血清学反应试验
免疫血清学技术
直接凝集试验： 玻片法：鸡白痢玻片凝集 试管法：布氏杆菌试管凝集 间接凝集试验：
间接血凝试验：猪瘟间接血凝试验
乳胶凝集试验：猪伪狂犬病乳胶凝集试验 协同凝集试验：
SPA +
Ab
SPA-Ab +
Ag
SPA-Ab-Ag
2. 沉淀试验：
可溶性抗原（毒素、病毒、细菌裂解液）与相应抗体结合, 在电解质 存 在情况下，产生可见的沉淀物。
补体结合反应的基本原理
Ag + Ab
Ag Ab +
C
Ag Ab C
Ag?
Ab
Ag+ Ab
C C
E E H
+ 不溶血
H
Ag-
Ab
Ag-
Ab 溶血
C
C
E H
E
H
五、
中和试验
抗原和相应抗血清按适当比例混合作用后可被中和而失去
毒力，接种实验动物、组织细胞、鸡胚而不出现致病作用。
1. 终点法中和试验（End-point neutralizing test）:
Reed 法Muench 计算半数致死量（LD50）。
2. 空班减少试验 ( Plague reduction test)：
应用空斑技术使空斑数减少50%的血清量作为中和滴度。
将已知空斑单位（PFU）的病毒稀释成每一接种剂量含 100 PFU，加等量递进稀释的血清，37 ℃ 1h 。接种细胞后， 覆盖琼脂，培养数天后，计算空斑数，计算血清的中和滴度。
（3）免疫电泳技术 琼脂双扩散与电泳技术结合而成。
包括：免疫电泳
对流免疫电泳 火箭电泳
+
Ag Ab
Ag
Ab
血清学试验
•
用已知免疫血清与细菌的可溶性抗原
接触，在有适量电解质存在时，于两液交
界面形成肉眼可见的白色沉淀环，来指示 抗原的存在。
抗原、抗体必须澄清
Ag
抗体比重大，可形成清晰的界面
Ab
• （三）荚膜肿胀试验
•
1.原理
•
用荚膜免疫血清（含抗体）与检材中细菌的荚膜抗原特异性
结合形成复合物，使荚膜呈肿胀现象。
•
2.方法
• （四）制动试验 • 原理 将特异性抗血清与相应运动活泼的细菌
悬液混合，则抗鞭毛抗体与鞭毛抗原结合，使 鞭毛强直、相互粘着而失去动力，细菌运动停 止，从而证明相应细菌的存在。 • 方法 将待检标本或增菌培养液1滴置于玻片 上，用显微镜观察细菌运动情况。再于待检标 本上加1滴适当稀释的抗血清，混匀，作悬滴 镜检。 • 结果 若滴加抗血清3～5分钟内，细菌运动停 止，菌体凝集成块为制动试验阳性；反之，滴 加抗血清后，细菌运动无改变为制动试验阴性。
•
（1）处理标本
•
标本用蒸馏水洗涤，接种于小鼠皮下，次日抽取皮下渗出液
（2）取洁净玻片一张，两侧各加待测 菌1～2接种环，于一侧加抗血清，另一 侧加正常兔血清，混匀；再于两侧各加 1％美蓝水溶液，加盖玻片，湿盒内室 温5～10分钟。
标本
（3）结果 阳性：试验侧为蓝色菌体周围可见界限清晰、厚薄不等的无 色环状物。对照侧无此现象。 阴性：试验侧与对照侧均不产生无色环状物为阴性。
• 原理
• （二）固相酶联免疫试验（ELISA）
• 1.基本原理 • ⑴使抗原和抗体结合到某种固相载体表面，并保持其
免疫活性。 • ⑵使抗原或抗体与某种酶联结成酶标抗原或抗体，这
种酶标抗原或抗体既保留其免疫活性，又保留酶的活 性。 • ⑶在测定时，把受检标本（测定其中的抗体或抗原） 和酶标抗原或抗体按不同的步骤与固相载体表面的抗 原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的 抗原抗体复合物与其他物质分开，最后结合在固相载 体上的酶量与标本中受检物质的量成一定的比例。加 如酶反应的底物后，底物被酶催化变为有色产物，产 物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据颜 色反应的深浅进行定性或定量分析。
102.梅毒血清学检验
梅毒的血清学试验参考范围：性病研究实验室试验（VDRL）阴性不加热血清反应素试验（USR）阴性快速血浆反应素试验（RPR）阴性荧光密螺旋体抗体吸收试验（FTA-ABS）阴性梅毒螺旋体血凝试验（TPHA）1：25以下为阴性梅毒螺旋体制动试验试验标本活动螺旋体数为对照标本的40%为阴性梅毒螺旋体抗体试验（TP-Ab）阴性临床评价：1．梅毒螺旋体也称苍白密螺旋体，是性传播疾病梅毒的病原体。
机体对梅毒螺旋体感染可产生体液和细胞免疫反应，梅毒螺旋体血清学试验是诊断梅毒的依据之一。
血清学试验主要有两个类型，一类是VDR L，USR和RPR．属非螺旋体抗原试验，是用正常牛心类脂质作为抗原，测定血清中的反应素，为筛查试验。
另一类是FTA-ABS，TPHA和TPl，属螺旋体抗原试验，是用梅毒螺旋体作为抗原，检测血清中的特异性抗体，为确证试验。
2．非螺旋体抗原试验(VDRL，USR，RPR)敏感性高，其反应素效价与病变活动性有关。
第一期梅毒病灶出现后1～2周即可测出反应素，第二期梅毒病人血清中反应素效价最高，阳性率可达99％，经药物治疗后可转阴。
先天性梅毒80％～100％阳性。
但此类试验特异性不高，常有假阳性反应，在分析结果时应注意结合病史、临床症状及特异性试验作出正确判断。
FTA-ABS的敏感性和特异性均高，在早期梅毒首先出现阳性，病人经药物治疗后反应仍不转阴，故不能用作疗效的评价，常用于梅毒的确定诊断。
TPI是一种经典的特异性较高的梅毒血清学反应，假阳性不到1％，主要用于晚期梅毒及疑难病人的诊断。
TPHA具有敏感、快速、简便等特点，但特异性不及FTA-ABS和TPI。
采取脑脊液标本进行特异性抗体检测，对中枢神经系统的梅毒具有诊断价值。
3．暗视野检查法对梅毒的诊断有重要意义。
此法系采取病灶组织渗出液、淋巴穿刺液或组织悬液制成涂片，在暗视野显微镜下直接检查梅毒螺旋体，主要适用于初期梅毒的检查，有一定局限性。
暗视野检查法一次阴性结果不能否定梅毒的存在，一般连续检查3天阴性才能予以排除。
免疫血清学技术
荧光色素
是能够产生明显荧光，并能作为染料使用 的有机化学物称为荧光色素或荧光染料。
可用于标记的荧光素有异硫氰酸荧光素 (FITC)、四乙基罗丹明(RB 200)和四甲基 异硫氰酸罗丹明(TRITC)
染色原理及方法
FITC含有异硫氰基，能与IgG分子自由基 结合，形成FITC-IgG复合物，且不影响结 合抗原的能力和特异性，因此，当荧光抗 体与抗原结合后形成有荧光性的抗原抗体 复合物
高敏感性的标记分子
荧光素 酶分子 放射性同位素
荧光抗体技术 酶标抗体技术 同位素标记技术
（一）荧光抗体标记技术
fluorescent-labelled antibody technique
是指用荧光素对抗体或抗原进行标记，然 后用荧光显微镜观察所标记的荧光以分析 示踪相应的抗原或抗体的方法。
抗原可以是多糖、蛋白质、类脂等，抗原分 子较小，单位体积内所含的量多，与抗体结 合的总面积大，故在作定量试验时，为了不 使过剩，通常稀释抗原，并以抗原稀释度作 为沉淀试验效价。
参加沉淀试验的抗原称沉淀原，抗体称为沉 淀素。
环状沉淀试验
在小口径试管内先加入已知抗血清，然后小心沿管壁 加入待检抗原于血清表面，使之成为分界清晰的两层
SPA与IgG结合后，其Fab片暴露于外，并保持其抗体 活性。
当此被覆着特异性抗体的葡萄球菌与相应的抗原结合 时，就可互相连结引起协同凝集反应，简称COAG。
（二）沉淀试验
可溶性抗原(如细菌的外毒素、内毒素、菌 体裂解液，病毒的可溶性抗原、血清、组 织浸出液等)与相应抗体结合，在适量电解 质存在下，形成肉眼可见的白色沉淀，称 为沉淀试验(precipitation test)。
用于标记的酶
用于标记的酶有辣根过氧化物酶(Horseradish peroxidase，HRP)、葡萄糖氧化酶、碱性磷酸酶
血清学试验种类
血清学试验种类
血清学试验主要分为微量凝集试验、酶联免疫吸附试验、免疫印迹试验和补体结合试验等。
这些试验在医学诊断和治疗中有着广泛的应用，可以帮助医生了解患者的免疫系统状态，从而制定更有效的治疗方案。
微量凝集试验是一种通过测定血清中特定抗体与细菌或病毒抗原之间的反应来检测感染的试验。
这种试验通常用于诊断细菌感染和病毒感染。
酶联免疫吸附试验是一种常用的血清学试验，通过酶标记的抗体与抗原的结合反应，检测样本中是否存在目标抗原。
这种试验具有较高的灵敏度和特异性，可用于检测各种感染性疾病、自身免疫性疾病和肿瘤标志物等。
免疫印迹试验是一种将被测样本中的蛋白分离出来，然后通过特定抗体与蛋白进行相互作用，从而确认特定抗体或蛋白的方法。
这种试验常用于检测自身免疫性疾病、传染病和肿瘤等。
补体结合试验是一种通过测定补体结合率来检测免疫反应
的试验。
这种试验通常用于诊断自身免疫性疾病和某些感染性疾病。
除了以上几种血清学试验，还有间接血凝试验、亲和素-生物素-酶复合物酶联免疫吸附试验、斑点酶联免疫吸附试验等其他血清学方法。
这些试验在临床诊断和治疗中都有着广泛的应用，为医生提供了重要的参考信息。
血清学试验
2、胶乳凝集试验
3、协同凝集反应
抗体致敏载体，载体为金黄色葡萄球 菌A蛋白（SPA） SPA具有与IgG的Fc段结合的特性。
第三节 沉淀反应 （precipitation reaction)
可溶性抗原（如细菌的外毒素、内毒素、菌体 裂解液、病毒的可溶性抗原、血清、组织浸出 液等）与相应的抗体结合，在适量电介质存在 下，形成肉眼可见的细微的白色沉淀。
第一节 血清学试验概述
二、特点
特异性与交叉性 敏感性 反应的可逆性 反应的二阶段性 最适比与带现象 用已知测未知
第一节 血清学试验概述
三、影响血清学试验的因素 电解质 温度 酸碱度 震荡 杂质和异物
第一节 血清学试验概述
四、应用及发展趋向
血清学试验在医学和兽医学领域已广泛应用，可 直接或间接从传染病、寄生虫病检出相应的抗原 或抗体。 血清学试验还广泛应用于生物活性物质的超微定 量、物种及微生物鉴定和分型等方面。 血清学试验也用于基因分离，克隆筛选，表达产 物的定性、定量分析和纯化等，已经成为现代分 子生物学研究的重要手段。
酶联免疫吸附试验（简称ELISA ）
将抗原或抗体吸附于固相载体的表面，酶标 记物与相应的抗体或抗原反应后，形成酶标 记抗原抗体复合物，在遇到相应底物时，结 合物上的酶催化底物产生水解、氧化或还原 等反应，从而生成可溶性或不溶性的有色物 质，可用肉眼或酶标测定仪判定结果。颜色 的深浅与相应的抗体或抗原量成正比，因此， 可根据颜色的深浅来定量抗体或抗原。
第三节 沉淀反应 （precipitation reaction)
可溶性抗原+相应抗体 肉眼可见的沉淀
第三节 沉淀反应 沉淀反应 （precipitation reaction)
血清学试验流程
血清学试验流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
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链球菌感染的血清学检验
抗链球菌溶血素“O"试验参考范围：免疫比浊法：0～200 u/ml临床评价：1．链球菌溶血素“O”（ASO）是A群链球菌的代谢产物之一，它是一种具有酶活性的蛋白质，能溶解红细胞，也能破坏白细胞和血小板。
溶血素“O”具有很强的抗原性，机体受A群链球菌感染后可产生溶血素“O”抗体，这种抗体可以抑制溶血素“O”的溶血作用。
通过测定血清中ASO水平，有利于A群链球菌感染的诊断。
2．当ASO试验呈阳性反应，且抗体滴度有逐步增高趋势时，即具有诊断参考价值。
主要见于A群链球菌感染后引起的变态反应性疾病，如风湿热、急性肾小球肾炎等，还可见于A群链球菌感染所致的上呼吸道炎症(咽炎或扁桃体炎)。
85％～90％的患者感染后2周左右到病愈后数月至年余血清中均可测到ASO。
应用ELISA可检测患者血清中的IgM型和IgG 型ASO特异性抗体，IgM-ASO多见于感染的急性期，IgG-ASO见于恢复期。
抗体效价逐步下降时为疾病缓解期，抗体恒定在高效价水平多为非活动期。
3．咽拭培养直接分离病原菌是诊断A群链球菌感染的可靠方法，急性风湿热发作时阳性率可高达70％～90％。
进行多项链球菌抗体试验，可提高对A群链球菌感染诊断的准确率。
这些试验包括抗链球菌激酶(ASK)，抗脱氧核糖核酸酶B(ADNase B)，抗链球菌二磷酸吡啶核苷酸酶(ADPNase)和抗透明质酸酶(AH)等，其中ASK试验是新近链球菌感染的一个非常敏感的指标。
其它实验室检查还有红细胞沉降率，血清C-反应蛋白试验，血清补体C3、C4成分测定等，上述项目联合应用对A群链球菌感染所致疾病有一定辅助诊断意义。
4．影响本试验结果的因素(1)单一次试验结果对诊断意义不大。
(2)链球菌溶血素“O”在Ph6.5环境中活性最强，偏酸或偏碱都可影响其活性。
(3)在溶血抑制法中，血清溶血、黄疸、高胆固醇或血清保存过久污染长菌者，皆可致试验结果偏高，胆固醇有抑制溶血素活性的作用。
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抗原抗体反应条件
1. 抗原 2. 抗体
3. 环抗境因原素抗： 体反应条件
（1）电介质：0.85%NaCI； （2）温度：37或56 （3）pH值：7.0 （4）振荡：适当的机械振荡 （5）反应时间
血清学反应试验
抗原抗体反应一般规律
特异性和交叉性
若两种抗原之间含有部分共同抗原时，则发生交叉反 应。亲缘关系越近，交叉反应的程度也越高 。
与相应抗体结合后，能出现红细胞凝集现象。 用已知抗原吸附于红细胞上检测未知抗体称为正向 间接血凝试验，用已知抗体吸附于红细胞上鉴定未 知抗原称为反向间接血凝试验。 常用的红细胞有绵羊、家兔、鸡及人的O型红细胞。
血清学反应试验
抗原抗体反应类型-----间接凝集反应
间接血凝抑间制试接验血凝抑制试验
抗体与游离抗原结合后就不能凝集抗原致敏的红 细胞，从而使红细胞凝集现象受到抑制，这一试 验被称为间接血凝抑制试验 。
血清学反应试验
IgG结构
血清学反应试验
IgA结构
IgＡ：存在于血清（占血清免疫球蛋白总量的13%）
和外分泌液中
血清学反应试验
IgM 等结构
IgＭ：血液中
IgＤ：血清中，1%
IgＥ：血清中，0.002% 血清学反应试验
淋巴器官
抗体的产生部位
胸腺
一级淋巴器官
骨髓 (鸟)法氏囊
二级淋巴器官
淋巴结（约500-600个） 脾脏
血清学试验
血清学反应试验
血清学试验
血清学鉴定： 用已知抗体鉴定未知的细菌或标本中的抗原
血清学诊断： 用已知抗原检测血清中的特异性抗体
血清学反应试验
抗原（antigen）
是一类能刺激人或动物机体产生抗体或致敏 淋巴细胞（免疫原性），并能与这些产物在 体内或体外发生特异性反应的物质（反应原 性）。
血清学反应试验
➢ 当抗原过多或抗体过多，则抗原抗体的结合不能形成 大的复合物，因而抑制可见反应的出现，这一现象称 为带现象。
➢ 抗体过多出现的抑制现象称前带现象，而抗原过多出 现的抑制现象称后带现象。
➢ 为了克服带现象，在进行血清学试验时，需将抗原或
抗体作适当稀释。
血清学反应试验
抗原抗体反应一般规律
反应的二阶段性 结合阶段-----反应发生快，几秒钟至几分钟 。 反应阶段-----较慢，需几分钟、几十分钟或更长时 间。
血清学反应试验
抗原抗体反应凝类集型反--应---凝集反应
颗粒性抗原（如细菌、红血球等）或吸附在乳胶、 白陶土、离子交换树脂和红细胞的抗原与其特异性 抗体结合后，在有电介质存在时，凝聚成肉眼可见 的凝集小块。
凝集原——凝集素
玻片法 直接凝集反应
试管法
血清学反应试验
血清凝集试验
血清学反应试验
抗原抗体反应类型-----间接凝集反应
（一）抗原的性质抗原的性质
1.异物性
异种间的物质Biblioteka 同种异体间的物质 自体内隔绝物质： 眼睛水晶体蛋白质、精
细胞及甲状腺球蛋白等
血清学反应试验
抗原的性质
2.分子量足够大：一般>104道尔顿 3.立体化学结构：一般分子结构和空间构象愈复杂 的物质，免疫原性愈强。
4.抗原决定族antigenic determinant(抗原分子表 面上的具有一定化学组成和结构的特殊化学基团) 决定其特异性
抗体(antigen)
是浆由细抗胞原所刺激产人生体的或具动物有抗体特体的异B细性胞的,由免B细疫胞球转蛋化白成
(immunoglobulin,缩写为Ig)．
血清学反应试验
抗体的结构和种类
IgＧ：存在于血清（占血清免疫球蛋白总量
的80%）和组织液抗中体。种类
IgA：二体 IgD： IgE： IgM：五体
鞭毛抗原称为H抗原 表面抗原:不同细菌的表抗原名称不同.大肠杆菌的 表面抗原称为封套抗原或K抗原,肺炎双球菌的叫荚膜 抗原,伤寒沙门氏菌的表面抗原称为Vi抗原
血清学反应试验
细菌抗原
细菌的血清各学反种应试抗验 原
微生物抗原成分-----病毒抗原成分
颗粒抗原 微生物抗原
组分抗原 可溶性抗原
血清学反应试验
将粒可 （溶 载性 体抗 ）原表（面间或，抗加接体入凝）相吸应集附的反于抗与体应免 （疫或无抗关原的）小，颗在
适宜条件下，发生凝集反应。 载体：动物的红血球；聚苯乙烯乳胶；矽酸铝； 活性炭等。
血清学反应试验
抗原抗体反应类型-----间接凝集反应
间接血凝试验
吸附抗原的红细胞间就接称为血致凝敏红试细胞验。致敏红细胞
反应的可逆性
抗原与抗体的结合为分子表面的结合，结合的适宜温 度为0～40℃、pH在4.0～9.0范围内。如温度超过 60℃或pH降到3.0以下，或加入解离剂台硫氰化钾、 尿素等，则抗原抗体复合物又可重新解离，解离后的 抗原或抗体性质不改变。
血清学反应试验
抗原抗体反应一般规律
最适比和带现象
➢ 只有抗原与抗体呈适当比例时，才可出现可见的结合 反应。
血清学反应试验
Lymph
抗体在人体node中产生部位
thymus
spleen Bone marrow
抗体的存在部 位:血清、乳汁、 体液
血清学反应试验
抗 体 作 用
血清学反应试验
抗体依赖性细胞介导的细胞毒作用 （ADCC）
血清学反应试验
抗原抗体反应
抗原抗体反应（antigen-antibodyreaction）是指抗原与相应 抗体之间所发生的特异性结合反应。可发生于体内（invivo）， 也可发生于体外(invitro)。体内反应可介导吞噬、溶菌、杀菌、 中和毒素等作用；体外反应则根据抗原的物理性状、抗体的类 型及参与反应的介质（例如电解质、补体、固相载体等）不同， 可出现凝集反应、沉淀反应、补体参与的反应及中和反应等各 种不同的反应类型。因抗体主要存在于血清中，在抗原或抗体 的检测中多采用血清作试验，所以体外抗原抗体反应亦称为血 清反应（erologicreaction）。
血清学反应试验
抗原抗体反应类型-----间接凝集反应
乳胶凝集试验
胶凝集以试乳验胶。颗该粒乳试作胶验为既载凝可体检的集测间试相接应凝验的集抗试体验也，可称鉴为定乳
血清学反应试验
抗原决定族
血清学反应试验
抗原的种类
半抗原（只有反应原性而无免疫原性）
完全抗原
天然抗原 人工抗原 合成抗原
抗原种类
异种抗原
同种异体抗原
自身抗原
蛋白质抗原 核酸抗原 多糖抗原 脂抗原
血清学反应试验
微生物抗原成分-----细菌抗原成分
菌体抗原:革兰氏阴性菌的菌体抗原称O抗原---脂
多糖蛋白质的复合物微生物抗原