抗A抗B血型定型试剂
实验四 抗A抗B血型定型检测
抗A抗B血型定型检测
一、实验目的
观察红细胞凝集现象，掌握ABO血型鉴定的原理。
二、实验原理
A型红细胞膜上含有A抗原，B型红细胞膜上含有B抗原，AB型红细胞膜上含有A，B两种抗原，O型红细胞膜上不含有A、B抗原。
抗A、抗B血型试剂是分别针对A抗原和B抗原的特异性抗体。
当将已知的抗A、抗B血型试剂与受验者的红细胞混合时，与抗A血型试剂发生凝集都即为A型血型，与抗B 血型试剂发生凝集者即为B型血型，与抗A、抗B血型试剂均发生凝集者为AB 型血型，与抗A、抗B血型试剂均不凝集者即为O型血型。
三、实验试剂和器材
1.试剂
抗A定型试剂、抗B定型试剂、抗D定型试剂、酒精棉球、自身血液
2.器材
大头针、玻璃板，移液枪
四、实验步骤
1.在玻璃板背面分别标记A、Rh、B，然后依次在正面各加一滴抗A定型试剂、
抗D定型试剂、抗B定型试剂。
2.用酒精棉球消毒手指，使用大头针扎破手指，并用移液枪吸取微量血液，分
别滴加在玻璃板上的标记处，并混匀各自样品点。
3.观察凝血现象
五、实验结果
从血液凝集现象可观察，A、B处没有发生明显的凝血现象，在Rh处有明显
颗粒状凝血现象。
故可以判读血型为O型。
血型的鉴定方法及操作全解
血型的鉴定方法及操作全解血型是指人体血液中红细胞表面的抗原特征，主要分为A、B、AB和O四种血型。
了解一个人的血型对献血、输血和婚姻等方面都有重要意义。
下面将详细介绍血型的鉴定方法及操作步骤。
一、血型鉴定的试剂1.抗A血清：含有抗A抗体，加入A型血液会凝集。
2.抗B血清：含有抗B抗体，加入B型血液会凝集。
3.抗AB血清：含有抗A和抗B抗体，加入A型、B型和AB型血液会凝集。
4.抗Rh血清（抗D血清）：含有抗Rh抗体，加入Rh阳性的血液会凝集。
二、操作步骤2.涂血滴定法鉴定血型：步骤一：取一根牙签，将其浸入患者或供血者的新鲜封闭伤口、创口或皮肤直至有微量血液，然后将牙签上的血涂于三个试管中的三个凹槽中。
步骤二：加入抗A、抗B和抗Rh血清。
步骤三：用滴管分别向三个试管中加入一滴抗A血清，观察结果。
如果出现凝集反应，则表示該人的血液中有A抗原，血型为A型；如无凝集反应，则表示人的血液中无A抗原，进入下一步鉴定。
步骤四：用滴管分别向三个试管中加入一滴抗B血清，观察结果。
如果出现凝集反应，则表示該人的血液中有B抗原，血型为B型；如无凝集反应，则表示人的血液中无B抗原，进入下一步鉴定。
步骤五：用滴管分别向三个试管中加入一滴抗AB血清，观察结果。
如果出现凝集反应，则表示該人的血液中有A和B抗原，血型为AB型；如无凝集反应，则表示人的血液中无A和B抗原，进入下一步鉴定。
步骤六：用滴管分别向三个试管中加入一滴抗Rh血清，观察结果。
如果出现凝集反应，则表示該人的血液中有Rh抗原，血型为阳性（+）；如无凝集反应，则表示人的血液中无Rh抗原，血型为阴性（-）。
3.精确测定法鉴定血型：步骤一：利用滴管取适量血液加入试管中。
步骤二：加入抗A血清滴定至血液凝结。
步骤三：记录滴定的比率，若比率超过1∶3，即滴入的抗A血清多于血液凝集，则表示为A型血液。
步骤四：继续加入抗B血清滴定至血液凝结。
步骤五：记录滴定的比率，若比率超过1∶3，即滴入的抗B血清多于血液凝集，则表示为B型血液。
ABO和RH血型鉴定操作规程4
ABO和RH（D）血型鉴定操作规程一、目的：规范ABO和RH(D)血型鉴定操作，保证临床用血的安全性及有效性。
二、适用范围：适用于血库ABO和RH（D)血型鉴定三、所需材料和设备:1、材料：抗—A、抗—B、抗—D试剂、A、B、O型反定型试剂红细胞,生理盐水，滴管，患者标本。
2、设备：离心机，显微镜.四、操作规程1、试管法:（1）取洁净试管3支，分别标明抗A、抗B及抗D,分别加入抗A、抗B及IgM抗D 单克隆血清各1滴于试管底部，再用滴管分别加入受检者5％红细胞生理盐水悬液1滴,轻摇混匀。
（2）另取洁净试管3支，分别标明A、B和O，用滴管分别加入受检者血浆1滴于试管底部，再分别以滴管加入A、B和O型5％试剂红细胞悬液1滴,轻摇混匀。
（3）立即以1000r/min离心1分钟后将试管轻轻摇动,使沉于管底的红细胞浮起,先以肉眼观察有无凝集(溶血）现象。
如肉眼不见凝集,应将反应物取置于玻片上，再以低倍显微镜检查。
（4）观察结果时既要看有无凝集,更要注意凝集强度，有助于A、B亚型,类B或嵌合体血型的发现。
2、玻片法：(1) 取血型鉴定专用玻璃板一块，在凹孔旁分别标明抗A、抗B及抗D，分别加入抗A、抗B及抗D单克隆血清1滴，再各加受检者5%红细胞悬液1滴,混匀。
(2）标明A、B及O细胞，分别加入受检者血浆1滴,再各加入A、B及O型试剂红细胞悬液1滴，混匀.（3）轻轻转动玻板，使血清与红细胞充分混匀,连续15分钟以肉眼观察有无凝集(溶血)反应。
有需要时也可用低倍显微镜观察结果.(4) Rh（D）血型鉴定时应作阳性对照及阴性对照。
3、结果判断:4、凝集强度判断:4+ 红细胞凝集成一大块，背景清晰透明；3+ 红细胞凝集成数小块，背景尚清晰;2+ 红细胞凝块分散成许多小块,背景可见到游离红细胞；1+ 肉眼可见大颗粒，周围有较多游离红细胞；+—镜下可见数个红细胞凝集在一块，周围有许多游离红细胞；混合外观凝集是指镜下可见少数红细胞凝集，而绝大多数红细胞仍分散分布；-阴性镜下未见凝集，红细胞均匀分布.5、报告实验结果，并保存受检标本：一般保存一周以上6、注意事项6。
抗 a 抗 b 血型定型试剂(单克隆抗体+人血清)
抗 A 、抗 B 血型定型试剂（单克隆抗体）Kang A、Kang B Xuexing Dingxing Shiji (Dankelongkangti) Anti- A and Anti- B Blood Grouping Reagents (Monoclonal Antibody )本品系用A血型单克隆抗体或 B 血型单克隆抗体配制而成，用于鉴定人ABO 血型。
1 基本要求生产和检定用设施、原料及辅料、水、器具、动物等应符合凡例的要求。
2制造2.1 专用原材料2.1.1杂交瘤细胞杂交瘤细胞建株，需经几次克隆筛选，以 100 ％克隆孔上清相应抗体阳性的作为原始细胞株。
原始细胞株经传代，稳定分泌特异性抗体的杂交瘤细胞株为主细胞。
杂交瘤细胞库的建立及检定应符合“生物制品生产和检定用动物细胞基质制备及检定规程”规定。
工作细胞库经血凝效价测定合格后方能用于生产。
2.1.2染色剂抗A可选用次甲基兰等蓝色染料、抗B可选用吖啶黄等黄色染料配制至适宜浓度。
2.1.3防腐剂可选用叠氮钠、硫柳汞钠盐等，配制至适宜浓度。
2.1.4稳定剂可选用蛋白质、葡萄糖、盐类等配制至适宜浓度，不得使用凝聚胺、聚乙二醇等促凝剂用于配制稳定剂。
2.2 制备程序2.2.1杂交瘤细胞培养物上清液的制备抗A 血型或抗 B 血型杂交瘤细胞经培养传代，待杂交瘤细胞过度生长后收取培养液上清．检测血凝效价合格后扩大培养即得。
2.2.2小鼠杂交瘤腹水的制备2.2.2.1小鼠腹腔预处理健康 BALB / c 小鼠腹腔用石蜡油预处理。
2.2.2.2接种检测抗 A 血型或抗 B 血型杂交瘤细胞培养物上清液抗体血凝效价合格后，用生理氯化钠溶液或不完全培养液重新悬浮细胞，接种于数天前用石蜡油处理过的小鼠腹腔内。
2.2.2.3腹水的收集接种后数周，处死小鼠收集腹水，离心去沉淀，以适当方法除纤维蛋白原，加入适宜的防腐剂，－30℃及以下保存。
2.3 半成品2.3.1 半成品配制合并杂交瘤细胞培养物上清，可加入少量腹水混合，加入染色剂，使抗 A 血型定型试剂呈蓝色，抗B血型定型试剂呈黄色，除菌过滤。
抗 a 抗 b 血型定型试剂(单克隆抗体)
抗 A 、抗 B 血型定型试剂（单克隆抗体）Kang A、Kang B Xuexing Dingxing Shiji (Dankelongkangti) Anti- A and Anti- B Blood Grouping Reagents (Monoclonal Antibody )本品系用A血型单克隆抗体或 B 血型单克隆抗体配制而成，用于鉴定人ABO 血型。
1 基本要求生产和检定用设施、原料及辅料、水、器具、动物等应符合凡例的要求。
2制造2.1 专用原材料2.1.1杂交瘤细胞杂交瘤细胞建株，需经几次克隆筛选，以 100 ％克隆孔上清相应抗体阳性的作为原始细胞株。
原始细胞株经传代，稳定分泌特异性抗体的杂交瘤细胞株为主细胞。
杂交瘤细胞库的建立及检定应符合“生物制品生产和检定用动物细胞基质制备及检定规程”规定。
工作细胞库经血凝效价测定合格后方能用于生产。
2.1.2染色剂抗A可选用次甲基兰等蓝色染料、抗B可选用吖啶黄等黄色染料配制至适宜浓度。
2.1.3防腐剂可选用叠氮钠、硫柳汞钠盐等，配制至适宜浓度。
2.1.4稳定剂可选用蛋白质、葡萄糖、盐类等配制至适宜浓度，不得使用凝聚胺、聚乙二醇等促凝剂用于配制稳定剂。
2.2 制备程序2.2.1杂交瘤细胞培养物上清液的制备抗A 血型或抗 B 血型杂交瘤细胞经培养传代，待杂交瘤细胞过度生长后收取培养液上清．检测血凝效价合格后扩大培养即得。
2.2.2小鼠杂交瘤腹水的制备2.2.2.1小鼠腹腔预处理健康 BALB / c 小鼠腹腔用石蜡油预处理。
2.2.2.2接种检测抗 A 血型或抗 B 血型杂交瘤细胞培养物上清液抗体血凝效价合格后，用生理氯化钠溶液或不完全培养液重新悬浮细胞，接种于数天前用石蜡油处理过的小鼠腹腔内。
2.2.2.3腹水的收集接种后数周，处死小鼠收集腹水，离心去沉淀，以适当方法除纤维蛋白原，加入适宜的防腐剂，－30℃及以下保存。
2.3 半成品2.3.1 半成品配制合并杂交瘤细胞培养物上清，可加入少量腹水混合，加入染色剂，使抗 A 血型定型试剂呈蓝色，抗B血型定型试剂呈黄色，除菌过滤。
抗a抗b血清定型试剂质量标准要求
抗a抗b血清定型试剂质量标准要求
抗A、抗B 血清定型试剂是用于检测红细胞ABO 血型的试剂。
以下是一些常见的质量标准要求：
1. 特异性：抗A、抗B 血清应该只与对应的A 型或B 型红细胞发生反应，而不与其他血型的红细胞发生反应。
2. 敏感性：抗A、抗B 血清应该能够检测到最低浓度的A 型或B 型红细胞。
3. 精确性：抗A、抗B 血清的检测结果应该具有高精确性，即相同的样本在不同的实验中应该得到相同的结果。
4. 稳定性：抗A、抗B 血清应该在规定的储存条件下保持稳定，不应该出现失效或变质的情况。
5. 无菌性：抗A、抗B 血清应该是无菌的，以避免感染的风险。
6. 批间一致性：不同批次的抗A、抗B 血清应该具有相同的质量和性能。
临检室抗A抗B血型定型试剂单克隆抗体操作规程
临检室抗A、抗B血型定型试剂（单克隆抗体）操作规程
【用途】本试剂盒专供鉴定人血型用，具有快速简便、灵敏度高、特异性强、重复性好等优点。
【测定原理】利用单克隆抗A、抗B抗体和相应的红细胞抗原发生特异性凝集反应的原理。
能和抗A抗体发生凝集反应，而不和抗B抗体反应的为A型；和抗B抗体发生凝集反应而不和抗A抗体发生反应的为B型；同时能和抗A及抗B抗体发生凝集反应为AB型；而不被抗A及抗B抗体凝集的则为O型。
【测定步骤】
1.被检者的抗凝血，用生理盐水洗涤1-2次后，取压积红细胞配成5%的生理盐水悬液。
2.取小试管5支，分别标明抗A、抗B、A细胞、B细胞、O 细胞。
在抗A管内加1滴抗A试剂，抗B管内加1滴抗B 试剂，A细胞、B细胞、O细胞管内各加被检血清1滴，然后在抗A、抗B管内各加被检红细胞1滴，A细胞管内加1滴5% A型红细胞悬液，B细胞管内加1滴5% B型红细胞悬。
ABO血型正定型标准操作规程
ABO血型正定型标准操作规程一.目得:规范AＢO血型正反定型得操作、二.适用范围:适用于ABO血型正反定型。
三.支持性文件:全国临床检验操作规程第二版、四。
原理:根据红细胞上有或无A抗原或／与B抗原,将血型分为Ａ型、B型、AB型及O型。
可利用红细胞凝集试验,通过正反定型准确鉴定AＢO血型。
所谓正定型,就是用已知抗A与抗B分型血清来测定红细胞上有无相应得A抗原或／与B抗原;五.仪器:离心机。
六。
试剂:1.抗A、抗B分型血清;定期进行效价滴定,以保分型血清质量性能符合要求。
抗A:１∶128,抗B:１∶128、七、样本要求:１.红细胞可用针刺手指采血,并直接用生理盐水稀释制成5%红细胞悬液;也可静脉采血,用1∶9枸橼酸钠抗凝.。
２。
血清取静脉血将血液沿管壁慢慢注入干燥试管中,待自然凝固后用玻璃棒轻轻搅动血块,使之与试管壁分离。
或置37℃水浴1小时,使血块收缩离心分离血清。
八.操作步骤:1。
取洁净小试管３支,分别标明抗A.抗B与抗A+Ｂ,用滴管分别加抗Ａ、抗B 与抗Ａ+B分型血清各1滴于试管底部,再以滴管分别加入受检者5%红细胞悬液１滴,混合。
2.另取洁净小试管３支,分别标明Ａ、B与Ｏ细胞;用滴管分别加入受检者血清１滴于试管底部,再分别以滴管加入A、B与O型5％试剂红细胞悬液1滴,混合。
3、用离心机以1000r/ｍin离心1分钟;或34０0r／10秒、４.将试管轻轻摇动,使沉于管底得红细胞浮起,先以肉眼观察有无凝集(溶血)现象、如肉眼不见凝集,应将反应物倒于玻片上,再以低倍镜检查。
５.观察结果时既要瞧有无凝集,更要注意凝集强度,此有助于A、B亚型;类B或ciｓAＢ得发现。
6、凝集强度判断标准:4＋＝红细胞凝集成一大块,血清清晰透明1.观察结果时不可用力振摇;2.严格按规程操作,避免操作失误,以免重新试验浪费时间与试剂;3.试验结束后,试剂置2-６℃冰箱保存,以免试剂中得免疫球蛋白变质聚凝胺法交叉配血实验操作规程ﻫ1、目得:检出与鉴定意外抗体、ﻫ2、原理:凝聚胺溶解后产生得阳离子中与红细胞表面得唾液酸使红细胞间距缩短,发生由ＩgG直接搭桥得可逆得非特异性凝集,当非特异性凝集回复时,只剩下由抗原抗体搭桥得特异性凝集。
abo正反定型操作步骤
abo正反定型操作步骤一、概述ABO血型正反定型操作是确定个体血型的重要方法，主要基于红细胞凝集实验和酶法鉴定原理。
本操作步骤将详细介绍正反定型的全过程，包括试剂和器材的准备、取样、标记、红细胞悬液制备以及结果观察等。
二、血型鉴定原理1.红细胞凝集实验：利用不同血型抗原抗体反应的原理，通过观察红细胞是否凝集来判断血型。
2.酶法鉴定：通过酶处理红细胞表面的抗原，使其性质发生改变，再与相应抗体结合，从而确定血型。
三、正定型操作步骤1.准备试剂和器材：准备好抗A、抗B标准血清、已知A、B型标准红细胞、受检者血液样本等。
同时需要准备的器材包括显微镜、离心机、滴管等。
2.取样：从受检者体内抽取适量血液样本。
3.标记试剂：分别标记抗A、抗B标准血清，便于后续观察。
4.红细胞悬液制备：将受检者血液样本与已知A、B型标准红细胞分别制备成红细胞悬液。
5.观察结果：将标记好的抗A、抗B标准血清分别与受检者红细胞悬液混合，观察是否发生凝集反应。
根据凝集反应的情况判断受检者的血型。
四、反定型操作步骤1.准备试剂和器材：准备好已知A、B型标准血清、受检者血液样本等。
同时需要准备的器材包括显微镜、离心机、滴管等。
2.取样：从受检者体内抽取适量血液样本。
3.标记抗体：分别标记已知A、B型标准血清，便于后续观察。
4.细胞悬液制备：将受检者血液样本制备成红细胞悬液。
5.观察结果：将标记好的已知A、B型标准血清与受检者红细胞悬液分别混合，观察是否发生凝集反应。
根据凝集反应的情况判断受检者的血型。
五、结果判断与分析根据正反定型的结果，综合判断受检者的血型。
若正反定型结果不一致，可能存在异型输血、血型变异或实验室误差，需进一步核实。
六、注意事项1.所有试剂和器材必须清洁无菌，避免污染。
2.取样时应注意安全，防止交叉感染。
3.操作过程中应严格遵守无菌操作规程，避免人为污染。
4.观察结果时，应仔细辨别红细胞凝集情况，避免误判。
抗 A 、抗 B 血型定型试剂(人血清)
抗 A 、抗 B 血型定型试剂（人血清）Kang A、Kang B Xuexing Dingxing Shiji (Renxueqing)Anti- A and Anti-B Blood Grouping Reagents (Human Sera)本品系用人抗A、抗B血型血清，经处理后制成，用于鉴定人ABO血型。
1 基本要求生产和检定用设施、原料及辅料、水、器具、动物等应符合凡例的要求。
2制造2.1专用原材料2.1 人血液2.1.1血液经 HBsAg、HCV 抗体、HlV-1/ HIV-2抗体、梅毒血清学检测，应为阴性，丙氨酸氨基转移酶（ ALT ）值应在正常范围内。
2.1.2用人A血型红细胞和B血型红细胞分别测定抗 A 、抗 B 血型血清凝集效价，均应不低于1：128 倍稀释。
2.1.3染色剂抗A可选用次甲基兰等蓝色染料、抗B可选用吖啶黄等黄色染料，配制至适宜浓度。
2.1.4防腐剂可选用叠氮钠、硫柳汞钠盐等，配制至适宜浓度。
2.2制备程序2.2.1采血供血者血样按 2.1.1 项检查合格后方可在无菌条件下采血。
2.2.2分离血液凝固后于 4℃放置 48 小时吸收冷抗体，分离血清。
如系血浆，则需去除纤维蛋白原并经测定合格。
分离的血清经 56℃30分钟处理后加入叠氮钠或其他适宜的防腐剂。
2.3半成品2.3.1半成品配制取制备好的血清或血浆，加入染料，使抗 A 血型血清染色呈蓝色，抗B血型血清染色呈黄色，除菌过滤。
2.3.2半成品检定按3.1项进行。
2.4 成品2.4.1 分批应符合“生物制品分批规程”规定。
2.4.2 分装与冻干应符合“生物制品分装与冻干规程”规定。
2.4.3 规格应为经批准的规格。
2.4.4 包装应符合“生物制品包装规程”规定和批准的内容。
3检定3.1半成品检定3.1.1效价测定取抗A血型血清、抗B血型血清及国家参考品，2倍系列稀释至适宜的稀释度，分别加入相应的2％A1、A2、A2B、B血型红细胞悬液，同时设红细胞悬液对照，置18～ 25℃反应15分钟，以1000转/分钟离心1分钟后观察结果。
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抗A抗B血型定型试剂（单克隆抗体）
包装规格：10ml
预期用途：
1、专用于定性鉴定人ABO血型（正定型）
2、ABO血型系统是临床输血、器官移植中最重要的血型系统，
错误的ABO血型定型导致的输血反应将给受血者带来十分严
重的后果。
因此，《中国输血技术操作规程》规定，ABO血型
鉴定必须通过正反定型。
正定型是用已知的抗A和抗B血型
定性试剂测定红细胞上有无相应的A抗原或/和B抗原；反定
型是用已知ABO血型的红细胞测定血清中有无相应的抗A抗
体或/和抗B抗体。
检验原理：根据红细胞上有无A抗原或（和）B抗原，以及血清中有无抗A或（和）抗B抗体，可以将红细胞血型分为A型、B 型、AB型和O型。
根据抗A和抗B抗体与对应红细胞抗原的凝集反应，可以鉴定ABO血型。
ABO血型表现型反应格局表见下表：
ABO血型表现行反应格局表
主要组成成分：
1、本品由抗A血型定型试剂、抗B血型定型试剂各1支组成。
2、本品由法国GIAGAST公司提供的杂交瘤细胞培养上清液
和本公司自制的杂交瘤细胞培养上清液按4:1比例混合后，
加入适量稳定剂、染色剂、防腐剂配置而成。
贮存条件及有效期:
1、储存条件：2-8℃避光保存。
如果长时间储存在高温或反复冻
融会使试剂失去活性。
2、有效期：储存条件下有效期24个月。
适用仪器：
本品为非仪器配套试剂。
样本要求：
按照临床输血技术规范中的血液样本采集步骤，采集患者或供血者、受血者的血液，红细胞抗凝或不抗凝样本。
严重溶血、脂血、污染标本不适用本项检测。
检验方法：
1、平板法（玻片法）
（1）加1滴抗A或抗B试剂于玻片上。
（2）再加1滴10%的被检红细胞悬液。
该红细胞悬液可以是盐水悬液，也可以是悬浮于自身血浆或血清中的红细胞。
（3）在圆形的玻片区域中混匀，（直径约为20mm大小），前后缓慢摇晃玻片。
2分钟左右肉眼判读结果，并记录。
2、试管法
（1）加1滴抗A或抗B试剂于两支预先标记好的试管中（75*12mm或75*10mm）。
（2）再加一滴2-5%的被检红细胞悬液于试管中。
混匀。
（3）离心，速度和时间可选择以下二种之一：
a)转速1000rpm，时间1分钟；
b)转速3400rpm，时间15秒。
（4）检查是否有溶血（溶血可能是阳性结果，或者是细菌污染），然后轻轻摇晃，使细胞再悬浮。
（5）观察凝集状况，并且记录结果。
必要时可借助显微镜。
（6）许多红细胞亚型（如Ax）能在抗AB试剂的盐水中凝集，但于抗A不凝，在室温（23+-3℃）中放置几分钟，可以
增强反应，但放置时间不宜超过30分钟。
参考值：本品为定性试剂，不需要设定参考值。
检验结果的解释：
检验方法的局限性：本实验建议与反定型一起进行，正反定型不一致须做进一步研究。
注意事项：
1、对含有较多自身冷凝集素的受检者，在鉴定血型时往
往被误定为AB血型，遇到此种情况，需用37℃生
理氯化钠溶液洗涤受检者红细胞2-3次，以去除吸附
在红细胞上的冷凝集素，然后再鉴定血型。
2、新生儿的血样中抗体含量较低，抗原发育不完全。
同
时可能含有母亲血液中的抗A或抗B抗体，可能导
致假阳性和假阴性的出现。
3、在许多病例中，ABO正反定型不符，必须在记录之
前调查原因并解决问题。
4、用立即试管法不能测出亚型（如Ax），需延长时间。
5、本品如出现浑浊则不能使用，若开瓶使用时间过长
后，最好用已知ABO血型红细胞检查结果是否与已
知血型相符，以防制品污染，实质失效，而造成鉴定
错误。
6、本试剂含有1%W/V叠氮钠，如果摄入会中毒。