甲醛滴定法测定溶液中的氨基酸含量
氨基酸总量测定
氨基酸总量测定蛋白质经水解或酶解可由大分子变成小的蛋白质成分，如水解后的产物经月示、陈、肽等最后变成为氨基酸，氨基酸是构成蛋白质最基本的物质。
水解后的蛋白质和水解前的蛋白质在物理特性、化学结构以及被吸收消化的程度上是很不相同的，其差别与水解的程度有密切关系，分析氨基酸的含量就可以知道水解的程度，也就可以评价食品的营养价值。
氨基酸不是单纯的一种物质，用氨基酸分析仪可直接测定出17种氨基酸（仪器价格昂贵，不能普便使用），很多氨基酸可以同时存在于一种食品中，所以需要测定总的氨基酸量。
它们不能以氨基酸的百分率来表示，只能以氨基酸中所含的氨（氨基酸态氮）的百分率来表示。
当然，如果食品中只含有一种氨基酸，如味精中的谷氨酸，就可以从氮量计算出氨基酸的含量。
在评价蛋白质的营养价值时，除了测定蛋白质的含量，氨基酸氮量，还需要对各种氨基酸进行分离、鉴定，尤其对8种人体必需氨基酸进行定性定量分析。
1.1单指示剂甲醛滴定法原理氨基酸具有酸、碱两重性质，因为氨基酸含有一CooH基显示酸性，又含有一NH2基显示碱性。
由于这两个基的相互作用，使氨基酸成为中性的内盐。
当加入甲醛溶液时，一NH2与甲醛结合，其碱性消失，破坏内盐的存在，就用碱来滴定一COOH基，以间接方法测定氨基酸的量。
反应式以下而三种形式存在:试剂40%中性甲醛溶液，以麝香草酚醐为指示剂，以mo1/1NaOH 溶液中和0.1%麝香草酚酸乙醇溶液；0.100mo1∕1氢氧化钠标准溶液。
操作步骤称取一定量样品（约含20毫克左右的氨基酸）于烧杯中（如为固体加水50毫升）,加2〜3滴指示剂，用O.1OOmo1/1NaOH液滴定至淡蓝色。
加入中性甲醛20毫升，摇匀，静置1分钟，此时蓝色应消失。
再用0.10OmC）I/1NaOH溶液滴定至淡蓝色，记录两次滴定所消耗的碱液毫升数，用下述公式计算氨基酸氮的含量。
计算氨基酸态氮（％）=MVX0.014><100/W式中：M一氢氧化钠标准溶液摩尔浓度V一氢氧化内标准溶液消耗的总量（毫升）W一样品溶液相当样品重量（克）0.014一氮的毫摩尔质量g/mmo11.2双指示剂甲醛滴定法原理与单色法相同，只是在此法中使用两种指示剂。
中华人民共和国国家标准甲醛值法
中华人民共和国国家标准甲醛值法1 主题内容与适用范围本标准规定了用甲醛值滴定法测定果蔬汁饮料中氨基态氮含量的方法。
本标准适用于浓缩果蔬汁、果蔬原汁、果蔬汁饮料及果蔬汁固体饮料。
2 引用标准GB 601 化学试剂标准溶液制备方法GB 604 化学试剂指示剂pH变色域制定法GB 685 化学试剂甲醛溶液HG 3-1082 30%过氧化氢3 原理氨基酸为两性电解质。
在接近中性的水溶液中,全部解离为双极离子。
当甲醛溶液加入后,与中性的氨基酸中的非解离型氨基反应,生成单羟甲基和二羟甲基诱导体,此反应完全定量进行。
此时放出氢离子可用标准碱液滴定,根据碱液的消耗量,计算出氨基态氮的含量。
其离子反应式如下：NH2NH2│ │R─CH─COO→←R─CH─COO-+H+ (1)NH2 NHCH2OH│ │R─CH─COO-+HCHO R─CH─COO- (2)NHCH2OH HOH2CNCH2OH│ │R─CH─COO-+HCHO→←R─CH─COO- (3)4 试剂所用试剂均为分析纯,使用的水为蒸馏水或同等纯度的水。
4.1 0.1mol/L氢氧化钠标准溶液：按GB 601配制与标定。
4.2 0.05mol/L氢氧化钠标准滴定溶液：用0.1mol/L的氢氧化钠标准溶液当天稀释。
4.3 中性甲醛溶液：量取200mL甲醛溶液(GB 685)于400mL烧杯中,置于电磁搅拌器上, 边搅拌边用0.05mol/L氢氧化钠溶液调至pH8.1.4.4 30%过氧化氢(HG 3-1082).4.5 pH 6.8缓冲溶液：按GB 604中“缓冲溶液的制备”配制。
5 仪器设备实验室常用玻璃仪器及下列各项：5.1 酸度计：直接读数,测量范围0～14pH,精度±0.1pH.5.2 电磁搅拌器。
5.3 玻璃电极和甘汞电极。
6 试样的制备6.1 浓缩果蔬汁在浓缩果蔬汁中,加入与在浓缩过程中失去的天然水分等量的水,使其成为果汁,并充分混匀,供测试用。
关于氨基酸的定量分析
• 再在冰浴中冷却3 min 以上,加碘化钾5mL , 立即用硫代硫酸钠标准滴定溶液滴定至淡 黄色,加入淀粉溶液2 mL ,继续滴定至蓝色 消失为终点,同时做空白试验。
x(v1 v2)c0.02403100 m 25 100
有吸收的衍生试剂。该方法的基本原理是 经阳离子交换柱分离出的氨基酸与茚三酮 混合,经加热反应后,一级胺与之生成蓝紫 色化合物,二级胺与之生成黄色化合物。两 种衍生物使用双通道紫外检测器同步检测, 检测波长分别为570nm 和436nm。
C OH
C
C
OH
O
茚三酮
O
C OH
C
C
OH
O
COOH
H 3N
C
关于氨基酸的定量分析
氨基酸的分析方法
化学分析法——甲醛滴定法 甲醛滴定法用于氨基氮的
测定, 可以测出样品中总氨基酸 的含量,其原理是在中性或弱碱 性水溶液中,氨基酸的α—氨基与醛类反应生成
Schiff碱:α—氨基酸与甲醛反应生成亚 甲基亚氨基衍生物
H
R C C O O
N H 3
H C H O
O H
H
பைடு நூலகம்
R
O
C OH
C
C
H
NH3
CO2
O
O
C OH C
C OH
O
O C
C C O
O
C
NC
H
C
O
紫色化合物
RCHO
H
O C
CN C O
亮黄色化合物
氨基酸分析的检测方法评述
文章编号:1004-7964(2004)03-0039-05收稿日期:2003-11-05基金项目:国家高技术研究发展计划(863计划)经费资助,课题编号:2001AA647020四川大学青年基金,课题编号:H2002[9-057]第一作者简介:戴红,女,1966年出生,副教授。
主要研究方向:分析检验。
氨基酸分析的检测方法评述戴红,张宗才,张新申(皮革化学与工程教育部重点实验室(四川大学),四川成都610065)摘 要:对氨基酸分析常用的化学方法、电化学方法、分光光度法(包括可见光分光光度法,紫外光分光光度法和荧光分光光度法)等检测方法进行综述,以期为提高氨基酸分析的灵敏度、准确性,为快速、高效的氨基酸分析方法的建立提供参考。
关键词:氨基酸;检测;分析中图分类号:Q517;Q503 文献标识码:ADetermination M ethods of Amino A cids A nalysisDA I Hong ,ZHA N G Zong 2cai ,ZHA N G Xi n 2shen (Key L aboratory of L eather Chemist ry and Engi neeri ng(S ichuan U niversity ),M i nist ry of Education ,Chengdu 610065,Chi na )Abstract :Determination methods for amino acids ,including chemistry determination ,elec 2tric 2chemistry determination ,spectrophotometer determination and conductivity detection method were reviewed for the sake of improving the analysis sensitivity and accuracy.The paper aimed at providing useful reference to building a fast and effective amino acids aualytic methods.K ey w ords :amino acid ;analysis ;determination 氨基酸是蛋白质的基本结构单位和生物代谢过程中的重要物质,氨基酸分析技术对蛋白质化学、生物化学和整个生命科学研究以及产品开发、质量控制和生产管理等具有重要意义,广泛地应用于化工、轻工、食品加工、医药卫生行业的医药、食品、保健品等的分析,并且用于皮革化学鞣革机理的研究中[1,2,3]。
甲醛滴定法测定溶液中的氨基酸含量.docx
甲醛滴定法测定氨基酸含量一、目的掌握甲醛滴定法测定氨基酸含量的原理和操作要点二、原理水溶液中的氨基酸为兼性离子，因而不能直接用碱滴定氨基酸的羧基。
甲醛可与氨基酸上的一N%3结合，形成一NH —CH Q OH、一N （CH2—0H）2等羟甲基衍生物，使N+H3上的H+游离出来，这样就可以用碱滴定N+H3放出H+,测出氨基氮，从而计算氨基酸的含量。
若样品中只含有单一的已知氨基酸，则可由此法滴定的结果算出氨基酸的含量。
若样品中含有多种氨基酸（如蛋白质水解液），测不能由此法算出氨基酸的含量。
脯氨酸与甲醛作用后，生成的化合物不稳定，导致滴定后结果偏低；酪氨酸含酚基结构，导致滴定结果偏高。
三、材料、试剂与器具（一）试剂1、1%酚酞酒精溶液称Ig酚酞溶于IOOmI 95%酒精中。
2、0.5%溴麝香草酚蓝溶液取0.5溴麝香草酚蓝溶于100ml 20%乙醇溶液中。
3、氨基酸溶液4、标准0.100mol∕L氢氧化钠溶液5、中性甲醛溶液取甲醛溶液50ml ,加1%酚酞指示剂2滴，滴加0.1mol∕L NaoH 溶液，使溶液呈微粉红色，临用前中和 （二）实验器具 1、锥形瓶 3、移液管洗耳球 5、容量瓶 7、量筒 四、操作步骤1、取3只50ml 锥形瓶，按下表加入试剂(pH8.7~9.0)2、碱式滴定管 4、天平 6、试剂瓶 8玻棒与烧杯3、结果计算氨基酸溶液中含氨基酸的百分比浓度为式中：C=（V1-V2）× C0×氨基酸分子量/（10× V样）C:总酸含量（g∕100ml）V i为滴定样品消耗标准氢氧化钠的体积（ml）; V2为滴空白消耗氢氧化钠的体积（ml）；C o :标准氢氧化钠准确浓度（mol∕L）V样：样品体积（ml）4、氢氧化钠标准溶液的标定4 1 κm标准is定落液4.1.1配制⅛⅛ no g⅛S'⅛钠需于IOQmL无二敦化晞⅛水中滞匀琏人聚乙烯容界中•密闭放置至溶液清氐按表1倾定佣酬管量取上翩孰用无二輸斛水解至IQ伽L,齣.表1标定按表2的规定称取于105Γ-110t电烘箱中十煥至国重的工作基准试剂命苯二屮酸爼銅厠无二水溶絹加2⅛≡ao示椒10 XLh用吃制⅛τ⅛s¾⅛⅛溶發滴定至酒液呈粉虹色供保痔30S4同时做零白试蜃。
甲醛滴定法测定氨基酸的原理
甲醛滴定法测定氨基酸的原理嘿，你知道吗？甲醛滴定法测定氨基酸，那可真是个神奇的事儿！咱先说说啥是氨基酸。
氨基酸就像是生命的小砖块，构建起了我们身体的各种重要物质。
没有氨基酸，咱可就没法正常运转啦！那怎么才能准确地测定氨基酸呢？这时候甲醛滴定法就闪亮登场了。
甲醛滴定法到底是咋回事呢？简单来说，就是利用甲醛和氨基酸的特殊反应来进行测定。
这就好比一场奇妙的化学反应舞会，甲醛和氨基酸在这个舞池中相遇，然后发生一系列的变化。
甲醛就像是一个神秘的魔术师，它能和氨基酸发生一些特别的反应。
当甲醛加入到含有氨基酸的溶液中时，会发生什么呢？氨基酸的氨基会和甲醛结合，形成一种新的化合物。
这就像是两个小伙伴手拉手，组成了一个新的团队。
这种新的化合物有啥特点呢？它的碱性会增强。
为啥会增强呢？这就像是给一个原本不太起眼的人穿上了一件闪亮的外套，一下子变得更加引人注目了。
碱性增强后，我们就可以用碱来滴定它了。
滴定的过程就像是一场精准的游戏。
我们小心地滴加碱液，看着溶液的变化。
就好像是在小心翼翼地走钢丝，一步一步都要非常谨慎。
当溶液的酸碱度达到一定的值时，我们就知道了氨基酸的含量。
你想想，这多神奇啊！通过这么一个看似简单的方法，就能准确地测定出氨基酸的含量。
这对于科学家们来说，可真是个了不起的工具。
在实际应用中，甲醛滴定法有很多优点呢。
它操作相对简单，不需要特别复杂的仪器。
这就好比是一个实用的小工具，随时都能拿出来用。
而且，它的准确性也比较高，可以为我们提供可靠的数据。
但是，就像任何方法都不是完美的一样，甲醛滴定法也有一些局限性。
比如说，它可能会受到其他物质的干扰。
这就像是在一场音乐会上，突然出现了一些噪音，会影响我们欣赏音乐的效果。
不过，这并不妨碍甲醛滴定法在很多领域的应用。
在食品工业中，我们可以用它来检测食品中的氨基酸含量，确保食品的质量和营养价值。
在医药领域，它也能帮助我们研究药物的成分和作用。
总的来说，甲醛滴定法测定氨基酸是一个非常有趣且实用的方法。
甲醛滴定法测定溶液中的氨基酸含量
甲醛滴定法测定溶液中的氨基酸含量甲醛滴定法测定氨基酸含量一、目的掌控甲醛滴定法测量氨基酸含量的原理和操作方式要点二、原理水溶液中的氨基酸为兼性离子，因而不能直接用碱滴定氨基酸的羧基。
甲醛可与氨基酸上的―n+h3结合，形成―nh―ch2oh、―n(ch2―oh)2等羟甲基衍生物，使n+h3上的h+游离出来，这样就可以用碱滴定n+h3放出h+，测出氨基氮，从而计算氨基酸的含量。
若样品中只所含单一的未知氨基酸，则可以由此法电解的结果算是出来氨基酸的含量。
若样品中所含多种氨基酸（例如蛋白质水解液），测无法由此法求出氨基酸的含量。
脯氨酸与甲醛作用后，生成的化合物不稳定，导致滴定后结果偏低；酪氨酸含酚基结构，导致滴定结果偏高。
三、材料、试剂与器具（一）试剂1、1%酚酞酒精溶液称1g酚酞溶于100ml95%酒精中。
2、0.5%溴麝香草酚蓝溶液挑0.5溴麝香草酚蓝溶100ml20%乙醇溶液中。
3、氨基酸溶液4、标准0.100mol/l氢氧化钠溶液5、中性甲醛溶液取甲醛溶液50ml，加1%酚酞指示剂2滴，滴加0.1mol/lnaoh溶液，使溶液呈微粉红色，临用前中和。
（二）实验器具1、锥形瓶2、碱式滴定管3、移液管洗耳球4、天平5、容量瓶6、试剂瓶7、量筒8、玻棒与烧杯四、操作步骤1、挑3只50ml锥形瓶，按下表中重新加入试剂。
锥形瓶编号试剂氨基酸溶液或样品（ml）蒸馏水（ml）中性甲醛溶液（ml）0.05%溴麝香草酚蓝溶液（几滴）1%酚酞乙醇溶液（几滴）1.05.05.0221.05.05.022―6.05.022样品1样品2空白2、搅匀后用标准0.100mol/l氢氧化钠溶液电解至紫色（ph8.7~9.0）3、结果计算氨基酸溶液中不含氨基酸的百分比浓度为c=（v1-v2）×c0×氨基酸分子量/（10×v样）式中：c：总酸含量（g/100ml）v1为电解样品消耗标准氢氧化钠的体积（ml）；v2为滴空白消耗氢氧化钠的体积（ml）；c0：标准氢氧化钠精确浓度(mol/l)v样：样品体积(ml)4、氢氧化钠标准溶液的标定五、注意事项（1）利用甲醛滴淀法可以用来测定蛋白质的水解程度。
氨基酸态氮的检验方法
氨基酸态氮的检验方法一﹑原理：根据氨基酸的两性作用，加入甲醛以固定氨基的碱性，使羧基显示出酸性，将酸度计的玻璃电极及甘汞电极同时插入被测液中构成电池，用用氢氧化钠标准溶液滴定后依据酸度计指示的pH值判断和控制滴定终点。
二﹑试剂：甲醛（36%）、氢氧化钠标准滴定溶液C=L仪器：酸度计﹑磁力搅拌器﹑10ml碱式滴定管三﹑分析步骤：1.准确称取5g（液体吸取5ml）样品，置于100ml容量瓶中，加水至刻度，混匀后吸取，置于200ml烧杯中，加60ml水（酵母类吸取5ml,加55ml水），开动磁力搅拌器，用氢氧化钠标准溶液C（NaOH）=L滴定至PH=[注：滴定时应先快后慢,如果不小心滴过量可用玻璃棒蘸取少量L盐酸沿烧杯壁流入溶液；开磁力搅拌器时,转速要由慢变快,不要让转子碰到电极]2.加入10ml甲醛溶液,混匀。
再用氢氧化钠标准溶液（L）继续滴定至PH=,记下样品PH从到消耗氢氧化钠标准溶液L)的毫升数。
3.空白试验：将80ml蒸馏水（酵母类为60ml）置于200ml烧杯中滴定，记录加入甲醛后消耗标液毫升数。
四﹑计算：()1230.014100%100V V CXVm-⨯⨯=⨯⨯式中：X——样品中氨基酸态氮的含量，g/100ml1V——样品稀释液加入甲醛后消耗氢氧化钠标准溶液的体积，ml 2V——试剂空白加入甲醛后消耗氢氧化钠标准溶液的体积，ml 3V——样品稀释液取用量，mlM——样品质量，gC——氢氧化钠标准溶液的浓度，mol/L六、备注滴定空白时，由于PH=时的显示值极不稳定，可加一滴氢氧化钠标准液后直接加甲醛，不必待其稳定，然后先预滴，再逐滴滴定至PH=。
参照：GB/谷氨酸钠测定以上操作步骤不变，操作步骤2滴定终点改为滴定至PH=，计算公式系数改为进行计算参照SB/T 10371-2003 鸡精调味料。
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甲醛滴定法测定氨基酸含量
一、目的
掌握甲醛滴定法测定氨基酸含量的原理和操作要点
二、原理
水溶液中的氨基酸为兼性离子，因而不能直接用碱滴定氨基酸的羧基。
甲醛可与氨基酸上的—N+H3结合，形成—NH—CH2OH、—N(CH2—OH)2等羟甲基衍生物，使N+H3上的H+游离出来，这样就可以用碱滴定N+H3放出H+，测出氨基氮，从而计算氨基酸的含量。
若样品中只含有单一的已知氨基酸，则可由此法滴定的结果算出氨基酸的含量。
若样品中含有多种氨基酸（如蛋白质水解液），测不能由此法算出氨基酸的含量。
脯氨酸与甲醛作用后，生成的化合物不稳定，导致滴定后结果偏低；酪氨酸含酚基结构，导致滴定结果偏高。
三、材料、试剂与器具
（一）试剂
1、1%酚酞酒精溶液
称1g酚酞溶于100ml 95%酒精中。
2、%溴麝香草酚蓝溶液
取溴麝香草酚蓝溶于100ml 20%乙醇溶液中。
3、氨基酸溶液
4、标准L 氢氧化钠溶液
5、中性甲醛溶液
取甲醛溶液50ml，加1%酚酞指示剂2滴，滴加L NaOH溶液，使溶液呈微粉红色，临用前中和。
（二）实验器具
1、锥形瓶
2、碱式滴定管
3、移液管洗耳球
4、天平
5、容量瓶
6、试剂瓶
7、量筒8、玻棒与烧杯
四、操作步骤
1、取3只50ml锥形瓶，按下表加入试剂。
2、混匀后用标准L氢氧化钠溶液滴定至紫色（~）
3、结果计算
氨基酸溶液中含氨基酸的百分比浓度为
C=（V1-V2）×C0×氨基酸分子量/（10×V样）式中：C：总酸含量（g/100ml）
V1为滴定样品消耗标准氢氧化钠的体积（ml）；
V2为滴空白消耗氢氧化钠的体积（ml）；
C0：标准氢氧化钠准确浓度(mol/L)
V样：样品体积(ml)
4 、氢氧化钠标准溶液的标定
五、注意事项
（1）利用甲醛滴淀法可以用来测定蛋白质的水解程度。
随着蛋白质水解度的增加，滴定值也增加，当蛋白质水解完成后，滴定值不再增加。
（2）氨与甲醛反应方程
①铵根与甲醛反应生成六次甲基四胺盐及强酸：
（氨的部分电离产生少量铵根，但由第二个反应大量消耗铵根后，氨电离方程就强烈地偏向右边了）
②反应生成的六次甲基四胺盐及3个氢离子都可以跟碱反应，而溶液中正好有还未反应的氨水，因而第二个反应，中和反应发生
(CH2)6N4H+ + NH3 = (CH2)6N4 + NH4+
H++NH3=NH4+
这第二组反应就是一个释放出中和热的过程，所以溶液就热起来。
这里生成的铵盐又重复第一组甲醛强酸化的反应，一直在①和②之间循环，直至氨被中和和转化完，理论上讲，最终的极限结果应该是略呈微碱性的六次甲基四胺。