提取纯化制备竹叶黄酮的研究
提取纯化制备竹叶黄酮的研究作者：曹亚兰罗艳萍罗锦杰来源：《现代食品·下》2019年第06期摘要：目的：制備符合新资源食品要求的竹叶黄酮。
方法：将竹叶先进行优化提取，得到粗制竹叶黄酮，再经大孔吸附树脂柱纯化，得到符合新资源食品要求的竹叶黄酮。
结论：竹叶经水提工艺得到的总黄酮总量为9.72%;乙醇提取工艺的总量为12.65%;水提醇沉工艺的总量为16.03%：水提或醇提工艺后，再经大孔吸附树脂柱后总量为24.1 3%或29.57%，均达到新资源食品要求。
关键词：竹叶黄酮;提取;纯化中图分类号：TQ914.1竹叶是卫生部确定的药食两用的天然植物，是一种资源丰富且廉价的林业资源。
但相关研究较少，对其的开发利用相对较滞后，这无疑是对自然资源的严重浪费。
研究发现，竹叶中含有大量的活性成分，如黄酮及其苷类、活性多糖、特种氨基酸及其肽类、微量元素及芳香成分等。
其中黄酮类物质是一类重要的抗氧化剂，具有抗氧化、抗疲劳、抑菌、降血脂与增强免疫力等多种生理功能。
本研究从安全性、经济效益、大规模产业化等方面考虑，研究楠竹竹叶的提取工艺及纯化方案，以期得到符合新资源食品要求的竹叶黄酮，同时为充分利用竹子加工业的副产品，开发利用竹叶资源，提高产品的附加值，实现产业化提供科学依据。
1材料与仪器1.1材料与试剂新鲜的楠竹竹叶，采自四川长宁，将楠竹竹叶晾晒，于60℃左右烘干，适度粉碎后，装入塑料袋中密封，干燥贮存备用。
芦丁标准品（纯度为92.6%，批号：100080-201409），购于广东省药品检验所;AB-8大孔吸附树脂，购于西安蓝晓科技新材料股份有限公司;甲醇、氢氧化钠、乙醚、亚硝酸钠、硝酸铝等均为分析纯。
1.2试验仪器UV-2450型紫外可见分光光度计：岛津仪器（苏州）有限公司;DHG-9146A电热恒温鼓风干燥箱：上海精宏实验设备有限公司;118B摇摆式八两装高速中药粉碎机：浙江温州瑞安市永历制药机械有限公司;ABT220-5DM十万分之一天平：广州得翔科技有限公司;AUY120 EXP岛津万分之一天平：日本岛津;RE-3000旋转蒸发器：上海亚荣生化仪器厂;SHB-III型循环水式多用真空泵：郑州长城科工贸有限公司。
2试验方法2.1竹叶总黄酮含量的测定2.1.1芦丁标准工作曲线的制作准确称取充分干燥后的芦丁标准品50 mg，精密称定，置于25 mL棕色量瓶中，加甲醇适量，置水浴上微热使溶解，放冷，加甲醇至刻度，摇匀。
精密量取10mL，置100mL棕色容量瓶中，加水至刻度，摇匀，即得（每1mL中含芦丁0.2 mg）。
分别取上述芦丁标准溶液0、1、2、3、4mL及5mL于6支25 mL棕色容量瓶中，各加水至6 mL，加5%亚硝酸钠溶液1mL，混匀，放置6min，加10%硝酸铝溶液1mL，摇匀，放置6 min，加氢氧化钠试液（0.043g·mL-1）10mL，再加水至刻度，摇匀，放置15min，以相应的试剂（芦丁标准溶液0mL）为空白，采用2015版药典通则0401中的紫外一可见分光光度法，在500nm波长处测定吸光度，以吸光度A为纵坐标，芦丁浓度c为横坐标，绘制标准曲线。
以芦丁浓度c与吸光度A作图，用最小二乘法作线性回归，得芦丁浓度c与吸光度A的标准曲线线性回归方程式。
2.1.2竹叶总黄酮的抽提取一定量的竹叶剪段，于60℃烘箱内干燥约2 h，取出后用粉碎机适度粉碎，将所得竹叶粉装入塑料袋中密封，干燥贮存备用。
准确称取1.000g竹叶粉，用滤纸包好放入索氏抽提器中，加乙醚适量，水浴加热回流至提取液无色，放冷，弃去乙醚液。
再加甲醇适量，加热回流至提取液无色，转移至25mL棕色容量瓶中，用甲醇少量多次洗涤容器，洗液并入同一量瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀。
精密量取2.5 mL，置25 mL棕色容量瓶中，加水至刻度，摇匀，待测定。
2.1.3总黄酮含量的测定及计算精密量取5mL上述样液，置25mL棕色容量瓶中，按照2.1.1中标准曲线的制作方法，测定吸光度，并根据标准曲线线性回归方程计算出每毫升提取液中的总黄酮量，再换算成每克干竹叶粉中的总黄酮量。
2.2竹叶中黄酮提取试验2.2.1水提竹叶黄酮工艺取2.1.2制得的竹叶粉70 g，按1：20（w：v）的比例加水1 400 mL，加热回流提取两次，第一次一煎2h，过滤，滤渣进行二煎1.5h，过滤，滤渣弃去，将两次滤液合并，浓缩，干燥，收集，得水提竹叶黄酮，备用。
2.2.2醇提竹叶黄酮工艺取2.1.2制得的竹叶粉70g，按1：20（w：v）分别加30%、50%、70%乙醇1400 mL，加热回流提取两次，一煎2h，过滤，滤渣进行二煎1.5h，过滤，滤渣弃去，将两次滤液合并，浓缩，干燥，收集，得30%醇提竹叶黄酮、50%醇提竹叶黄酮、70%醇提竹叶黄酮，备用。
2.2.3水提醇沉竹叶黄酮取2.1.2制得的竹叶粉70g，按1：20（w：v）加水1 400 mL，加热回流提取两次，一煎2 h，过滤，滤渣进行二煎1.5 h，过滤，滤渣弃去，将两次滤液合并，浓缩至固形物含量为40%，加浓缩液2.8倍的95%乙醇，缓慢添加，边加边搅拌至溶液中乙醇含量为70%。
室温沉降12 h，第二天抽滤，得滤液备用。
2.3竹叶黄酮的纯化试验大孔吸附树脂是一类有效的和有发展前景的分离精制方法。
根据文献资料，选择AB-8作为竹叶黄酮纯化预试验的树脂。
2.3.1大孔吸附树脂AB-8预处理装柱前把AB-8在乙醇中浸泡24 h，并把树脂中的杂质除去，然后将其装柱。
装好后，用蒸馏水以2 BV·h-1的流速冲洗树脂柱，直到无乙醇残留;然后以2BV·h-1的流速，将5%的HCI 通过树脂柱，2 h后再以蒸馏水洗至中性;然后以2 BV·h-1的流速，将2%的NaOH水溶液通过树脂柱，2 h后再用蒸馏水洗至中性。
2.3.2AB-8吸附洗脱竹叶黄酮将水提竹叶黄酮提取物和醇提竹叶黄酮提取物分别用水溶解至1.5 g·L-1，以1BV·h-1的流速上柱。
上完样后，用水以1BV·h-1的流速洗脱，开始流出的溶液颜色较浅，当水洗剂用量为2 BV水溶液时，流出液颜色较深，为黄色和棕黄色，到3 BV水溶液时，颜色又变浅，此时己基本把水溶性杂质洗脱出来，所以水的用量为3个树脂床体积。
然后用70%乙醇以1BV·h-1的流速用4 BV醇溶液洗脱，收集醇洗洗脱液，旋转蒸发浓缩，干燥，按2.1的方法测定总黄酮含量。
3结果与分析3.1竹叶重金属含量测定竹叶各产品重金属含量测定结果如表l所示。
水提竹叶黄酮与醇提竹叶黄酮提取物的铜、铅、砷均有所富集，但还在标准范围内，竹叶各产品重金属含量均符合要求。
3.2芦丁标准工作曲线及线性回归方程按2.2.1所述方法，在500nm处测定芦丁系列标准溶液的吸光度，以吸光度A为纵坐标，以芦丁标准溶液浓度c为横坐标，绘制标准工作曲线。
用最小二乘法进行线性回归得标准回归方程为：Y=10.791 2X+0.002 0，R2=0.999 9。
可见吸光度与芦丁浓度有良好的线性关系。
3.3竹叶黄酮提取物总黄酮含量卫生计生委2014年第20号《关于批准番茄籽油等9种新食品原料的公告》中对竹叶黄酮的生产工艺：以竹叶为原料，经水提、萃取、浓缩、喷雾干燥等工艺制成，质量要求总黄酮（以芦丁计）≥24%。
本实验中竹叶黄酮提取物总黄酮含量及得率如表2所示。
水提竹叶黄酮提取物总黄酮得率为1.54%，70%乙醇竹叶黄酮提取物总黄酮得率为2.42%，醇提得率较高。
不同乙醇浓度提取竹叶黄酮时，随乙醇浓度的提高，提取物总黄酮含量升高，水提总黄酮含量为9.72%，70%乙醇提取总黄酮含量为12.65%，但离24%还差的很远，可以考虑加入其他方法。
单纯提取工艺所得到的提取物总黄酮含量远达不到24%，考虑用水提醇沉或醇提水沉进行初步纯化。
试验发现醇提水沉溶液色素较多，较为浑浊，较难过滤，于是采用水提醇沉工艺进行试验。
3.4竹叶黄酮水提醇沉试验结果按2.2.3方法进行水提醇沉竹叶黄酮，结果如表3所示。
竹叶黄酮水提醇沉后，提取出的总黄酮含量从9.72%，提高到16.03%，提高了1.65倍，但還是没有达到24%，于是需要进一步的纯化处理，采用大孔吸附树脂过柱的方法。
3.5竹叶黄酮的过柱纯化试验结果由于水提工艺与醇提工艺提取的竹叶黄酮含量相差并不是很大，考虑成本与安全性，将水提与醇提后的竹叶黄酮分别过大孔吸附树脂柱，研究两种工艺的可行性。
竹叶黄酮提取物总黄酮含量及得率如表4所示。
过柱后制备的竹叶黄酮提取物、总黄酮含量均符合新资源食品要求。
100 g竹叶药材粉，按水提-过AB-8树脂工艺，可以得到4.5 g总黄酮含量为29.57%的竹叶黄酮提取物;100 g竹叶药材粉，按70%乙醇提取-过AB-8树脂工艺，可以得到6.8 g总黄酮含量为24.13%的竹叶黄酮提取物。
水提工艺简单，节约乙醇，树脂易处理，无色素残留;醇提时会爆沸，不如水提安全，且成本高，树脂不易处理，有色素残留。
考虑到产品提取的成本和工艺的繁琐度，纯化树脂脱色再生的难度，且水提与醇提最终产物的总黄酮提取率相差并不算多，可适当降低醇提浓度，或者采用水提工艺。
4讨论黄酮类化合物难溶于水，但天然黄酮类化合物多以苷类的形式存在，黄酮苷一般易溶于水、乙醇、甲醇等极性强的溶剂中。
竹叶黄酮的功能因子是黄酮糖苷，以碳苷黄酮为主。
经研究发现，经水提与醇提并过大孔吸附树脂柱后，纯化的总黄酮含量在24%以上。
可以为进一步开发和利用竹叶资源提供理论依据，方法简便、易行，适用于规模化生产。
竹叶黄酮的提取和抗氧化性研究
实验提出：
结合竹叶黄酮类化合物所具有的优点及在药 物市场的前景，实验提取竹叶黄酮，对其抗氧化 性进行研究。
实验方法
1、竹叶黄酮类化合物的提取、纯化、鉴定 2、竹叶黄酮类化合物的抗氧化性研究 3、根据实验所得的数据，评估竹叶黄酮应用于药物市 场的前景
一、竹叶黄酮类化合物的提取、纯化 1、乙醇回流提取与纯化
3、竹叶黄酮类化合物的鉴定 取一定量上述所得产物，加入适量 盐酸、镁粉，产生红色络合物，说明 所得为黄酮类化合物。（黄酮化合物 基本骨架是2-苯基色酮，其母核含有 碱性氧原子，又往往带有酚性羟基， 因此能与某些还原剂产生颜色反应， 与某些金属离子及其他一些试剂产生 有色络合物。）
2、竹叶黄酮类化合物的抗氧化 性研究
竹叶黄酮类化合物的提取及其 抗氧化性的研究
指导老师：王平华 小组成员：杨楠楠 杨啸 许亚波 伍安乐 罗延庆
一 实验背景
1、黄酮类化合物的特点及市场应用前景 黄酮类化合物（flavonoids）又称黄酮体、黄碱素和类黄 酮，基本骨架是两个苯环通过三个碳原子相互连接而成
黄酮类化合物对于预防疾病，如骨质疏松，血脂升高 等；对于高激素水平者可产生抗激素功能.黄酮有利于预 防肿瘤发生，提高机体免疫功能，抗炎，降低胆固醇， 预防心血管疾病发生，其作用很大部分是因为黄酮类化 合物具有很强的抗氧化性，并且竹叶黄酮不含任何有害 成分和抗营养因子.可广泛应用于食品饮料酒类、保健品、 生物医药、化妆品、饲料等领域. 国内研究黄酮类化合物 状况 目前国内提取黄酮类化合物的原料主要是葛根、苷草， 而以竹叶为原料尚未广泛采用.,竹叶黄酮类化合物研究进展 不大.
（1）将新鲜竹叶洗净后自然晾干，在60℃烘箱中烘干10h， 粉碎后备用 （2）称取15.0g烘干的竹叶粉末装入1000ml三口烧瓶内，加 入500ml 80%的乙醇溶液，投入几粒沸石，安装好提取装置。 用电热套加热，回流提取3h。 （3）将三口烧瓶内的溶液冷却至50～60℃，抽滤，取滤液 （4）将滤液减压浓缩，静置至不再产生絮状物质，分离去 杂 （5）将上述滤液在低温真空浓缩至近干，用正丁醇萃取至 水溶液无黄酮反应为止，得水相、醇相。取醇相低温真空中 浓缩至近干，然后再在问题和黄酮具有 的前景优势 •（1）竹叶黄酮与维生素C的抗氧化性 •（2）营养成分上那个更适于动物乃至人类 •（3）比较添加食品时的抗氧化性强度随时间 的变化，是否无毒、无产生副有害物质。那个 更适于做为绿色食品的抗氧化添加剂。 •（4）开发美容护肤饮料或药品以及护肤品的 前景
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关于竹叶中总黄酮提取工艺研究 2012-12-24 【编者按】：医药论文是科技论文的一种是用来进行医药科学研究和描述研究成果的论说性文章。
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关于竹叶中总黄酮提取工艺研究 【摘要】目的用正交试验法优选淡竹叶中总黄酮的提取工艺。
方法以20 g原药材的总黄酮提取量为评价指标,选择乙醇用量(倍)、提取时间(h)、提取次数(次)为考察因素,采用正交试验法L9(34)确定醇提取淡竹叶中总黄酮的最佳工艺。
结果最佳提取工艺条件为75%乙醇18倍量提取1.0 h,共提取1次,乙醇用量为显著影响因素。
结论首次进行了淡竹叶总黄酮正交提取工艺的研究,结果比较可靠。
【关键词】淡竹叶;总黄酮;正交试验 Abstract：Objective To study the optimum ethanol extraction process of total flavonoids in Lophatherun gracile Brongn. Methods The extraction of total flavonoids was choosen as the assessment index. Ethanol volumn extracting time and times were the studing factors. The optimum ethanol extraction process was selected with the orthogonal design. Results The optimum ethanol extracting process conditions were as follows：adding 18 fold of 75% ethanol, extracting for 1.0 h and one in all. Ethanol dosage was the predominant influencing factor. Conclusion This optimum extradion process of total flavonoids in Lophatherum gracle Brongn is reliable. Key words：Lophatherum gracile Brongn;total flavonoids;orthogonal design 淡竹叶为禾本科多年生草本植物淡竹叶(Lophatherum gracile Brongn.)的干燥茎叶,主产于河南、安徽、江苏、浙江、福建、广东、广西等地。
竹叶黄酮的提取、检测、分离、抗氧化活性及构-效关系的研究
摘要
竹叶黄酮是我国新开发的一种植物类黄酮制剂，由于其具有优良的抗自由基、 抗氧化、抗衰老、及保护心血管等方面的生物学功效，目前已受到国内外市场的 广泛关注。为了全面考察竹叶黄酮的性质，本论文采用天然的刚竹属毛竹叶为原 料，对竹叶黄酮的提取、含量检测、分离纯化、抗氧化活性及构-效关系等方面作 了较系统的研究，主要研究内容和实验结果如下：
II
英文摘要
the antioxidant activity-structure relationship of flavonoids. From the above series experiments, it was proved that the bamboo leaves
flavonoids was a excellent flavonoids prepration. The research provided important theoretical and pratical guidances for exploiting and using of bamboo resource. Key words: bamboo leaves flavonoids, extraction, enrichment, antioxidant,
近年来，自由基生命科学的进展，使具有强抗氧化和清除自由基作用的类黄 酮受到空前的重视。二十世纪 80 年代以来，有研究报导[4-5]从竹叶中提取食品防腐 剂、杀菌剂和叶绿素等；90 年代以来，人们开始关注竹叶中黄酮类化合物的存在 及其生物学活性[6-9]。1998 年，我国研究人员在借鉴国内外植物黄酮提取方面的各 种专利技术的基础上，结合竹叶中黄酮类化合物存在的特点，创造了经济、适用、 独特的提取工艺，获得了国家发明专利，并率先在浙江实现了产业化生产，至此， 竹叶黄酮提取物正式面世。同年，(淡)竹叶被卫生部正式批准列入了“药食两用的 天然植物名单”[10]。1999 年竹叶黄酮获国家级新产品证书，其衍生产品---竹康宁 胶囊获卫生部保健食品批文，竹叶啤酒和竹叶饮料等也纷纷上市[11]。
竹叶中总黄酮的纯化工艺研究
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关键 词 ：竹 叶 ；黄酮 ；异荭草苷 ；紫外分光光度法 ；高效液相色谱法 ；聚酰胺柱分离法 中图分类 号 ：Ｔ ２ ２ １ Ｓ０ ． 文献标 识码 ：Ａ 文章编号 ：１０ ０６—２ １ （０ １ ６— １９— ４ ５ ３ ２ １ ）０ ０ ０ ０
Ｓ ｕ ｙ ｏ ｕ ｉｃ ｔ ｎ ｔ ｃ ｎｑ ｅ ｏ ｌｖ ｎ ｓ ｆ ｍ ａ ｏ ａ ｅ ｔ ｄ ｆｐ ｒ ｉａ ｉ ｅ ｈ ｉｕ ｆ ａ ｏ ｅ ｒ ｆ ｏ ｆ ０ ｂ ｍｂ ｏ ｌ ｖ ｓ ｅ
ｐ ｒ ｙ ｔｈ ｓｎ ｏｌ ｔ ｎ ａ ｄ Ｃ ｅ ｕ ｅ ｎ ｌｒ ｅ—ｓ ａ ｅ ｐ ｏ ｕ ｔ ｎ ｕ ｔ ．Ｉ ａ ｏ ｐ ｌ ｉ ｎ ａ ｂ ｓ ｄ ｉ ａｇ ｉ ｕｏ ｎ ｃ ｌ ｒ ｄ ｃｉ ． ｏ
竹叶黄酮提取工艺的研究
ｌ 材 料 与 方 法
处测定 吸光度 值 Ａ 。然 后 以芦 丁作 为 标 样 ， 定 时 测 最大 吸收波 长为 ５ ０ｎ 工作 曲线 方程 为 ：（ ｇ ｍ ） １ ｍ， Ｙｍ ／ １
０ ７３ ９ ＋０ ０ ０ １９４ Ａ 为 吸 光 度 值 ， ２＝ ． ９ Ａ ． ０ ８ ， Ｒ
全性 Ｌ Ｊ ２ 。最新 研究 表 明 ， 叶 黄 酮还 具 有 明 显 的 竹
１３ １ 黄 嗣 的测定 移 取 ５ Ｉ 提 取液 于 ２ ｌ比 ．． ｌ ｎ ５Ｉ Ｔ １ 色管 中 ， 浓度 ３ ％ 乙醇 １ ｌ０ ７ｍ ａ Ｏ 溶 液 加 ０ ０ｍ ， ． ｌ Ｎ ２ Ｎ 摇匀 ， 放置 ５ｍ ｎ 加 ０ ７ｍ ＩＮ ３ ｉ后 ． ｌ （ ０ ） 液摇匀 ， Ａ 溶 放 置 ６ｍ ｎ后加 入 浓度 １ｍ ｌＬＮ Ｏ ｉ ｏ ａ Ｈ溶 液混 匀 ， 浓 ／ 用
１ １ 实验 材 料 ．
慈竹竹 叶采 自湖南 益 阳 ， 净 后 自然 晾 干 ， 洗 在
＝
０，９ ， 算 出总 黄 酮 量 ， 到 总 黄 酮 提 取 率 【 ９ ８８ 计 得 。
６ ０℃烘箱 中烘干 １ ， 碎后 过 ４ ０ｈ 粉 ０目筛备 用 。 １ ２ 试 剂 与 仪 器 ．
竹叶 黄 酮 具 有 抗 活 性 氧 自由基 能 力 和类 Ｓ Ｄ Ｏ
竹叶黄酮提取工艺研究120203
竹叶总黄酮提取工艺研究陈宇1，邓金木，林丽丽，吴慧龙，杨建建，钟红金（莆田学院环境与生命科学系莆田351100）摘要：探讨用醇提法提取竹叶中黄酮类成分的最佳工艺，为竹叶的开发利用提供理论依据。
以竹叶为试材，以乙醇为溶剂，采用分光光度法对竹叶中的黄酮类化合物的含量进行测试。
通过单因素试验研究乙醇浓度、料液比、提取温度、提取时间对总黄酮提取率的影响, 再采用正交试验法优化提取总黄酮的最佳工艺条件。
单因素和正交试验表明：影响黄酮提取率的因素主次顺序是：料液比> 乙醇浓度> 提取时间> 浸润时间。
最佳实验条件为料液比1﹕20，60%的乙醇，60℃提取4小时，竹叶中黄酮的含量为7.88 mg·g-1。
关键词：竹叶黄酮类化合物正交试验中图分类号：S718.4竹子是禾本科(Poaceae)竹亚科(Bambusoideae)多年生常绿植物，研究表明，竹叶中含有大量的黄酮类化合物[1-2]和其他生物活性成分，如酚酸、蒽醌类化合物、活性多糖、香豆素类内醋、特种氨基酸等[3-4]，其中黄酮是其主要的生理活性成分[5]。
生物类黄酮化合物具有清除自由基、抗衰老和预防心血管疾病等生理功能[6-8]。
目前，对竹叶黄酮类物质功能作用的研究已成为一个热点，为此，本研究以莆田学院校园内的竹子叶片为材料，研究了竹叶黄酮提取工艺，并采用正交试验优化黄酮提取工艺，为竹子的综合开发利用提供参考。
1 材料与方法1.1材料1.1.1 原材料：竹叶（佛肚竹）采至芳名湖畔，经烘箱70℃烘干，再用研钵研碎，过60目筛备用。
1.1.2 试剂：芦丁标准品（99%，郑州荔诺生物科技有限公司），氢氧化钠、三氯化铝、硝酸铝、亚硝酸钠、乙醇、石油醚等均为分析纯试剂。
1.1.3主要仪器：BS224S电子天平赛多利斯科学仪器（北京）有限公司、722型分光光度计上海光谱仪器有限公司制造、DGH-9246电热鼓风干燥箱上海精宏实验设备有限公司、RE52CS-2旋转蒸发仪上海亚荣生化仪器厂、恒温水浴锅国华电器有限公司。
提取纯化制备竹叶黄酮的研究
63提取纯化制备竹叶黄酮的研究Study on Extraction Purification and Preparation of Bamboo Leaf Flavonoids◎ 曹亚兰，罗艳萍，罗锦杰（广东一方制药有限公司，广东 佛山 528244）Cao Yalan, Luo Yanping, Luo Jinjie(Guangdong Yifang Pharmaceutical Co, Ltd., Foshan 528244, China)摘 要：目的：制备符合新资源食品要求的竹叶黄酮。
方法：将竹叶先进行优化提取，得到粗制竹叶黄酮，再经大孔吸附树脂柱纯化，得到符合新资源食品要求的竹叶黄酮。
结论：竹叶经水提工艺得到的总黄酮总量为9.72%；乙醇提取工艺的总量为12.65%；水提醇沉工艺的总量为16.03%；水提或醇提工艺后，再经大孔吸附树脂柱后总量为24.13%或29.57%，均达到新资源食品要求。
关键词：竹叶黄酮；提取；纯化Abstract ：Objective: To prepare bamboo leaf flavonoids which meet the requirements of new resource food. Methods: The bamboo leaves were optimized and extracted, the coarse bamboo leaves were obtained, and then purified by macroporous adsorption resin column, and the bamboo leaf flavonoids were obtained in accordance with the requirements of the new resource food. Conclusion: The content of total flavonoids in bamboo leaves by water extraction process is 9.72%, the content of ethanol extraction process is 12.65%, the process content of water extraction is 16.03%, and the content ofwater extraction or alcohol extraction process is 24.13% or 29.57% after adsorption of resin column by macroporous, allmeet the requirements of new resource food.Key words ：Bamboo leaf flavonoids; Extraction; Purification中图分类号：TQ914.1竹叶是卫生部确定的药食两用的天然植物，是一种资源丰富且廉价的林业资源。
竹叶黄酮提取纯化及其在轻工业中的应用研究进展
基金项目:云南省吴良如专家工作站项目(２０２３０５ＡＦ１５００５０)ꎻ云南省景谷县林业和草原技术推广中心云南省赵一鹤专家基层科研㊀㊀㊀㊀㊀工作站项目ꎮ第一作者:李翱翔(１９９７－)ꎬ男ꎬ硕士研究生ꎬ主要从事竹类植物资源的化学与利用研究ꎮＥ－ｍａｉｌ:１９０７０４９５３８＠ｑｑ ｃｏｍꎮ通信作者:赵一鹤(１９７０－)ꎬ博士ꎬ研究员ꎬ博士生导师ꎬ主要从事竹资源高效利用研究ꎮＥ－ｍａｉｌ:９０３７９６２５９＠ｑｑ ｃｏｍꎮ竹叶黄酮提取纯化及其在轻工业中的应用研究进展李翱翔１ꎬ２㊀赵一鹤２∗(１西南林业大学材料与化学工程学院昆明６５０２２４ꎻ２云南省林业和草原科学院昆明６５０２０１)摘㊀要:竹叶富含黄酮类物质ꎬ竹叶黄酮具有多种生物活性ꎬ可广泛应用于农业㊁日化产品㊁医药㊁功能性食品等行业ꎬ开发利用竹叶黄酮已成为近年来的研究热点ꎮ文章综述了国内外竹叶黄酮提取和纯化方法以及在轻工业领域的应用现状ꎬ以期为竹叶黄酮工业化开发利用提供依据和参考ꎮ目前ꎬ竹叶黄酮的提取方法可归纳为化学提取法㊁生物提取法㊁物理提取法和联合提取法ꎻ其纯化方法按照理化性质可归为柱层析法㊁大孔树脂吸附法以及超滤膜法３类ꎻ而检测竹叶黄酮的主要方法有分光光度法和高效液相色谱法(ＨＰＬＣ)ꎮ竹叶黄酮在很多领域都有较好的应用前景ꎬ但目前产业化应用仍存在许多尚待解决的问题ꎬ今后应在竹叶黄酮的提取和检测方法以及快速高效的产业化方面进行深入研究ꎮ关键词:竹叶ꎻ黄酮ꎻ提取方法ꎻ纯化方法ꎻ检测方法ꎻ工业化应用ＤＯＩ:１０.１２１６８/ｓｊｚｔｔｘ.２０２３.０９.２４.００１ＲｅｓｅａｒｃｈＰｒｏｇｒｅｓｓｏｎＥｘｔｒａｃｔｉｏｎａｎｄＰｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆＦｌａｖｏｎｏｉｄｓＦｒｏｍＢａｍｂｏｏＬｅａｖｅｓａｎｄＩｔｓＡｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｉｎＬｉｇｈｔＩｎｄｕｓｔｒｙＬｉＡｏｘｉａｎｇ１ꎬ２ꎬＺｈａｏＹｉｈｅ２∗(１ ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＭａｔｅｒｉａｌｓａｎｄＣｈｅｍｉｃａｌꎬＳｏｕｔｈｗｅｓｔＦｏｒｅｓｔｒｙＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙꎬＫｕｎｍｉｎｇ６５０２２４ꎬＣｈｉｎａꎻ２ ＹｕｎｎａｎＡｃａｄｅｍｙｏｆＦｏｒｅｓｔｒｙａｎｄＧｒａｓｓｌａｎｄꎬＫｕｎｍｉｎｇ６５０２０１ꎬＣｈｉｎａ)Ａｂｓｔｒａｃｔ:Ｂａｍｂｏｏｌｅａｖｅｓａｒｅｒｉｃｈｉｎｆｌａｖｏｎｏｉｄｓꎬｗｈｉｃｈｈａｖｅａｖａｒｉｅｔｙｏｆｂｉｏｌｏｇｉｃａｌａｃｔｉｖｉｔｉｅｓａｎｄｃａｎｂｅｗｉｄｅｌｙｕｓｅｄｉｎａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅꎬｄａｉｌｙｃｈｅｍｉｃａｌｐｒｏｄｕｃｔｓꎬｍｅｄｉｃｉｎｅꎬｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｆｏｏｄａｎｄｏｔｈｅｒｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ.Ｔｈｅｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｎｄｕｔｉｌｉｚａｔｉｏｎｏｆｂａｍｂｏｏｌｅａｆｆｌａｖｏｎｏｉｄｓｈａｓｂｅｃｏｍｅａｒｅｓｅａｒｃｈｈｏｔｓｐｏｔｉｎｒｅｃｅｎｔｙｅａｒｓ.Ｉｎｔｈｉｓｐａｐｅｒꎬｔｈｅｅｘｔｒａｃｔｉｏｎａｎｄｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄｓｏｆｂａｍｂｏｏｌｅａｆｆｌａｖｏｎｏｉｄｓａｔｈｏｍｅａｎｄａｂｒｏａｄａｎｄｔｈｅｉｒａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｉｎｌｉｇｈｔｉｎｄｕｓｔｒｙｗｅｒｅｒｅｖｉｅｗｅｄｔｏｐｒｏｖｉｄｅｂａｓｉｓａｎｄｒｅｆｅｒｅｎｃｅｆｏｒｔｈｅｉｎｄｕｓｔｒｉａｌｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｎｄｕｔｉｌｉｚａｔｉｏｎｏｆｂａｍｂｏｏｌｅａｆｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ.Ａｔｐｒｅｓｅｎｔꎬｔｈｅｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄｓｏｆｆｌａｖｏｎｏｉｄｓｆｒｏｍｂａｍｂｏｏｌｅａｖｅｓｃａｎｂｅｓｕｍｍａｒｉｚｅｄａｓｃｈｅｍｉｃａｌｅｘｔｒａｃｔｉｏｎꎬｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｅｘｔｒａｃｔｉｏｎꎬｐｈｙｓｉｃａｌｅｘｔｒａｃｔｉｏｎａｎｄｃｏｍｂｉｎｅｄｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ.Ａｃｃｏｒｄｉｎｇｔｏｐｈｙｓｉｃａｌａｎｄｃｈｅｍｉｃａｌｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓｏｆｆｌａｖｏｎｏｉｄｓꎬｔｈｅｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄｓｃａｎｂｅｃｌａｓｓｉｆｉｅｄｉｎｔｏｃｏｌｕｍｎｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙꎬｍａｃｒｏｐｏｒｏｕｓｒｅｓｉｎａｄｓｏｒｐｔｉｏｎａｎｄｕｌｔｒａｆｉｌｔｒａｔｉｏｎｍｅｍｂｒａｎｅｍｅｔｈｏｄ.Ｔｈｅｍａｉｎｍｅｔｈｏｄｓｆｏｒｔｈｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆｆｌａｖｏｎｏｉｄｓｉｎｂａｍｂｏｏｌｅａｖｅｓａｒｅｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｒｙａｎｄｈｉｇｈｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅｌｉｑｕｉｄｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ(ＨＰＬＣ).Ｂａｍｂｏｏｌｅａｆｆｌａｖｏｎｏｉｄｓｈａｖｅｇｏｏｄａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｐｒｏｓｐｅｃｔｓｉｎｍａｎｙｆｉｅｌｄｓꎬｂｕｔｔｈｅｒｅａｒｅｓｔｉｌｌｍａｎｙｐｒｏｂｌｅｍｓｔｏｂｅｓｏｌｖｅｄｉｎｔｈｅｉｎｄｕｓｔｒｉａｌａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ.Ｉｎｔｈｅｆｕｔｕｒｅꎬｔｈｅｅｘｔｒａｃｔｉｏｎａｎｄｄｅｔｅｃｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄｓｏｆｂａｍｂｏｏｌｅａｆｆｌａｖｏｎｏｉｄｓａｓｗｅｌｌａｓｔｈｅｒａｐｉｄａｎｄｅｆｆｉｃｉｅｎｔｉｎｄｕｓｔｒｉａｌｉｚａｔｉｏｎｓｈｏｕｌｄｂｅｆｕｒｔｈｅｒｓｔｕｄｉｅｄ.Ｋｅｙｗｏｒｄｓ:ｂａｍｂｏｏｌｅａｆꎬｆｌａｖｏｎｏｉｄｓꎬｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄꎬｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄꎬｄｅｔｅｃｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄꎬｉｎｄｕｓｔｒｉａｌａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ７９㊀㊀竹叶作为一种可食用和药用的植物资源ꎬ在中国乃至其他国家都有着悠久的历史记录ꎮ竹叶提取物具有多种生理活性ꎬ对于保护人体健康具有重要作用[１]ꎬ１９９８年中国卫生部认定竹叶是一种草药ꎮ竹叶中富含黄酮类化合物ꎬ该类化合物也是植物中最重要的次生代谢产物之一[２]ꎮ文献分析显示ꎬ现已发现竹叶中有２１种黄酮类化合物ꎬ主要以糖苷的形式存在于竹叶中ꎬ分为Ｏ苷和Ｃ苷２种ꎬ并以黄酮Ｃ苷为主[３]ꎮ黄酮Ｃ苷主要有４种活性化合物[４]ꎮ魏琦等[５]通过高效液相色谱法同时测定竹叶中的１３种黄酮类化合物ꎬ并用同样方法与牡竹属１０个竹种的竹叶黄酮类化合物进行比较ꎬ结果发现不同竹种竹叶黄酮类化合物组成和含量存在差异ꎻ李翱翔等[６]采用４种黄酮碳苷标品分析了５种竹叶的黄酮类成分及含量[６]ꎬ印证了该结果ꎮ已有研究表明ꎬ黄酮类化合物表现出一系列生物活性ꎬ包括抗氧化[７]㊁抗真菌活性[８]㊁调节血脂血糖和抑制肿瘤活性[９]㊁阻断亚硝化反应㊁消除溃疡以及降低患动脉粥样硬化㊁老年痴呆症㊁帕金森综合征病的风险[１０]等ꎮ竹叶中提取的黄酮类化合物由于其独特的生物理化活性ꎬ可用于医药产品㊁功能保健产品以及日用化妆品ꎬ也可进一步制成抗氧化剂㊁抑菌防腐剂㊁天然营养性低甜度甜味剂等食品添加剂ꎮ然而ꎬ到目前为止竹叶黄酮在轻工业上的应用并未取得实质性进展ꎮ本文综述了国内外竹叶黄酮提取和纯化方法以及在轻工业领域的应用现状ꎬ以期为竹叶黄酮工业化开发利用提供依据和参考ꎮ１㊀竹叶黄酮类化合物的提取方法常见的竹叶黄酮类化合物提取方法有煎煮法㊁共沉淀法㊁超临界流体萃取法(ＳＰＥ)㊁表面活性剂法㊁微波辅助提取法(ＭＡＥ)㊁双水相法㊁超声波萃取法㊁离子液体提取法㊁生物酶解提取法㊁闪蒸提取法等ꎬ根据提取原理可将这些方法归纳为化学提取法㊁生物提取法㊁物理提取法以及联合提取法４类[１１]ꎮ１ １㊀化学提取法化学提取法是将竹叶原料进行粉碎过筛后ꎬ选择合适的溶剂在最佳的提取工艺下进行提取的方法ꎮ常用的溶剂为水或有机溶剂ꎬ即选择黄酮类化合物和非目标物质之间具有极性差异的有机溶剂(例如常用的有丙酮㊁乙醇㊁甲醇㊁乙酸乙酯及某些极性较大的混合有机溶剂)进行提取ꎮ何春雷等[１２]采用水提取法分析了１０个不同竹种的竹叶黄酮ꎬ其最佳提取工艺条件为:固液比１ʒ２０㊁提取温度８０ħ(水浴加热)㊁提取时间３０ｍｉｎꎮ水提取法具有经济环保㊁设备简单㊁工业生产成本低的优点ꎬ但提取率较低ꎬ也会附带多种水溶性杂质ꎬ给分离纯化带来一定困难ꎬ得到的产物含量少ꎮ李坤平等[１３]使用不同的有机溶剂对竹叶黄酮进行提取ꎬ认为酒精为最合适的提取溶剂ꎮ有机溶剂提取法便于操作㊁经济适用㊁得率较高㊁易处理ꎬ相对于水提法更加常用ꎬ但工业化生产耗量较大ꎬ相对于水来说ꎬ有机溶剂存在环境污染和回收困难等问题ꎮＷａｎｇ等[１４]开发了以离子液体为溶剂提取竹叶黄酮的方法ꎬ提出的最佳工艺条件为１ ５ｍｏｌ/Ｌ[ＢＭＩＭ]Ｂｒ水溶液㊁固液比１ʒ４１ꎮ１ ２㊀生物提取法生物提取法主要是酶解法ꎬ即利用酶来分解植物细胞壁和果胶质等ꎬ加快提取溶剂进入细胞内部ꎬ从而提高目标化合物的提取率ꎮ赵洪等[１５]利用纤维素酶提取竹叶黄酮ꎬ最佳提取工艺为:酶添加量０ ５％ꎬ提取温度４５ħꎬ固液比１５倍ꎬ提取时间１ ５ｈ㊁ｐＨ值为５ꎮ罗春连[１６]在赵洪等的基础上加入了一定比例的果胶酶ꎬ用２种混合酶优化提取工艺ꎬ得到的最佳工艺条件为:０ ０５％的果胶酶㊁０ ０８％的纤维素酶ꎬ固液比１ʒ２０ꎬ酶解温度４８ħꎬ酶解时间２ｈꎬｐＨ值为５ꎻ在该条件下提取效果最佳ꎬ总黄酮的提取率可以达到８５％~９５％ꎬ比传统提取法的提取率提高了１０％左右ꎮ采用酶解法提取竹叶黄酮所应用到的设备较为简易ꎬ工艺简单ꎬ操作简便ꎬ成本低廉ꎬ效率８９高ꎬ而且相对有机溶剂提取更加环保安全ꎮ１ ３㊀物理提取法物理提取法主要是借助外力作用创造出高温㊁高压㊁高频等提取条件ꎬ从而获取竹叶黄酮的方法ꎮ物理提取方法主要有超临界流体法㊁破碎提取法等ꎮ陶清等[１７]利用超临界流体ＣＯ２萃取技术进一步优化竹叶黄酮的提取工艺ꎬ得到的最优提取条件为:萃取压力４０Ｍｐａ㊁夹带剂用量１ｍＬ/ｇ㊁萃取温度６０ħ㊁萃取时间６０ｍｉｎꎬ最终的竹叶总黄酮提取量为４ ９７８ｍｇ/ｇꎮ与化学提取方法相比ꎬ物理提取法不仅提高了目标产物的得率ꎬ而且节能省时ꎮ１ ４㊀联合提取法联合提取法就是将几种提取方法相结合进行提取竹叶黄酮ꎮ李烨等[１８]利用响应面法优化超声波提取竹叶黄酮ꎬ最佳工艺条件为:７０％乙醇ꎬ超声功率１９０ｋＷꎬ超声时间３０ｍｉｎꎻ在该条件下竹叶黄酮提取率为５ ４６３％ꎮ许子竞[１９]以毛竹叶为原料ꎬ通过响应面法优化微波提取毛竹叶黄酮的工艺ꎬ在固定微波功率３ ０ｋＷ和以８０％乙醇为溶剂条件下提取竹叶黄酮ꎬ得出最佳提取工艺为:固液比１ʒ２４(ｇʒｍＬ)ꎬ在８１ħ条件下提取２１ｍｉｎꎬ黄酮的提取率为５ ７８％ꎮ王博文等[２０]应用Ｄｅｓｉｇｎ￣Ｅｘｐｅｒｔ法得到提取的最优条件下(８０％乙醇溶液作为溶剂ꎬ固液比１ʒ１７㊁提取温度８２ħ㊁提取时间８６ｍｉｎ㊁氧化石墨烯加入量为１ ５ｍｇ/ｇ)竹叶黄酮的提取率可达８８ ４％ꎬ相比只用乙醇回流提取提高约１０ ６％ꎮ此外ꎬ联合提取法还有表面活性剂辅助超声提取法[２１]㊁超声波辅助双水相提取法[２２]㊁超声－微波协同辅助酶提取法[２３]等都应用在黄酮类化合物的提取上ꎬ但这些方法尚未应用在竹叶黄酮的提取上ꎬ将来可能成为竹叶黄酮一种比较理想的提取方法ꎮ２㊀竹叶黄酮类化合物的纯化和含量测定方法㊀㊀黄酮类化合物分离的传统方法主要有配位反应法[２４]㊁溶剂萃取法[２５]㊁醇沉法[２６]等ꎬ最近较为先进的技术主要有高速逆流色谱技术(ＨＳＣＣＣ)㊁分子印迹技术(ＭＩＴ)㊁液滴逆流色谱技术(ＤＣＣＣ)ꎬ以及较早方法中的压液相色谱法(ＭＰＬＣ)㊁循环液相色谱技术(ＣＬＣ)和离心制备薄层色谱法(ＣＰＴＬＣ)ꎮ目前ꎬ应用在竹叶黄酮的纯化分离的方法主要有聚酰胺柱层析法㊁大孔径树脂吸附法㊁硅胶柱层析法以及超滤膜法４种ꎮ根据各方法的理化性质可归为３类:柱层析法㊁大孔树脂吸附法以及超滤膜法ꎮ２ １㊀竹叶黄酮类化合物的纯化方法２ １ １㊀柱层析法可采用聚酰胺柱层析法㊁硅胶柱层析法等方法ꎮ郭雪峰等[２７]通过对比６种纯化工艺ꎬ认为聚酰胺柱吸附法为最佳工艺ꎬ纯化后竹叶黄酮浓度可达０ ５９~０ ６０ｍｇ/ｍＬꎮ张春娟等[２８]对比３种聚酰胺树脂的纯化效果ꎬ发现竹叶黄酮的４种黄酮碳苷在聚酰胺纯化后在竹叶黄酮粗品中纯度达７６ ９３９ｍｇ/ｇꎬ以选择６０~１００目的聚酰胺树脂效果最佳ꎮ孙武兴等[２９]采用薄层色谱法㊁反向色谱柱(ＯＤＳ)法等方法进行分离纯化竹叶提取化合物ꎬ效果良好ꎮ郭雪峰等在用有机溶剂提取竹叶黄酮粗产物之后ꎬ先用硅胶柱进行一次纯化ꎬ用ＳｅｐｈａｄｅｘＬＨ￣２０凝胶柱和ＲＰ￣１８反相硅胶柱进行二次纯化分离ꎬ发现硅胶柱层析法操作复杂耗时长ꎬ而且硅胶的吸附性较大ꎬ对黄酮分离效果较差ꎮ２ １ ２㊀大孔树脂吸附法姚林娜等[３０]采用ＡＢ￣８大孔树脂吸附法对竹叶黄酮粗品进行纯化ꎬ并确定了最佳工艺条件ꎬ纯化后竹叶黄酮纯度比纯化前约提高２ ７倍ꎮ周建飞等[３１]对比了８种大孔径树脂对竹叶黄酮的静态吸附与解吸效果ꎬ筛选出２种较好的树脂Ｄ１０１￣１和ＡＢ￣８ꎬ并采用混用技术进行分离纯化竹叶黄酮ꎬ分离纯化效果得到较好提升ꎬ样品中黄酮纯度在原有的基础上提升了１９ ７％ꎮ由于竹叶黄酮碳苷极性较大ꎬ与其他纯化方法相比ꎬ大孔树脂吸附法的纯化效果并非特别理想ꎬ可以结合其他的纯化方法进行二次纯化ꎮ９９２ １ ３㊀超滤膜法近年来ꎬ作为现代药物纯化工业中取代传统分离法的重要方法ꎬ超滤(ＵＦ)膜分离被应用于分离植物提取物中的不同组分ꎬ该方法具有操作简便㊁在常温常压即可进行㊁不需要剧烈反应条件等优点ꎬ但存在膜污染的问题ꎮ唐浩国等[３２]用５种常见的超滤膜对麻竹叶黄酮进行纯化ꎬ从中选择出了分离纯化效果较好的聚砜纤维膜ＰＳＦ￣５００ꎬ得到的竹叶黄酮的纯度达到４４ １３２％ꎮ王文渊等[３３]利用微滤－超滤二级膜联用分离技术对竹叶黄酮提取液进行处理ꎬ去除部分杂质后竹叶黄酮纯度达到４１ ６１％ꎬ竹叶黄酮回收率超过９１％ꎮ２ ２㊀竹叶黄酮含量测定方法２ ２ １㊀分光光度法分光光度法具有灵敏度高㊁快速㊁便于操作等优点ꎬ是目前竹叶黄酮成分测定最常用的方法ꎬ但由于竹叶黄酮粗提取液中杂质的存在ꎬ使得最终测定值偏高ꎬ因此应先分离出杂质再利用分光光度法测定竹叶黄酮成分含量ꎬ以获得较为理想的测定结果ꎮ该方法的基本原理是黄酮类物质的基本结构上都有酚羟基或还原性羰基ꎬ这些基团能够与金属盐离子形成有色络合物ꎬ从而在特定的紫外波长下具有一定的吸光度ꎮ池玉梅等[３４]通过亚硝酸钠－硝酸铝－氢氧化钠法和氯化铝－乙酸钾法比较了１２种黄酮类化合物的紫外和可见光谱ꎬ分析了分光光度法对于测定黄酮类化合物的适用性ꎬ结果认为该方法只适用于部分黄酮类成分分析ꎮ２ ２ ２㊀高效液相色谱法高效液相色谱(ＨＰＬＣ)是生物化学㊁药理学和环境科学等各个研究领域中应用最广泛的分析方法之一ꎮ一些学者采用ＨＰＬＣ－外标法测定了４种丛生竹中总黄酮[３５]ꎮ张春娟等[２８]采用高效液相色谱法结合紫外光谱法ꎬ同时测定了４种竹叶黄酮碳苷ꎬ测得的结果分别为荭草苷１３ ７３ｍｇ/ｇ㊁异荭草苷４９ ６８ｍｇ/ｇ㊁牡荆素７ ８５ｍｇ/ｇ和异牡荆素３０ ７０ｍｇ/ｇꎮ高效液相色谱也可与其他技术联用ꎬ如Ｇａｏ等[３６]采用高效液相色谱法与二极管阵列检测技术和离子交换技术相结合ꎬ以高效液相色谱仪为基础ꎬ从猪笼草中提取了１４种黄酮类化合物ꎮ３㊀竹叶黄酮在轻工业中的应用竹叶黄酮由于具有多种生物学活性如抗氧化㊁抗肿瘤活性㊁抗辐射㊁抗病毒㊁提高免疫力㊁抑菌抗炎等而日益受到关注ꎬ被广泛应用于食品㊁医药㊁日化产品以及其他轻工业领域中ꎮ１)在功能食品中的应用ꎮ目前ꎬ与竹叶相关的各种类型用于增强免疫力㊁清热解毒的药品及保健品等系列功能产品(如片剂㊁口服饮品㊁胶囊等)已经上市ꎮ例如ꎬ浙江大学张英教授带头研制成功了竹叶黄酮类产品(竹康宁胶囊)ꎬ２００２年新时代集团在原有基础上进行技术改进研制出片剂型竹康宁产品ꎬ该产品在当年被国家卫生部批准为国产保健品ꎮ竹啤是在啤酒中加入一定量的竹叶黄酮ꎬ添加剂量在１００ｍｇ/Ｌ以上ꎬ这种啤酒不仅具有独特的竹叶清香ꎬ还具有增强免疫力㊁缓解疲劳㊁清除体内过氧化物㊁降低酒精对肝脏的伤害㊁促进新陈代谢和降低血糖血脂等得功效[３７]ꎮ２)在天然药物开发中的应用ꎮ早在汉代的«神农本草经»中竹叶就被作为一味中草药ꎬ具有清热解毒㊁轻身益气的功效ꎮ３０多年前ꎬ日本学者福山伍郎研究发现ꎬ屋久岛竹叶提取物对细胞产生的赘生物细胞群(肿瘤)具有良好的抑制作用[３８]ꎮ也有学者研究了竹叶提取物的药理学作用ꎬ并将其应用在治疗癌症上ꎬ取得了良好效果ꎮ随着医疗科技的进步和人们对天然药物的需求ꎬ竹叶黄酮作为新生代天然化学产物将是未来的一大研究方向ꎮ郑州大学第一附属医院王兆斌[３９]等通过体外㊁体内和动物模型以及药理实验ꎬ研究了竹叶黄酮在心脑血管诊断中的作用ꎬ研究发现竹叶黄酮对防止脑缺血有一定的作用ꎮ竹叶黄酮有潜力成为预防心脑血管疾病的天然药物ꎮ３)在日化产品中的应用ꎮ竹叶黄酮可以清除自由基㊁抗辐射㊁抑菌和抑制酪氨酸酶活性ꎬ加快细胞的新陈代谢ꎬ延缓表皮组织细胞衰老ꎬ将００１自由基对人体细胞的伤害降到最低ꎻ另外ꎬ皮肤上的色素沉着主要是因为酪氨酸酶会促进酪氨酸转化为多巴色素ꎬ经一系列转化变为黑色素ꎬ竹叶黄酮抑制酪氨酸酶活性ꎬ可以达到美白皮肤等效果ꎮＬｕ等[４０]研究表明竹叶黄酮在皮肤上使用时不会刺激人体的粘膜和皮肤ꎬ绿色安全ꎬ无任何毒副作用ꎬ因此可以将竹叶黄酮抗衰老㊁抗氧化等功能性因子作为一种添加剂应用在护手霜和防晒霜等日化产品中ꎬ达到实物化利用ꎮ４)在其他方面的应用ꎮ竹叶黄酮作为一种具有多重生理功效的新型天然活性物质ꎬ也可应用在畜牧养殖业和农业生产中ꎬ杨仕群等[４１]对竹叶黄酮在养殖业中的应用做了较为详细的阐述ꎮ张运红等[４２]以液体溶剂的形式对辣椒幼苗喷洒一定浓度的竹叶黄酮水溶液ꎬ发现在辣椒发育过程中竹叶黄酮能提高辣椒的抗寒性并促进辣椒的生长ꎮ４㊀竹叶黄酮工业化利用的发展趋势竹叶黄酮类化合物具有独特的生物活性ꎬ在很多行业领域都有较好的应用前景ꎬ因此竹叶黄酮的研究开发一直都是学术界关注的热点ꎮ然而ꎬ在相关研究领域还存在许多尚待解决的问题ꎬ比如竹叶黄酮类化合物的提取率较低ꎬ含量测定方法不完善和应用难以领域产业化等ꎮ下一步研究的重点和方向应是:一是联合提取法或者不同方法协同使用ꎮ目前提取和纯化分离竹叶黄酮的各种方法各有利弊ꎬ可结合各类方法的优点组合成更多的联合提取法或是不同方法协同使用ꎬ筛选出更优㊁更适合的提取和纯化分离的方法ꎬ并应用现代提取㊁分离新工艺进行竹叶黄酮等活性成分的提取和精制ꎬ提高竹叶黄酮提取得率和质量ꎬ增强产品的生物活性和生理功能ꎬ减少杂质和无效成分的副作用ꎮ二是建立高效㊁准确测定竹叶黄酮类化合物含量的方法ꎮ目前竹叶黄酮的测定方法一般采用比色法或液相色谱法ꎬ比色法更为普遍ꎬ经过改进后的比色法能克服一些常规比色法的弊端ꎬ测量结果与ＨＰＬＣ法相当ꎬ但目前还没见到改进比色法和ＨＰＬＣ法二者比较的报道ꎮ三是竹叶黄酮工业化和规模化生产应用ꎮ竹叶黄酮类化合物具有优良的清除氧自由基㊁降低血脂㊁抑制细菌生长繁殖㊁降低表皮组织细胞老化速度和降低心肌缺血风险等功效ꎬ为科研工作者提供了丰富的想象空间ꎬ也为竹叶黄酮类化合物应用于保健食品功能因子㊁膳食补充剂和天然药物的开发及功能定位提供了独到的着力点ꎮ虽然国内外已经有大量关于竹叶黄酮提取方法的研究成果ꎬ但是这些成果存在一定的局限性ꎬ还无法实现工业量产化应用ꎬ未能将其应用到民生领域ꎮ如何快速㊁高效地将竹叶黄酮产业化和规模化也将是下一步研究的重点ꎮ参考文献[１]㊀ＰＥＮＧＰꎬＳＨＥＤ.Ｉｓｏｌａｔｉｏｎꎬｓｔｒｕｃｔｕｒａｌｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎꎬａｎｄｐｏｔｅｎｔｉａｌａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓｏｆｈｅｍｉｃｅｌｌｕｌｏｓｅｓｆｒｏｍｂａｍｂｏｏ:ａｒｅｖｉｅｗ[Ｊ].ＣａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅＰｏｌｙｍｅｒｓꎬ２０１４ꎬ１１２:７０１－７２０.[２]ＨＡＶＳＴＥＥＮＢ.Ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓꎬａｃｌａｓｓｏｆｎａｔｕｒａｌｐｒｏｄｕｃｔｓｏｆｈｉｇｈｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌｐｏｔｅｎｃｙ[Ｊ].ＢｉｏｃｈｅｍｉｃａｌＰｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙꎬ１９８３ꎬ３２(７):１１４１－１１４８.[３]夏玉红ꎬ董普文ꎬ钟耕.竹叶提取物的研究开发现状[Ｊ].中国食品添加剂ꎬ２００９ꎬ７(８):７７－８０.[４]ＸＩＥＪꎬＬＩＮＹＳꎬＳＨＩＸＪꎬｅｔａｌ.Ｍｅｃｈａｎｏｃｈｅｍｉｃａｌ￣ａｓｓｉｓｔｅｄｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｏｆｆｌａｖｏｎｏｉｄｓｆｒｏｍｂａｍｂｏｏ(Ｐｈｙｌｌｏｓｔａｃｈｙｓｅｄｕｌｉｓ)ｌｅａｖｅｓ[Ｊ].ＩｎｄｕｓｔｒｉａｌＣｒｏｐｓａｎｄＰｒｏｄｕｃｔｓꎬ２０１３ꎬ４３:２７６－２８２.[５]魏琦ꎬ王淑英ꎬ汤锋ꎬ等.高效液相色谱法同时测定竹叶中１３种黄酮类化合物(英文)[Ｊ].林业科学ꎬ２０１５ꎬ５１(８):８１－８７.[６]李翱翔ꎬ张加研ꎬ赵一鹤.滇产５种经济竹种竹叶黄酮含量比较及体外抗氧化活性研究[Ｊ].西部林业科学ꎬ２０２３ꎬ５２(４):１５４－１６０.[７]ＺＨＡＮＧＹꎬＬＵＯＺꎬＳＨＡＯＺꎬｅｔａｌ.Ｅｆｆｅｃｔｓｏｆａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔｓｏｆｂａｍｂｏｏｌｅａｖｅｓａｎｄｆｌａｖｏｎｏｉｄｓｏｎ２￣ａｍｉｎｏ￣１￣ｍｅｔｈｙｌ￣６￣ｐｈｅｎｙｌｉｍｉｄａｚｏ[４ꎬ５￣ｂ]ｐｙｒｉｄｉｎｅ(ＰｈＩＰ)ｆｏｒｍａｔｉｏｎｉｎｃｈｅｍｉｃａｌｍｏｄｅｌｓｙｓｔｅｍｓ[Ｊ].ＪｏｕｒｎａｌｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌａｎｄＦｏｏｄＣｈｅｍｉｓｔｒｙꎬ２０１４ꎬ６２(２０):４７９８－４８０２.[８]ＳＡＬＡＳＭＰꎬＣÉＬＩＺＧꎬＧＥＲＯＮＡＺＺＯＨꎬｅｔａｌ.Ａｎｔｉｆｕｎｇａｌａｃｔｉｖｉｔｙｏｆｎａｔｕｒａｌａｎｄｅｎｚｙｍａｔｉｃａｌｌｙ￣ｍｏｄｉｆｉｅｄｆｌａｖｏｎｏｉｄｓｉｓｏｌａｔｅｄｆｒｏｍｃｉｔｒｕｓｓｐｅｃｉｅｓ[Ｊ].ＦｏｏｄＣｈｅｍｉｓｔｒｙꎬ２０１１ꎬ１２４(４):１４１１－１４１５.[９]ＫＲＩＳ￣ＥＴＨＥＲＴＯＮＰＭꎬＫＥＥＮＣＬ.Ｅｖｉｄｅｎｃｅｔｈａｔｔｈｅａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔｆｌａｖｏｎｏｉｄｓｉｎｔｅａａｎｄｃｏｃｏａａｒｅｂｅｎｅｆｉｃｉａｌｆｏｒｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒｈｅａｌｔｈ[Ｊ].ＣｕｒｒｅｎｔＯｐｉｎｉｏｎｉｎＬｉｐｉｄｏｌｏｇｙꎬ２００２ꎬ１３(１):４１－４９.[１０]ＤＡＳＷＡＤＡＫꎬＳＨＥＮＤＡＲＫＡＲＧＲꎬＳＨＥＬＫＥＤＰꎬｅｔａｌ.１０１ＰｈｙｔｏｃｈｅｍｉｃａｌｅｖａｌｕａｔｉｏｎａｎｄａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔｓｔｕｄｙｏｆＤｅｎｄｒｏｃａｌａｍｕｓｓｔｒｉｃｔｕｓｌｅａｆｅｘｔｒａｃｔｓ[Ｊ].ＷｏｒｌｄＪｏｕｒｎａｌｏｆＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌａｎｄＭｅｄｉｃａｌＲｅｓｅａｒｃｈꎬ２０１７ꎬ３(３):１４７－１５２.[１１]李云琴ꎬ赵一鹤.竹笋膳食纤维的研究进展及发展趋势[Ｊ].竹子学报ꎬ２０２２ꎬ４０(４):４４－４９.[１２]何春雷ꎬ罗学平ꎬ李丽ꎬ等.竹叶黄酮提取工艺的研究[Ｊ].四川农业大学学报ꎬ２００６ꎬ２４(４):４０９－４１２.[１３]李坤平ꎬ杨国恩ꎬ潘天玲.正交试验法优化竹叶总黄酮提取工艺研究[Ｊ].广东药学院学报ꎬ２００４ꎬ２０(２):１０２－１０３.[１４]ＷＡＮＧＬꎬＢＡＩＭꎬＱＩＮＹꎬｅｔａｌ.Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｏｆｉｏｎｉｃｌｉｑｕｉｄ￣ｂａｓｅｄｕｌｔｒａｓｏｎｉｃ￣ａｓｓｉｓｔｅｄｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｏｆｆｌａｖｏｎｏｉｄｓｆｒｏｍｂａｍｂｏｏｌｅａｖｅｓ[Ｊ].Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓꎬ２０１８ꎬ２３(９):２３０９.ＤＯＩ:１０.３３９０/ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ２３０９２３０９.[１５]赵洪ꎬ欧秀蓉.纤维素酶提取竹叶黄酮工艺初步研究[Ｊ].广州化工ꎬ２０１５ꎬ４３(１５):８０－８１.[１６]罗春连.复合酶－微波提取绿竹叶黄酮技术及产品开发[Ｊ].福建轻纺ꎬ２００９(９):５２－５４.[１７]陶清ꎬ吕鉴泉.ＣＯ２超临界流体萃取法提取竹叶黄酮的研究[Ｊ].湖北师范学院学报(自然科学版)ꎬ２０１０ꎬ３０(１):９６－９９.[１８]李烨ꎬ朱志强ꎬ集贤ꎬ等.响应面优化超声波法提取竹叶黄酮[Ｊ].西华大学学报(自然科学版)ꎬ２０１９ꎬ３８(５):７８－８３.[１９]许子竞.响应面法优化微波提取毛竹叶黄酮工艺研究[Ｊ].农产品加工ꎬ２０２１(１０):４４－４８.[２０]王博文ꎬ李静静ꎬ巩秋艳ꎬ等.氧化石墨烯辅助乙醇提取竹叶黄酮[Ｊ].过程工程学报ꎬ２０１７ꎬ１７(４):７０９－７１５.[２１]ＷＡＮＮꎬＫＯＵＰꎬＰＡＮＧＨꎬｅｔａｌ.Ｅｎｚｙｍｅｐｒｅｔｒｅａｔｍｅｎｔｃｏｍｂｉｎｅｄｗｉｔｈｕｌｔｒａｓｏｎｉｃ￣ｍｉｃｒｏｗａｖｅ￣ａｓｓｉｓｔｅｄｓｕｒｆａｃｔａｎｔｆｏｒｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｏｆｅｓｓｅｎｔｉａｌｏｉｌａｎｄｆｌａｖｏｎｏｉｄｓｆｒｏｍＢａｅｃｋｅａｆｒｕｔｅｓｃｅｎｓ[Ｊ].ＩｎｄｕｓｔｒｉａｌＣｒｏｐｓａｎｄＰｒｏｄｕｃｔｓꎬ２０２１ꎬ１７４:１１４１７３.ＤＯＩ:１０.１０１６/ｊ.ｉｎｄｃｒｏｐ.２０２１.１１４１７３.[２２]ＪＩＹꎬＲＡＯＧꎬＸＩＥＧ.Ｕｌｔｒａｓｏｕｎｄ￣ａｓｓｉｓｔｅｄａｑｕｅｏｕｓｔｗｏ￣ｐｈａｓｅｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｏｆｔｏｔａｌｆｌａｖｏｎｏｉｄｓｆｒｏｍＴｒｅｍｅｌｌａｆｕｃｉｆｏｒｍｉｓａｎｄａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔａｃｔｉｖｉｔｙｏｆｅｘｔｒａｃｔｅｄｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ[Ｊ].ＰｒｅｐａｒａｔｉｖｅＢｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ＆Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙꎬ２０２２ꎬ５２(９):１０６０－１０６８.[２３]ＸＵＬꎬＨＥＷꎬＬＵＭꎬｅｔａｌ.Ｅｎｚｙｍｅ￣ａｓｓｉｓｔｅｄｕｌｔｒａｓｏｎｉｃ￣ｍｉｃｒｏｗａｖｅｓｙｎｅｒｇｉｓｔｉｃｅｘｔｒａｃｔｉｏｎａｎｄＵＰＬＣ￣ＱＴＯＦ￣ＭＳａｎａｌｙｓｉｓｏｆｆｌａｖｏｎｏｉｄｓｆｒｏｍＣｈｉｎｅｓｅｗａｔｅｒｃｈｅｓｔｎｕｔｐｅｅｌｓ[Ｊ].ＩｎｄｕｓｔｒｉａｌＣｒｏｐｓａｎｄＰｒｏｄｕｃｔｓꎬ２０１８ꎬ１１７:１７９－１８６.[２４]ＺＨＡＮＧＪꎬＹＵＥＬꎬＨＡＹＡＴＫꎬｅｔａｌ.ＰｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｆｌａｖｏｎｏｉｄｆｒｏｍＧｉｎｇｋｏｂｉｌｏｂａｅｘｔｒａｃｔｂｙｚｉｎｃｃｏｍｐｌｅｘａｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄａｎｄｉｔｓｅｆｆｅｃｔｏｎａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔａｃｔｉｖｉｔｙ[Ｊ].ＳｅｐａｒａｔｉｏｎａｎｄＰｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙꎬ２０１０ꎬ７１(３):２７３－２７８.[２５]ＭＡＸꎬＺＨＡＮＧＴꎬＷＥＩＹꎬｅｔａｌ.ＰｒｅｐａｒａｔｉｖｅｉｓｏｌａｔｉｏｎａｎｄｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｃａｌｙｃｏｓｉｎｆｒｏｍＡｓｔｒａｇａｌｕｓｍｅｍｂｒａｎａｃｅｕｓＢｇｅ.ｖａｒ.ｍｏｎｇｈｏｌｉｃｕｓ(Ｂｇｅ.)Ｈｓｉａｏｂｙｈｉｇｈ￣ｓｐｅｅｄｃｏｕｎｔｅｒ￣ｃｕｒｒｅｎｔｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ[Ｊ].ＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙＡꎬ２００２ꎬ９６２(１/２):２４３－２４７.[２６]ＪＩＮＸꎬＬＩＵＭꎬＣＨＥＮＺꎬｅｔａｌ.Ｓｅｐａｒａｔｉｏｎａｎｄｐｕｒｉｆｉｃａ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竹叶黄酮提取工艺的研究
表 3
正交实验方差分析
因素 偏差平方和
乙醇浓度 料液比 提取时间 提取温度 误差
0. 251 0. 054 1 ×10 - 3 0. 005 0. 01
自由度
2 2 2 2 2
F 比 F 临界值 显著性
50. 200 19. 000
3
10. 800 19. 000
3
< 0. 010 19. 000
醇浓度的继续增加 ,黄酮类化合物的提取率下降 ,故 选择乙醇浓度 45 %～75 %为正交实验提取溶剂浓 度范围 。 2. 1. 3 料液比的影响 如图 3 所示 ,当料液比为 1∶10～1∶20 时 ,随料液比增大黄酮提取率增加较快 , 但当料液比大于 1∶30 后 ,提取率趋于稳定 。通过对 提取率 、溶剂用量和能量损耗的综合考虑 ,选用1∶10 ～1∶30 为进一步优化的范围 。
reference to flavonoids production and it was a new way to bamboo leaves precessing.
Key words :bamboo leaves ; flovonoids ; extraction
竹叶黄酮具有抗活性氧自由基能力和类 SOD 活性[1] ,有良好的免疫调节作用 ,能显著增强人体对 不良环境和疾病的抵抗力 ,并且不含任何有害成分 和抗营养因子 ,对人体无毒 、副作用 ,具有极大的安 全性[2 - 3] 。最新研究表明 ,竹叶黄酮还具有明显的 解毒功效[4] 。本文以慈竹竹叶为原料 ,探讨了慈竹 竹叶黄酮的最佳提取工艺参数 。
表 1
正交实验因素与水平
水平
1 2 3
A 浓度 ( %) 45 65 75
竹叶总黄酮的提取和纯化工艺的研究
竹叶总黄酮的提取和纯化工艺的研究
朱宏莉;韦海洪;宋纪蓉;陈邦;任静
【期刊名称】《食品科学》
【年(卷),期】2005(026)008
【摘要】采用L9(34)正交试验设计,以溶剂种类、溶剂浓度、料液比、浸提时间,作为主要考虑因素,确定了竹叶黄酮的最佳提取工艺为:60%丙酮,料液比为1:40的条件下回流浸提3h.其中,溶剂浓度和料液比是两个主要影响因素,其p＜0.01,达到了显著性水平.在此基础上,采用x-5大孔吸附树脂与聚酰胺树脂联用的方法纯化竹叶提取物,最终竹叶总黄酮含量可达78.97%.
【总页数】4页(P158-161)
【作者】朱宏莉;韦海洪;宋纪蓉;陈邦;任静
【作者单位】西北大学生命科学学院,陕西西安710069;西北大学化学系,陕西西安710069
【正文语种】中文
【中图分类】Q946
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