高效液相色谱法测定左金胃内滞留漂浮型缓释片中吴茱萸碱和吴茱萸次碱含量

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HPLC法测定吴茱萸中吴茱萸碱和吴茱萸次碱的含量

40中国处方药第16卷第7期·实验研究·均逐渐趋向正常值，而对照组中的小白鼠的SMC 内LPO 指标为22.3±0.1，SOD 指标为30.49±0.3，均处在异常且较高指标上，并且研究组小白鼠有效率为90%，对照组仅为10%，两组数据对比差异具有统计学意义（P ＜0.05）。

因此，当归补血汤对治疗动脉硬化病症有极好的疗效。

参考文献[1]胡冠英，张三印，杨苗. 当归补血汤治疗动脉粥样硬化的机制研究. 陕西中医学院学报，2014，37（1）:103-105.[2]乐智卿. 当归补血汤及黄芪、当归提取物对动脉粥样硬化大鼠血脂及斑块的影响.广州: 广州中医药大学，2009.[3]职玉娟. 当归补血汤及有效成分对动脉粥样硬化及心肌细胞凋亡的影响. 广州:广州中医药大学，2013.[4]林利生. 益本活血方治疗2型糖尿病合并脑梗塞的临床与实验研究.济南:山东中医药大学，2014.[5]佘玉清. 落新妇苷通过上调PPAR α/γ对大鼠糖尿病肾病的保护作用及机制探讨.扬州: 扬州大学，2017.吴茱萸具有较高的药用价值，在中药治疗应用中，具有散寒止痛、助阳止泻、降逆止呕等功效，能够用于厥阴头痛、寒疝腹痛、脘腹胀痛、五更泄泻等疾病治疗，且作用效果十分显著[1]，此外，在口疮以及高血压外治中，效果也比较突出。

吴茱萸中包含化学成分类型相对多样，其中以生物碱与柠檬苦素类化合物为主要有效成分；而生物碱中又以吴茱萸碱、吴茱萸次碱为主，在镇痛、止呕、抗炎、强心、血管扩张上作用功效显著，同时吴茱萸次碱还能够抵抗胃黏膜损伤[2]。

本研究对HPLC 法测定吴茱萸中吴茱萸碱与吴茱萸次碱含量进行研究，以供参考。

1 仪器与试剂本次实验使用仪器为Agilent1220型高效液相色谱仪、Agilent 紫外检测器以及EclipseXDB-C 18色谱柱（250 mm ×4.6 mm ，5 μm ）、HH-2数显恒温水浴锅、MettlerAE240电子天平、KQ318T 型超声清洗器（昆山市超声仪器有限公司生产）等，此外，实验试剂为吴茱萸碱、吴茱萸次碱对照品（均由成都彼祥生物科技有限公司购买，纯度≥98%）；实验使用甲醇、乙醇、乙酸乙酯为分析纯[3]，乙腈为色谱纯[4]，还包括纯化水、吴茱萸（产自江西新干县）等。

HPLC法测定吴茱萸超微速溶饮片中吴茱萸碱、吴茱萸次碱及柠檬苦素的含量

HPLC法测定吴茱萸超微速溶饮片中吴茱萸碱、吴茱萸次碱及柠檬苦素的含量目的建立一种同步测定吴茱萸超微速溶饮片中吴茱萸碱，吴茱萸次碱及柠檬苦素含量的高效液相色谱方法。

方法采用Hypersil ODS2 C18柱（4.6 mm×250 mm，5μm），岛津LC-20AD高效液相色谱仪，流动相为乙腈-水-四氢呋喃-冰醋酸（34︰64.7︰1.1︰0.2），流速：1.0 mL/min，检测波长：225 nm，柱温：30℃。

结果吴茱萸碱、吴茱萸次碱、柠檬苦素进样量分别在0.101 6～2.032μg（r2=0.999 9，n=6）、0.097 4～1.948μg（r2=0.999 9，n=6）、0.7010～14.02μg（r2=0.999 9，n=6）范围内与峰面积呈良好线性关系，平均回收率分别为100.37%（RSD=1.29%，n=6）、99.11%（RSD=0.83%，n=6）、99.30%（RSD=0.52%，n=6）。

结论该测定方法简便，测定结果准确，重复性好，可作为质量控制方法。

标签：吴茱萸碱；吴茱萸次碱；柠檬苦素；HPLC吴茱萸为芸香科植物吴茱萸Evodia rutaecparpa（Juss）. Benth，石虎E.rutaecarpa（Juss.）benth.var.offcinalis（Dode）Huang或疏毛吴茱萸E.rutaecarpa （Juss.）benth.var.Bodinieri（Dode）Huang的干燥近成熟果实，具有散寒止痛、降逆止呕、助阳止泻等功效[1]。

吴茱萸主要有效成分为生物碱类和柠檬苦素类，其中吴茱萸碱和吴茱萸次碱，具有镇痛和抗炎作用[2]，柠檬苦素具有调节体内胆固醇水平，防止动脉粥样化和除虫等作用[3]。

吴茱萸经超微粉碎后制成的饮片可提高中药成分的利用率，减少中药资源的浪费[4]。

本实验通过对吴茱萸超微速溶饮片的研究，建立了高效液相色谱法测定吴茱萸超微速溶饮片中吴茱萸碱，吴茱萸次碱及柠檬苦素含量的方法。

高效液相色谱法测定四神片中吴茱萸碱和吴茱萸次碱含量

高效液相色谱法测定四神片中吴茱萸碱和吴茱萸次碱含量
潘瑞玲，韩慧琴
（１．内蒙古医学院第二附属医院，内蒙古呼和浩特０１００３０；２．河北省张家口市食品药品检验中心，
河北张家口０７５０００）
摘要：目的建立测定四神片中昊茱萸碱和吴茱萸次碱含量的高效液相色谱（ＨＰＬＣ）法。方法使用Ｗａｔｅｒｓ２６９５— ２９９６型高效液相色谱仪，色谱柱为ＣａｐｃｅｌｌＰＡＫ—Ｃ。柱（１５０ｍｍ× ４．６ｍｍ，５Ｉｘｍ），流动相为０．１％磷酸溶液（含十二烷基硫酸钠０．２％）一甲醇一乙腈（５０：２０：３０），吴茱萸碱、吴莱萸次碱检测波长分剐为２２５ｎｍ和３４３ｎｍ，流速为１．０ｍＬ／ｍｉｎ。结果吴莱萸碱的进样量线性范围为０．００３８～０．７５００ｇ
Ａｂｓｔｒａｃｔ：ＯｂｊｅｃｔｉｖｅＴｏｅｓｔａｂｌｉｓｈａＨＰＬＣｍｅｔｈｏｄｆｏｒｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇｔｈｅｅｖｏｄｉａｍｉｎｅａｎｄｒｕｔａｅｃａｒｐｉｎｅｃｏｎｔｅｎｔｓｉｎＳｉｓｈｅｎＴａｂｌｅｔｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ
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药物鉴定・

HPLC法测定吴茱萸超微速溶饮片中吴茱萸碱、吴茱萸次碱及柠檬苦素的含量

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药品鉴定・
２０１３年１月第３Fra bibliotek卷第１期
ＨＰＬＣ法测定吴茱萸超微速溶饮片中吴茱萸碱、吴茱萸次碱及柠檬苦素的含量
胡晓艳陈乐熊彝熊学敏邱卓星。唐细英
１．江西省中医药研究院，江西南昌３３００４６；２．ＡｃｕｔｅＧｅｒｉａｔｒｉｃＭｅｄｉｃｉｎｅＢａｎｋｓｔｏｗｎ－ＬｉｄｃｏｍｂｅＨｏｓｐｉｔａｌＮＳＷ２２００Ｓｙｄｎｅｙ；３．江西省胸科医院药剂科，江西南昌３３０００６；４．江西中医学院，江西南昌３３０００４
１ＪｉａｎｇｘｉＴｒａｄｉｔｉｏｎａｌＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎｅＲｅｓｅａｒｃｈＩｎｓｔｉｔｕｔｅ，Ｎａｎｃｈａｎｇ３３００４６，Ｃｈｉｎａ；２．ＡｃｕｔｅＧｅｒｉａｔｒｉｃＭｅｄｉｃｉｎｅＢａｎｋｓｔｏｗｎ — ＬｉｄｃｏｍｂｅＨｏｓｐｉｔａｌＮＳＷ２２００Ｓｙｄｎｅｙ；３．ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＰｈａｒｍａｃｙ，ＪｉａｎｇｘｉＣｈｅｓｔＨｏｓｐｉｔａｌ，Ｎａｎｃｈａｎｇ３３０００６，Ｃｈｉｎａ；４．Ｊｉａｎｇｘｉ
ｓｕｐｅｒｉｎｓｔａｎｔｄ —ｎｎｇｔａｂｌｅｔｏｆｅｖｏｄｉａｒｕｔａｅｃａｒｐｉｎｅｗｉｔｈＨＰＬＣ

反相高效液相色谱法同时测定复方木香小檗碱片中吴茱萸碱和吴茱萸次碱的含量

吴茱萸次碱在 21 816～141 080 μg ·mL - 1 与峰面积线性关系
良好。
21 6 精密度试验精密吸取上述对照品溶液 , 重复进样 6 次 , 每次 20μL ,
分别测定吴茱萸碱和吴茱萸次碱的峰面积 , 结果吴茱萸碱的
RSD 为 11 78 % , 吴茱萸次碱的 RSD 为 11 88 %。
品溶液 , 并注入高效液相色谱仪 , 记录峰面积 , 分别计算吴
茱萸碱 , 吴茱萸次碱的回收率 (见表 1 、2) 。结果吴茱萸碱
的平均回收率为 981 76 % , 其 RSD 为 11 68 % ; 吴茱萸次碱
的平均回收率为 991 54 % , 其 RSD 为 11 93 %。
积值 ( A) 为纵坐标 , 进行线性回归 , 得吴茱萸碱的回归方
程为 : A = 21 387 ×105 X + 7661 1 , r = 01 999 9 ; 吴茱萸次碱
的回归方程为 : A = 71 177 ×104 X + 9851 5 , r = 01 999 9 。试验结果表明 : 吴茱萸碱在 21 096～101 480μg ·mL - 1 、
Cent ral Sout h Pharmacy. September 2009 , Vol1 7 No1 9 中南药学 2009 年 9 月第 7 卷第 9 期
反相高效液相色谱法同时测定复方木香小檗碱片中吴茱萸碱和吴茱萸次碱的含量
谢娇1 , 孙丽仁2 , 卢燕香2 , 卢潇潇1 ( 1. 萍乡市人民医院药剂科 , 江西萍乡 337055 ; 2. 江西中医学院 , 南昌
L C - 20A 高效液相色谱仪 , SPD - M20A 二极管阵列检测器 , L C Solutio n 化学工作站 (日本 SH IMADZU ) ; N 1001 旋转蒸发仪 (日本东京理化器械株式会社) ; EL - 204 万分之一分析天平 (梅特勒2托利多仪器有限公司) ; SE - 93

HPLC法测定超微戊己丸中吴茱萸碱和吴茱萸次碱含量word精品文档5页

HPLC法测定超微戊己丸中吴茱萸碱和吴茱萸次碱含量戊己丸属于纯中药制剂，其处方组成为白芍（炒）、黄连各300g，吴茱萸（制）50g，临床主要用于治疗肝胃疾病、腹泻腹痛、呕吐胃酸，能够达到泄肝火、调和脾胃的效果[1]。

戊己丸的传统测定方式是测定当中盐酸小檗碱的含量，首先用酸性甲醇索式和乙醇洗脱氧化铝柱抽取和分解，最后利用紫外分光光度法获得，但除此以外，吴茱萸碱同样是药方中的重要组成部分，但是在中国药典及相关资料中对其测定方法的表述存在空白[2]。

当前出现的测定方式包括薄层扫描色谱法、高效液相色谱法等，而吴茱萸碱以及吴茱萸次碱含量的测定尚少见报道，本研究以高效液相色谱法测定超微戊己丸中吴茱萸碱和吴茱萸次碱的含量，取得了较好的效果，主要研究结果报道如下。

1 仪器与试剂本次采用的高效液相色谱仪器型号为Agilent1260，紫外检测器。

戊己丸相关药材均由省药材公司提供，吴茱萸碱和吴茱萸次碱对照品均购于省药检所，以上涉及药材均接受满足中国药典一部相关要求，流动相乙腈色谱纯由汇虹试剂公司提供；所用试剂除甲醇、乙腈为色谱纯外，其余为分析纯，水为超纯水[3]。

2 方法2.1 溶液制备2.1.1 对照品溶液的制备精密称取吴茱萸碱1.5mg、吴茱萸次碱1.2mg，置于10mL容量瓶中，加入甲醇至刻度，摇匀，备用。

2.1.2 供试品溶液的制备取超微戊己丸1.3g于100mL锥型瓶中，加甲醇30mL，精密称定后水浴加热60min，放置使其温度与室温相同，精密称定，补足损失的重量，转移至100mL容量瓶中定容，0.45μm微孔滤膜过滤，封存备用[4]。

2.2 色谱条件及系统适应性实验KromasailC18分析色谱柱（250mm×4.6mm，微粒直径5μm），流动相为流速1mL/min的乙腈-乙腈10%（50∶50），测定波长为225nm，柱温为31℃。

在以上条件下进行吴茱萸碱以及吴茱萸次碱对照品的检测[5]。

HPLC测定左金丸中吴茱萸次碱的含量

【关键词】ＨＬ；丸；ＰＣ左金吴茱萸次碱；含量测定
左金丸收载于２１００年版《中国药典》一部，由黄连、吴
茱萸两味中药组成，具有泻火，疏肝，胃，和止痛之功。用于肝火犯胃，脘胁疼痛，口苦嘈杂，呕吐酸水，不喜热饮… 。是
峰面积值Ａ为纵坐标，绘制标准曲线，计算其回归方程为：Ｙ＝９６０３５５３ｒ０９９５２３Ｘ＋２．，＝．９。结果表明，吴茱萸次碱在０２２．０（＝．９）． —２９ｇｒ０９范围内线性关系良好。结果见９２９５表１标准曲线图见图２，。
图２标准曲线图
２系统适应性试验分别取阴性对照溶液、．３吴茱萸次碱对照品溶液、复方供试品溶液各１件进行检测，按记录色谱图，结果供试品
２．５精密度试验精密吸取吴茱萸次碱对照品溶液ｌ “ ，ＯＬ
茱萸次碱０ｇｇ）．ｍ・，３－共称取９，份分别加入样品中吴茱萸次碱含量的８％，０％，２％的对照品溶液，每个浓度做０１０１０
三个平行样，按供试品的制备方法制备供试品溶液。分别进行含量测定，计算含量，其吴茱萸次碱的平均回收率为９．％，Ｓ９５ＲＤ为０９回收率良好。结果见表５６．％，６。表５回收率试验结果表（：）ｎ９
表１线性关系考察结果（＝）ｎ６
２２样品溶液的制备．
２２１吴茱萸次碱对照品溶液的制备精密称取吴茱萸次．．
碱对照品３６０，２Ｌ的容量瓶内，甲醇溶解定容，．ｍｇ置５ｍ５加即得０１６・Ｌ．ｍ－的吴茱萸次碱对照品溶液，４ｍｇ备用。２２２复方供试品溶液的制备精密称取左金丸１，乙．．．ｇ０加醇回流提ｌ取出，ｈ，滤过，液置恒温水浴锅上蒸干，甲滤加醇溶解并定容至１Ｌ容量瓶中，取溶液过０５０ｍ．ｍ微孑４Ｌ滤膜为复方供试品溶液。２２３阴性对照品溶液的制备取缺吴茱萸的处方药材，．．按照２．．２项下同法操作，２即得阴性对照品溶液。

高效液相色谱法测定左金胃内滞留漂浮型缓释片中吴茱萸碱和吴茱萸次碱含量

《丹溪心法》，左金丸出自为传统名方，由黄连和吴茱萸按照 6 1 的比例组成，具有泻火疏肝、和胃止痛之功用，药现代临床常使用左金丸治疗由幽门螺杆菌引起的胃效较好，炎、消化性溃疡等病
［13 ］
2000 年版标准。实验用样品由本院制剂室制备。典》含量测定用吴茱萸碱（ C19 H17 N3 O ）对照品、吴茱萸次碱（ C18 H13 N3 O）对照品（中国药品生物制品检定所）。
2012 年 6 月 1 日第 6 期 No．
第 27 卷 Vol． 27
总第 169 期 Serial No． 169
CHINA JOURNAL OF CHINESE MEDICINE
·中药研究 Chinese Pharmacy Study·
高效液相色谱法测定左金胃内滞留漂浮型 * 缓释片中吴茱萸碱和吴茱萸次碱含量
广东药学院，广东广州 510006 Guangdong College of Pharmacy， Guangzhou， Guangdong， China 510006 摘要：目的：建立高效液相色谱法（ HPLC）测定左金胃内滞留漂浮型缓释片中吴茱萸碱和吴茱萸次碱含量的方法。方法：用 C18BDS 为固定相。乙腈－水－四氢呋喃－乙酸（ 51． 0 48． 0 0． 9 0． 1 ）为流动相。UV 检测波长为： 225 nm。结果：吴茱萸吴茱萸次碱在 0． 019 6 ～ 0． 196 0 μg 线性关系良好（ r = 0． 999 8 ）；回收率为碱在 0． 02 ～ 0． 20 μg 线性关系良好（ r = 0． 999 9 ）， 99. 02% ； RSD 为 2． 75% 。结论：方法简便、准确、重复性好，可作为该制剂的含量测定方法。 Abstract： Objective： To develop a method of applying HPLC for the determination of the content of evodiamine and rutaecarpine in inBDS was used as the stationary phase and acetonitrilewatertettragastric floating sustainedrelease tablet of Zuojin Wan． Methods： C18rahydorfuranacetic acid（ 51 48 1 0． 8 ） as the mobile phase． The wavelength was 225nm detected by UV． Results： Evodiamine presented good linear relation in 0． 02 ～ 0． 20 μg（ r = 0． 999 9 ） while rutaecarpine presented good linear relation in 0． 0196 ～ 0． 196 0 accurate and μg（ r = 0． 999 8 ）； the recovery rate was 99． 02% ； RSD was 2． 75． % ． Conclusion： This method is simple and convenient， which can be used for content determination of intragastric floating sustainedrelease tablet of Zuojin Wan． has good reproducibility，关键词：高效液相色谱法；左金缓释片；胃内漂浮；吴茱萸碱；吴茱萸次碱；含量测定 Key words： HPLC； sustainedrelease tablet of zuojin wan； floating in stomach； evodiamine； rutaecarpine； content determination 中图分类号 CLC number： R284． 2 文献标识码 Document code： A 文章编号 Article ID： 1674 － 8999 （ 2012 ） 06 － 0711 － 04

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2． 1
方法与结果
色谱条件 C18 （ 4． 6 mm × 200 mm，色谱柱： Hypersil BDS 粒径 5
。吴茱萸碱和吴
［5 ］
，本实验采用高效
μm）；流动相：乙腈水四氢呋喃乙酸（ 51． 0 48． 0 0． 9 0． 1 ）；柱温： 25 ℃ ；检测波长： 225 nm；流速：每分钟 1． 0 mL；进样量：样品 10 μL；理论塔板数：不低于 7 000 。 2． 2 对照品溶液的制备精密称定吴茱萸碱对照品 0． 001 00 g，色谱甲醇定容于 100 mL 量瓶中，作为吴茱萸碱对照品溶液（浓度为 0． 010 0 g·L － 1 ）；精密称定吴茱萸次碱对照品 0. 000 98 g，色谱甲醇定容于 100 mL 量瓶中作为吴茱萸次碱对照品溶液（浓度为 0. 009 8 g·L － 1 ）。 2． 3 供试品溶液的制备 10 片，取左金胃内滞留漂浮型缓释片，研细，取约 0． 1 g，精密称定，以 100 mL 人工胃液超声波振荡 30 min，抽滤，以人工胃液分 3 次洗涤滤纸及滤瓶，滤液以 NaOH 溶液调 pH 值至 7 ，水浴蒸干，以 20 mL 氯仿超声波振荡提取 30 min，补
广东药学院，广东广州 510006 Guangdong College of Pharmacy， Guangzhou， Guangdong， China 510006 摘要：目的：建立高效液相色谱法（ HPLC）测定左金胃内滞留漂浮型缓释片中吴茱萸碱和吴茱萸次碱含量的方法。方法：用 C18BDS 为固定相。乙腈－水－四氢呋喃－乙酸（ 51． 0 48． 0 0． 9 0． 1 ）为流动相。UV 检测波长为： 225 nm。结果：吴茱萸吴茱萸次碱在 0． 019 6 ～ 0． 196 0 μg 线性关系良好（ r = 0． 999 8 ）；回收率为碱在 0． 02 ～ 0． 20 μg 线性关系良好（ r = 0． 999 9 ）， 99. 02% ； RSD 为 2． 75% 。结论：方法简便、准确、重复性好，可作为该制剂的含量测定方法。 Abstract： Objective： To develop a method of applying HPLC for the determination of the content of evodiamine and rutaecarpine in inBDS was used as the stationary phase and acetonitrilewatertettragastric floating sustainedrelease tablet of Zuojin Wan． Methods： C18rahydorfuranacetic acid（ 51 48 1 0． 8 ） as the mobile phase． The wavelength was 225nm detected by UV． Results： Evodiamine presented good linear relation in 0． 02 ～ 0． 20 μg（ r = 0． 999 9 ） while rutaecarpine presented good linear relation in 0． 0196 ～ 0． 196 0 accurate and μg（ r = 0． 999 8 ）； the recovery rate was 99． 02% ； RSD was 2． 75． % ． Conclusion： This method is simple and convenient， which can be used for content determination of intragastric floating sustainedrelease tablet of Zuojin Wan． has good reproducibility，关键词：高效液相色谱法；左金缓释片；胃内漂浮；吴茱萸碱；吴茱萸次碱；含量测定 Key words： HPLC； sustainedrelease tablet of zuojin wan； floating in stomach； evodiamine； rutaecarpine； content determination 中图分类号 CLC number： R284． 2 文献标识码 Document code： A 文章编号 Article ID： 1674 － 8999 （ 2012 ） 06 － 0711 － 04
。左金胃内滞留漂浮型缓释片是在
左金丸处方基础上采用流体动力学平衡控释系统原理（ HBS）设计制备而成的胃内漂浮型制剂，能使药物直达病灶从而充分发挥药效并缓慢释放所含药物，茱萸次碱为左金丸方药的重要有效成分茱萸次碱的含量进行ation of Evodiamine and Rutaecarpine in Intra-gastric Sustained-release Tablet of ZuoJin Wan by HPLC 周臻 Zhou Zhen，孟繁姝 Meng Fanshu，曹高 Cao Gao
2012 年 6 月 1 日第 6 期 No． 6 1 Jun． 2012
中
医
学
报
第 27 卷 Vol． 27
总第 169 期 Serial No． 169
CHINA JOURNAL OF CHINESE MEDICINE
·中药研究 Chinese Pharmacy Study·
高效液相色谱法测定左金胃内滞留漂浮型 * 缓释片中吴茱萸碱和吴茱萸次碱含量
《丹溪心法》，左金丸出自为传统名方，由黄连和吴茱萸按照 6 1 的比例组成，具有泻火疏肝、和胃止痛之功用，药现代临床常使用左金丸治疗由幽门螺杆菌引起的胃效较好，炎、消化性溃疡等病
［13 ］
2000 年版标准。实验用样品由本院制剂室制备。典》含量测定用吴茱萸碱（ C19 H17 N3 O ）对照品、吴茱萸次碱（ C18 H13 N3 O）对照品（中国药品生物制品检定所）。