pET-SUMO大肠杆菌表达载体说明
pET表达载体
表达载体pETA.pET系统是有史以来在E.coli中克隆表达重组蛋白的功能最强大的系统。
目的基因被克隆到pET质粒载体上，受噬菌体T7强转录及翻译(可选择)信号控制；表达由宿主细胞提供的T7 RNA聚合酶诱导。
T7 RNA 聚合酶机制十分有效并具选择性：充分诱导时，几乎所有的细胞资源都用于表达目的蛋白；诱导表达后仅几个小时，目的蛋白通常可以占到细胞总蛋白的50%以上。
尽管该系统极为强大，却仍能很容易地通过降低诱导物的浓度来削弱蛋白表达。
降低表达水平可能可以提高某些目的蛋白的可溶部分产量。
该系统的另一个重要优点是在非诱导条件下，可以使目的基因完全处于沉默状态而不转录。
用不含T7 RNA聚合酶的宿主菌克隆目的基因，即可避免因目的蛋白对宿主细胞的可能毒性造成的质粒不稳定(详见I. F.部分)。
如果用非表达型宿主细胞克隆，可以通过两种方法启动目的蛋白的表达：用带有受λpL 和pI 启动子控制的T7 RNA聚合酶的λCE6噬菌体侵染宿主细胞，或者将质粒转入带有受lacUV5 控制的T7 RNA聚合酶基因的表达型细胞。
在第二种情形下，可以通过在细菌培养基中加入IPTG 来启动表达。
尽管有时(例如非毒性目的蛋白) 可以直接将目的基因克隆到表达型宿主细胞中，但这种策略并不是通用做法。
两种T7启动子以及多种拥有不同抑制本底表达水平的宿主细胞共同构成了一个极为灵活而有效的系统，使各种目的蛋白得以最优化表达。
所有pET载体以及相关产品均以试剂盒形式提供，用户可以很方便地进行克隆、表达检测以及纯化目的蛋白的所有操作。
pET 表达系统包括质粒和宿主菌。
您可参考系统组成部分，选择符合具体需要的载体/宿主菌最佳组合。
B.使用许可及协议Novagen的T7表达系统，包括细菌、噬菌体和带有T7 RNA 聚合酶基因的质粒，均依照非商业用户应用声明相应条款有条件提供。
详情请垂询。
C. 系统组成pET表达系统提供目的基因克隆和表达所需的核心试剂。
碧云天SUMO Protease产品说明书
SUMO Protease产品简介：碧云天生产的SUMO Protease (Small Ubiquitin-related Modifier Protease)，是一种重组表达的高度特异性识别SUMO 化修饰或SUMO 结构域，并水解SUMO 羧基端(C 端) x-Gly-Gly-x 肽段中Gly-Gly 后的肽键，从而去除SUMO 化修饰或者去除SUMO 融合表达蛋白中SUMO 结构域的蛋白酶。
本产品是一种来自Saccharomyces cerevisiae 的高活性的半胱氨酸蛋白酶(cysteinyl protease) Ulp1 (Ubl-specific protease 1, ubiquitin-like protein-specific protease 1)基因片段的重组表达蛋白。
SUMO 是一种泛素样蛋白(Ubiquitin-like Protein)，是一种非常常见蛋白翻译后修饰(post-translation modification, PTM)，对于蛋白的稳定性、生物学功能有重要的调节作用。
SUMO 也常被作为一种非常高效和有用的标签用于蛋白的表达纯化，例如碧云天的D2918 pET-N-His-PreScission-SUMO 质粒就是一种在N 端同时表达His 标签和SUMO 标签的原核表达质粒。
将SUMO 作为标签和目的蛋白的氨基端(N 端)进行融合表达时可以改善目的蛋白的折叠，提高目的蛋白的可溶性和产量。
随后使用SUMO Protease 对SUMO 融合蛋白进行酶切,去除SUMO 标签就可以获得完全没有标签蛋白干扰的目的蛋白。
因此SUMO Protease 可以高效且特异性地用于从重组融合蛋白上完全切割去除SUMO 标签，从而最大限度地减少了对目的蛋白结构和功能的影响。
SUMO Protease 进行酶切时的最适pH 值为8.0，最佳酶切温度为30ºC 。
大肠杆菌表达系统
调控方式为控制 T7 RNA 聚合 酶的启动子调控类型
ColE1 ori
AmpR
T7 启动子
目的基因
热诱导
T7 RNA 聚合酶
PL 启动子 T7 RNA 聚合酶基因
cI857
p15A ori
KanR
T7 表达系统存在的问题
T7 表达系统表达目的基因的水平是目前所有表达系统中最高的，但 也不可避免出现在相对较高的本底转录，如果目的基因产物对大肠杆 菌宿主有毒性，会影响细胞的生长。
因此 PL 、 PR 表达系统都选用温度敏感突变体 cI 857(ts) 的基因产物 来调控 PL 、 PR 启动子的转录。
在较低温度（30℃）时以活性形式存在 在较高温度（42℃）时失活脱落
PL 和 PR 表达系统
宿主菌中没有 cI 基因产物，PL、PR 启动子的高强度直接转录，带有PL
或 PR 启动子的表达载体在普通大肠杆菌中相当不稳定。
其他表达系统
pH调控型 采用大肠杆菌赖氨酸脱羧酶基因 cadA 启动子构建表达载体。
cadA 启动子受培养基中 H+ 浓度，即 pH 值调控。（在pH﹥8 时抑 制，pH ﹤ 6时激活，pH = 6时转录活力最高）。
用噬菌体 DE3 的溶源菌作为表 达载体的宿主菌，调控方式为 化学诱导型，类似于 Lac 表达 系统。
E.Coli （DE3）
T7 启动子
目的基因
IPTG 诱导
T7 RNA 聚合酶
lac 启动子 T7 RNA 聚合酶基因
T7 表达系统
转录调控的机理 温度诱导型 PL 启动子控制 T7 RNA 聚合 酶基因，通过热诱导方式激发 T7 噬菌体启动子的转录。
斑马鱼p53基因原核表达载体的构建及其在大肠杆菌中的表达
p53 基 因 在 大 肠 杆 菌 中 成 功 表 达 ，表 达 的 p53 融 合 蛋 白 分 子 量 大 约 为 53kD，透 析 复 性 后 获 得 了 高 纯 度
可溶性的 p53 蛋白。
关键词：p53 基因；斑马鱼；原核表达
中 图 分 类 号 ：Q786
文 献 标 识 码 ：A
文 章 编 号 ：0439－8114 （2010）03－0526-03
胞。 挑取单克隆菌落接种于 LB 培养基中，37℃摇荡 过夜， 转接扩大培养至菌液 OD600 达 0．5～0．8 时，加 入 终 浓 度 为 1 mmol ／ L 的 IPTG，37℃ 诱 导 1、3、5h 后，分别取样进行 SDS－PAGE 分析，5 h 后收集菌体 溶 于 溶 菌 缓 冲 液 （50 mmol ／ L NaH2PO4，300 mmol ／ L NaCl，10 mmol ／ L 咪唑，pH 值 8．0） 中， 超声破碎菌 体 ，12 000 r ／ min 离 心 20 min， 分 别 取 上 清 和 沉 淀 进行 SDS－PAGE 分析。 1．2．6 p53 蛋 白 的 变 性 纯 化 及 复 性 参 照 Qiagen 镍柱蛋白纯化操作步骤，在变性条件下纯化以包涵 体形式表达的 p53 蛋白。 采用尿素梯度透析法对纯 化的 p53 蛋白进行复性，尿素浓度梯度分别为 8、6、 4、2，0M。 首先将变性纯化的 p53 蛋白用变性结合缓 冲 液 （8 mol ／ L 尿 素 ，100 mmol ／ L NaH2PO4，100mM Tris－HCl， pH 值 8．0）稀释 5 倍后装入透析袋中，放 置在透析液中 （100 mmol ／ L Tris－HCl，100 mmol ／ L NaH2PO4，1 mmol ／ L EDTA，2 mmol ／ L 还原型谷胱甘 肽，0．2 mmol ／ L 氧化型谷胱甘肽，20％丙三醇，1％甘 氨酸，pH 值 8．0），4℃磁力搅拌透析 12 h， 每隔 12 h 更换含低浓度尿素的透析液，其他成分不变，最后 将 p53 透析至水中，离心去除沉淀，复性的 p53 蛋 白 冷 冻 干 燥 后 经 12％ SDS－PAGE 电 泳 检 测 后 于－ 80℃保存。
PET系统_原核表达详细总结
04
应用前景展望
在生物制品领域的应用前景
1 2
疫苗生产
利用PET系统进行原核表达，可实现疫苗抗原的 高效制备，降低生产成本和时间。
抗体药物生产
通过PET系统表达抗体，能够简化抗体药物的生 产流程，提高生产效率和产品质量。
3
生物制品质量控制
PET系统可用于生物制品质量控制，如蛋白质结 构鉴定、功能检测和残留物质检测等。
疾病机制研究
PET技术可用于研究疾病的发 生机制、发展过程和治疗方法 ，有助于深入了解疾病的本质
。
医学影像诊断
PET技术能够提供高灵敏度和特异 性的医学影像，有助于肿瘤、神 经系统疾病等疾病的早期诊断。
生物医学材料研究
通过PET技术对生物医学材料进行 标记和检测，能够提高材料的安全 性和有效性。
05
培养基
提供实验菌种生长和繁殖所需的营 养成分。
试剂和仪器
包括各种分子生物学试剂和细胞培 养设备，用于实验操作。
实验方法
活性检测
通过生物学活性检测，评估目的蛋白的功 能和效果。
目的基因克隆
将目的基因从染色体或质粒上克隆到表达 载体中。
表达载体转化
将克隆好的表达载体转化到实验菌种中。
蛋白纯化
采用各种纯化技术，将目的蛋白从细胞中 分离出来。
诱导表达
通过添加诱导剂或其他方法，启动目的基 因的表达。
02
实验结果
pet系统表达的蛋白质量分析
总结词
在利用PET系统进行原核表达的过程中，需要关注蛋白的质量和产量。
详细描述
通过SDS-PAGE和Western Blot分析，可以检测到目标蛋白的分子量标准，同时利用定量蛋白试剂盒可以测定 其浓度。
pET-32c(+)大肠杆菌表达载体说明
pET-32c(+)编号 名称北京华越洋VECT-‐600 pET-‐32c(+)pET32c载体基本信息别名: pET32c, p et 32c质粒类型: 大肠杆菌蛋白表达表达水平: 高克隆方法: 多克隆位点，限制性内切酶载体大小: 5901bp5' 测序引物: T75' 测序引物序列: 5'-‐TAATACGACTCACTATAGGG-‐3'载体标签: thioredoxin (N端); H is (中间和C端) 载体抗性: Ampicillin备注: Production o f s oluble, a ctive t arget p roteins; N-‐term t hrombin c leavage s ite; Nterm e nterokinase c leavage s ite; a,b,c v ary b y M CS稳定性: 瞬时表达 Transient 组成型: 组成型 Constitutive 病毒/非病毒: 非病毒pET32c载体质粒图谱和多克隆位点信息pET32c载体简介The pET-‐32 series is designed for cloning and high-‐level expression of peptide sequences fused with t he 109aa T rx•Tag™ thioredoxin p rotein (1). C loning s ites a re a vailable f or p roducing f usion proteins a lso c ontaining c leavable H is•Tag® a nd S•Tag™ sequences f or d etection a nd p urification. Unique sites are shown on the circle map. Note that the sequence is numbered by the pBR322 convention, so the T7 expression region is reversed on the circle map. The cloning/expression region of the coding strand transcribed by T7 RNA polymerase is shown below. The f1 origin is oriented s o t hat i nfection w ith h elper p hage w ill p roduce v irions c ontaining s ingle-‐stranded D NA that corresponds to the coding strand. Therefore, single-‐stranded sequencing should be performed u sing t he T7 t erminator p rimer.pET32c载体序列ORIGIN1 ATCCGGATAT AGTTCCTCCT TTCAGCAAAA AACCCCTCAA GACCCGTTTA GAGGCCCCAA 61 GGGGTTATGC TAGTTATTGC TCAGCGGTGG CAGCAGCCAA CTCAGCTTCC TTTCGGGCTT 121 TGTTAGCAGC CGGATCTCAG TGGTGGTGGT GGTGGTGCTC GAGTGCGGCC GCAAGCTTGT 181 CGACGGAGCT CGAATTCGGA TCCACAGATA TCCCATGGCC TTGTCGTCGT CGTCGGTACC 241 CAGATCTGGG CTGTCCATGT GCTGGCGTTC GAATTTAGCA GCAGCGGTTT CTTTCATACC 301 AGAACCGCGT GGCACCAGAC CAGAAGAATG ATGATGATGA TGGTGCATAT GGCCAGAACC 361 AGAACCGGCC AGGTTAGCGT CGAGGAACTC TTTCAACTGA CCTTTAGACA GTGCACCCAC 421 TTTGGTTGCC GCCACTTCAC CGTTTTTGAA CAGCAGCAGA GTCGGGATAC CACGGATGCC481 ATATTTCGGC GCAGTGCCAG GGTTTTGATC GATGTTCAGT TTTGCAACGG TCAGTTTGCC541 CTGATATTCG TCAGCGATTT CATCCAGAAT CGGGGCGATC ATTTTGCACG GACCGCACCA 601 CTCTGCCCAG AAATCGACGA GGATCGCCCC GTCCGCTTTG AGTACATCCG TGTCAAAACT 661 GTCGTCAGTC AGGTGAATAA TTTTATCGCT CATATGTATA TCTCCTTCTT AAAGTTAAAC 721 AAAATTATTT CTAGAGGGGA ATTGTTATCC GCTCACAATT CCCCTATAGT GAGTCGTATT 781 AATTTCGCGG GATCGAGATC GATCTCGATC CTCTACGCCG GACGCATCGT GGCCGGCATC 841 ACCGGCGCCA CAGGTGCGGT TGCTGGCGCC TATATCGCCG ACATCACCGA TGGGGAAGAT 901 CGGGCTCGCC ACTTCGGGCT CATGAGCGCT TGTTTCGGCG TGGGTATGGT GGCAGGCCCC 961 GTGGCCGGGG GACTGTTGGG CGCCATCTCC TTGCATGCAC CATTCCTTGC GGCGGCGGTG 1021 CTCAACGGCC TCAACCTACT ACTGGGCTGC TTCCTAATGC AGGAGTCGCA TAAGGGAGAG 1081 CGTCGAGATC CCGGACACCA TCGAATGGCG CAAAACCTTT CGCGGTATGG CATGATAGCG 1141 CCCGGAAGAG AGTCAATTCA GGGTGGTGAA TGTGAAACCA GTAACGTTAT ACGATGTCGC 1201 AGAGTATGCC GGTGTCTCTT ATCAGACCGT TTCCCGCGTG GTGAACCAGG CCAGCCACGT 1261 TTCTGCGAAA ACGCGGGAAA AAGTGGAAGC GGCGATGGCG GAGCTGAATT ACATTCCCAA 1321 CCGCGTGGCA CAACAACTGG CGGGCAAACA GTCGTTGCTG ATTGGCGTTG CCACCTCCAG 1381 TCTGGCCCTG CACGCGCCGT CGCAAATTGT CGCGGCGATT AAATCTCGCG CCGATCAACT 1441 GGGTGCCAGC GTGGTGGTGT CGATGGTAGA ACGAAGCGGC GTCGAAGCCT GTAAAGCGGC 1501 GGTGCACAAT CTTCTCGCGC AACGCGTCAG TGGGCTGATC ATTAACTATC CGCTGGATGA 1561 CCAGGATGCC ATTGCTGTGG AAGCTGCCTG CACTAATGTT CCGGCGTTAT TTCTTGATGT 1621 CTCTGACCAG ACACCCATCA ACAGTATTAT TTTCTCCCAT GAAGACGGTA CGCGACTGGG 1681 CGTGGAGCAT CTGGTCGCAT TGGGTCACCA GCAAATCGCG CTGTTAGCGG GCCCATTAAG 1741 TTCTGTCTCG GCGCGTCTGC GTCTGGCTGG CTGGCATAAA TATCTCACTC GCAATCAAAT 1801 TCAGCCGATA GCGGAACGGG AAGGCGACTG GAGTGCCATG TCCGGTTTTC AACAAACCAT 1861 GCAAATGCTG AATGAGGGCA TCGTTCCCAC TGCGATGCTG GTTGCCAACG ATCAGATGGC 1921 GCTGGGCGCA ATGCGCGCCA TTACCGAGTC CGGGCTGCGC GTTGGTGCGG ACATCTCGGT 1981 AGTGGGATAC GACGATACCG AAGACAGCTC ATGTTATATC CCGCCGTTAA CCACCATCAA 2041 ACAGGATTTT CGCCTGCTGG GGCAAACCAG CGTGGACCGC TTGCTGCAAC TCTCTCAGGG 2101 CCAGGCGGTG AAGGGCAATC AGCTGTTGCC CGTCTCACTG GTGAAAAGAA AAACCACCCT 2161 GGCGCCCAAT ACGCAAACCG CCTCTCCCCG CGCGTTGGCC GATTCATTAA TGCAGCTGGC 2221 ACGACAGGTT TCCCGACTGG AAAGCGGGCA GTGAGCGCAA CGCAATTAAT GTAAGTTAGC 2281 TCACTCATTA GGCACCGGGA TCTCGACCGA TGCCCTTGAG AGCCTTCAAC CCAGTCAGCT 2341 CCTTCCGGTG GGCGCGGGGC ATGACTATCG TCGCCGCACT TATGACTGTC TTCTTTATCA 2401 TGCAACTCGT AGGACAGGTG CCGGCAGCGC TCTGGGTCAT TTTCGGCGAG GACCGCTTTC 2461 GCTGGAGCGC GACGATGATC GGCCTGTCGC TTGCGGTATT CGGAATCTTG CACGCCCTCG 2521 CTCAAGCCTT CGTCACTGGT CCCGCCACCA AACGTTTCGG CGAGAAGCAG GCCATTATCG 2581 CCGGCATGGC GGCCCCACGG GTGCGCATGA TCGTGCTCCT GTCGTTGAGG ACCCGGCTAG 2641 GCTGGCGGGG TTGCCTTACT GGTTAGCAGA ATGAATCACC GATACGCGAG CGAACGTGAA 2701 GCGACTGCTG CTGCAAAACG TCTGCGACCT GAGCAACAAC ATGAATGGTC TTCGGTTTCC 2761 GTGTTTCGTA AAGTCTGGAA ACGCGGAAGT CAGCGCCCTG CACCATTATG TTCCGGATCT 2821 GCATCGCAGG ATGCTGCTGG CTACCCTGTG GAACACCTAC ATCTGTATTA ACGAAGCGCT 2881 GGCATTGACC CTGAGTGATT TTTCTCTGGT CCCGCCGCAT CCATACCGCC AGTTGTTTAC 2941 CCTCACAACG TTCCAGTAAC CGGGCATGTT CATCATCAGT AACCCGTATC GTGAGCATCC 3001 TCTCTCGTTT CATCGGTATC ATTACCCCCA TGAACAGAAA TCCCCCTTAC ACGGAGGCAT 3061 CAGTGACCAA ACAGGAAAAA ACCGCCCTTA ACATGGCCCG CTTTATCAGA AGCCAGACAT 3121 TAACGCTTCT GGAGAAACTC AACGAGCTGG ACGCGGATGA ACAGGCAGAC ATCTGTGAAT3181 CGCTTCACGA CCACGCTGAT GAGCTTTACC GCAGCTGCCT CGCGCGTTTC GGTGATGACG 3241 GTGAAAACCT CTGACACATG CAGCTCCCGG AGACGGTCAC AGCTTGTCTG TAAGCGGATG 3301 CCGGGAGCAG ACAAGCCCGT CAGGGCGCGT CAGCGGGTGT TGGCGGGTGT CGGGGCGCAG 3361 CCATGACCCA GTCACGTAGC GATAGCGGAG TGTATACTGG CTTAACTATG CGGCATCAGA 3421 GCAGATTGTA CTGAGAGTGC ACCATATATG CGGTGTGAAA TACCGCACAG ATGCGTAAGG 3481 AGAAAATACC GCATCAGGCG CTCTTCCGCT TCCTCGCTCA CTGACTCGCT GCGCTCGGTC 3541 GTTCGGCTGC GGCGAGCGGT ATCAGCTCAC TCAAAGGCGG TAATACGGTT ATCCACAGAA 3601 TCAGGGGATA ACGCAGGAAA GAACATGTGA GCAAAAGGCC AGCAAAAGGC CAGGAACCGT 3661 AAAAAGGCCG CGTTGCTGGC GTTTTTCCAT AGGCTCCGCC CCCCTGACGA GCATCACAAA 3721 AATCGACGCT CAAGTCAGAG GTGGCGAAAC CCGACAGGAC TATAAAGATA CCAGGCGTTT 3781 CCCCCTGGAA GCTCCCTCGT GCGCTCTCCT GTTCCGACCC TGCCGCTTAC CGGATACCTG 3841 TCCGCCTTTC TCCCTTCGGG AAGCGTGGCG CTTTCTCATA GCTCACGCTG TAGGTATCTC 3901 AGTTCGGTGT AGGTCGTTCG CTCCAAGCTG GGCTGTGTGC ACGAACCCCC CGTTCAGCCC 3961 GACCGCTGCG CCTTATCCGG TAACTATCGT CTTGAGTCCA ACCCGGTAAG ACACGACTTA 4021 TCGCCACTGG CAGCAGCCAC TGGTAACAGG ATTAGCAGAG CGAGGTATGT AGGCGGTGCT 4081 ACAGAGTTCT TGAAGTGGTG GCCTAACTAC GGCTACACTA GAAGGACAGT ATTTGGTATC 4141 TGCGCTCTGC TGAAGCCAGT TACCTTCGGA AAAAGAGTTG GTAGCTCTTG ATCCGGCAAA 4201 CAAACCACCG CTGGTAGCGG TGGTTTTTTT GTTTGCAAGC AGCAGATTAC GCGCAGAAAA 4261 AAAGGATCTC AAGAAGATCC TTTGATCTTT TCTACGGGGT CTGACGCTCA GTGGAACGAA 4321 AACTCACGTT AAGGGATTTT GGTCATGAGA TTATCAAAAA GGATCTTCAC CTAGATCCTT 4381 TTAAATTAAA AATGAAGTTT TAAATCAATC TAAAGTATAT ATGAGTAAAC TTGGTCTGAC 4441 AGTTACCAAT GCTTAATCAG TGAGGCACCT ATCTCAGCGA TCTGTCTATT TCGTTCATCC 4501 ATAGTTGCCT GACTCCCCGT CGTGTAGATA ACTACGATAC GGGAGGGCTT ACCATCTGGC 4561 CCCAGTGCTG CAATGATACC GCGAGACCCA CGCTCACCGG CTCCAGATTT ATCAGCAATA 4621 AACCAGCCAG CCGGAAGGGC CGAGCGCAGA AGTGGTCCTG CAACTTTATC CGCCTCCATC 4681 CAGTCTATTA ATTGTTGCCG GGAAGCTAGA GTAAGTAGTT CGCCAGTTAA TAGTTTGCGC 4741 AACGTTGTTG CCATTGCTGC AGGCATCGTG GTGTCACGCT CGTCGTTTGG TATGGCTTCA 4801 TTCAGCTCCG GTTCCCAACG ATCAAGGCGA GTTACATGAT CCCCCATGTT GTGCAAAAAA 4861 GCGGTTAGCT CCTTCGGTCC TCCGATCGTT GTCAGAAGTA AGTTGGCCGC AGTGTTATCA 4921 CTCATGGTTA TGGCAGCACT GCATAATTCT CTTACTGTCA TGCCATCCGT AAGATGCTTT 4981 TCTGTGACTG GTGAGTACTC AACCAAGTCA TTCTGAGAAT AGTGTATGCG GCGACCGAGT 5041 TGCTCTTGCC CGGCGTCAAT ACGGGATAAT ACCGCGCCAC ATAGCAGAAC TTTAAAAGTG 5101 CTCATCATTG GAAAACGTTC TTCGGGGCGA AAACTCTCAA GGATCTTACC GCTGTTGAGA 5161 TCCAGTTCGA TGTAACCCAC TCGTGCACCC AACTGATCTT CAGCATCTTT TACTTTCACC 5221 AGCGTTTCTG GGTGAGCAAA AACAGGAAGG CAAAATGCCG CAAAAAAGGG AATAAGGGCG 5281 ACACGGAAAT GTTGAATACT CATACTCTTC CTTTTTCAAT ATTATTGAAG CATTTATCAG 5341 GGTTATTGTC TCATGAGCGG ATACATATTT GAATGTATTT AGAAAAATAA ACAAATAGGG 5401 GTTCCGCGCA CATTTCCCCG AAAAGTGCCA CCTGAAATTG TAAACGTTAA TATTTTGTTA 5461 AAATTCGCGT TAAATTTTTG TTAAATCAGC TCATTTTTTA ACCAATAGGC CGAAATCGGC 5521 AAAATCCCTT ATAAATCAAA AGAATAGACC GAGATAGGGT TGAGTGTTGT TCCAGTTTGG 5581 AACAAGAGTC CACTATTAAA GAACGTGGAC TCCAACGTCA AAGGGCGAAA AACCGTCTAT 5641 CAGGGCGATG GCCCACTACG TGAACCATCA CCCTAATCAA GTTTTTTGGG GTCGAGGTGC 5701 CGTAAAGCAC TAAATCGGAA CCCTAAAGGG AGCCCCCGAT TTAGAGCTTG ACGGGGAAAG 5761 CCGGCGAACG TGGCGAGAAA GGAAGGGAAG AAAGCGAAAG GAGCGGGCGC TAGGGCGCTG5821 GCAAGTGTAG CGGTCACGCT GCGCGTAACC ACCACACCCG CCGCGCTTAA TGCGCCGCTA 5881 CAGGGCGCGT CCCATTCGCC A//其他大肠杆菌表达载体：pBV221 ptdTomato pET-‐52b(+) pAmCyanpDsRed-‐Express2 pBV220 pCold-‐GST pColdS-‐SUMOpCold T F pCold I V pCold I II pCold I IpCold I pE-‐SUMO pCold-‐ProS2 pBAD102/D-‐TOPOpBAD202/D-‐TOPO pACYC184 pBAD/Thio-‐TOPO pBad/Myc-‐His CpBad/Myc-‐His B pBad/Myc-‐His A pBad/His C pBad/His BpBad/His A pBAD-‐TOPO pET-‐23b(+) pET-‐23a(+)pET-‐23c(+) pET-‐23(+) pET-‐12b(+) pET-‐12c(+)pET-‐12a(+) pET-‐11b(+) pET-‐11a(+) pET-‐11c(+)pBad24 pQE-‐82L pQE-‐81L pQE-‐80LpQE-‐32 pQE-‐9 pQE-‐16 pQE-‐31pQE-‐60 pQE-‐70 pQE-‐40 pET-‐51b(+)pET-‐50b(+) pET-‐49b(+) pET-‐48b(+) pET-‐47b(+)pET-‐26b(+) pET-‐32a(+) pET-‐21b(+) pET-‐22b(+)pET-‐14b pET-‐16b pET-‐15b pET-‐19bpET-‐20b(+) pET-‐21d(+) pET-‐21c(+) pET-‐21b(+)pET-‐21a(+) pET-‐24a(+) pET-‐24d(+) pET-‐25b(+)pET-‐27b(+) pET-‐28a(+) pET-‐30a(+) pET-‐42a(+)pET-‐43.1c(+) pET-‐43.1b(+) pET-‐43.1a(+) pET-‐44a(+)pET-‐44c(+) pET-‐46 E K/LIC pET-‐37b(+) pTrcHis2 CpTrcHis2 B pTrcHis2 A pET303/CT-‐His pET302/NT-‐HispRSET-‐CFP pRSET-‐EmGFP pRSET-‐BFP pGFPuvpET300/NT-‐DEST pET301/CT-‐DEST pGEM-‐T pBad43pGEX-‐4T-‐3 pGEX-‐5X-‐2 pBlueScript S K(+) pG-‐Tf2pG-‐KJE8 pGro7 pET-‐SUMO pSE380pET-‐17b pET102/D-‐TOPO pCDFDuet-‐1 pMAL-‐p5xpTf16 pET-‐28c(+) pBluescript I I S K(+) pET-‐30b(+)pSUMO pProEX H Tc pProEX H Tb pProEX H TapKD3 pKD13 pKD46 pTYB1pTYB2 pTWIN2 pBluescript I I K S(-‐) pTYB12pMAL-‐p5e pACYCDuet-‐1 pEGM-‐11ZF(+) pEGM-‐7ZF(+)PinPoint X a-‐3 PinPoint X a-‐2 PinPoint X a-‐1 pSP73pSP64 pTWIN1 pTYB11 pTXB1pET-‐5b(+) pBad/gIII C pBad/gIII B pBad/gIII ApET-‐5a(+) pMal-‐p4X pMal-‐p2G pkk223-‐3pkk232-‐8 pCYB1 pEZZ18 pBAD18pMAL-‐c5x pMal-‐p2E pMal-‐p2X pET-‐44 E K/LICpET-‐43.1 E K/LIC pET-‐41 E K/LIC pMal-‐c4X pTrcHis BpET-‐31b(+) pET-‐3b(+) pET-‐41a(+) pGEX-‐3XpGEX-‐4T-‐2 pETDuet-‐1 pGEX-‐4T-‐1 pTrc99a pET-‐28b(+) pET-‐His pALEX a,b,c pACYC177 pBR322 pKD4 pKD20 pMXB10 pEcoli-‐6xHN-‐GFPuv pKJE7 pRSET B pGEX-‐KG pGEX-‐2T pRSFDuet-‐1 pCOLADuet-‐1 pTrcHis C pTrcHis A pET-‐41b(+) pET-‐42b(+) pET-‐3a(+) pGEX-‐6P-‐3 pGEX-‐6P-‐2 pGEX-‐6P-‐1 pGEX-‐5X-‐3 pGEX-‐5X-‐1 pGEX-‐2TK pRSET A pMal-‐c2G pMal-‐c2E pMal-‐c2X pRSET C pQE-‐30pET-‐45b(+) pET-‐44b(+) pET-‐42c(+) pET-‐41c(+) pET-‐40b(+) pET-‐33b(+) pET-‐39b(+) pET-‐32 E K/LIC pET-‐32 X a/LIC pET-‐32c(+) pET-‐32b(+) pET-‐30 X a/LIC pET-‐30 E K/LIC pET-‐30c(+) pET-‐29c(+) pET-‐29b(+) pET-‐29a(+) pET-‐24c(+) pET-‐24b(+) pET-‐24(+) pET-‐23d(+) pET-‐11d(+) pBad33。
小分子泛素相关修饰物SUMO融合外源蛋白表达的研究进展
文章编号：2096-0387 (2018) 03-0152-03第4卷第3期 生物化工Vol.4 No.32018 年 6 月Biological Chemical EngineeringJun. 2018小分子泛素相关修饰物SUM O 融合外源蛋白表达的研究进展荣雅昕，王英超'张耀方，卢顺娇，周倩，陈慧慧(天津农学院基础科学学院，天津300384)摘要：S U M 0 (类泛素蛋白修饰分子）是一类具有高度保守序列的低分子量蛋白。
作为融合标签在蛋白质的融合表达得到 了广泛应用。
本文对SUM0融合表达系统的优点进行概述，并综述了其在原核生物和真核生物外源蛋白融合表达的研究情况。
关键词：融合外源蛋白；SU M 0;研究进展 中图分类号：Q786文献标志码：AResearch Progress on the Fusion of Foreign Protein by Small Molecule Ubiquitin PeptideRong Ya -xin , Wang Ying-chao , Zhang Yao -fang , Lu Shun -jiao , Zhou Qian,Chen H ui-hui(College of Basic Science , Tianjin Agriculture University , Tianjin 300384)Abstract ： SUMOwas a class of low molecular weight proteins with highly conserved sequences . As a fusion label , the fusion expression of protein has been widely used . In this paper , the advantages of SUMO fusion expression system were summarized and the progress in the fusion expression of exogenous proteins in prokaryotes and eukaryotes was reviewed .Key words ： Fusion of exogenous protein;Small ubiquitin-related modifer;Research progressSUMO 是存在于真核生物中起相关修饰作用的 一类蛋白质，具有调节蛋白转运、相互作用，维持基 因完整性等多种功能[1_3]。
SUMO蛋白酶活性片段的表达、纯化及活性测定
SUMO蛋白酶活性片段的表达、纯化及活性测定
SUMO蛋白酶被认为在多种细胞过程中起着调节作用。
为了
进一步研究SUMO蛋白酶的生物学功能，需要进行其活性片
段的表达、纯化及活性测定。
首先，可以使用质粒构建技术从人类cDNA库中克隆SUMO
蛋白酶的一个片段，如Ulp1，Ulp2或Ulp3。
将其插入到表达
载体中，并进行适当的序列验证。
接下来，需要选择适当的宿主细胞进行表达。
常用的宿主细胞为大肠杆菌，但也存在其他表达系统，如酵母菌表达系统。
通过在表达时添加不同的诱导剂，可以控制蛋白的表达量和时机。
之后，需要对表达的蛋白进行纯化。
可以利用亲和纯化柱进行初步的纯化，然后再使用离子交换、凝胶过滤和透析等方式进行进一步的纯化。
纯化后的蛋白需要经过SDS-PAGE和Western blot验证。
最后，需要对SUMO蛋白酶活性片段进行活性测定。
可以观
察其对SUMO修饰蛋白的去SUMO化作用。
可以通过Western blot、荧光标记或质谱等方法进行定量。
活性测定的
结果可以用于进一步研究SUMO蛋白酶的生物学功能及调节
机制。
在表达、纯化和活性测定这一系列实验中，需要严格控制实验条件和研究方法。
同时，还需要注意跟踪和记录实验结果，以便后续分析和讨论。
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pET-SUMO编号 载体名称北京华越洋生物VECT4790 pET-‐SUMOpETsumo载体基本信息载体名称: pET-‐SUMO质粒类型: 大肠杆菌表达载体高拷贝/低拷贝: 低拷贝启动子: T7 和 lacO克隆方法: TA C loning载体大小: 5643bp5' 测序引物及序列: T7 F orward3' 测序引物及序列: -‐-‐载体标签: His T ag(6x)；SUMO T ag载体抗性: 卡那霉素筛选标记: -‐-‐备注: 宿主菌株BL21(DE3)；IPTG诱导 稳定性: -‐-‐组成型: 诱导型病毒/非病毒: 非病毒pETsumo载体质粒图谱和多克隆位点信息pETsumo载体简介The Champion pET-‐SUMO Expression System produces the highest levels of soluble protein i n E. c oli. I t u tilizes a s mall u biquitin-‐related m odifier (SUMO) f usion, b elonging t o the growing family of ubiquitin-‐related proteins, to enhance the solubility of expressed fusion proteins. In contrast to ubiquitin, SUMO is involved in the stabilization and localization of proteins in vivo. After expression, the 11 kd SUMO moiety can be cleaved by the highly specific and active SUMO (ULP-‐1) protease at the carboxyl terminal, producing a native protein*. The Champion pET SUMO Protein and Peptide Expression System o ffers:Greatly enhanced solubility with an N-‐terminal SUMO fusionHighly efficient cleavage-‐ produces n ative p rotein o f i nterest w ith S UMO (ULP-‐1) p rotease*Highly s pecific c leavage-‐ eliminates the chance of your protein of interest being internally digested, regardless of its a mino a cid s equenceSignificantly i ncreased s tability w ith S UMO f usion-‐can b e u sed f or small peptide productionT7lac promoter for high-‐level protein expressionN-‐terminal 6xHis t ag f or p rotein d etection a nd p urification.pETsumo载体序列CAAGGAGATGGCGCCCAACAGTCCCCCGGCCACGGGGCCTGCCACCATACCCACGCCGAAACAAGCGCTC ATGAGCCCGAAGTGGCGAGCCCGATCTTCCCCATCGGTGATGTCGGCGATATAGGCGCCAGCAACCGCAC CTGTGGCGCCGGTGATGCCGGCCACGATGCGTCCGGCGTAGAGGATCGAGATCTCGATCCCGCGAAATTA ATACGACTCACTATAGGGGAATTGTGAGCGGATAACAATTCCCCTCTAGAAATAATTTTGTTTAACTTTA AGAAGGAGATATACATATGGGCAGCAGCCATCATCATCATCATCACGGCAGCGGCCTGGTGCCGCGCGGC AGCGCTAGCATGTCGGACTCAGAAGTCAATCAAGAAGCTAAGCCAGAGGTCAAGCCAGAAGTCAAGCCTG AGACTCACATCAATTTAAAGGTGTCCGATGGATCTTCAGAGATCTTCTTCAAGATCAAAAAGACCACTCC TTTAAGAAGGCTGATGGAAGCGTTCGCTAAAAGACAGGGTAAGGAAATGGACTCCTTAAGATTCTTGTAC GACGGTATTAGAATTCAAGCTGATCAGACCCCTGAAGATTTGGACATGGAGGATAACGATATTATTGAGG CTCACAGAGAACAGATTGGTGGTAGACAAGCTTAGGTATTTATTCGGCGCAAAGTGCGTCGGGTGATGCT GCCAACTTAGTCGAGCACCACCACCACCACCACTGAGATCCGGCTGCTAACAAAGCCCGAAAGGAAGCTG AGTTGGCTGCTGCCACCGCTGAGCAATAACTAGCATAACCCCTTGGGGCCTCTAAACGGGTCTTGAGGGG TTTTTTGCTGAAAGGAGGAACTATATCCGGATTGGCGAATGGGACGCGCCCTGTAGCGGCGCATTAAGCG CGGCGGGTGTGGTGGTTACGCGCAGCGTGACCGCTACACTTGCCAGCGCCCTAGCGCCCGCTCCTTTCGC TTTCTTCCCTTCCTTTCTCGCCACGTTCGCCGGCTTTCCCCGTCAAGCTCTAAATCGGGGGCTCCCTTTA GGGTTCCGATTTAGTGCTTTACGGCACCTCGACCCCAAAAAACTTGATTAGGGTGATGGTTCACGTAGTG GGCCATCGCCCTGATAGACGGTTTTTCGCCCTTTGACGTTGGAGTCCACGTTCTTTAATAGTGGACTCTT GTTCCAAACTGGAACAACACTCAACCCTATCTCGGTCTATTCTTTTGATTTATAAGGGATTTTGCCGATT TCGGCCTATTGGTTAAAAAATGAGCTGATTTAACAAAAATTTAACGCGAATTTTAACAAAATATTAACGC 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AGTCATGCCCCGCGCCCACCGGAAGGAGCTGACTGGGTTGAAGGCTCTCAAGGGCATCGGTCGAGATCCC GGTGCCTAATGAGTGAGCTAACTTACATTAATTGCGTTGCGCTCACTGCCCGCTTTCCAGTCGGGAAACC TGTCGTGCCAGCTGCATTAATGAATCGGCCAACGCGCGGGGAGAGGCGGTTTGCGTATTGGGCGCCAGGG TGGTTTTTCTTTTCACCAGTGAGACGGGCAACAGCTGATTGCCCTTCACCGCCTGGCCCTGAGAGAGTTG CAGCAAGCGGTCCACGCTGGTTTGCCCCAGCAGGCGAAAATCCTGTTTGATGGTGGTTAACGGCGGGATA TAACATGAGCTGTCTTCGGTATCGTCGTATCCCACTACCGAGATATCCGCACCAACGCGCAGCCCGGACT CGGTAATGGCGCGCATTGCGCCCAGCGCCATCTGATCGTTGGCAACCAGCATCGCAGTGGGAACGATGCC CTCATTCAGCATTTGCATGGTTTGTTGAAAACCGGACATGGCACTCCAGTCGCCTTCCCGTTCCGCTATC GGCTGAATTTGATTGCGAGTGAGATATTTATGCCAGCCAGCCAGACGCAGACGCGCCGAGACAGAACTTA ATGGGCCCGCTAACAGCGCGATTTGCTGGTGACCCAATGCGACCAGATGCTCCACGCCCAGTCGCGTACC GTCTTCATGGGAGAAAATAATACTGTTGATGGGTGTCTGGTCAGAGACATCAAGAAATAACGCCGGAACA TTAGTGCAGGCAGCTTCCACAGCAATGGCATCCTGGTCATCCAGCGGATAGTTAATGATCAGCCCACTGA CGCGTTGCGCGAGAAGATTGTGCACCGCCGCTTTACAGGCTTCGACGCCGCTTCGTTCTACCATCGACAC CACCACGCTGGCACCCAGTTGATCGGCGCGAGATTTAATCGCCGCGACAATTTGCGACGGCGCGTGCAGG 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