ｇ ａｅｙｃ ｏｉｅｔｒｓ ｏｅ ａ ｃ ｅｔａ ｓ ｓｉｎｌｖ ｌ ｆｃ ｏ ｎ ｒｉ ｎ ｆ ｅｂ ｓ ｍｅｈｄ ｎａ ｎ ｉｉｎ ｃ ｔｌｈ ｌ ｓｅａｅｔ ｎ ｎ ｅｔ ｒｎ ｍｉｓｏ ｅ ｅ ｈ ｌ ｅｇｃｉ ｏ ｅｏ ｅ ｔ ｔｏ ｓｏ ． ｉ ｎ ｈ ｈ ｏ ｉ ｓ ｈ ｔ
北京 １０ ５ ； ００ ０ 北京 １０ ７ ） ０ ０ １ （ １中国医学科学 院 中国协和医科大学 医药生物技术研究所 ２首都师范大学附属丽泽 中学
摘要
抑制 乙酰胆碱 酯酶以增加胆碱 能传 递水平而成为 目前 改善 早老年性 痴呆症 最有效 的方法之一。本研
究通过 乙酰胆碱 酯酶抑制 剂筛选 模型筛选 到一株革 兰氏阴性 细茵 Ｃ Ｃ １０ ６ ６ Ｎ Ｐ Ｃ ０ ５ 。１ Ｓｒ Ａ基 因序列分析发 现该 茵 Ｒ 株为玫瑰 单胞 茵属 （ ｏｅｍ ｎｓ 的一个新成员。茵株 Ｃ Ｃ １０ ６的最适 生长条 件为 ３ ℃ ，Ｈ ． ７ ５ 在供试培 Ｒ ｓｏ ｏ ａ） Ｐ Ｃ０５ ２ ｐ ７０— ． ， 养基上形成酒红色、 湿润、 滑的茵落。 光
（ Ｉｔ ｔｏＭｄｉｌ ｉｅ ｎｏ ， ｈ ｅ ａｅｙｆ ｅｃ ｉｃ ＆ＰｋｇＵｉ ｅｃ Ｕ ｅＢ／ １ ０ ； １ｎｉ ｅｆ ｅｃａＢ ｔｈ ｌｙ ＣｉｓＡ ｄｍ ＭｄａＳｅ ｅ ｅｎ ｎｎ ｄ ａＣ ｅ ， ｅ￣ ０ ５ ｓｕ ｔ ｉ ｏｃ ｏｇ ｎ ｎ ｅｃ ｏ ｉｌｃｎｓ ｉ ｏ Ｍ ｉｌｏ ｇ ／ ０ ０ ／
维普资讯
九江 医学 ２０ ０７年第 ２ ２卷第 ２ 期 Ｊ ｊ ｎ Ｓｃ ｕｎｌ ０ ７ ２ （ ） ｉ ｉ ｇＭｅ ａ Ｊ ｒａ ２０ ，２ ２ ｕａ ｌ ｏ
一
株具有乙酰胆碱酯酶抑制剂活性的细菌菌株的分离与鉴定术
魏玉珍 宋茂 卿 关 艳 李秋平 张月琴
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ＫＥＹ ＯＲＤＳ Ｒｏｅ ｍｏ ａ ｐ ｏ ． ｉ ｈｔ ｎ：ｄ ｎｉｃｔ ｎ Ｗ ｓｏ ｎ ｓ ．ｎｖ ：ｓ ｉ ｉｅ ｔ ａｉ ｓ ｏ ｏ ｉ ｆ ｏ
早 老年 性 痴呆 症 又 称 为 阿尔 茨 默 氏 （ ｌ ｅ Ａｚ ｉ ｈ ｍ．
ｅ ｉａ ， ｒ Ｄｓ ｓ 简称 Ａ ） ｓ ｅｅ Ｄ 是一种 以进行 性认 知障碍和 记忆力损伤为主的中枢神经系统退行性疾病， 引 是
关键 词 Ｒ ６ｏ ｏａ ｐ ｏ ． 分 离 ； 定 ｏｅｍ ｎ ｓ．ｎｖ ； ｓ 鉴中图分类号来自Ｒ７ ９ 文献标识码 ４
Ａ 文章编号
１０ ０６—３ ３ （ ０７ ０ ０ ０ 一（ ３ ８ ８ ２０ ） ２— ０ １ ０ ）
Ｉ ０Ｌ Ｓ ＡＴ ０Ｎ １ ＡＮＤ ＤＥ Ｉ ＮＴ ＣＡＴ【 Ⅱ ０Ｎ ＢＡＣＴ ｎ ０Ｆ Ａ ＥＲ Ｍ Ｅ ＸＨＩ ＴＩ ＢＩ ＮＧ ＡＣＥ ＴＹＬＣＨ０ＬＩ Ｓ ＲＡＳ ＮＨＩ Ｔ ＮＥ Ｔｅ ＥＩ ＢＩ ０Ｒ ＡＣＴ【 ＴＹ ＶＩ ＷＥ ｕｈｎ ；Ｏ Ｇ Ｍａｑｎ ； Ｕ Ｎ Ｙ ｎ ；Ｉ ｉ ｉ Ｚ Ａ ＧＹ ｅｉ Ｉ ｚｅ Ｓ Ｎ ｏ ｉ ， Ｇ Ａ ａ Ｌ ｕ ｎ ；Ｈ Ｎ ｕｑ Ｙ ｇ Ｑ ｐｇ ｎ
起 老年性 痴 呆 和 行 为异 常 的 主要 原 因之 一 。 乙酰
１１ ． 样品采集和菌种分离 １１１ ． ． 样品采集 本研究 所用土样均采集于青藏
高原 的森林 土壤 。
１１２培养基 ．．
分离和 富集 培养所用培养基均为
胆碱酯酶是神经递质乙酰胆碱 的水解酶 ， 根据胆碱 能假说 ，Ｄ的主要原因是神经原 突触 间胆碱能的 Ａ 不足， 所以恢复突触 间胆碱 能的水平成为治疗 Ａ Ｄ 疾病 的主要 目标 。因 而抑 制 乙酰 胆 碱 酯 酶 来 增 加 胆碱 能 传 递水 平 已成 为 目前 改 善 Ａ Ｄ最 有 效 的 方 法之一 。笔者通过 乙酰胆碱酯酶抑制剂筛选模 型 筛选到一株 细菌 Ｃ Ｃ １０ ６ Ｐ Ｃ ０ ５ 。现将该 菌株 的分离