实验一 植物染色体压片法

（九）永久装片 把压好的玻片标本，放在冰箱冷藏箱里冻 结。然后用刀片迅速把盖玻片和载玻片分开， 用电吹风把玻片吹干后，滴上油派胶加上盖 玻片封片，或经二甲苯透明后，滴中性树胶， 加盖玻片封片，做成永久封片。
五、作业
1．绘有丝分裂中期或后期细胞图像。 2．在你观察的细胞分裂过程中，哪些分裂时 期最多？ 3．根据你的实验情况总结出制备好一张优良 的细胞分裂标本应注意哪些问题?
（四）解离 将固定后（或保存后）的根尖分装到指 管内，用清水洗几次，吸干水，加入盐酸酒 精离析液，在室温下水解10～20分钟，解离 成功的根尖，分生组织发白，伸长区已呈半 透明，似烂状。解离后的根尖用水轻洗2～3 次，以利于着色。 解离的目的是使分生组织细胞间的果胶 质分解，细胞壁软化或部分分解，使细胞和 染色体容易分散压平，解离方法有酸解法和 酶解法。
四、实验方法和说明
（一）生根 用刀片将洋葱的老根削去露出鳞基，然后 将鳞基置于盛水的小烧杯上，放在25℃培养箱 内培养。待根长到2cm左右时，在上午九时切 下根尖进行下一步处理。 植物细胞分裂周期的长短不尽相同，通常 在十到几十小时之间，温度明显地影咱分裂周 期，对于一个不太熟悉的实验材料，最好在特 定温度下生根，掌握有丝分裂高峰期，以使得 到更多的处于有丝分裂中期的细胞。
* +++优 ++良。
（三）固定 固定时，将根尖投入固定液中室温处理3～ 24小时。材料若不及时用，可经过90%酒精和 70%酒精浸洗一次，再换入新的70%酒精中， 置于冰箱内0～4℃保存备用。经过较长时间保 存的材料，在进行观察前可用固定液再处理一 次，效果较好。 通常采用的固定液是卡诺氏固定液。固定 的目的是借助于物理的或化学药剂的作用，迅 速透入组织和细胞将之杀死；并使其结构和内 含物，在形态结构上尽可能保持生活时的完整 和真实状态，同时更易于着色，可以较清楚的 显现细胞在生活是不易看清的结构。
①低温预处理：低温处理可以引起染色 体的缩短并可获得较多的中期分裂相，而且 此法无须使用任何药物，安全性高。但不同 的植物所需的预处理温度是有差异的，如小 麦的处理温度为1～5℃，水稻和玉米则需6～ 8℃，剪下的根尖置于盛有蒸馏水的烧杯内， 放入冰箱中低温预处理20～40h。
②秋水仙素（colchicine）：是从百合科植物 秋水仙的种子和鳞茎中提取的一种生物碱。它的分 子式为C22H25NO6。纯的秋水仙素为针状结晶，一般 商品秋水仙素为淡黄色粉末。熔点为155℃，味苦。 易溶于冷水、酒精、氯仿和甲醛，但在热水中溶解 度较低，不易溶于苯和乙醚。 秋水仙素毒性极强，可以导致眼睛暂时失明和 使中枢神经系统麻痹而导致呼吸困难。在使用过程 中要特别注意安全，同时要做好药品的管理工作。 一般认为秋水仙素对纺缍丝有麻痹和毒害作用， 也有人认为秋水仙素通过抑制ATP的机制从而破坏纺 缍丝的形成及活动。处理后的染色体收缩较直，有 利于对染色体结构的研究。秋水仙素水溶液的作用 效果与其浓度成正比，浓度越高，作用效果越强。 通常用0.05%～0.2%的秋水仙溶液处理2～4h。
（二）预处理 把根尖放到对二氯苯饱和水溶液，或0.02 ％秋水仙素溶液中，浸泡处理3—4小时。 预处理是为了有利于对有丝分裂中染色体 的观察和计数，一般在固定之前应用理化因素 进行预处理，这样可以改变细胞质的粘度，抑 制或破坏纺锤丝的形成，促使染色体缩短和分 散等。通常是在分裂高峰前，把根尖浸泡到药 剂中处理3～4小时以上。
植物 名称 小麦
染色体 数(2n） 42
处 理 因 素 0.2%秋水仙素水溶液
处理时间 9:00-11:00
温 度 25℃
效 果* +++
小麦
小麦 小黑麦 豌豆 烟草 蚕豆 蚕豆 洋葱 茄子 大麦
42
42 56 14 48 12 12 16 24 14
对二氯苯饱和水溶液
1～4℃冰箱 对二氯苯饱和水溶液 对二氯苯饱和水溶液 对二氯苯饱和水溶液 0.05～0.1%秋水仙素水溶液 0.05～0.1%秋水仙素水溶液 0.05～0.1%秋水仙素水溶液 0.002M 8-羟基喹啉 0.05～0.1%秋水仙素水溶液
④8-羟基喹啉（8-Hydroxyquinolin）：其分子 式为C9H7NO，为白色结晶或粉末，溶于酒精而难溶 于水。8-羟基喹啉的作用机制，一般认为它首先引 起细胞质粘度的改变，结果导致纺缍体的活动受阻。 所用浓度范围是0.002～0.004M之间，特别适用于具 有较大染色体的植物。它的优点是经它处理后，可 使中期染色体在赤道面上保持其相应的排列位置， 另一优点是处理后的缢痕区较为清晰。 下表为不同材料采用不同预处理方法获得的效 果，供参考。
（五）水洗 经解离的材料用蒸馏水反复 冲洗4-5次。 目的是冲去材料中的酸以利于染色。
（六）染色 将解离后的根尖放在洁净的载玻片上，切取其根尖分生组织（约 1mm左右），剁成碎末，滴加改良苯酚品红染色液染色10-15分钟左右。 改良苯酚品红染液： 是近年来观察植物染色体时新使用的比较理 想的染色剂，优点较多，使用方便。配法顺序如下： 原液A：取3克碱性 品红溶于100毫升70%酒精中，此液可以长期保存。 原液B：取A液10毫 升加入90毫升5%苯酚(即石炭酸)水溶液中(2周内使用)。 原液C：取B液 55毫升加入6毫升的冰醋酸和6毫升38%的甲醛(可长期保存)。 染色液： 取C液10-20毫升，加入90-80毫升45%醋酸和1.5克山梨醇。放置2周后 使用，染色效果显著，可普遍用于植物组织的压片法和涂片法，使用2-3 年不变质。山梨醇为助渗剂，兼有稳定染色液的作用。如果没有山梨醇， 也能染色，但效果稍差。 改良苯酚品红染色液对果蝇唾液腺染色体的染 色效果与醋酸染洋红染色液的染色效果是相同的。而且用改良苯酚品红 染色液还能提高工效，简易节约的优点。
实验一 植物染色体压片法
一、实验目的
• 学习植物根尖染色体压片方法的基本技术。 • 熟悉细胞有丝分裂各个时期的形态特征及 染色体的变化特点，为研究染色体组型等 打基础。
二、实验原理ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
有丝分裂是体细胞分裂的主要方式，一般发生在 植物根尖或茎尖的分生组织中。在有丝分裂时，细胞 核与细胞质有很大的变化，但以细胞核内染色体的变 化最为明显，而且是有规律地进行。 各种生物染色体在数目上和形态上是相对恒定的， 并随科属种的不同而具有一定的特征。 洋葱体细胞中有8对共16条染色体，在有丝分裂过 程中，每个染色体能复制一份，然后分配到两个子细 胞中，所以两个子细胞与母细胞所含的染色体在数目、 形态和性质上都是相同的。 在细胞遗传学研究中，人们常常需要了解某一物 种的染色体数目，而最有效的方法就是观察细胞有丝 分裂的中期，这样能得到较为准确的结果。
蚕豆根尖2n=2x=12
豌豆根尖 2n=2x=14
玉米根尖 2n=2x=20
水稻根尖 2n=2x=24
三、实验用品
（一）材料 大蒜（Aillum sativum）、洋葱（Aillum cepa、 2n=16）根尖或蚕豆（Vicia faba、2n=12）根尖 （二）器材 显微镜、镊子、载玻片、盖玻片、解剖针、刀片、 试剂瓶、指管（或小培养皿）、冰箱、培养箱、吸水 纸。 （三）试剂 70%乙醇、45%冰醋酸、对二氯苯饱和水溶液、 0.2%秋水仙素溶液、卡诺氏固定液（甲醇或95%乙醇3 份，冰醋酸1份）、改良苯酚品红染色液、盐酸酒精离 析液（浓盐酸：95%乙醇=1：1）、叔丁醇、二甲苯、 95%乙醇、尤派胶或中性树胶。
③饱和对二氯苯（p-Dichlorobenzene）：其分 子式为C6H4Cl2，无色结晶，具有特殊的臭味，常温 下可升华。易溶于乙醇、乙醚、苯等有机溶剂，难 溶于水，易燃而且有毒。由于对二氯苯难溶于水， 所以一般用它的饱和水溶液，它的作用效果与秋水 仙素相似，但价格却低得多，便于广泛使用。室温 下处理3～5h，此法特别适于染色体小而多的植物， 计数染色体制片效果最好。
10:00-14:00
20-24小时 10:00-14:00 10:00-11:30 8:30-11:30 20:00-23:00 14:30-17:30 7:30-11:30 9:00-13:00 8:00-11:00
室温
1～4℃ 室温 室温 室温 室温 8℃ 15℃ 15℃ 25℃
+++
+++ +++ +++ +++ +++ +++ +++ +++ ++