药动学实验
生物药剂学及药物动力学实验讲解
生物药剂学与药物动力学实验讲义中药药剂学教研室编写2006年12月目录实验一片剂溶出度试验 (4)实验二尿药法测定水杨酸钠片剂的生物利用度 (7)实验三扑热息痛血管外给药的药物动力学研究 (10)实验四大鼠在体小肠吸收实验 (13)实验五氨茶碱药物动力学的研究 (15)生物药剂学与药物动力学实验须知生物药剂学与药物动力学属于药物临床应用学科的范畴，具有综合性强、应用性强、创新性强等特点。
生物药剂学与药物动力学实验是教学的重要组成部分，是理论与实践结合的主要方式之一。
通过实验课不仅能印证、巩固和扩展教学内容，还能训练基本操作技能，培养良好的实验作风。
为保证实验课顺利进行，并达到预期的目的，实验中必须做到以下六个方面：1．预习实验内容通过预习，明确实验目的与要求，对实验内容做到心中有数，并能合理安排实验顺序与时间。
要明确每个处方中药物与辅料的用途。
2．遵守实验纪律不迟到，不早退，不旷课，保持实验肃静，未经许可，不得将实验室物品带离实验室。
3．重视药剂卫生进入实验室必须穿整洁的白工作服。
先将工作台面擦洗干净再开始做实验。
实验过程中应始终注意台面、地面的整洁，各种废弃物应投入指定位置，不能随手乱丢，更不能弃入水槽内。
完成实验后，应将容器、仪器清洁，摆放整齐，台面擦净，经教师同意后方能离开。
值日生负责整理公用器材，清扫实验室，关好水、电、门、窗。
4. 细心操作、勤于思考称量药品、试剂时，要在称量前（拿取时）、称量时和称量后（放回时）进行三次核对。
称量完毕应立即盖好瓶塞，放回原处。
对剧毒药品更要仔细核对名称与剂量，并准确称取。
实验中要严格控制好实验条件，认真操作每一道工序，以保证成品质量。
实验成品应标明名称、规格、配制者、配制时间，并交教师验收。
实验中遇到问题应先独立思考，再请教他人。
在实验中逐步形成整洁、细致、严谨、冷静、善于观察、善于思考、勤于动手的实验风格。
5．正确使用仪器、注意安全使用仪器时要按使用方法正确操作，不熟悉操作方法时，应在教师指导下使用。
[定稿]实验21药动学实验2肝功能对药物作用的影响
![[定稿]实验21药动学实验2肝功能对药物作用的影响](https://img.taocdn.com/s3/m/2eceaac1b04e852458fb770bf78a6529647d3563.png)
实验21药动学实验（2）肝功能对药物作用的影响【摘要】目的：了解肝脏在药物代谢中的重要性。
观察小白鼠肝功能损伤对硫喷妥钠的作用的影响。
方法：腹腔注射硫喷妥钠溶液（0.1ml/10g）后，记录肝损伤组小鼠和正常组小鼠翻正反射消失和恢复的时间并观察肝脏的形态变化。
结果及结论：由于药品的配制误差以及反复注射的原因，导致全班实验失败。
解剖后发现正常小鼠肝脏成暗红色，表面光滑；而肝损小鼠肝脏呈灰褐色，表面有较强的颗粒感。
【关键词】翻正反射肝脏硫喷妥钠肝脏的生物转化是巴比妥类药物消除的主要方式之一。
硫喷妥钠是脂溶性极高的药物。
脂溶性高的巴比妥类血浆蛋白结合率高，由肾小球滤过较小，也易被肾小球再吸收，其主要消除方式由肝药酶代谢。
因此，肝脏损伤极易使硫喷妥钠的生物转化受阻，从而使小鼠的睡眠时间延长。
1.材料和方法1.1 实验动物：正常小鼠和肝脏损伤小鼠各12只1.2 药品和试剂：4g/L 硫喷妥钠溶液；10%四氯化碳溶液。
1.3 实验器材：注射器，手术剪，镊子。
1.4 肝损模型试验前24h用10%四氯化碳溶液0.2mL/10g皮下注射，损伤小鼠肝功能。
（实验室已事先造模）1.5 小鼠手术取体重相近的正常及肝动能已损伤小鼠各一只，称体重，以苦味酸溶液作好标记，并试其翻正反射是否存在（将小鼠仰卧在试验台上，若能恢复正常体位，为翻正反射存在，否则为翻正反射消失）。
按0.1 mL/10g（40mg/kg）剂量腹腔注射（i.p.）4g/L 硫喷妥钠溶液。
2.结果2.1 翻正反射消失及恢复时间测定·由于药品的配制误差和反复注射的原因，以及注射水平的差异，导致全班实验失败。
·本组实验数据如下表。
样本进入翻正反射消失的时间（min）翻正反射消失到恢复的时间（min）正常1 3 ＞109正常2 3 20肝损1 1 ＞109肝损2 3 ＞1092.2 肝脏形态观察将小白鼠处死（用颈椎脱臼法），解剖后取出肝脏观察形态改变，发现正常小鼠肝脏成暗红色，表面光滑；而肝损小鼠肝脏呈灰褐色，表面有较强的颗粒感。
药动学实验
①定时迅速采血，②排除血浆蛋白的干扰，③灌胃是否成功
注意：①灌胃确定插入胃中，另一端放入水中，②Ep管应先用肝素湿润抗凝，③第二次离心后若上清液不澄清，则微孔滤膜过滤。
片剂溶出度测定意义，哪些药剂需要测定?
溶出度系指药物从片剂或胶囊等固体制剂在规定的溶剂中溶出的速度和程度。大多数口服固体制剂在给药后必须从制剂内释放出溶解于体液才能经吸收进入血液循环，达到一定血药浓度后奏效，因此溶出是药物吸收的前提，测定固体制剂溶出度或释放度的过程称溶出度试验，是一种模拟口服固体制剂在胃肠道中的崩解、溶出和吸收的体外试验法。
4、药物的给药途径。静脉注射给药和口服给药的隔室模型往往不同。
5、采样时间也有可能有较大影响，如果采样安排不恰当可能错过分布期，就会往往误认为为单室；如果分析方法的灵敏度不够或采样周期过短，不能测定消除相末端血药浓度，也会影响隔室模型的判断。
6、用残数平方和与加权残差平方和判断、拟合度法、IC法、F检验法判断时相关数据的计算误差。
为什么要测定两个波长下氨茶碱的吸光度并取其差值?
氨茶碱为临床用平喘药，由茶碱与乙二胺缩合而成。在酸性条件下，可用有机溶剂从血清中提取出茶碱，再用碱液将茶碱从有机溶剂中提取，测量入274和入298处的吸光度。因为A274为茶碱和本底，即溶剂、血清的吸光度，而A298为本底的吸光度，氨茶碱在A298的吸光度几乎为0，则ΔA=A274-A298正好为去除本地的影响后的药物氨茶碱的吸光度
影响片剂溶出度的因素：
①溶质在介质内的扩散系数，系数越大，溶出度越大。
②颗粒的表面积，增大表面积，即减小药物粒径可增加溶出度。
③溶液的浓度，更换溶剂，使浓度降低，溶出度越大。
④扩散层的厚度，厚度越小，溶出度越大。
药动学实验讲义
生物药剂学与药物动力学实验讲义湖南中医药大学药学技能教学实验中心二O一O年五月目录1．前言---------------------------------------------------------------2页2. 实验一固体制剂体外溶出度测定------------------3～4页3. 实验二血药浓度法测定对乙酰氨基酚片的生物利用度等药动学参数-----------------------------------------5～7页前言生物药剂学与药代动力学是药学专业的一门专业课程，主要研究药物制剂的评价方法及药物的体内过程。
生物药剂学与药代动力学实验是本课程的重要组成部分，实验中不仅将应用到本课程的理论知识，而且将贯通药动学、药剂学、分析化学、体内药物分析等课程，并使用UV、HPLC等现代分析仪器。
为了达到本实验教学目的，要求学生上实验课前，必须认真预习，明确实验目的，了解实验内容和方法，并结合课堂教学明白实验的基本原理。
实验中要有严谨的科学态度和实事求是的作风，严格操作，正确使用仪器，详细做好实验记录。
实验数据不得任意涂改，实验报告要求书写正确整洁。
实验中严格遵守实验室规章制度，注意安全，保持实验台面整洁及室内卫生。
本实验讲义主要参考华西医科大学《临床药代动力学实验讲义》、中南大学湘雅医学院药学系《生物药剂学与药物动力学实验讲义》及北京医科大学《生物药剂与药物动力学实验讲义》编写，在此对两所学校的老师们表示感谢。
由于时间仓促，错误及遗漏之处在所难免敬请批评指正。
实验一固体制剂体外溶出度测定一．目的要求1．掌握固体制剂（片剂丸剂胶囊剂等）溶出度的测定原理、方法与数据处理。
2．熟悉溶出度测定的意义，溶出度测定仪的使用方法。
3．了解溶出仪的基本构造与性能。
二．实验提要1．溶出度系指在规定介质中药物从片剂或胶囊等固体制剂中溶出的速度和程度。
崩解（或溶散）度无法反映崩散后微细颗粒的再分散和溶解过程。
实验21 药动学实验1静脉注射苯酚磺酞的药动学参数计算
实验21药动学实验（1）静脉注射苯酚磺酞的药动学参数计算【摘要】目的：观察肾功能受损对药动学的影响。
方法：正常和肾损家兔分别耳缘静脉注射苯酚磺酞（PSP），颈动脉插管依次在给药后2min、5 min、10 min、15 min、20 min、25 min 采血，分光光度计法测血浆药物浓度，计算药动学参数（k，T1/2，CL，V d）。
结果：正常家兔及肾损家兔在给药后PSP血浆浓度均逐渐降低，但肾损伤组在2min、5 min、10 min、15 min、20 min显著高于正常组，在25 min与正常组无显著性差异。
而肾损家兔的药物消除速率常数（k）和清除率（CL）低于正常家兔，消除半衰期（t1/2）高于正常家兔,表观分布容积（V d）显著低于正常家兔。
结论：PSP主要经肾脏排泄，家兔肾功能受损后，PSP的排泄速率减慢，有关的药动学参数发生相应变化。
【关键词】苯酚磺酞肾脏清除率消除半衰期药物代谢动力学（pharmacokinetics）简称药动学，主要研究药物的体内过程包括吸收、分布、代谢和排泄四个基本过程和药物在体内随时间变化的速率过程。
PSP静脉注射后迅速分布全身，其血浆浓度与各组织器官的浓度之间保持动态平衡。
此时整个机体可视作单一房式，即一室模型，在给药后不同时间取血测定血浆药物浓度，依血药浓度与时间关系计算药动学参数。
PSP主要经肾脏排泄。
家兔肾功能受损后，PSP的排泄速率减慢，与消除有关的常数k，T1/2，CL就会发生改变，实验主要目的是观察这些常数的改变。
1.材料和方法1.1 实验动物：家兔1.2 器材：动物手术器材，约10cm长细尼龙导管，20ml、5ml及1ml注射器各1副，7~5号针头3个，干洁刻度试管12支，5ml吸管1只，200μl移液器，缝线，小毛巾，洗耳球1只，80-2型台式离心机、7200型分光光度计。
1.3 药品和试剂6g/LPSP溶液、60 g/L升汞溶液、乌拉坦，苯巴比妥钠溶液、稀释液（0.9% NaCl 29ml +1 mol/L NaOH 1ml）、10 g/L 肝素钠溶液。
药物动力学实验方法概述
2－1－2 组织样品的消化
对于与组织结合很牢的药物，采用沉淀蛋白的 处理难以使药物充分释放出来，此时可将组织消 化。 剧烈的条件：如NaOH溶液，甲酸－双氧水 等；这种处理也可能导致药物的破坏，一般适用于 放射性同位素标记药物的实验。 温和的条件：常用蛋白水解酶使肽键降解。
2－1－3 缀合物的水解
历史
药物代谢的研究始于何时还没有一个非 常权威的考证，可能要追溯到二十世纪四 十年代或更早，当时这方面的论文甚少， 直至六十年代，研究论文的数量才陡然增 加。其后的发展更加迅猛，从研究技术、 方法到研究内容均取得了巨大的进展，衍 生出不同的专业方向，甚至形成了独立的 学科。
药物代谢的研究内容
1. 吸收：药物从给药处进入血液循环的过程，可以从速度 和数量加以定量。通过测定不同时间的血中药物浓度确 定。有关参数：达峰时间（Tmax），峰浓度（Cmax）, 药时曲线下的面积AUC。 2. 分布：药物被血液运送到各组织的过程，也包括速度和 数量上的区别。通过测定不同时间组织中药物含量来确 定。对于动物，可直接取各种组织来测定药物含量。人 则不能直接测定，只能利用数学方法来推算。有关参 数：分布容积（Vα） 3. 代谢（生物转化）：药物在结构上被体内的酶系统改变 的情况。通过鉴定代谢产物的结构来确定。 4. 排泄：药物通过粪便、尿液等从体内排出体外的过程。 通过测定不同时间药物在粪尿中的含量来确定。 3、4合称为药物处置。有关参数：血桨半衰期（T1/2）, 总清除率（CLs）, 肾清除率（CLr）。
影响提取率和专一性的因素
1.pH值：与药物pka值有关，药物只有以非电离形 式存在时，才能被有机溶剂提取。 因此，对于碱性药物，pH应高于pka值1-2个 pH单位，对于酸性药物，pH应低于pka值1-2个pH 单位，药物可保持在非电离形式。 2.溶剂的极性： 非极性物质易溶于极性小的溶剂中，极性大的 物质则易溶于极性溶剂中，因此，应根据被测组分 的极性选择相似极性的溶剂。 例如，代谢物的极性 通常比母体药物高，因此可利用不同极性的溶剂选 择性地提取母药和代谢物。
药动学实验报告
实验一：血药浓度法测定扑热息痛口服给药的药动学参数（10药剂）指导老师：杨红梅老师组员： 1025001 陆洁 1025002 谭聪婷1025003 林小英 1025009 周晓妮1025010 文玉琴 1025011 莫振桂1025012 陈英澜实验时间：2013年5月22日【实验目的】掌握口服给药后用血药浓度法测定药物制剂的药物动力学参数的原理与方法，并加深对这些参数的理解。
【仪器与试剂】仪器：离心机、紫外分光光度法、具塞刻度试管，离心式管、涡旋混合器试剂：对乙酰氨基酚、1﹪肝素溶液、0.12mol/L氢氧化钡溶液、20g/L 硫酸锌溶液【实验原理】血管外给药途径包括口服、皮下注射、透皮给药等。
血管外给药后，药物的吸收和消除常用一级过程描述，即药物以一级速度过程吸收进入体内，然后以一级速度过程从体内消除（一级吸收模型）。
体内血药浓度与时间的关系为：C=kaFX OV(k a-k)(e-kt-e-kat)对大多数药物来说，吸收速率常数k a d大于消除速率常数k。
当k a远大于k,且t较长时，则e-kat趋向零，上式可简化为：C=kaFX OV(k a-k)*e-kt利用尾段直线即可计算消除速度k。
残数浓度C残与时间t的关系式为：C残=k a FX0V(k a-k)*e-kat利用残数线即可计算消除速度k a。
错误！未指定书签。
【试验方法】1 标准曲线的制备1.1 标准溶液的配制精密称取105℃干燥恒重的扑热息痛1g（按含量计算称取）。
用热蒸馏水溶解，与250ml容量瓶中，冷至室温后稀释至刻度，置冰箱保存备用（40000vg/ml）。
分别精密吸取上述40000vg/ml的浓贮备液1.25、2.5、3.75、5.0、6.25ml于100ml容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，用50、100、150、200、250vg/ml的标准溶液。
1.2 空白（无药）血浆的制备将实验动物家兔静脉处毛拔掉，涂擦酒精，用100W灯泡烤5min，再将耳静脉横向切开，用经1%肝素溶液处理并烘干的离心管采血约9ml。
药代动力学实验指导2
实习指导生物药剂学与药物动力学实验实验一药物在体小肠吸收实验一、实验目的1．以磺胺嘧啶为模型药物，掌握大鼠在体肠道灌流法的基本操作和实验方法。
2．掌握药物肠道吸收的机理及吸收速度常数（k a）与吸收半衰期[t1/2(a)]的计算方法。
二、实验原理药物消化道吸收实验方法可分为体外法（in vitro）、在体法（in situ）和体内法（in v ivo）。
在体法由于不切断血管和神经，药物透过上皮细胞后即被血液运走，能避免胃内容物排出及消化道固有运动等生理影响，是一种较好的研究吸收的方法。
但本法一般只限于溶解状态药物，并有可能将其他因素引起药物浓度的变化误认为吸收。
消化道药物吸收的主要方式为被动扩散。
药物服用后，胃肠液中高浓度的药物向细胞内透过，又以相似的方式扩散转运到血液中。
这种形式的吸收不消耗能量，扩散的动力来源于膜两侧的浓度差。
药物转运的速度可用Fick's（注：最后一稿校，全书一致）扩散定律描述：式中，为扩散速度；D为扩散系数；A为扩散表面积；k为分配系数；h为膜厚度，C GI为胃肠道中药物浓度；C为血药浓度。
在某一药物给予某一个体的吸收过程中，其D、A、h、k均为定值，可用透过系数P来表示，即。
当药物口服后，吸收进入血液循环中的药物，随血液迅速地分布于全身。
故胃肠道中的药物浓度（C GI）远大于血中药物浓度（C），则上式可简化为：上式表明药物被动转运（简单扩散）透过细胞膜的速度与吸收部位药物浓度的一次方成正比，表明被动转运速度符合表观一级速度过程。
若以消化液中药量（X a）的变化速度（）表示透过速度，则：式中，k a为药物的表观一级吸收速度常数。
对上式积分后两边取对数：式中，X a为t时间消化液中药量；X0为零时间消化液中药量。
以lg X a对t作图可得一直线，由此直线斜率即可求出药物的吸收速度常数，并可计算吸收半衰期：本实验以磺胺嘧啶为模型药物，进行大鼠在体小肠吸收试验。
三、仪器与材料仪器：蠕动泵、紫外-可见分光光度计、恒温水浴、离心机、注射器、眼科剪刀、眼科镊子、手术刀片等。
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血药浓度计算
样品管OD
= 标准管OD 标准管药物浓度 (μg/ ml) 样品管OD 标准管药物浓度 标准管OD 血药浓度 = 样品管药物浓度 30
样品管药物浓度 (μg/ ml)
样品管药物浓度 =
【方法与步骤】
麻醉(称重，iv 3％戊 巴比妥钠1.0 ml/kg） 动脉插管：夹住近 心端，结扎远心端 气管插管 分离颈总动脉 肝素化：iv 1000u/ml 肝素生理盐水，1 ml/kg
取空白血样：>0.4ml 给药: iv 20％SD 1.5ml/kg 比色 计时，取给药后各 时间点血样0.2ml 显色
0.5％亚硝 充 0.5％ 酸钠（ml） 分 麝香 摇 草酚 (先） 匀 （ml） 0.5 0.5 1 1
光密 度
浓度 g/ml
空白 标准
1
3
2.7
2.7
0.2
0.2
0.5
0.5
1
1
5
15 30 45 60 90
2.7
2.7 2.7 2.7 2.7
0.2
0.2 0.2 0.2 0.2 0.2
722分光光度计的使用方法
• 开机预热30min • 按‘模式’ 按钮‘透射比’ 放入空白 管（对应光孔处） • 打 开 盖 板 调 零 （ 0% ） ， 合 上 盖 板 调 满 （ 100% ），如此三次。稳定后在合上盖板 状态下再次按‘模式’ ‘吸光度’ • 比色时由低高浓度进行，并且尽快完成
【结果与处理】
• 将所得数据填入表1中，并用计算机软件 绘制药物的药时曲线。
【注意事项】
• 麻醉药注射速度要慢 • 动脉插管时远心端一定结扎牢固；放血时动脉夹不 要离开血管；不能用镊子、止血钳夹血管 • 必须取空白血样，否则无法进行实验 • 注射药物一定要真正到达要注射的部位 • 每次取血前要先将插管中的残血放掉 • 每取一个血样必须更换吸头 • 将血样加到三氯醋酸试管中应立即摇匀 • 实验顺序不能颠倒（空白血样，显色等） • 因时间较长，注意补麻药和检查血管通畅度
表1 磺胺类药物血药浓度测定的步骤
试管 时间 7.5％ 血液 （min） 三氯 （ml） 醋酸 （ml） 0 0 2.7 2.7 0.2 0.2 充 分 摇 匀 0.1 后 标准液0.1 离 心 0.1 5 分 0.1 钟， 0.1 取 0.1 上 清 0.1 液 1.5 0.1
ml
蒸馏水 （ml）
第一章 药动学实验
实验一 磺胺类药物静脉给药后的药时曲线
【目的】了解磺胺类药物（ sulfonamides ） 静脉一次给药后血浓随时间变化的规律。
【原理】
• Sulfonamides 能与某些试剂发生反应生成有 色物质，通过比色可以对sulfonamides血药浓 度进行定量分析 • Sulfonamides 在酸性环境下使其苯环上的氨 基 （ —NH2 ） 离 子 化 生 成 铵 类 化 合 物 （ — NH3+），与亚硝酸钠反应后，发生重氮化反 应生成重氮盐（ —N ＝ N+— ）。该化合物在 碱性条件下与麝香草酚生成橙黄色化合物。 在 525nm 波 长 下 比 色 ， 其 光 密 度 与 Sulfonamides浓度成正比
【动物】 2kg左右兔一只 【药品】 • 20％磺胺嘧啶（sulfadiazine，SD） • 7.5％三氯醋酸 • 0.1％SD标准液 • 0.5％亚硝酸钠 • 0.5％麝香草酚（用20％NaOH配制） • 1000u/ml肝素生理盐水 • 3％戊巴比妥钠 • 蒸馏水
【器材】
• • • • • • • 722分光光度计 离心机 电子秤 手术器械 动脉夹、尼龙插管（或玻璃插管、硅胶管） 兔手术台 注射器及针头、移液器、吸头、离心管、试管、 试管架 • 计算机