医学微生物学教学课件-张敏-第七章 细菌感染的检测方法与防治原则精品文档15页
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《医学微生物学 》教学课件：细菌感染的诊断与防治
13.3.2016
Bacteriology / Qiushui He
临床微生物实验室的作用
做特异的病原学 (细菌，病毒，真菌，和寄 生虫)诊断
为病人提供更好和更有效的诊断和治疗 预防和控制疾病在医院和社区内的传播
13.3.2016
Bacteriology / Qiushui He
细菌感染的诊断
13.3.2016
Bacteriology / Qiushui He
酶联免疫吸附试验
(Enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)
Also known as an enzyme immunoassay (EIA) Is a biochemical technique used mainly in immunology to
细菌学诊断-致病菌及其抗原或代谢产物 血清学诊断-患者血清中的特异性抗体 分子生物学诊断-致病菌特异DNA片段
13.3.2016
Bacteriology / Qiushui He
第一节 细菌学诊断
13.3.2016
Bacteriology / Qiushui He
确认细菌引起的传染病的过程
血、脑脊液→增菌
（ Ab→菌? ）
13.3.2016
Bacteriology / Qiushui He
显微镜检查
Gram-stain Acid-fast stain
Ziehl-Neelsen
Fluorescence
Direct, e.g. auramine Immunofluorescence
13.3.2016
Bacteriology / Qiushui He
第二节 血清学诊断
《医学微生物学 》教学课件：细菌感染的诊断与防治
13.3.2016
Bacteriology / Qiushui He
抗酸染色法
(Acid-fast stain: Ziehl-Neelsen stain)
First described by two German doctors: the bacteriologist Franz Ziehl and the pathologist Friedrich Neelsen
Acid fast organisms like Mycobacterium contain large amounts of lipid substances within their cell walls called mycolic acids. These acids resist staining by ordinary methods such as a Gram stain.
血、脑脊液→增菌
（ Ab→菌? ）
13.3.2016
Bacteriology / Qiushui He
显微镜检查
Gram-stain Acid-fast stain
Ziehl-Neelsen
Fluorescence
Direct, e.g. auramine Immunofluorescence
13.3.2016
Bacteriology / Qiushui He
革兰染色法
Developed by Hans Christian Gram, a Danish scientist in 1884
A method to differentiate bacterial species into two large groups (G+ and G-)
医学微生物学 第7章 细菌感染的检查方法与防治原则
• 人工主动免疫 artificial active immunization
• 人工被动免疫 artificial passive immunization
人工免疫
• 人工自动免疫
– 疫苗（vaccine）
死疫苗 减毒活疫苗 亚单位疫苗 重组载体疫苗 基因工程疫苗 核酸疫苗
– 类毒素（toxiod)
第7章
细菌感染的检查方法与 防治原则
检查方法
形态观察
合
疑
细菌分离、鉴定
似 细
样 品
病原菌
抗原成分检查
正 确
菌
采
核酸检查
诊
感
集
断
理 的 治 疗 方
染
血清抗体
案
宿主
细胞免疫
其他指标
细菌感染的特异性预防
• 自然免疫 Natural Immunization
– 自然主动免疫：隐性或显性感染 – 自然被动免疫：通过胎盘或初乳获得母体抗体
人工主动免疫artificialactiveimmunization人工被动免疫artificialpassiveimmunization疫苗vaccine死疫苗减毒活疫苗亚单位疫苗重组载体疫苗基因工程疫苗核酸疫苗人工自动免疫人工被动免疫免疫物质接种次数免疫力出现时间免疫力维持时间用途抗原长数月数年多用于预防抗体或细胞因子用于治疗或应急预防biologicalproducts丙种球蛋白vaccine减毒活疫苗attenuatedlivevaccine灭活疫苗inactivatedvaccine亚单位疫苗subunitvaccine基因工程疫苗geneengineeredvaccine核酸疫苗nucleicacidvaccinetoxoid细菌外毒素经0304甲醛液处理后其毒性消失而仍保留抗原性的生物制品通常是用细菌类毒素给马多次注射后取其免疫血清提取免疫球蛋白精制而成免疫球蛋白immunoglobulin抗菌药物概念1
• 人工被动免疫 artificial passive immunization
人工免疫
• 人工自动免疫
– 疫苗（vaccine）
死疫苗 减毒活疫苗 亚单位疫苗 重组载体疫苗 基因工程疫苗 核酸疫苗
– 类毒素（toxiod)
第7章
细菌感染的检查方法与 防治原则
检查方法
形态观察
合
疑
细菌分离、鉴定
似 细
样 品
病原菌
抗原成分检查
正 确
菌
采
核酸检查
诊
感
集
断
理 的 治 疗 方
染
血清抗体
案
宿主
细胞免疫
其他指标
细菌感染的特异性预防
• 自然免疫 Natural Immunization
– 自然主动免疫：隐性或显性感染 – 自然被动免疫：通过胎盘或初乳获得母体抗体
人工主动免疫artificialactiveimmunization人工被动免疫artificialpassiveimmunization疫苗vaccine死疫苗减毒活疫苗亚单位疫苗重组载体疫苗基因工程疫苗核酸疫苗人工自动免疫人工被动免疫免疫物质接种次数免疫力出现时间免疫力维持时间用途抗原长数月数年多用于预防抗体或细胞因子用于治疗或应急预防biologicalproducts丙种球蛋白vaccine减毒活疫苗attenuatedlivevaccine灭活疫苗inactivatedvaccine亚单位疫苗subunitvaccine基因工程疫苗geneengineeredvaccine核酸疫苗nucleicacidvaccinetoxoid细菌外毒素经0304甲醛液处理后其毒性消失而仍保留抗原性的生物制品通常是用细菌类毒素给马多次注射后取其免疫血清提取免疫球蛋白精制而成免疫球蛋白immunoglobulin抗菌药物概念1
医学微生物学6.细菌感染的检查方法与防治原则PPT
案例二：霍乱弧菌感染
总结词
霍乱弧菌感染是一种经口摄入霍乱弧菌引起的急性腹泻疾病 ，可导致严重脱水、休克甚至死亡。
详细描述
霍乱弧菌感染的典型症状为剧烈腹泻、呕吐、脱水等，可在 数小时内导致严重脱水和电解质紊乱。检查方法主要包括粪 便培养和抗原检测等。防治原则包括保持水源清洁、加强食 品卫生和接种疫苗等措施。
04
细菌感染的案例分析
案例一：肺炎链球菌感染
总结词
肺炎链球菌感染是一种常见的细菌感染，主要通过飞沫传播，可 引起大叶肺炎、脑膜炎、心内膜炎等疾病。
详细描述
肺炎链球菌感染通常表现为高热、咳嗽、胸痛等症状，严重时可 引起肺炎链球菌败血症。检查方法主要包括细菌培养、抗原检测 和核酸检测等。防治原则包括加强个人卫生、接种疫苗和使用抗 生素等措施。
在严重的情况下，细菌感染还可能导致休克、多器 官功能衰竭等严重并发症。
细菌感染的体征包括局部红肿、热痛、淋巴结肿大 等，严重时可能出现黄疸、肝脾肿大等症状。
02
细菌感染的检查方法
血液检查
血常规
检查白细胞计数、中性粒细胞计数及比例，判断是 否存在细菌感染。
C反应蛋白（CRP）
检测体内炎症反应，辅助诊断细菌感染。
预防耐药性
合理使用抗生素，避免滥用和 误用，以延缓细菌耐药性的产
生。
控制传播途径
隔离患者
对感染细菌的患者进行 隔离，以防止疾病传播。
消毒与灭菌
对接触患者的物品、医 疗器械等进行消毒或灭 菌处理，以消除携带的
病原体。
环境清洁
健康教育
保持医院、家庭和其他 公共场所的清洁卫生，
减少细菌的传播。
加强公众对细菌感染的 认识，提高预防意识， 减少疾病传播的可能性。
5细菌感染的检查与防治PPT课件
生物制品：人工免疫的免疫原、免疫血清、 细胞制剂及诊断 制剂的生物性制剂。
.
23
人工主动免疫 artificial active immunity
将疫苗或类毒素接种于人体，使机体 产生获得性免疫力的一种防治微生物感染 的措施。
作用：特异性预防，
.
24
用于人工主动免疫的生物制品
▪死疫苗 ▪活疫苗 ▪类毒素 ▪亚单位疫苗 ▪核酸疫苗
.
5
What ?
根据病史与临床表现确定标本采集的类型与 部位，尽量采集病变明显部位标本。
食物中毒 : 可疑食物, 呕吐物, 粪便 痢疾：脓血便 败血症: 血 化脓感染的病灶
.
6
How ?
无菌采集。
污染：环境，正常菌群
无菌标本：脑脊液、血液、穿刺液等。
有菌标本：
无菌容器
根据目的菌的特性，采用不同的方法采集，以保 证目的菌的活性。 （需氧菌、厌氧菌、兼性厌氧菌、L型细菌）
直接涂片检查；分离培养。
.
9
标本的处理
保持细菌的活性 时间？保存？
1.对环境敏感的细菌如脑膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟 菌和流感嗜血杆菌等应保温并立即送检。
2.其他所有的标本采集后最好在2h之内送检。 3.用于细菌培养的标本保存时间不应超过24h。
4.若不能及时送检，标本应置于4℃保存。 5.送检过程中要采取适当的保存方式，注意防护。
3
1、标本的采集和处理原则
标本采集的一般原则 When? What? How? 何时取，取什么，怎么取？
标本的处理 如何保持细菌的活性
.
4
When?
尽早采集： 在发病的早期或急性期采集标本 最好在抗生素使用前（如使用过抗生素应 在申请单上注明）。
.
23
人工主动免疫 artificial active immunity
将疫苗或类毒素接种于人体，使机体 产生获得性免疫力的一种防治微生物感染 的措施。
作用：特异性预防，
.
24
用于人工主动免疫的生物制品
▪死疫苗 ▪活疫苗 ▪类毒素 ▪亚单位疫苗 ▪核酸疫苗
.
5
What ?
根据病史与临床表现确定标本采集的类型与 部位，尽量采集病变明显部位标本。
食物中毒 : 可疑食物, 呕吐物, 粪便 痢疾：脓血便 败血症: 血 化脓感染的病灶
.
6
How ?
无菌采集。
污染：环境，正常菌群
无菌标本：脑脊液、血液、穿刺液等。
有菌标本：
无菌容器
根据目的菌的特性，采用不同的方法采集，以保 证目的菌的活性。 （需氧菌、厌氧菌、兼性厌氧菌、L型细菌）
直接涂片检查；分离培养。
.
9
标本的处理
保持细菌的活性 时间？保存？
1.对环境敏感的细菌如脑膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟 菌和流感嗜血杆菌等应保温并立即送检。
2.其他所有的标本采集后最好在2h之内送检。 3.用于细菌培养的标本保存时间不应超过24h。
4.若不能及时送检，标本应置于4℃保存。 5.送检过程中要采取适当的保存方式，注意防护。
3
1、标本的采集和处理原则
标本采集的一般原则 When? What? How? 何时取，取什么，怎么取？
标本的处理 如何保持细菌的活性
.
4
When?
尽早采集： 在发病的早期或急性期采集标本 最好在抗生素使用前（如使用过抗生素应 在申请单上注明）。
医学微生物学6.细菌感染的检查方法与防治原则ppt课件
6.细菌感染的检 查方法与防治原 则
•医学微生物学
第一节 细菌感染的实验室诊断
BEA Confidential. | 2
必要性
细菌 感染 的 检查 原则
代价 敏感性、特异性
准确性
BEA Confidential. | 3
一
细菌学诊断
BEA Confidential. | 4
（一）
标本采集
BEA Confidential. | 5
灭活疫苗 减毒活疫苗 类毒素 亚 单 位 疫 苗 核酸疫苗 转基因植物疫苗 治疗性疫苗
非重组亚单位疫苗 重组亚单位疫苗
BEA Confidential. | 37
BEA Confidential. | 38
BEA Confidential. | 39
二
人工被动免疫
BEA Confidential. | 40
直接形态学检查 细菌分离培养 鉴定
形态检查 生化反应 抗原检测 动物实验 药敏试验
特异性抗体检测
抗原检测
试管凝集 沉淀反应 补体结合试验
凝集试验 协同凝集试验 乳胶凝集试验 ELISA 免疫荧光检测
BEA Confidential. | 8
核酸检测
核酸杂交 PCR
直接涂片染色镜检
BEA Confidential. | 9
BEA Confidential. | 31
斑点杂交
原位杂交
BEA Confidential. | 32
BEA Confidential. | 33
BEA Confidential. | 34
第二节 细菌感染的免疫预防
BEA Confidential. | 35
一
•医学微生物学
第一节 细菌感染的实验室诊断
BEA Confidential. | 2
必要性
细菌 感染 的 检查 原则
代价 敏感性、特异性
准确性
BEA Confidential. | 3
一
细菌学诊断
BEA Confidential. | 4
（一）
标本采集
BEA Confidential. | 5
灭活疫苗 减毒活疫苗 类毒素 亚 单 位 疫 苗 核酸疫苗 转基因植物疫苗 治疗性疫苗
非重组亚单位疫苗 重组亚单位疫苗
BEA Confidential. | 37
BEA Confidential. | 38
BEA Confidential. | 39
二
人工被动免疫
BEA Confidential. | 40
直接形态学检查 细菌分离培养 鉴定
形态检查 生化反应 抗原检测 动物实验 药敏试验
特异性抗体检测
抗原检测
试管凝集 沉淀反应 补体结合试验
凝集试验 协同凝集试验 乳胶凝集试验 ELISA 免疫荧光检测
BEA Confidential. | 8
核酸检测
核酸杂交 PCR
直接涂片染色镜检
BEA Confidential. | 9
BEA Confidential. | 31
斑点杂交
原位杂交
BEA Confidential. | 32
BEA Confidential. | 33
BEA Confidential. | 34
第二节 细菌感染的免疫预防
BEA Confidential. | 35
一
第7章 细菌感染的检测方法与防治原则
自然免疫 主动免疫：隐 性或显性感染 被动免疫：获 得母体的Ab(胎 盘/初乳) 人工免疫 主动免疫：疫 苗或类毒素等 被动免疫：抗 毒素或丙种球蛋 白等
29
一、人工主动免疫
人工主动免疫（artificial active immunization）是 将疫苗或类毒素接种于人体，刺激机体免疫系统产生特 异性免疫应答，机体主动产生获得性免疫力的一种防治 微生物感染的措施，主要用于特异性预防。
在血平板上的肺炎链球菌菌落
12
生化试验
肠道感染细菌在含铁双糖培养基上的生化反应
13
血清学鉴定
• 利用已知的特异性抗体检查未知的纯培养细菌 • 对细菌进行种、群、型的鉴定
沙门菌血清学鉴定
摘自 《临床微生物检验》（第五版）人民卫生出版社
14
药物敏感试验
• 纸片扩散法、稀释法、E-test法…… • 最低抑菌浓度（minimum inhibitory concentration, MIC）
种抗生素的敏感程度不同，在药物纸片周围便出现
抑制病原菌生长而形成的大小不同的抑菌环。根据
抑菌环的有无和大小来判定试验菌对该抗菌药物耐
药或敏感。
16
稀释法
• 以一定浓度的抗菌药物与含有待检细菌的 培养基进行一系列不同倍数稀释（通常为 双倍稀释），经培养后观察其最低抑菌浓 度。 • 稀释法
– 琼脂稀释法——使用琼脂培养基 – 肉汤稀释法——使用肉汤培养基
5
一.临床标本的采集与运送原则
标本采集
标本运送
早期采集
无菌操作 选感染部位 最佳时间采集 双份血清
6
做好标记 置于密闭容器内
尽快送检
二、细菌的检测
7
（一）细菌的形态学检查
29
一、人工主动免疫
人工主动免疫（artificial active immunization）是 将疫苗或类毒素接种于人体，刺激机体免疫系统产生特 异性免疫应答，机体主动产生获得性免疫力的一种防治 微生物感染的措施，主要用于特异性预防。
在血平板上的肺炎链球菌菌落
12
生化试验
肠道感染细菌在含铁双糖培养基上的生化反应
13
血清学鉴定
• 利用已知的特异性抗体检查未知的纯培养细菌 • 对细菌进行种、群、型的鉴定
沙门菌血清学鉴定
摘自 《临床微生物检验》（第五版）人民卫生出版社
14
药物敏感试验
• 纸片扩散法、稀释法、E-test法…… • 最低抑菌浓度（minimum inhibitory concentration, MIC）
种抗生素的敏感程度不同，在药物纸片周围便出现
抑制病原菌生长而形成的大小不同的抑菌环。根据
抑菌环的有无和大小来判定试验菌对该抗菌药物耐
药或敏感。
16
稀释法
• 以一定浓度的抗菌药物与含有待检细菌的 培养基进行一系列不同倍数稀释（通常为 双倍稀释），经培养后观察其最低抑菌浓 度。 • 稀释法
– 琼脂稀释法——使用琼脂培养基 – 肉汤稀释法——使用肉汤培养基
5
一.临床标本的采集与运送原则
标本采集
标本运送
早期采集
无菌操作 选感染部位 最佳时间采集 双份血清
6
做好标记 置于密闭容器内
尽快送检
二、细菌的检测
7
（一）细菌的形态学检查
细菌感染的检查方法和防治原则 PPT
直接涂片镜检 初步诊断
分离培养 生物化学
抗原检测 其他检测法
血清学试验
明
动物试验
确
药敏试验
诊
断
3.生化检测: 针对一个细菌菌落或纯培养物进行鉴定。
糖发酵试验
H2S试验 枸橼盐试验
（二）病原菌的检查程序
直接涂片镜检 初步诊断
分离培养 生物化学
抗原检测 其他检测法
血清学试验
明
动物试验
确
药敏试验
诊
断
4.抗原检测：用已知抗体检测未知细菌抗原，进行群 和型的鉴别。
（二）病原菌的检查程序
直接涂片镜检 初步诊断
分离培养 生物化学
抗原检测 其他检测法
血清学试验
明
动物试验
确
药敏试验
诊
断
1.形态学检查： 染色镜检：革兰染色，抗酸染色； 2.分离培养(isolation and cultivation)： 菌落 大小、
形态、颜色、表面性状、透明度、溶血性
（二）病原菌的检查程序
医学微生物学
细菌感染的检测方法与 防治原则
2
本章重点与难点
细菌感染性标本的采集原则 细菌感染的实验室检验程序 常用的血清学诊断方法 人工免疫的概念 细菌感染的治疗原则
3
第一节 细菌感染的诊断
一、病原菌检测
用抗菌素以前
（一）
避免杂菌污染
标本的采集和送检 不同期不同标本
采集病变明显部位
注意保ห้องสมุดไป่ตู้ 及时送检
第二节 人工免疫
一、人工主动免疫
1.疫苗：死疫苗、减毒活疫苗、亚单位疫苗、重组 载 体疫苗、基因工程疫苗、核酸疫苗 2.类毒素：用0.3%-0.4%甲醛处理外毒素获得
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细菌感染的治疗
抗菌药物种类（抗生素及人工合成化学制剂）
主要作用机制
影响细胞壁合成 影响细胞膜功能 影响细菌蛋白合成 影响细菌核酸合成
小结
标本的采集与送检原则 细菌感染的检查方法 人工主动免疫与人工被动免疫的比较
谢谢你的阅读
❖ 知识就是财富 ❖ 丰富你的人生
细菌感染的检查程序
直接涂片检查
分离培养
生化试验 血清学试验 动物试验 药物敏感试验
分子生物学技术 其他检测技术
初步诊断
明 确 诊 断
标本的采集和处理原则
标本采集的一般原则 When? What? How? 何时取，取什么，怎么取？
标本的处理 保持细菌的活性
标本采集的一般原则
1．早期采集：
2．不同期不同标本：不同病程致病菌在体内分布和 排出部位不同。采集病变明显部位的新鲜的标本。
➢ 抗毒素 ➢ 抗菌血清 ➢ 胎盘球蛋白、丙种球蛋白 ➢ 细胞免疫制剂
两种人工免疫的比较
区别要点
人工主动免疫
人工被动免疫
免疫物质
抗原
抗体或细胞因子等
接种次数
1-3次
1次
免疫出现时间 免疫维持时间
慢（注射后2-4W） 快（注射后立刻出 现）
长（数月~数年） 短（2-3W）
用途
多用于预防
多用于治疗或应急 预防
形态学检查 分离培养 生化反应 药物敏感实验 血清学或免疫学检测 分子生物学方法 动物实验
细菌的培养检测方法
细菌的非培养检测方法
特异性预防与治疗
1、人工主动免疫(artificial active immunity)：
将疫苗(vaccine)或类毒素接种于人体，使机体产生 获得性免疫力的一种防治微生物感染的措施，主要用 于预防。
无菌采集中段尿 如考虑厌氧菌感染， 采取膀胱穿刺法采集 标本。 排尿困难者考虑导尿 采集标本。
粪便标本采集
自然排便，挑取脓、血或粘液部分于清洁 容器中送检。 排便困难者，采用直肠拭子采集。 怀疑霍乱弧菌感染引起的腹泻，立即接种 或将标本置于碱性蛋白胨或卡-布运送培养 液送检。 传染性腹泻应连续送检3次。
标本的处理
1.对环境敏感的细菌如脑膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌和 流感嗜血杆菌等应保温并立即送检。
2.其他所有的标本采集后最好在2h之内送检。 3.若不能及时送检，标本应置于一定环境中保存。 4.一般情况下，用于细菌培养的标本保存时间不应超
过24h。 5.送检过程中要采取适当的保存方式，并注意防护。
检查方法
➢ 死疫苗 ➢ 活疫苗 ➢ 类毒素 ➢ 新型活疫苗 ➢ 基因工程疫苗 ➢ 重组载体疫苗
➢合成疫苗
➢亚单位疫苗 ➢DNA疫苗 ➢ial passtive immunity)：
注射含有特异性抗体的免疫血清或纯化免疫球蛋白， 或细胞因子等免疫制剂，使机体即刻获得特异性免疫， 因而作用及时。但这些免疫物质不是病人自己产生的， 故维持时间短。主要用于治疗或紧急预防。
3．无菌采集：
4．根据目的菌的特性用不同的方法采集适量标本
正确的采集方法并有适当的采集量.
5. 安全采集：采集标本时要防止传播和自身感染。
污染？ 环境，正常菌群
无菌标本； 有菌标本。
呼吸道标本采集
类型：鼻咽拭、痰和 经气管采集的标本。 上呼吸道存在正常菌 群，在采集标本与结 果分析时应予考虑。
尿标本的采集