光镜下细胞大小的测量与计数
细胞计数板的使用方法
细胞计数板的使用方法细胞计数板是一种用于计算液体中细胞数量的实验仪器，广泛应用于生物学、医学、生化学等领域。
1. 准备工作：首先，确保细胞计数板和显微镜等设备是干净的。
使用无纺布或纸巾轻轻擦拭细胞计数板和显微镜镜片表面，确保没有灰尘或污垢。
2. 取样：将需要计数的细胞悬液充分摇匀，并使用一根吸管或移液器将约10 μl的悬液吸起。
3. 加样：将吸取的悬液滴在细胞计数板的一个计数室（通常是一个小的方形区域）中。
确保滴入的悬液不会溢出计数室，以避免误差。
4. 显微镜观察：使用显微镜将计数室的细胞放大到适当倍数。
通常，使用40倍或100倍镜放大细胞会更容易进行计数。
调节显微镜的对焦和光照使细胞清晰可见。
5. 细胞计数：用显微镜通过目视或帮助计数的软件来计数计数室内的细胞。
一般来说，通过从左上角开始顺时针或逆时针移动显微镜视野，并计算每个小方格内的细胞数量。
6. 计数室细胞数量的计算：根据计数室的大小和计数室中细胞的总数，以及所使用的倍数，计算出每个计数室内的平均细胞数量。
通常，计数室内每个小方格的面积和厚度在细胞计数板上都有标记。
7. 样本体积与细胞密度的计算：利用计数室内的平均细胞数量，结合计数室的体积，可以计算出样本中的细胞密度。
根据需要，这可以使用以下公式计算：细胞密度（cells/ml）= 细胞数÷（计数室体积×加样体积）8. 数据记录与分析：将结果记录下来，并根据需要进行数据的分析和进一步处理。
需要注意的是，在使用细胞计数板时要小心操作，避免细胞污染和误差的发生。
同时，细胞计数板的使用方法可能会因具体型号或厂家的要求而有所不同，建议参考厂家提供的使用说明书。
2.实验二 微生物细胞计数与显微测量
实验二微生物细胞计数与显微测量一、实验目的与要求1、了解血球计数板结构，掌握血球计数板计数微生物数量的技术。
2、了解目镜测微尺和物镜测微尺，掌握显微镜下测定微生物细胞大小的技术。
二、微生物细胞计数1、血球计数板的结构：4条竖槽和1条横槽；计数室（即正中间的大方格）大小为1mm×1mm×0.1mm；计数室共有400个小格，划分有两种可能：16中格×25小格或25中格×16小格。
菌体较大的酵母菌或霉菌孢子可采用血球计数板，因血球计数板较厚，不能使用油镜，故细菌不易看清。
2、血球计数板的使用（1）低倍镜下观察空白的血球计数板，找到计数室，注意应用调光旋钮、聚光镜和光圈调节视野亮度，建议将调光旋钮调到较亮的位置、聚光镜上升、光圈调到较小的位置。
（2）滴加稀释至适宜浓度的样品，盖上特制的盖玻片，静置5-10min. 也可以先盖上盖玻片，再沿槽滴加样品。
以酵母菌为例，以小格内含4-5个酵母菌为宜。
（3）在低倍镜下寻找大方格，将正中间的大方格（即计数室）移至视野正中央，再根据需要换上高倍镜计数。
3、血球计数板的计数方法（1）计数室含25个中格时，取4个角的中格及中间1个中格计数；计数室含16个中格时，取4个角的中格计数。
当样品中的细胞数较少时，应计算所有中格中的细胞。
每个样品须重复计数2-3次。
（实验室现有的血球计数板均为25中格的格式。
）（2）计数时需调节细准焦螺旋，以看到计数室内不同深度的微生物细胞（3）压线的细胞的计数方法：计压左线和上线的细胞或压右线和下线的细胞。
4、计算方法：样品细胞数（个/mL）=每小格的细胞数×400×10000×稀释倍数三、草履虫大小（长*宽）的显微测量1. 目尺和物尺的形态、安装及用途。
注意物尺每一小格代表的实际长度。
2. 标定：两尺平行--记录两尺重合线之间的刻度数--计算标定结果（即某一放大倍数下，目尺一小格代表的实际长度）。
使用测微尺观测细胞的大小(1)
使用测微尺观测细胞的大小(1)使用测微尺观测细胞的大小测微尺，是生物实验室中使用最为普遍的测量细胞大小的工具之一。
借助测微尺，生物学家能够对于细胞的大小、形态、颜色等方面进行深入的研究，从而更好地了解细胞结构及其功能。
一、什么是测微尺？测微尺是一种测量细小物体尺寸的仪器，由于其基于光学原理确定了长度的单位，因此精度高且适用于微观尺度的物体。
通常测微尺由微型透镜和支撑透镜的支架构成，并通过观测透镜上的刻度盘来进行测量。
二、为什么要使用测微尺测量细胞的大小？细胞作为生物体中的基本结构单元，其大小及形态的变化对于生物学研究至关重要。
然而，细胞结构及其大小的测量并非易事，因此需要借助于一些光学仪器对其进行观测和测量。
而测微尺便是生物学研究中的一种重要工具，通过其高精度的测量，生物学家能够准确地描述细胞的大小及其变化，帮助更好地了解细胞特性和功能。
三、如何使用测微尺进行细胞大小的测量？1. 首先，先将需要观测和测量的细胞取出，放置在光镜下，并将其对焦；2. 然后，将测微尺放置在细胞的覆盖物上方，观察并确认其上的标尺；3. 接下来，使用目镜从测微尺透镜上读取标尺上的刻度，以确定细胞表面部分的实际尺寸；4. 最后，通过多次测量及统计平均值来得出细胞大小的准确数值。
四、测微尺测量细胞大小的优缺点是什么？测微尺有其在生物学研究中的优点，也有其相应的缺点。
优点：1. 高精度：借助于测微尺，生物学家能够得到非常准确的细胞大小数据，这对于科学研究具有重要意义。
2. 方便：测微尺使用简单，不需要过多的困难操作，相对来说十分方便。
缺点：1. 需要取样：借助于测微尺，必须取出细胞才能进行测量，这对于基于细胞形态的测量来说并不一定便捷。
2. 只能测量特定尺寸的物体：测微尺的读数通常在毫米范围内测量，这限制了其只能测量一定尺寸的物体。
综上，使用测微尺测量细胞的大小是一种高精度的生物学研究方法，它帮助科学家更好地了解细胞的结构和特性，进而推进生物学研究的发展。
细胞计数方法------细胞计数板法
细胞计数方法------细胞计数板法实验原理：当待测细胞悬液中细胞均匀分布时，通过测定一定体积悬液中的细胞的数目，即可换算出每毫升细胞悬液中细胞的细胞数目。
具体操作：1. 将计数板及盖片擦拭干净，并将盖片盖在计数板。
2. 将细胞悬液吸出少许，滴加在盖片边缘，使悬液充满盖片和计数板之间，静置3min，注意盖片下不要有气泡，也不能让悬液流入旁边槽中。
3. 计算板四大格细胞总数，压线细胞只计左侧和上方的。
然后按公式计算：细胞数/mL=四大格细胞总数/4×104个/ml(注：当细胞很多时，可在四个格中选一定数目较平均的小格，由于每大格中有16个小格，然后计左侧和上方的细胞数，求出每小格的细胞数，取平均值m，m ×16即每个格的平均值。
所以，细胞密度=m×16×104个/ml)说明：公式中除以4，因为计数了4个大格的细胞数。
公式中乘以104因为计数板中每一个大格的体积为：1.0mm（长）×1.0mm（宽）×0.1mm（高）=0.1mm3而 1ml=1000ul=1000mm3（注意：镜下偶见有两个以上细胞组成的细胞团，应按单个细胞计算，若细胞团10%以上，说明分散不好，需重新制备细胞悬液。
）================================================细胞计数板的使用一、血球计数板-基本构造血球计数板是一块特制的厚型载玻片，载玻片上有四个槽构成三个平台。
中间的平台较宽，其中间又被一短横槽分隔成两半，每个半边上面各刻有一小方格网，每个方格网共分九个大格，中央的一大格作为计数用，称为计数区。
计数区的刻度有两种：一种是计数区分为16个大方格（大方格用三线隔开），而每个大方格又分成25个小方格；另一种是一个计数区分成25个大方格（大方格之间用双线分开），而每个大方格又分成16个小方格。
但是不管计数区是哪一种构造，它们都有一个共同特点，即计数区都由400个小方格组成。
细胞生物学实验指导
《细胞生物学实验》指导一、实验课名称：细胞生物学实验Experiment of Cell Biology二、实验课性质：独立设课三、适用专业：生物技术和水产养殖四、采用教材及参考书：教材：安利国主编．细胞生物学实验教程．北京：科学出版社，2004参考书：1. 杨汉民主编．细胞生物学实验（第二版）．北京：高等教育出版社，1997.72. 徐承水，党本元主编．现代细胞生物学技术．青岛：青岛海洋大学出版社，19953. 王金发主编．细胞生物学实验教程．北京：科学出版社，2003五、学时学分：课程总学时：36；课程总学分：1七、实验课考核方式：1.实验课考核成绩确定：本课程考核成绩由平时成绩（占30%）、实验报告成绩（占30%）和终期考核成绩（占40%）三部分构成。
2.平时成绩确定：由任课教师根据实验操作、问题回答和出勤情况确定，按A（优）、B （良）、C（及格）、D（不及格）四个等级评分。
3.实验报告成绩：本课程要求学生实验报告应包括以下内容：①实验目的及原理：简明；②方法与步骤：具体操作步骤、注意事项等；③结果：详细每一步的结果以及计算方法和计算结果；④分析与讨论：根据所学知识对结果进行分析讨论，阐明所得结果说明了什么问题；如果结果与理论不符，应说明可能的原因。
实验报告成绩由任课教师根据学生实验报告写作是否符合规范要求、试验结果及分析的具体情况给出。
每次报告均按A（优）、B（良）、C（及格）、D（不及格）四个等级评分，实验报告成绩为各次报告成绩的平均值。
4.终期考核成绩：实验课结束后进行笔试、口试或现场操作考核，按A（优）、B（良）、C（及格）、D（不及格）四个等级评分。
实验项目实验一、显微镜的技术参数及特殊光镜的演示实验一、要求：了解普通光镜及各种特殊光镜的构造、成像原理及应用；掌握正确的使用方法；理解显微镜的技术参数和特殊光镜的结构特点；掌握实验报告的写法。
二、实验内容：普通光学显微镜的结构及技术参数：由光学和机械两大系统构成。
光学显微技术与细胞显微测量实验
2023级医学实验技术专业《细胞生物学实验技术》课程实验报告学号姓名成绩实验一：光学显微技术与细胞显微测量一．实验原理光镜的成像需要光束穿透被观察的样品，用于普通光镜的生物样品必须经过一系列的组织处理并制成1~10微米的切片。
普通显微镜的成像原理：被观察的物体先通过物镜进行第一次成像，物镜会将物体放大成一个倒立的实像。
这个实像再通过目镜进行第二次放大，最终形成一个倒立的虚像。
荧光显微镜利用短波波长，激发样品，使其产生荧光，通过放大系统放大后，看到的不是样品的本色，而是其荧光。
荧光显微镜的工作原理：荧光显微镜会使用特定的荧光染料或标记物，这些物质在受到特定波长的光激发时，会发出荧光。
当被观察的样本被这种荧光染料处理后，在显微镜下用特定波长的光进行照射，样本中的荧光染料就会吸收光的能量并发出荧光。
二．实验器材普通光镜44台（两间实验室）、荧光显微镜4台（每间实验室2台）、倒置显微镜4台（每间实验室2台）、小剪、小镊、小刀、牙签、吸管、手套、载玻片、盖玻片、移液器、黄白枪头、擦镜纸、面巾纸三．实验试剂教学标本片：人血标本44片、鸡血标本44片、镜台测微尺44片、目镜测微尺44片、AO 染液（0.1mg/ mL )1.5mLx4支、碘液10mLx4瓶四．实验步骤显微测量的步骤：1．抽出目镜，旋下接目透镜，将目微尺放到目镜光阑上（刻度一面朝下），再将透镜旋上。
2．将台尺置于载物台，用低倍镜将台微尺移至视野中央，然后换用测量细胞时所用物镜，调焦，使刻度清楚。
3.转动目镜，使目微尺与台微尺的刻度平行，再使目微尺上某段两端的刻线与台微尺刻线重合，读出两端重合线间，目微尺和台微尺各多少格。
4.计算选定物镜下，目微尺每格实际长度（μm ):目微尺每格长度＝台微尺格数／目微尺格数x10μm5．取下台尺，换上细胞标本，用目微尺测量细胞大小。
先用目尺测出佰放：数，再每格长度。
每种细胞测量5-10个（不同视野），计算均值。
光镜下细胞大小的测量与计数
光镜下细胞大小的测量与计数一、实验目的1.学会观察某些细胞形态，掌握显微镜使用方法。
2.掌握测量和计算细胞大小的方法。
3.掌握台尺，目尺的使用方法，知道细胞度量单位。
4.掌握血球计数板的使用方法二、实验原理（一）显微测微尺显微测微尺分物镜测微尺和目镜测微尺，目镜测微尺为一块可以放入目镜内的圆形玻片，玻片中央有一长5-10mm的刻度尺，分成50-100格。
每格的实际长度随不同的物镜放大倍数而变化。
物镜测微尺为一载玻片中封固一圆形测微尺组成，测微尺的长度为1-2mm，分成 100或200格，每格实际长度0.01mm。
当测量细胞大小时，须在显微镜下用物镜测微尺核实目镜测微尺的每一格长度，然后再用目镜测微尺去测定标本。
换算公式：目尺每格长度（mm）= 物尺的格数/目尺的格数×10㎛（二）血球记数板现在使用的记数板为改良Neubauer记数板，由一优质厚玻璃制成，每块记数板分为两个记数室。
在记数室两侧各有一条支柱，与记数室高度差是0.1mm，当一块平整的记数用盖玻片放到两条支柱上时，盖玻片底面与记数室间形成0.1m的缝隙。
每个记数室的边长各为 3mm，并被精密地划分为9个大方格，每个大方格长宽各为1.0mm，面积为1mm²，加盖玻片后的容积为1mm² ☓ 0.1mm=0.1mm³（相当于0.1㎕），所以一个大方格的细胞数×104=细胞数/ml。
记数细胞时，记数四个大方格中的细胞数，按下公式计算：细胞悬液的细胞数/ml=(四个大方格中的细胞总数/4) × 104三、实验器材、药品普通光学显微镜，微分尺（目尺和台尺），血球计数板，洋葱内表皮细胞,小鼠脾细胞等。
四、实验步骤（一）在光学显微镜下测量细胞大小：1.卸下目镜的上透镜，将目镜测微尺有刻度一面向下装在目镜镜面上，再旋上目镜的上透镜。
2.将镜台测微尺有刻度一面朝上放在载物台上夹好，用低倍镜观察，调焦至看清镜台测微尺的刻度。
微生物细胞大小测定及显微镜直接计数
微生物细胞大小测定及显微镜直接计数一、实验原理微生物细胞的大小是微生物重要的形态特征之一，由于菌体微小，只能在显微镜下测量。
用于测量微生物细胞大小的工具有目镜测微尺和镜台测微尺。
目镜测微尺（图示）是一块圆形玻片，在玻片中央把5mm长度刻成50等分，或把10mm长度刻成100等分。
测量时，将其放在接目镜中的隔板上，此处正好与物镜放大的中间物像重迭，用于测量经显微镜放大后的细胞物象。
由于不同目镜、物镜组合的放大倍数不相同，目镜测微尺每格实际表示的长度也不一样，因此目镜测微尺测量微生物大小时须先用置于镜台上的镜台测微尺校正，以求出在一定放大倍数下，目镜测微尺每小格所代表的相对长度。
镜台测微尺（图示）是中央部分刻有精确等分线的专用载玻片，一般将1mm等分为100格，每格长10µm即0.01mm，是专门用来校正目镜测微尺的。
校正时，将镜台测微尺放在载物台上，由于镜台测微尺与细胞标本是处于同一位置，都要经过物镜和目镜的两次放大成像进入视野，即镜台测微尺随着显微镜总放大倍数的放大而放大，因此从镜台测微尺上得到的读数就是细胞的真实大小，所以用镜台测微尺的已知长度在一定放大倍数下校正目镜测微尺，即可求出目镜测微尺每格所代表的实际长度，然后移去镜台测微尺，换上待测标本片，用校正好的目镜测微尺在同样放大倍数下测量微生物细胞大小。
测定微生物细胞数量的方法很多，通常采用的有显微镜直接计数法和稀释平板计数法。
直接计数法适用于各种单细胞菌体的纯培养悬浮液，如有杂菌或杂质，则难于直接测定。
菌体较大的酵母菌或霉菌孢子可采用血球计数板，一般细菌则采用彼德罗夫·霍泽（Petrof Hausser）细菌计数板。
两种计数板的原理和部件相同，只是细菌计数板较薄，可以使用油镜观察。
而血球计数板较厚，不能使用油镜，计数板下部的细菌难于区分。
血球计数板是一块特制的厚型载玻片，载坡片上有4条槽所构成的3个平台。
中间的平台较宽，其中间又被一短横槽分隔成两半，每个半边上面各有一个计数区（图示），计数区的刻度有两种：一种是计数区分为16个大方格，大方格用三线隔开，而每个大方格又分成25个小方格；另一种是一个计数区分成25个大方格，大方格之间用双线分开，而每个大方格又分成16个小方格。
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光镜下细胞大小的测量与计数
一、实验目的
1.学会观察某些细胞形态，掌握显微镜使用方法。
2.掌握测量和计算细胞大小的方法。
3.掌握台尺，目尺的使用方法，知道细胞度量单位。
4.掌握血球计数板的使用方法
二、实验原理
（一）显微测微尺
显微测微尺分物镜测微尺和目镜测微尺，目镜测微尺为一块可以放入目镜内的圆形玻片，玻片中央有一长5-10mm的刻度尺，分成50-100格。
每格的实际长度随不同的物镜放大倍数而变化。
物镜测微尺为一载玻片中封固一圆形测微尺组成，测微尺的长度为1-2mm，分成100或200格，每格实际长度0.01mm。
当测量细胞大小时，须在显微镜下用物镜测微尺核实目镜测微尺的每一格长度，然后再用目镜测微尺去测定标本。
换算公式：目尺每格长度（mm）= 物尺的格数/目尺的格数×10㎛
（二）血球记数板
现在使用的记数板为改良Neubauer记数板，由一优质厚玻璃制成，每块记数板分为两个记数室。
在记数室两侧各有一条支柱，与记数室高度差是0.1mm，当一块平整的记数用盖玻片放到两条支柱上时，盖玻片底面与记数室间形成0.1m的缝隙。
每个记数室的边长各为3 mm，并被精密地划分为9个大方格，每个大方格长宽各为1.0mm，面积为1mm²，加盖玻片后的容积为1mm²☓0.1mm=0.1mm³（相当于0.1㎕），所以一个大方格的细胞数×104 =细胞数/ml。
记数细胞时，记数四个大方格中的细胞数，按下公式计算：
细胞悬液的细胞数/ml=(四个大方格中的细胞总数/4) ×104
三、实验器材、药品
普通光学显微镜，微分尺（目尺和台尺），血球计数板，洋葱内表皮细胞,小鼠脾细胞等。
四、实验步骤
（一）在光学显微镜下测量细胞大小：
1.卸下目镜的上透镜，将目镜测微尺有刻度一面向下装在目镜镜面上，再旋上目镜的上透镜。
2.将镜台测微尺有刻度一面朝上放在载物台上夹好，用低倍镜观察，调焦至看清镜台测微尺的刻度。
3.小心移动镜台测微尺，同时转动目镜(如目镜测微尺刻度模糊，可转动目镜上透镜进行调焦)，使目镜测微尺与镜台测微尺平行靠近，两尺左边的\"0\"点一直线重合，然后由左向右找出两尺另一次重复的直线。
4.记录两条重合线间目镜测微尺和镜台测微尺的格数。
按公式计算目镜测微尺每格的长度等于多少mm。
5.拿开台尺，放上细胞标本片，开始测量，按上述公式计算。
（二）细胞计数
（1）准备计数板：用去离子水浸泡并冲洗计数板及专用盖玻片，然后用绸布轻轻拭干或晾干。
（2）制备细胞悬液：用消化液分散单层培养细胞或直接收集悬浮培养细胞，制成单个细胞悬液。
本法要求细胞密度不低于104细胞/ml,若细胞数很少，应将悬液离心（1000rpm，2 min），重悬浮于少量培养液中。
（3）加样：用吸管轻吹打细胞悬液，取少许细胞悬液，在计数板上盖玻片的一侧加微量细胞悬液，加样量不要溢出盖玻片，也不要过少或带气泡。
（4）计数：在显微镜下，用10×物镜观察计数板四角大方格中的细胞数，细胞压中线时，只计左侧和上方者，不计右侧和下方者。
（5）计算：将计算结果代入下式，得出细胞密度（4大格中的每一大格体积为0.1mm3。
1ml=l，0000大格，因此，1大格细胞数×104=细胞数／ml）
细胞数/毫升原液=（4大方格细胞数之和/4）×104
注意事项：
（1）消化单层细胞时，务求细胞分散良好，制成单个细胞悬液。
否则会影响细胞计数结果。
（2）取样计数前，应充分混匀细胞悬液。
在连续取样计数时，尤应注意这一点。
否则，前后计数结果会有很大误差。
（3）镜下计数时，遇见2个以上细胞组成的细胞团，应按单个细胞计算。
如细胞团占10%以上，说明消化不充分；或细胞数少于200个/10mm2或多于500个/10mm2时，说明稀释不当，需重制备细胞悬液、计数。