ABO血型反定型试剂红细胞配制SOP修订版
ABO及RH(D)血型鉴定SOP
ABO和RH（D）血型鉴定操作规程一、目的：规范ABO和RH（D）血型鉴定操作，保证临床用血的安全性及有效性。
二、适用范围：适用于血库ABO和RH（D）血型鉴定三、所需材料和设备：1、材料：抗-A、抗-B、抗-D试剂、A、B、O型反定型试剂红细胞，生理盐水，滴管，患者标本。
2、设备：离心机，显微镜。
四、操作规程1、试管法：（1）取洁净试管3支，分别标明抗A、抗B及抗D，分别加入抗A、抗B 及IgM抗D单克隆血清各1滴于试管底部，再用滴管分别加入受检者5％红细胞生理盐水悬液1滴，轻摇混匀。
（2）另取洁净试管3支，分别标明A、B和O，用滴管分别加入受检者血浆1滴于试管底部，再分别以滴管加入A、B和O型5％试剂红细胞悬液1滴，轻摇混匀。
（3）立即以1000r/min离心1分钟后将试管轻轻摇动，使沉于管底的红细胞浮起，先以肉眼观察有无凝集（溶血）现象。
如肉眼不见凝集，应将反应物取置于玻片上，再以低倍显微镜检查。
（4）观察结果时既要看有无凝集，更要注意凝集强度，有助于A、B亚型，类B或嵌合体血型的发现。
2、玻片法：(1) 取血型鉴定专用玻璃板一块，在凹孔旁分别标明抗A、抗B及抗D，分别加入抗A、抗B及抗D单克隆血清1滴，再各加受检者5％红细胞悬液1滴，混匀。
(2) 标明A、B及O细胞，分别加入受检者血浆1滴，再各加入A、B及O型试剂红细胞悬液1滴，混匀。
编制人王渊审核人钟剑版本号第二版颁布日期2018年1月1日编制人 王渊 审核人 钟剑版本号 第二版颁布日期 2018年1月1日 (3) 轻轻转动玻板，使血清与红细胞充分混匀，连续15分钟以肉眼观察有无凝集（溶血）反应。
有需要时也可用低倍显微镜观察结果。
(4) Rh （D ）血型鉴定时应作阳性对照及阴性对照。
3、结果判断：单克隆血清＋受检者红细胞受检者血型受检者血浆＋试剂红细胞抗A 抗B 抗D A 细胞 B 细胞 O 细胞 ＋ — ＋/－ A 型 Rh （D ）＋/－－ ＋ － － ＋ ＋/－ B 型 Rh （D ）＋/－ ＋ － － － － ＋/－O 型Rh （D ）＋/－ ＋ ＋ － ＋ ＋ ＋/－ AB 型 Rh （D ）＋/－ － － －4、凝集强度判断：4+ 红细胞凝集成一大块，背景清晰透明； 3+ 红细胞凝集成数小块，背景尚清晰；2+ 红细胞凝块分散成许多小块，背景可见到游离红细胞； 1+ 肉眼可见大颗粒，周围有较多游离红细胞；+- 镜下可见数个红细胞凝集在一块，周围有许多游离红细胞； 混合外观凝集是指镜下可见少数红细胞凝集，而绝大多数红细胞仍分散分布；- 阴性 镜下未见凝集，红细胞均匀分布。
ABO血型鉴定SOP文件
ABO血型鉴定SOP文件1. 原理根据红细胞上有或无A抗原或/和B抗原，将血型分为A型、B型、AB型及O型四种。
A型红细胞膜上含有A抗原，B型红细胞膜上含有B抗原，AB型红细胞膜上含有A、B抗原，抗A、抗B试剂是分别针对A抗原和B抗原的特异性抗体。
可利用红细胞凝集试验，通过正、反定型准确鉴定ABO血型。
所谓正定型，是用已知的抗A、抗B试剂与受检者的红细胞混合时，与抗A试剂发生凝集者即为A 型，与抗B分型试剂发生凝集者即为B型，与抗A、抗B试剂均发生凝集者即为AB型，与抗A、抗B试剂均不凝集者即为O型。
所谓反定型，是用已知A细胞和B细胞来测定血清中有无相应的抗－A 或/和抗－B。
2. 标本采集2.1 标本种类：新抽取的抗凝血或手指末梢血和血清。
2.2 标本要求：2.2.1 抗凝剂：如用抗凝血，多主张用EDTA K2（㎎/dL）抗凝。
2.2.2 用手指末梢血作血型检测时，最少样品量为100ul，如手指有冻疮，则主张采耳垂血。
3. 标本储存：2小时内完成实验，室温放置下不超过8小时，4℃-8℃保存不超过48小时。
4. 标本运输：室温运输5. 标本拒收标准：细菌污染、溶血标本不能作测定6. 试剂6.1 试剂名称：ABO血型检测试剂6.2 试剂生产厂家：上海血液生物医药有限责任公司6.3 试剂组成试剂1：抗A分型试剂（蓝色），效价1：128，2℃-8℃避光保存，室温放置不宜过久。
试剂2：抗B分型试剂（黄色），效价1：128，2℃-8℃避光保存，室温放置不宜过久。
试剂3：5％A、B及O型红细胞盐水悬液，自制。
配制方法：分别采取已知A、B、O三种血型的红细胞，经盐水洗涤3次，以压积红细胞配成不同浓度的红细胞悬液。
红细胞悬液的配制悬液浓度（％）压积红细胞（滴）盐水（滴）2 5 10 20 11112ml（40）0.8ml（16）0.4ml（8）0.2ml（4）为了防止红细胞悬液敏感性不一致，可随机采取3个或以上的健康成人血液，按A、B、O型分别混合后，按上法制备。
ABO血型反定型标准操作规程(SOP)
ABO血型反定型标准操作规程（SOP）一．【检验原理】用已知的AI,B,0细胞测定被检者血清中有无相应的抗A或抗B抗体,结合正定型结果判断ABO血型二．【样本要求】被检者血清或血浆三．【检验方法】（1）试管法1.取被检者血清(或血浆)各1滴(50ul)分别加于3支标记好的小试管中2.分别各加1滴(50ul)Al,B.0试剂红细胞3.摇动试管,离心,速度和时间可选以下二种之一：a)转速1000rpm,时间1分b)转速3400rpm,时间15秒4.先观察是否溶血(溶血可能是阳性结果,或者是细菌污染),然后轻轻摇晃,使细胞再悬浮起来。
5.观察凝集状况,并立即记录结果(2)微量板法1.在U型板三个孔内分别加入25-30u1的被检者血清(或血浆)2.每孔内分别加入与血清的等量的A1、B、0试剂红细胞3.混匀(手工振动混匀或机器混匀)4,离心,转速2000m,时间30秒(650G)注:不同的离心机、不同的微量板所需要的离心条件有所区别,正确实验的结果需要适当的离心,反应板应产生清晰的细胞扣及透亮的上清液5.检测溶血情况(溶血可能是阳性结果,或者是细菌污染)6.用震荡仪振动微量板，振动能使阳性反应出现凝集的细胞扣，而若是阴性结果反应很快则细胞扣消除7.记录结果：亦可使用酶标读数仪，与电脑连接可实现自动化检测。
四．【检验结果的解释】ABO血型表现型反应格局表．【检验方法的局限性】本实验必须与正定型一起进行,正反定型不一致须做进一步研究。
单独反定型结果不能作为判断血型的依据。
六．【注意事项】1.如果在反定型试验中,受检者的血清或血浆与0型红细胞试剂产生阳性反应,则需要添加自身对照试验。
如果自身对照为阳性,表明是自身冷凝集素导致。
如果自身对服为阴性,则表明被检者血清或血浆中可能存在AB0系统以外的其他系统的抗体干扰定型。
请按照相关试验方法解决上述定型。
2.本品如出现红细胞颜色变成暗紫色或红细胞发生凝集,出现菌落或溶血严重,则不能使用。
S006红细胞ABO血型(反定型)鉴定标准化操作规程
红细胞ABO血型（反定型）鉴定标准化操作规程一、目的为保证血液及血液成分的红细胞ABO血型在临床上同型输注，确保临床输血安全、有效，根据《临床输血技术规范》第十五条特制定本标准化操作规程。
二、方法采用试管法检测红细胞ABO血型（反定型）。
三、原理用已知的A1、B、O标准红细胞测定被检者血清中有无相应的抗A或抗B抗体，结合正定型结果判断ABO血型。
四、适用范围适用于输血前患者与献血者红细胞ABO血型(反定型)确认。
五、仪器设备普通离心机；血型专用离心机；六、试剂1、试剂名称：人ABO血型反定型用红细胞试剂盒；2、试剂生产厂家：上海血液生物医药有限公司；3、批准文号：国药准字S2*******；4、包装规格：A1、B、O试剂各1支， 10ml /支；5、贮藏条件；2-8℃保存，不能冰冻。
6、有效期：自检定合格之日起2个月；7、试剂性能：外观、溶血率%、特异性、抗原性均符合检定规程要求。
七、检测样本要求1、标本类型：静脉血(EDTA抗凝剂:血液=1:10)。
2、标本采集：见输血科标本管理标准化操作规程。
3、标本储存和运输：新鲜血2～8℃贮存时间不超过72小时。
4、标本拒收状态：标识不准确、标本稀释、细菌污染，严重溶血等不能测定。
八、操作步骤1、取10mmx60mm洁净小试管3支，分别标明A1型细胞、B型细胞、O型细胞，用滴管分别加入受检者血清1滴于试管，再分别用滴管加入A1、B、O型试剂红细胞悬液1滴。
2、，摇动试管，立即以1000rpm离心1min或3400rpm离心15s。
3．先观察是否有溶血，溶血可能是阳性结果，或者是细菌污染；将试管轻轻摇晃，使沉于管底的红细胞浮起，观察细胞扣情况，并判断凝集强度（见下表）。
如肉眼不见凝集，应将反应物倒于玻片上，再以低倍镜检查。
红细胞ABO血型（反定型）结果凝集强度判断对照表4、ABO血型（反定型）表现型反应格局表九、质量控制1、对新进批号的试剂应作亲和力与效价验定。
ABO血型鉴定正反定型试验方法
ABO血型鉴定正反定型试验方法正定型试验方法：1.准备试验所需材料：A、B和O型血浆，还原血红蛋白（RBCs），生理盐水（PBS）和试管。
2.在试管中加入一定量的PBS。
3.取一滴A型血浆滴在PBS中的一根试管中，取另一滴B型血浆滴在PBS中的另一根试管中，取一滴O型血浆滴在PBS中的另一根试管中。
4.在每个试管中分别加入一滴RBCs。
5.轻轻摇晃每个试管，观察RBCs和血浆的反应。
反定型试验方法：1.准备试验所需材料：A、B和O型RBCs，A和B型血浆，抗人类血球定向凝集试验（AHG试剂），患者的血清和试管。
2.在试管中加入一定量的患者血清。
3.取一滴A型RBCs滴在血清中的一根试管中，取另一滴B型RBCs滴在血清中的另一根试管中，取一滴O型RBCs滴在血清中的另一根试管中。
4.分别制备三个试管，将A、B和O型RBCs与患者的血清混合。
5.将三个试管分别加入AHG试剂。
6.轻轻摇晃每个试管，观察RBCs和血清的反应。
分析结果：正定型试验的结果是通过观察每个试管中RBCs与血浆的反应来确定的。
如果A型血浆与A型RBCs在试验中凝集，B型血浆与B型RBCs在试验中凝集，而O型血浆不与任何RBCs发生凝集，则可以初步断定该患者的血型是A型、B型或O型。
反定型试验的结果是通过观察每个试管中RBCs与患者血清和AHG试剂的反应来确定的。
如果A型RBCs与患者血清和AHG试剂在试验中凝集，B型RBCs与患者血清和AHG试剂在试验中凝集，而O型RBCs与患者血清和AHG试剂不发生凝集，则可以最终确定该患者的血型。
总结：。
ABO.RhD血型定型试剂卡标准操作程序（SOP）
ABO.RhD血型定型试剂卡标准操作程序（SOP）一、准备工作（一）微柱凝胶试剂卡的准备：观察外观，如有干胶、杂质、气泡不可使用，之后将卡放置室温（18－25℃）平衡，再用专用离心机离心5分钟。
（二）检测标本的准备：1．红细胞悬液的制备：取被检者压积红细胞10微升，加入1.0－1.2毫升红细胞稀释液，外观应为均匀淡红色，无絮状物和血块。
2．血清标本的制备：采集被检对象静脉血，放入含兔脑粉或其它促凝剂的试管中，10分钟后离心，取上清；或者静脉血采入无抗凝剂试管中，4℃放置 12小时，或37℃放置2小时后离心，2000r/min,10分钟，取上清（该上清不得有絮状物或沉淀）。
二、操作步骤1. 将准备好的ABO.RhD血型定型试剂卡做好标记。
2. 将待检者红细胞悬液分别加入第1至第4管中，每管50ul。
3. 将待检者血清分别加入第5和第6管中，每管50ul。
4. 将已知的A型和B型红细胞0.8%浓度悬液或0.8%浓度ABO血型反定型红细胞试剂，每管50ul分别加入第5和第6管。
5. 即刻使用专用离心机离心5分钟（900rpm2分钟，1500rpm3分钟），取出肉眼判定结果。
结果判定：阳性结果：红细胞抗原与相应抗体在微柱凝胶中形成的特异性抗原抗体复合物浮在凝胶表面或胶中，为阳性反应。
阴性结果：被检红细胞抗原无相应的抗体结合，不出现特异性抗原抗体复合物，红细胞沉于微柱凝胶的尖底部。
三、注意事项1. 检测标本必须为抗凝血。
2. 红细胞标本一定不能被细菌污染，否则出现假阳性反应。
尽可能应用当日采集的新鲜血做本试验。
如不得不用过夜血或陈旧血，则必须首先用该标本做阴性对照试验，以确定该标本是否可以做本实验。
3. 血清标本：血清标本必须充分去纤维蛋白，否则标本中纤维蛋白在微柱凝胶中析出，阻碍阴性红细胞沉淀，呈假阳性反应。
4. 如在微柱凝胶管中出现溶血现象，强烈提示为红细胞抗原抗体阳性反应，也不排除其他原因所致溶血，故对此标本一定认真分析，并向上级主管技术人员报告并讨论。
ABO血型反定型操作步骤
ABO血型反定型操作步骤
【检验方法】
一试管法：
1 取被检查者血清（或血浆）各1滴（50ul ）分别加入3支标记好的小试管中；
2 分别各加1滴(50ul )A1,B,O试剂红细胞；
3 摇动试管，离心，速度和时间可选以下二种之一；
A）转速1000rpm, 时间1分钟；
B）转速3400rpm, 时间15秒；
4 先观察是否溶血（溶血可能是阳性结果，或者是细菌污染），然后轻轻摇晃，使细胞再悬浮起来；
5 观察凝集状况，并立即记录结果。
二微量板法
1在U型板三个孔内分别加入25--30ul的被检查血清（血浆）；
2 每孔内分别加入与血清的等量的A1，B,O试剂红细胞；
3 混匀（手工振动混匀或机器混匀）；
4 离心，转速2000rpm，时间30秒（650G）
注：不同的离心机，不同的微量板所需要的离心条件有所区别，正确实验的结果需要适当的离心，反应板应产生清晰的细胞扣及透亮的上清液。
5 检测溶血情况（溶血可能是阳性结果，或者是细菌污染）；
6 用振荡仪振动微量板，振动能使阳性反应出现凝集的细胞扣，而若是阴性反应很快则细胞扣消除；
7 记录结果，亦可使用酶标读数仪，与电脑连接可实现自动化检测。
【检验结果的解释】
ABO血型表现型反应格局表
正定型反定型血型
抗A试剂抗B试
剂A 细胞 B 细
胞
O 细
胞
+ - - + - A - + + - - B - - + + - O + + - - - AB。
ABO血型反定型试剂红细胞配制(SOP)
5.1注射器
5.2试管
5.3离心机
注：ISO2000不允许从血袋的小辫上留取红细胞样本。
6.检测环境
6.1温度：23-27℃
6.2相对湿度：30-70%
7．方法步骤
7.1选取的样本分别定型并且准确无误。
7.2选取每型至少10人份的同型细胞等量混合，越多越好。
7.3用足量的生理盐水至少洗三遍，最后一遍压积必须扣干。
ABO血型反定型试剂红细胞配制（SOP）
1．目的
规范ABO血型反定型检测试剂红细胞配制的操作，以保证该实验在工作中能够正常进行，确保检测结果的准确性。
2．职责
2.1操作者负责试验操作，并作好相关记录及留样。
2.2科主任监督该规程的执行。
3．适ห้องสมุดไป่ตู้范围
本规程适用于中心血库检验室ABO血型反定型检测试剂红细胞配制的操作工作。
9.2应严格按照以上操作步骤进行。
11质量记录
11.1《检验室污物处理记录》
11.2《试剂配制记录》
7.4经多批次定型试剂鉴定确认血型无误方可使用，并作好明显标记。
7.5悬浮在含有葡萄糖等保存液的抗凝剂中。
9．注意事项
9.1特异性鉴定，阴性必须在显微镜下观察，包括红细胞形态。
9.2每次使用前必须观察溶血现象，并配制成5％左右的红细胞悬液。
9.3不使用时必须4℃保存。
9.4配制必须符合《实验室质量管理规范》和《生物安全守则》的规定。操作时必须戴手套、穿工作衣，严格执行消毒隔离制度。所有样品、废液、废弃物都应按污物处理程序进行。
标准红细胞配置操作规程
标准红细胞配置操作规程(总
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标准红细胞配置操作规程
标准红细胞用于测定ABO血型(反定型)，可以验证正定型结果的准确性，也可以纠正正定型时发生的错误，避免事的发生。
以下介绍标准红细胞的配置规程：
1 搜集新鲜的A型、B型、O型血标本各3份以上。
最好是抗凝血，以便可以吸取较多的红细胞。
2 取三支洁净10cm×150mm试管标上“A”“B’’“O”等字样，根据平时工作量需要，分别将三份或以上A型血的适量红细胞吸入标有“A”字样的试管中。
B 型、O型依次类推。
3 用生理盐水加入上述三支试管进行洗涤，洗涤时需加入生理盐水2／3 试管以上，并且要轻轻地充分摇匀，然后以3000转／rain离心5min，弃去上清液。
4 重复第3步骤三次，使红细胞充分洗清。
5 将上法取得的红细胞再用生理盐水配制成5％的红细胞悬液，每10ml加1滴甲醛溶液。
即得用于反定型的标准红细胞。
可在4"C冰箱中保存2w。
2。
血型鉴定反定型细胞配制操作作业指导书
血型鉴定反定型细胞（A、B细胞）悬液配制操作作业指导书
1、目的
配比已知血型细胞（A、B型）用于血型鉴定反定型细胞
2.原理
ABO血型鉴定：根据红细胞膜表面有无A抗原和（或）B抗原，将血型分为A型、B型、AB型及O型4钟。
可利用红细胞凝集试验，通过正反定型确定ABO血型。
所谓正定型，是指用标准抗A、抗B分型血清来测定红细胞上有无相应的A抗原或（和）B抗原；所谓反定型，是指用标准A型细胞和B型细胞来测定血清中有无相应的抗A和（或）抗B
3.样品类型
EDTA-K2抗凝血（合血时A、B型辫子最佳）
4.操作步骤
4.1将已知A、B型细胞装入干净试管内
4.2离心机（2500r）离心5min
4.3用干净吸头吸弃上清液直至肉眼不见血浆
4.4加入5ml低离子液，摇匀，离心机（2500r）离心5min，干净吸头吸弃上清液，重复洗涤红细胞3次
4.5取两只干净塑料管，标记A、B并加入低离子液，按0.5%-0.8%配制洗涤红细胞悬液，摇匀。
5.计划措施
5.1离心时注意转速（离心力）和时间设置
5.2离心后观察有无溶血，凝露，乳糜等，如有慎用
5.3配比后的反定型细胞需做验证试验，用已知A、B型做血型鉴定
5.4反定细胞需尽快使用，如细胞溶血弃用
输血科
2021年4月3日（修订）。
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A B O血型反定型试剂红
细胞配制S O P修订版 IBMT standardization office【IBMT5AB-IBMT08-IBMT2C-ZZT18】
ABO血型反定型试剂红细胞配制（SOP）
1．目的
规范ABO血型反定型检测试剂红细胞配制的操作，以保证该实验在工作中能够正常进行，确保检测结果的准确性。
2．职责
2.1操作者负责试验操作，并作好相关记录及留样。
2.2科主任监督该规程的执行。
3．适用范围
本规程适用于中心血库检验室ABO血型反定型检测试剂红细胞配制的操作工作。
4.材料与设备
5.1 注射器
5.2 试管
5.3 离心机
注：ISO2000不允许从血袋的小辫上留取红细胞样本。
6.检测环境
6.1 温度：23-27℃
6.2相对湿度：30-70%
7．方法步骤
7.1 选取的样本分别定型并且准确无误。
7.2 选取每型至少10人份的同型细胞等量混合，越多越好。
7.3 用足量的生理盐水至少洗三遍，最后一遍压积必须扣干。
7.4 经多批次定型试剂鉴定确认血型无误方可使用，并作好明显标记。
7.5 悬浮在含有葡萄糖等保存液的抗凝剂中。
9．注意事项
9.1 特异性鉴定，阴性必须在显微镜下观察，包括红细胞形态。
9.2 每次使用前必须观察溶血现象，并配制成5％左右的红细胞悬液。
9.3 不使用时必须4℃保存。
9.4 配制必须符合《实验室质量管理规范》和《生物安全守则》的规定。
操作时必须戴手套、穿工作衣，严格执行消毒隔离制度。
所有样品、废液、废弃物都应按污物处理程序进行。
9.2应严格按照以上操作步骤进行。
11质量记录
11.1 《检验室污物处理记录》
11.2 《试剂配制记录》。