抗A、抗B血型定型试剂(单克隆抗体)
实验四 抗A抗B血型定型检测
抗A抗B血型定型检测
一、实验目的
观察红细胞凝集现象，掌握ABO血型鉴定的原理。
二、实验原理
A型红细胞膜上含有A抗原，B型红细胞膜上含有B抗原，AB型红细胞膜上含有A，B两种抗原，O型红细胞膜上不含有A、B抗原。
抗A、抗B血型试剂是分别针对A抗原和B抗原的特异性抗体。
当将已知的抗A、抗B血型试剂与受验者的红细胞混合时，与抗A血型试剂发生凝集都即为A型血型，与抗B 血型试剂发生凝集者即为B型血型，与抗A、抗B血型试剂均发生凝集者为AB 型血型，与抗A、抗B血型试剂均不凝集者即为O型血型。
三、实验试剂和器材
1.试剂
抗A定型试剂、抗B定型试剂、抗D定型试剂、酒精棉球、自身血液
2.器材
大头针、玻璃板，移液枪
四、实验步骤
1.在玻璃板背面分别标记A、Rh、B，然后依次在正面各加一滴抗A定型试剂、
抗D定型试剂、抗B定型试剂。
2.用酒精棉球消毒手指，使用大头针扎破手指，并用移液枪吸取微量血液，分
别滴加在玻璃板上的标记处，并混匀各自样品点。
3.观察凝血现象
五、实验结果
从血液凝集现象可观察，A、B处没有发生明显的凝血现象，在Rh处有明显
颗粒状凝血现象。
故可以判读血型为O型。
卫生部关于抗A、抗B血型定型试剂定点生产问题的通知-卫药发[1995]第26号
![卫生部关于抗A、抗B血型定型试剂定点生产问题的通知-卫药发[1995]第26号](https://img.taocdn.com/s3/m/6627a173ae1ffc4ffe4733687e21af45b307fe69.png)
卫生部关于抗A、抗B血型定型试剂定点生产问题的通知正文：---------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------- 卫生部关于抗A、抗B血型定型试剂定点生产问题的通知（卫药发(1995)第26号）各省、自治区、直辖市卫生厅(局)、总后卫生部：A、B、O血型定型试剂是临床鉴定人的血型类别的体外诊断用品，对于保证临床输血安全有着重要的意义。
但该类制品在国内至今尚未进行统一管理，没有统一的质控标准，生产、检定秩序比较混乱，临床上因定型试剂质量问题造成血型定型错误而引起输错血型的事故时有发生。
据中国药品生物制品检定所1992年对全国23个生产单位140批检品进行的检定结果来看，合格率仅为27．86％。
为做好ABO血型定型试剂的质量管理，我部组织中国药品生物制品检定所等单位制订了“ABO血型定型试剂质量标准”，并已列入“1993版中国生物制品规程二部”。
为进一步加强ABO血型定型试剂的生产及质量管理，保证临床输血的安全，对ABO血型定型试剂的生产及质量管理进行法制化、规范化管理，现决定对ABO血型定型试剂进行整顿并实行定点生产，统一核发生产批准文号。
现就有关问题通知如下：一、根据产品生产必须规模化、现代化的原则，现决定中国医学科学院成都输血研究所等单位(名单见附件)为ABO血型定型试剂定点生产单位。
今后，ABO血型定型试剂的生产只限定于上述单位，不受理生产同等技术水平的ABO血型定型试剂的立项申请。
二、自1996年1月1日起，各有关单位必须使用具有生产批准文号的ABO血型定型试剂。
凡尚未取得生产批准文号的上述定点生产单位须将ABO血型定型试剂各连续三批检品及制检记录等资料于1995年7月底以前报送中国药品生物制品检定所检定。
S005红细胞ABO血型(正定型)鉴定标准化操作规程
红细胞ABO血型（正定型）鉴定标准化操作规程一、目的为保证血液及血液成分的红细胞ABO血型在临床上同型输注，确保临床输血安全、有效，根据《临床输血技术规范》第十五条特制定本标准化操作规程。
二、方法采用试管法检测红细胞ABO血型（正定型）。
三、原理用已知抗A、抗B标准血清（单克隆抗体）测定被检者红细胞上有无相应的A 或B抗原，结合反定型结果判断ABO血型。
四、适用范围适用于输血前患者与献血者红细胞ABO血型(正定型)确认。
五、仪器设备普通离心机；血型专用离心机；六、试剂1、试剂名称：抗A、抗B血型定型试剂（单克隆抗体）；2、试剂生产厂家：上海血液生物医药有限责任公司；3、批准文号：国药准字S1*******；4、包装规格：抗A、抗B试剂各1支， 10ml /支；5、贮藏条件；2-8℃避光保存。
6、有效期：自检定合格之日起2年；7、试剂性能：试剂单克隆抗体效价：抗A效价≥128；抗B效价≥128；特异性试验合格。
七、检测样本要求1、标本类型：静脉血(EDTA抗凝剂:血液=1:10)。
2、标本采集：见输血科标本管理标准化操作规程。
3、标本储存和运输：新鲜血2～8℃贮存时间不超过72小时。
4、标本拒收状态：标识不准确、标本稀释、细菌污染，严重溶血等不能测定。
八、操作步骤1、取10mmx60mm洁净小试管2支，分别标明抗A、抗B，用滴管分别加入受检者5%红细胞悬液1滴于试管，再分别在对应管中加入抗A、抗B标准血清1滴。
2、摇动试管，立即以1000rpm离心1min或3400rpm离心15s或室温静置1小时。
3．先观察是否有溶血，溶血可能是阳性结果，或者是细菌污染；将试管轻轻摇晃，使沉于管底的红细胞浮起，观察细胞扣情况，并判断凝集强度（见下表）。
如肉眼不见凝集，应将反应物倒于玻片上，再以低倍镜检查。
4、ABO血型（正定型）表现型反应格局表5、红细胞ABO血型（正定型）结果凝集强度判断对照表九、质量控制1、对新进批号的试剂应作抗体效价验定。
新生儿ABO血型鉴定方法的选择
新生儿ABO血型鉴定方法的选择陈继良;曾荣荣【摘要】目的了解新生儿血型鉴定的难点,针对新生儿血型抗原与抗体的特点,探讨新生儿常见血型鉴定方法的选择.方法采用盐水介质法(玻片法和试管法)及微柱凝胶法同时正定型检测本院住院新生儿ABO血型.结果玻片法检测新生儿ABO血型符合率为97.75％,试管法检测新生儿ABO血型符合率为99.25％,微柱凝胶法检测新生儿ABO血型符合率为100％.结论微柱凝胶法检测新生儿ABO血型敏感性和准确性高于玻片法和试管法(P<0.05),具有统计学意义,为新生儿溶血病早期诊断、治疗及输血提供了安全保障,而玻片法和试管法的敏感性和准确性差,偶有错判和误判,慎用于新生儿ABO血型鉴定.【期刊名称】《实验与检验医学》【年(卷),期】2017(035)006【总页数】2页(P988-989)【关键词】新生儿;ABO血型鉴定;玻片法;试管法;微柱凝胶法【作者】陈继良;曾荣荣【作者单位】泗洪县妇产儿童医院,江苏宿迁 223900;泗洪县妇产儿童医院,江苏宿迁 223900【正文语种】中文【中图分类】R457.1+1新生儿血型的准确鉴定，是保证新生儿输血及换血安全的重要保障，对新生儿溶血病的早期诊断也至关重要。
新生儿红细胞上的A、B抗原位点数量只有成人红细胞上抗原数目的25%～50%，Rh血型系统已基本发育成熟，出生时其抗原数量基本和成人相同[1]，除正常新生儿外，早产儿或带有疾病（如血液及免疫系统疾病）的新生儿，还可出现ABO血型抗原减弱的情况 [2]。
由于新生儿ABO血型抗原较成人弱，用玻片法或试管法正定型时常出现不凝集或弱凝集，影响血型判定，容易出现误定，新生儿在母体和出生初期接触A、B物质的概率很低，且自身免疫系统未完全发育成熟，产生抗体的可能性较小[3]，随着月龄的增长，特别是6个月以后，婴幼儿血清中ABO血型抗体效价愈来愈强[4]。
新生儿和出生6个月之内的婴儿血液中无ABO抗体或抗体很弱，新生儿血清中可能存在来自母体的抗体，不适合做反定型[5]，目前ABO血型鉴定方法有多种，临床上常见的有玻片法、试管法、微柱凝胶法，本文用上述三种方法对本院400名住院新生儿进行ABO血型正定型鉴定，结果如下。
抗A抗B血型定型试剂
抗A抗B血型定型试剂（单克隆抗体）包装规格：10ml预期用途：1、专用于定性鉴定人ABO血型（正定型）2、ABO血型系统是临床输血、器官移植中最重要的血型系统，错误的ABO血型定型导致的输血反应将给受血者带来十分严重的后果。
因此，《中国输血技术操作规程》规定，ABO血型鉴定必须通过正反定型。
正定型是用已知的抗A和抗B血型定性试剂测定红细胞上有无相应的A抗原或/和B抗原；反定型是用已知ABO血型的红细胞测定血清中有无相应的抗A抗体或/和抗B抗体。
检验原理：根据红细胞上有无A抗原或（和）B抗原，以及血清中有无抗A或（和）抗B抗体，可以将红细胞血型分为A型、B 型、AB型和O型。
根据抗A和抗B抗体与对应红细胞抗原的凝集反应，可以鉴定ABO血型。
ABO血型表现型反应格局表见下表：ABO血型表现行反应格局表主要组成成分：1、本品由抗A血型定型试剂、抗B血型定型试剂各1支组成。
2、本品由法国GIAGAST公司提供的杂交瘤细胞培养上清液和本公司自制的杂交瘤细胞培养上清液按4:1比例混合后，加入适量稳定剂、染色剂、防腐剂配置而成。
贮存条件及有效期:1、储存条件：2-8℃避光保存。
如果长时间储存在高温或反复冻融会使试剂失去活性。
2、有效期：储存条件下有效期24个月。
适用仪器：本品为非仪器配套试剂。
样本要求：按照临床输血技术规范中的血液样本采集步骤，采集患者或供血者、受血者的血液，红细胞抗凝或不抗凝样本。
严重溶血、脂血、污染标本不适用本项检测。
检验方法：1、平板法（玻片法）（1）加1滴抗A或抗B试剂于玻片上。
（2）再加1滴10%的被检红细胞悬液。
该红细胞悬液可以是盐水悬液，也可以是悬浮于自身血浆或血清中的红细胞。
（3）在圆形的玻片区域中混匀，（直径约为20mm大小），前后缓慢摇晃玻片。
2分钟左右肉眼判读结果，并记录。
2、试管法（1）加1滴抗A或抗B试剂于两支预先标记好的试管中（75*12mm或75*10mm）。
（2）再加一滴2-5%的被检红细胞悬液于试管中。
抗A、抗B血型定型试剂(单克隆抗体)说明书
抗A、抗B血型定型试剂（单克隆抗体）抗A、抗B血型定型试剂（单克隆抗体）使用说明书•【药品名称】通用名称：抗A、抗B血型定型试剂（单克隆抗体）汉语拼音：Kang-A、Kang-B Xuexingdingxingshiji(Dankelongkangti) •【成份】本品主要成份为：分泌抗人A型和抗人B型血型抗原单抗的杂交瘤细胞培养上清液并补加一定量小鼠腹水抗体•【性状】抗A：浅蓝色澄明液体。
抗B：浅黄色澄明液体。
•【适应症】专用于鉴定人ABO血型。
•【规格】10ml/支•【用法用量】【用法与用量】（1）平板法（玻片法）：本品与受检者全血或10%红细胞生理氯化钠悬液按1：1使用，不必再稀释，按照有无凝集判定结果。
（2）试管法：本品与受检者5%红细胞生理氯化钠悬液按1：1使用，不必再稀释，摇匀，10000r/min离心1分钟或室温静置1小时，按照有无凝集判定结果。
血型抗A试剂抗B试剂A+-B-+O--AB++•【注意事项】（1）对含有较多自身冷凝集素的受检者，在鉴定血型时往往被误定为AB血型，遇到此种情况，需用37°C生理氯化钠溶液洗涤受检者红细胞2～3次，以去除吸附在红细胞上的冷凝集素，然后再鉴定血型。
（2）在做配型试验时，如发现有不配合现象，则取受检者血清，用已知A或B血型红血胞进行反定型试验，以核实原鉴定的血型是否正确。
（3）用立即试管法不能测出亚型（如Ax），需延长作用时间。
（4）本品如出现浑浊或变色则不能使用，若开瓶使用时间较长后，最好用已知A、B、O血晕型红细胞检查结果是否与已知血型相符，以防制品污染、变质失效，而造成鉴定错误。
（5）在有效期内使用。
•【孕妇及哺乳期妇女用药】【孕妇及哺乳用药】•【贮藏】2～8°C避光保存【注意】药物说明书里面有三种标识，一般要注意一下：1.第一种就是禁用，就是绝对禁止使用。
2.第二种就是慎用，就是药物可以使用，但是要密切关注患者口服药以后的情况，一旦有不良反应发生，需要马上停止使用。
输血科新生儿溶血病血型血清学检查标准操作规程
输血科新生儿溶血病血型血清学检查标准操作规程1、目的：规范血液免疫学产前检查操作，确保试验过程及结果的准确性与可靠性。
2、范围：本规程适用于实验室血液免疫学产前检查试验操作。
3、职责：经授权的血型实验室试验人员负责血液免疫学产前检查试验过程及报告的发出。
4、原理孕妇和丈夫ABO血型不合（O/A、O/B、O/AB、A/B、A/AB、B/A、B/AB）时，孕妇体内的IgG抗A（B）可能会引起新生儿溶血病的发生。
本试验通过检测孕妇血清中有无IgG性质的抗A（B）抗体及其效价（应用巯基试剂破坏IgM抗体，检测IgG抗体效价）即可预测ABO系HDN发生的可能性。
应用筛选红细胞可检测孕妇血清中是否存在不规则抗体，如果存在，应用谱细胞进行抗体鉴定，确定抗体的特异性，进一步检测非ABO系新生儿溶血病。
5、所需设备、材料或试剂：37℃恒温水浴箱、细胞洗涤离心机、抗-A抗-B血型定型试剂（单克隆抗体）、抗-D RH血型定型试剂（单克隆抗体）、凝聚胺介质试剂、抗人球蛋白试剂（抗-IgG、C3d）、（A、B、O）型标准红细胞悬液（2—5%）、商品化筛选细胞、谱细胞、2—ME试剂、12×75mm试管、塑料滴管。
6、检测环境条件：温度：18—25℃；湿度：30—70%7、标本要求7.1标本接收在接收标本时，应尽可能的了解、核对、记录患者的相关资料，包括受血者姓名、年龄、性别、临床诊断、输血史、用药史、妊娠史、标本编码等；7.2检验人员收到被检者产前检查申请按照申请单内容在试管上做标记(用记号笔在试管上标明被检者姓名、性别)，保留申请记录。
7.3按照要求进行血液采集。
将采好的血液沿试管壁注入已标识的抗凝试管中，反复颠倒混匀，放入2-8℃冰箱待用。
并填写《外来标本交接记录》及相关记录。
7.4标本的种类与数量：产前检查需送夫妇血样，血样均需抗凝（EDTA抗凝），女（母）5ml，男3ml。
7.5标本的保存与处理：完成所有试验内容后，要仔细核对实验结果，发出实验报告后，将实验所用的标本原始送检管存于2-8℃冰箱内至少7天以便进行查找和核对，之后交由单位相关部门统一处理。
血型鉴定操作规程教学文案
血型鉴定操作规程血型鉴定操作规程一．玻片法（仅适用于正定型）1 .原理：1.1根据红细胞上有无A抗原或（和）B抗原，可以将红细胞血型分为A 型、B型、AB型和O型。
根据抗-A和抗-B抗体与对应红细胞的凝集反应，可以鉴定ABO血型。
1.2根据抗-D抗体与对应红细胞抗原的凝集反应，区分RhD阳性和RhD 阳性。
2 .标本采集：用EDTA抗凝管采集被检对象静脉血，充分混匀，确保抗凝充分。
紧急情况下可以使用抗凝动脉血。
婴幼儿及其他不便于真空管采血的患者，如不进行反定型试验可采集末梢血。
3. 标本运送与储存：采集好的标本与申请单同期尽快（一般2小时内）送往输血科。
标本采集后和检测后，应置于2~8℃环境下。
检测后的标本应至少保存7天，以备结果查对。
4 .仪器与材料：抗-A/B血型定型试剂（单克隆抗体）、RhD（IgM）血型定型试剂（单克隆抗体）、载玻片、试管架、一次性塑料滴管、记号笔。
5. 操作步骤：5.1用标记笔在载玻片上划分成A、B、D三个区域；5.2在标记好的玻片上分别加1滴抗-A、抗-B和抗-D血型定型试剂；5.3再各加1滴10%患者红细胞悬液（该红细胞悬液可以是盐水悬液，也可以是悬浮于自身血浆或血清中的红细胞）；5.4用干净的搅拌棒将红细胞悬液和试剂充分混合，并把混合物均匀涂开，使其覆盖大约直径20mm的面积；5.5缓慢连倾斜摇动玻片1-2min，观察结果并记录。
6. 结果判定：6.1凝集或发生溶血为阳性结果；6.2细胞混匀2min后仍呈悬液状态的为阴性结果；6.3对结果有怀疑，应用试管法或微柱凝胶法重复实验。
二、纸板法1 .原理：1.1根据红细胞上有无A抗原或（和）B抗原，可以将红细胞血型分为A 型、B型、AB型和O型。
根据抗-A和抗-B抗体与对应红细胞的凝集反应，可以鉴定ABO血型正定型。
A1细胞上含有A和A1抗原，B细胞上含有B抗原。
用已知的A、B细胞检测被检者血清中有无相应的抗-A或抗-B抗体，即反定型。
血库技术操作规程
ABO血型正定型操作规程1、原理根据红细胞表面有无A抗原和（或）B抗原，将血型分为A型、B型、AB型及O型4种。
可利用红细胞凝集试验，通过正定型鉴定ABO血型。
正定型用已知抗A和抗B分型血清来测定红细胞上有无相应的A抗原或（和）B抗原。
2、试剂2.1 抗A、抗B血型定型试剂，有批文准号。
2.2 受检者3~5%红细胞盐水悬液。
3、操作3.1 试管法3.1.1 取洁净小试管2支，分别标明抗A、抗B，用滴管分别滴加抗A、抗B分型试剂各一滴于试管底部，再用滴管分别加入受检者3~5%红细胞盐水悬液1滴混匀。
3.1.2 立即以1000r/min离心1分钟。
3.1.3 将试管从离心机取出，轻轻摇动试管，使沉于管底的红细胞浮起，先以肉眼观察有无凝集或溶血现象。
如肉眼未见凝集，应将反应物倒于玻片上，以低倍镜观察。
3.1.4 观察结果时既要看有无凝集，更要注意凝集强度，此有助于A、B亚型、类B或cisAB的发现。
3.1.5 凝集强度判断标准4+：红细胞凝集成一大块，血浆清晰透明。
3+：红细胞凝集成数小块，血浆尚清晰。
2+：红细胞凝块分散成数小块，周围可见到游离红细胞。
1+：肉眼可见大颗粒，周围有较多游离红细胞±：镜下可见数个红细胞凝集在一起，周围有很多游离红细胞。
MF：即混合凝集外观，是指镜下可见少数红细胞凝集，而绝大多数红细胞仍呈分散分布。
—：镜下未见凝集，红细胞均匀分布。
3.2 玻片法3.2.1 取清洁玻片一张（或凹玻板），用记号笔划成方格，标明抗A、抗B，分别滴加抗A、抗B血清一滴于相应的方格内，再加受检者5%红细胞悬液一滴混匀。
3.2.2 将玻片（或凹玻板）不断轻轻转动，使血浆与细胞充分混匀，连续1~5分钟，肉眼观察有无凝集或溶血反应，再在低倍镜下观察结果。
ABO血型反定型操作规程1、原理用已知的A1、B细胞测定被箭血清中有无相应的抗A或抗B抗体，结合正定型结果判断ABO血型。
2、试剂为成熟市售标准红细胞，主要组成组分为：A1、B型红细胞，葡萄糖、枸橼酸、核苷酸、抗生素等。
抗 a 抗 b 血型定型试剂(单克隆抗体)
抗 A 、抗 B 血型定型试剂（单克隆抗体）Kang A、Kang B Xuexing Dingxing Shiji (Dankelongkangti) Anti- A and Anti- B Blood Grouping Reagents (Monoclonal Antibody )本品系用A血型单克隆抗体或 B 血型单克隆抗体配制而成，用于鉴定人ABO 血型。
1 基本要求生产和检定用设施、原料及辅料、水、器具、动物等应符合凡例的要求。
2制造2.1 专用原材料2.1.1杂交瘤细胞杂交瘤细胞建株，需经几次克隆筛选，以 100 ％克隆孔上清相应抗体阳性的作为原始细胞株。
原始细胞株经传代，稳定分泌特异性抗体的杂交瘤细胞株为主细胞。
杂交瘤细胞库的建立及检定应符合“生物制品生产和检定用动物细胞基质制备及检定规程”规定。
工作细胞库经血凝效价测定合格后方能用于生产。
2.1.2染色剂抗A可选用次甲基兰等蓝色染料、抗B可选用吖啶黄等黄色染料配制至适宜浓度。
2.1.3防腐剂可选用叠氮钠、硫柳汞钠盐等，配制至适宜浓度。
2.1.4稳定剂可选用蛋白质、葡萄糖、盐类等配制至适宜浓度，不得使用凝聚胺、聚乙二醇等促凝剂用于配制稳定剂。
2.2 制备程序2.2.1杂交瘤细胞培养物上清液的制备抗A 血型或抗 B 血型杂交瘤细胞经培养传代，待杂交瘤细胞过度生长后收取培养液上清．检测血凝效价合格后扩大培养即得。
2.2.2小鼠杂交瘤腹水的制备2.2.2.1小鼠腹腔预处理健康 BALB / c 小鼠腹腔用石蜡油预处理。
2.2.2.2接种检测抗 A 血型或抗 B 血型杂交瘤细胞培养物上清液抗体血凝效价合格后，用生理氯化钠溶液或不完全培养液重新悬浮细胞，接种于数天前用石蜡油处理过的小鼠腹腔内。
2.2.2.3腹水的收集接种后数周，处死小鼠收集腹水，离心去沉淀，以适当方法除纤维蛋白原，加入适宜的防腐剂，－30℃及以下保存。
2.3 半成品2.3.1 半成品配制合并杂交瘤细胞培养物上清，可加入少量腹水混合，加入染色剂，使抗 A 血型定型试剂呈蓝色，抗B血型定型试剂呈黄色，除菌过滤。
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抗A、抗B血型定型试剂(单克隆抗体)
【商品名】抗A、抗B血型定型试剂
【通用名】抗A、抗B血型定型试剂(单克隆抗体)
【批准文号】国药准字S1*******
【药品类别】诊断试剂
【药品剂型】液体制剂
【药品规格】【规格】10ml/支
【是否中标】未中标
【医保类型】抗A、抗B血型定型试剂(单克隆抗体)
【成分】【成份】本品主要成份为：分泌抗人A型和抗人B型血型抗原单抗的杂交瘤细胞培养上清液并补加一定量小鼠腹水抗体。
【用法用量】【用法用量】（1）平板法（玻片法）：本品与受检者全血或10%红细胞生理氯化钠悬液按1：1使用，不必再稀释，按照有无凝集判定结果。
（2）试管法：本品与受检者5%红细胞生理氯化钠悬液按1：1使用，不必再稀释，摇匀，1000r/min离心1分钟或室温静置1小时，按照有无凝集判定结果
【功能主治】【用途】专用于鉴定人ABO血型。
【生产厂家】河北医科大学生物医学工程中心。