甲醛含量测定

4.1 技术依据及原理
HCHO具有较强的还原性，能被氧化剂氧化 成相应的羧酸。基于这个原理，HCHO可在 碱性条件下，被氧化生成甲酸，加入定量、 过量的NaOH滴定液在水浴上加热15分钟，以 溴麝香草酚蓝为指示剂，用盐酸滴定液滴定 剩余的NaOH，测得甲醛的含量。反应式如下：
HCHO＋H2O2→HCOOH＋H2O HCOOH＋NaOH→HCOONa＋H2O （定量、过量）
×100= 268.8mg
4.2.3 配制浓度为0.1mg/ml对照溶液，要求称 取0.2688g（含量37.2％）的市售甲醛溶液， 精密称定，按规定可称取的量为 0.2688g±0.2688g×10%, 测 得 的 吸 收 值 就 会 比限度的值或大或小，需经折算后再进行比 较。如果实际称取的量为0.2823g，置100ml 量瓶中，该对照溶液的浓度为0.1050mg/ml， 算式如下：
4.5 计算
甲醛溶液（40%）含量%（g/ml）= 0.1 A样

0.4 × A对
A样=供试品溶液的吸收度；
A对=对照品溶液（0.1mg/L）的吸收度；
0.1为对照品溶液的浓度 ；
4.3.6 溴麝香草酚蓝指示液：取溴麝香草酚蓝 0.1g，加0.05mol/L氢氧化钠溶液3.2ml，使溶 解，再加水稀释至200ml，即得。
4.4 仪器与设备 4.4.1 分析天平（感量0.1mg）； 4.4.2 锥形瓶（250ml 5个）； 4.4.3 玻璃漏斗（3只）； 4.4.4 恒温水浴锅，准确度±1℃； 4.4.5 刻度吸管（2ml，1支） 4.4.6 移液管（25ml，1支）； 4.4.7 酸式滴定管（50ml，1支）；
4.2.5 供试品溶液必须是澄清的，否则在下一 步测定时，会影响吸收度的准确度。
4.2.6 油乳剂疫苗供试品溶液静置分层时间可 适当延长，以增强分层效果，经过滤仍不能 完全澄清，可继续试验，不影响结果。
4.3 仪器、试剂的准备及基本要求 4.3.1 仪器 4.3.1.1 紫外－可见分光光度计； 4.3.1.2 精密天平； 4.3.1.3 恒温水浴锅； 4.3.1.4 量瓶（100ml、50ml）； 4.3.1.5 刻度吸管（5ml、0.5ml）； 4.3.1.6 移液管（5ml）； 4.3.1.7 量筒； 4.3.1.8 试管。
4.3.3.2 醋酸－醋酸铵缓冲液（pH6.25）
醋酸液 醋酸（AR）12.9ml加水至100ml；
醋酸铵液 醋酸铵（AR）173.4g，加水至 1000ml溶解；
醋酸液40ml与醋酸铵液1000ml混合，置冷 暗处保存。
4.3.3.3 乙酰丙酮试液 乙酰丙酮（AR） 7ml，加乙醇14ml混合，置冷暗处保存。
相关甲醛含量测定
主要内容
甲醛含量标定 甲醛残留量测定
甲醛溶液(40%)的含量测定标准 操作规程
1 目的 本操作规程用于规范甲醛溶液的含量测定。 2 适用范围 本操作规程适用于甲醛溶液（40%）的含量测定。 3 职责 该项检验的检验员应该按该操作规程进行检验，检
测部门管理人员负责监督操作规程的正确执行。 4 检验
F为盐酸滴定液的浓度校正因子；
T=30.03，即每1ml氢氧化钠滴定液 （1.000mol/L）相当于甲醛的毫克数。
甲醛残留量测定
1 目的
本操作规程用于规范生物制品中甲醛的含量 测定。
2 适用范围
本操作规程适用于生物制品中甲醛的含量测 定。
3 职责
该项检验的检验员应该按该操作规程进行检 验，检测部门管理人员负责监督操作规程的 正确执行。
4.4.2.2 其他疫苗（与水互溶的产品）
用 5ml 刻 度 吸 管 量 取 被 测 样 品 5ml ， 置 50ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀， 即得。如不澄清，需经过滤，弃去初滤 液，取续滤液，即得。
4.4.3 检查法
4.4.3.1 取对照品溶液和供试品溶液各0.5ml，分 别加醋酸－醋酸铵缓冲液10ml，乙酰丙酮试液 10ml，摇匀，置60℃水浴15分钟（此时溶液呈 黄色），冷水冷却5分钟，放置20分钟，照分光 光度法（《中国兽药典》一部附录）在410nm 波长处测定吸收度，计算，即得。
4.5 检验步骤
4.5.1 将甲醛溶液置于小滴瓶中，精密称定滴 瓶加甲醛溶液的重量；
4.5.2 向加有10ml水的锥形瓶中滴入大约38～ 40滴（相当于1.5ml≈1.6g）甲醛；
4.5.3 再精密称取滴瓶加剩余甲醛溶液的重量， 记录称量数据，计算出称取甲醛溶液的重量；
4.5.4 加过氧化氢试液25ml与溴麝香草酚篮指 示液2滴；
4.6.2 甲醛溶液易挥发，称取后应立即滴定；
4.6.3 甲醛溶液在较低温度时易发生聚合作 用，已发生聚合作用的甲醛溶液不能作为对 照品用，所以甲醛在储存时室温不能过低。
4.6.4 浓过氧化氢溶液能烧伤皮肤，使用时须 注意。
4.6.5 金属粉末或重金属离子，甚至灰尘及器皿表面 粗糙等原因都可以加速H2O2分解，光线也能促使其分 解，所以H2O2应在低温环境，密闭、避光保存。
4.7 记录与计算 4.7.1 记录 应记录测定日期，室温，指示剂，滴定液名
称、浓度，天平型号、编号，滴定管编号， 移液管编号，记录有关的测试数据。
4.7.2 计算公式 T×F×(V空-V) ×100%
W
V空为两次空白溶液消耗盐酸滴定液
的毫升数平均值
V为供试品溶液消耗盐酸滴定液的毫升 数；
4.5.9 空白试验
4.5.9.1 精密量取氢氧化钠滴定液（1mol/L） 25ml，置锥形瓶中；
4.5.9.2 加水10ml，过氧化氢试液25ml与溴麝 香草酚蓝指示液2滴；
4.5.9.3 用盐酸滴定液（1mol/L）滴定至溶液 显黄色。
4.6 注意事项
4.6.1 称取甲醛溶液时一定注意不要使甲醛滴 到锥形瓶外面，否则重新称取；
4.2 规则
含量测定要液
4.3.1 甲醛（HCHO）溶液(40%) 分析纯（含 HCHO37.0％～40.0％）；
4.3.2 氢氧化钠滴定液（1mol/L） 取氢氧化钠 适量，加水振摇使溶解成饱和溶液，冷却后， 置聚乙烯塑料瓶中，静置数日，澄清后备用。
4.5.5 滴加氢氧化钠滴定液（1mol/L）至溶液 显蓝色；
4.5.6 再精密加入氢氧化钠滴定液（1mol/L） 25ml，瓶口置一玻璃小漏斗，置60℃水浴上 加热15分钟，不时振摇；
4.5.7 冷却，用水洗涤漏斗，加溴麝香草酚蓝 指示液2滴；
4.5.8 用盐酸滴定液（1mol/L）滴定至溶液显 黄色 。
4.6.6 由于H2O2极易分解，出厂时间或贮存时间较长 时，其浓度可能会发生变化，必要时在使用前应测定 其含量，根据H2O2的真实含有量加水将其稀释制成3 ％的溶液。
4.6.7 H2O2的含量测定： 30%，g/ml（100ml中含有 30g H2O2）。精密量取本品1ml，置储有20ml水的锥 形 瓶 中 ， 加 稀 硫 酸 20ml ， 用 高 锰 酸 钾 滴 定 液 （0.2mol/L）滴定，即得。每1ml的高锰酸钾滴定液 （0.2mol/L）相当于17.01mg的H2O2。
可见紫外分光光度仪
分光光度法是个根据物质的不同颜色有不同物理 性状和不同化学性质，进行了有效分析和判别。由于 颜色就惹人注意，根据颜色的深浅测定物质在特定波 长处或一定范围内的吸光度或发光强度，对该物质进 行定性和定量分析法。
可见紫外分光光度仪的应用广泛 首先能检定物质
：根据吸收光谱上的一些特征吸收，特别是最大吸收 波长和摩尔吸收系数是检定物质的常用参数。其二是 与标准物和标准色谱对照：其三是比较最大吸收波长 吸收系数的一致性。其四是纯度检验。其五是推测化 合物的分子结构。其六是氢键强度的测定等等。
4.2.2 配制对照品溶液时所取已测定含量的甲 醛溶液的量可用下式计算：
W= 1.0mg

P% ×100
式中W＝已测定甲醛溶液需取的量（mg）； P％＝测得甲醛溶液的含量。
例如：测得甲醛溶液的含量为37.2％，取 量为0.2688g，计算如下：
W= 1.0mg
37.2%
4.4 检验步骤
4.4.1 对照品溶液的制备
取已测定含量的甲醛溶液（40%）[测定方法 见甲醛溶液（40％）标准操作规程]适量，精 密称定，置100ml量瓶中，加水稀释至刻度， 摇匀，制成每1ml含甲醛1.0mg的溶液；精密 量取上述溶液5ml，置50ml量瓶中，加水稀释 至刻度，摇匀，即得（约0.1mg/ml）。如被 测样品为油乳剂疫苗，则精密量取上述每1ml 含甲醛1.0mg的溶液5ml，置50ml量瓶中，加 20％吐温80乙醇溶液10ml，再加水至刻度， 摇匀，即得。
取澄清的氢氧化钠饱和溶液56ml，加新沸过 的冷水使成1000ml，摇匀。
4.3.3 盐酸滴定液（1mol/L） 配制与标定见 盐酸滴定液（1mol/L）标准操作规程；
4.3.4 浓过氧化氢溶液（H2O2），分析纯，含 量30％；
4.3.5 过氧化氢试液：取浓过氧化氢溶液（30 ％），加水稀释成3％的溶液，即得；
4.3.2 试剂 4.3.2.1 吐温80（AR）； 4.3.2.2 乙醇（AR）； 4.3.2.3 醋酸（AR）； 4.3.2.4 醋酸铵（AR）； 4.3.2.5 乙酰丙酮（AR）； 4.3.2.6 甲醛溶液（40%）（AR）
4.3.3 试液配制
4.3.3.1 20％吐温80乙醇溶液：取吐温80 20ml，加乙醇使成100ml；
0.2823×37.2%1000 5
100
× 50 = 0.1050mg /ml