金黄色葡萄球菌

3、鉴定
1）染色镜检：金黄色葡萄球菌为革兰氏阳性球菌，
排列呈葡萄球状，无芽胞，无荚膜，直径约为
0.5μm～1μm。
2）血浆凝固酶试验：
有无致病性的 重要指标
挑取Baird-Parker 平板或血平板上可疑菌落1 个或以上， 分别接种到5 mL BHI和营养琼脂小斜面，36 ℃±1 ℃培 养18 h～24 h。 取新鲜配置兔血浆0.5 mL，放入小试管中，再加入BHI
BP平板主要成分及作用：P223
氯化锂、甘氨酸 抑制非制病性葡萄球的生长
丙酮酸钠:
促进葡萄球菌生长 亚碲酸钾: 抑制G-杆菌生长，可被金黄色葡萄球菌还 原为碲盐呈黑色
卵黄: 含蛋白质、卵磷、脂肪
金黄色葡萄球菌 在BP平板上的菌落形态
圆形，光滑突起，湿润，直径2-3mm，颜色呈灰色到黑玉色，边缘常为淡色（米 黄色或灰白色略带灰色或黄色的白色），周围为一混浊带，在其外缘常有一透明 圈。用接种针接触菌落似有黄油树胶的粘稠感
葡萄球菌属（Staphylococcus）
引起毒素型食物中毒 分为：金黄色葡萄球菌 表皮葡萄球菌 腐生性葡萄球菌
对于加工过的食品或食 品加工设备而言，此菌 或其肠毒素的存在通常 作为卫生条件差的一种 指标。
金黄色葡萄球菌的扫描 电镜照片
2.2 葡萄球菌属（Staphylococcus）
生物学特性
36 ℃±1 ℃培养，45 h～48 h。
4 典型菌落计数和确认
1）金黄色葡萄球菌在Baird-Parker 平板上，菌落直径
为2 mm～3 mm，颜色呈灰色到黑色，边缘为淡色，周围
为一混浊带，在其外层有一透明圈。用接种针接触菌落 有似奶油至树胶样的硬度，偶然会遇到非脂肪溶解的类 似菌落；但无混浊带及透明圈。长期保存的冷冻或干燥 食品中所分离的菌落比典型菌落所产生的黑色较淡些，
2、增菌和分离培养
3）长期保存的冷冻或干燥食品中所分离的菌落比典型菌落 所产生的黑色较淡些，外观可能粗糙并干燥。在血平板上，
形成菌落较大，圆形、光滑凸起、湿润、金黄色（有时为
白色），菌落周围可见完全透明溶血圈。挑取上述菌落进 行革兰氏染色镜检及血浆凝固酶试验。
血平板上金黄色葡萄球菌 菌落形态
金黄色葡萄球球菌 的单个菌落在血平 板上呈金黄色，有 时也为白色，大而 突出、圆形、不透 明、表面光滑，周 围有溶血圈。
第二法
第三法
金黄色葡萄球菌 Baird-Parker 平板计数
金黄色葡萄球菌MPN 计数
第一法 金黄色 葡萄球 菌定性 检验
国家标准检验方法GB4789.10-94
操作步骤：
1、样品的处理
2、增菌和分离培养
3、鉴定：染色镜检、血浆凝固酶试验
4、肠毒素的测定
5、结果报告
1、样品的处理
称取25g样品至盛有225mL7.5 %氯化钠肉汤或10 %氯化钠
棒涂布整个平板，注意不要触及平板边缘。使用前，如 Baird-Parker平板表面有水珠，可放在25 ℃～50 ℃的培养 箱里干燥，直到平板表面的水珠消失。
3 培养
在通常情况下，涂布后，将平板静置10 min，如样液不 易吸收，可将平板放在培养箱36 ℃±1 ℃培养1 h；等样品匀液吸收后翻转平皿，倒置于培养箱，
进行血浆凝固酶试验。
结果如可疑，挑取营养琼脂小斜面的菌落到5 mL BHI， 36 ℃±1 ℃培养18 h～48 h，重复试验。
阳性
4、葡萄球菌肠毒素的检验
可疑食物中毒样品或产生葡萄球菌肠毒素的金黄
色葡萄球菌菌株的鉴定，应按附录B检测葡萄球菌 肠毒素。 5、结果与报告 1）结果判定：符合2（3）、3，可判定为金黄色 葡萄球菌。 2）结果报告：在25 g（mL）样品中检出或未检出 金黄色葡萄球菌。
Baird-Parker平板，36 ℃±1 ℃培养45 h～48 h。
3 典型菌落确认
1）同上。
2）从典型菌落中至少挑取1 个菌落接种到BHI肉汤和营养
琼脂斜面，36 ℃±1 ℃培养18 h～24 h。 进行血浆凝固酶试验 4 结果与报告 计算血浆凝固酶试验阳性菌落对应的管数，查MPN 检索表
（见附录C），报告每g(mL)样品中金黄色葡萄球菌的最可
能数，以MPN/g（mL）表示。
5、结果计算与报告
1、样品的稀释 2、样品的接种
同上
根据对样品污染状况的估计，选择2 个～3个适宜稀释度的样 品匀液（液体样品可包括原液），在进行10 倍递增稀释时， 每个稀释度分别吸取1 mL 样品匀液以0.3 mL、0.3 mL、0.4
mL 接种量分别加入三块Baird-Parker 平板，然后用无菌L
一、金黄色葡萄球菌的生物学特性 1、形态与染色：(staphylococcus aureus) G+，无芽胞、鞭毛，大多数无荚膜。 典型的金黄色葡萄球菌为球型，直径0.8 mm左右， 显微镜下排列成葡萄串状。
附：
金黄色葡萄球菌的显微照片 金黄色葡萄球菌的染色照片 金黄色葡萄球菌的扫描电镜照片 金黄色葡萄球菌的透射电镜照片
同上
1）根据对样品污染状况的估计，选择3 个适宜稀释度的样
品匀液（液体样品可包括原液），在进行10 倍递增稀释时， 每个稀释度分别吸取1 mL 样品匀液接种到10%氯化钠胰酪胨 大豆肉汤管，每个稀释度接种3管，将上述接种物于36 ℃±1 ℃培养45 h～48 h。
2）用接种环从有细菌生长的各管中，移取1环，分别接种
可预置适当数量的无菌玻璃珠)中，振荡混匀。
2、增菌和分离培养
1）将上述样品匀液于36 ℃±1 ℃培养18 h～24 h。金黄
色葡萄球菌在7.5%氯化钠肉汤中呈混浊生长，污染严重时 在10%氯化钠胰酪胨大豆肉汤内呈混浊生长。 2）将上述培养物，分别划线接种到Baird-Parker 平板和 血平板。血平板36 ℃±1 ℃培养18 h～24 h。Baird-
根据Baird-Parker平板上金黄色葡萄球菌的典型菌 落数，按5中公式计算，报告每g（mL）样品中金 黄色葡萄球菌数，以CFU/g(mL)表示；如T值为0，则 以小于1乘以最低稀释倍数报告。
第三法 MPN计数方法
1、样品的稀释 2、接种培养
3、典型菌落确认
4、结果与报告
1、样品的稀释
2、接种培养
b） 最低稀释度平板的菌落数小于20 CFU 且有典型菌落， 计数该稀释度平板上的典型菌落； c） 某一稀释度平板的菌落数大于200 CFU 且有典型菌落， 但下一稀释度平板上没有典型菌落，应计数该稀释度平板
上的典型菌落；
4 典型菌落计数和确认
2）如果： d） 某一稀释度平板的菌落数大于200 CFU 且有典型菌 落，且下一稀释度平板上有典型菌落，但其平板上的菌
2.2.2 生物学特性
6、毒素和酶 肠毒素形成条件：


存放温度：在37℃内，温度越高，产毒时间越短；
存放地点：通风不良氧分压低易形成肠毒素；

食物种类：含蛋白质丰富，水分多，同时含
一定量淀粉的食物，肠10
第一法
金黄色葡萄球菌的定性检测
2、培养特性： 金黄色葡萄球菌营养要求不高，在普通培养 基上生长良好，加少量葡萄糖或血液生长更旺盛 需氧或兼性厌氧，最适生长温度37℃，最适生长 pH 7.4。 金黄色葡萄球菌有高度的耐盐性，可在7.5～ 15%NaCl肉汤中生长。
金黄色葡萄球菌 在甘露醇盐平板上的菌落
2.2 葡萄球菌属（Staphylococcus）
培养物0.2 mL～0.3 mL，振荡摇匀，置36
℃±1 ℃温箱或水浴箱内，每半小时观察一次，观察6 h， 如呈现凝固（即将试管倾斜或倒置时，呈现凝块）或凝 固体积大于原体积的一半，被判定为阳性结果。
有无致病性的 重要指标
2）血浆凝固酶试验：
同时以血浆凝固酶试验阳性和阴性葡萄球菌菌株的肉汤 培养物作为对照。也可用商品化的试剂，按说明书操作，
胰酪胨大豆肉汤的无菌均质杯内，8000r/min～
10000r/min 均质1min～2min，或放入盛有225mL7.5 %氯 化钠肉汤或10%氯化钠胰酪胨 大豆肉汤的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1min～ 2min。若样品为液态，吸取25mL样品至盛有225mL7.5 %氯
化钠肉汤或10 %氯化钠胰酪胨大豆肉汤的无菌锥形瓶(瓶内
Parker 平板36 ℃±1 ℃培养18 h～24 h 或45 h～48 h。
2、增菌和分离培养
3）金黄色葡萄球菌在Baird-Parker 平板上，菌落直径为 2 mm～3 mm，颜色呈灰色到黑色，边缘为淡色，周围为一
混浊带，在其外层有一透明圈。用接种针接触菌落有似奶
油至树胶样的硬度，偶然会遇到非脂肪溶解的类似菌落； 但无混浊带及透明圈。
落数不在20 CFU～200 CFU 之间，应计数该稀释度平板
上的典型菌落；以上按公式（1）计算。 e） 2 个连续稀释度的平板菌落数均在20 CFU～200 CFU 之间，按公式（2）计算。 3 ) 从典型菌落中任选5 个菌落（小于5 个全选），分 别做血浆凝固酶试验。
5
结果计算：
5 结果计算：
金黄色葡萄球菌肠毒素的检测
一、动物学试验 主要用幼猫和猴。 二、血清学试验 肠毒素作为抗原，可以和特异性抗体发生结合 性反应，产生可见沉淀。 方法主要有： 免疫琼脂扩散法 反向间接血凝试验 免疫荧光法 酶联免疫吸附法

第二法 直接计数方法
1、样品的稀释
2、样品的接种
3、培养
4、典型菌落计数和确认
1、形态与染色特性 G+，无芽孢、无鞭毛、无荚膜、不运动 2、培养特性： ① ② ③ ④ ⑤ 3、生化特性：MR阳性，V－P弱阳性，靛基质阴 性…… 4、抵抗力 具有较强的抵抗力，80 ℃ 30min 5、抗原结构 蛋白抗原——表面抗原，无特异性。 多糖抗原——半抗原，有型特异性