项目五 对流免疫电泳试验
免疫电泳实验报告
免疫电泳实验报告摘要：本实验运用火箭电泳、微量电泳、双向免疫扩散等方法测定抗体的效价。
关键词：抗体效价测定；火箭电泳；微量电泳；双向免疫扩散1 前言免疫电泳(immunoelectrophoresis)的方法很多，主要有单向免疫扩散、双向扩散电泳、对流免疫电泳、微量免疫电泳、免疫火箭电泳、免疫固定电泳等几种方法。
其中比较常用方法有以下三种。
火箭免疫（rocket immunoelectrophoresis），该方法是在琼脂板内掺入适量的抗体，在电场的作用下定量的在含适量抗体的离子琼脂中泳动，当走在前面的抗原遭到琼脂板内的抗体时，形成抗原体复合物而沉淀出来，走在后面的抗原继续在电场的作用下向正极泳动，在向前泳动过程中，遇到了前面抗原所沉淀的抗原抗体复合物，由于抗原的增加造成抗原过量时复合物沉淀溶解，并一同向正极移动而进入新的琼脂板内与未结合的抗体结合，有形成新的抗原抗体复合物沉淀出来，这样不断地沉淀—溶解—再沉淀，直到全部抗原与抗体结合，当比例合适时，可在短时间内出现锥形沉淀线，此沉淀线形似火箭，故称火箭电泳，抗原含量越高所形成的火箭峰愈长，因此依据火箭峰的长度，与标准抗原比较精确地计算抗原的浓。
微量电泳，该方法的原理是不同蛋白质颗粒所带电荷不同，在同一电场中，因泳动速度不同而发生分离，用于抗原、抗体纯度测定，以及临床诊断。
双向免疫扩散（double immunodiffuison）,根据出现沉淀线时抗体的最高稀释度来计算抗体的效价，或者依据沉淀线的出现定性抗原，检测疾病。
2 材料与方法2．1 材料抗体，抗原，巴比妥钠-HCl缓冲液（pH8.6，0.4M），1.5%琼脂糖凝胶，7%醋酸，电泳仪，温箱，玻璃板，打孔器等。
2．2 方法2．2．1 火箭电泳法配制巴比妥钠-HCl缓冲液（pH8.6，0.4M）；制备1.5%琼脂糖凝胶，煮沸至完全溶解；取琼脂糖凝胶约15ml，置55 ºC水浴中降温，并加入抗体200μL，共同孵育；将二者混匀，铺火箭电泳板，放置冷凝倍比稀释抗原抗体；电泳板打孔(6孔)，加入已稀释的抗原(约10 μL/孔)；电泳3~4h，电流：30mA/块，电压：100~120V；待火箭电泳结束，用0.1%氨基黑染色10min，7%醋酸脱色至条带清晰。
对流免疫电泳实验原理
对流免疫电泳实验原理
嘿，朋友们！今天咱来聊聊对流免疫电泳实验原理。
这玩意儿啊，就像是一场奇妙的舞蹈比赛！
想象一下，在一个特殊的舞台上，有两种选手，一种是抗原选手，另一种是抗体选手。
这个舞台呢，就是电泳槽啦。
抗原选手们和抗体选手们平时都好好地待在自己的位置上，互不干扰。
可一旦我们通上电，这就好比给这场比赛吹响了开场哨！抗原选手们因为各自的特点，就开始顺着电场的方向跑起来啦。
这时候，抗体选手们也不甘示弱呀，它们也顺着电场开始行动。
那场面，就跟两支队伍在比赛谁跑得快似的。
但是呢，有趣的事情发生啦！当抗原选手和抗体选手在电场中相遇的时候，哇哦，那可不得了！它们就像遇到了久别重逢的老友一样，紧紧地拥抱在一起。
这一拥抱可不简单呐，这就是我们能看到的沉淀线呀！就好像是这场舞蹈比赛中最精彩的部分，让我们一眼就能看到它们相遇的美妙瞬间。
你说神奇不神奇？这就是对流免疫电泳的魅力所在呀！通过这样一个看似简单的过程，却能让我们清楚地看到抗原和抗体之间的反应。
而且哦，这个实验就像是一个神奇的魔法，能帮我们解开好多生物谜题呢！它能告诉我们身体里的免疫系统是怎么工作的，能帮我们检测疾病，是不是超级厉害？
我们平时生活中可能不太会注意到这些小小的抗原和抗体，但在这个实验里，它们可成了大主角呢！就像我们每个人在自己的生活中都是主角一样。
所以啊，对流免疫电泳实验原理真的很有趣，也很重要呢！它让我们看到了微观世界里那些奇妙的互动和反应。
让我们更加了解生命的奥秘呀！这不就是科学的魅力所在嘛！大家说是不是呀！。
对流免疫电泳操作方法
对流免疫电泳操作方法
对流免疫电泳（CIEP）是一种检测样本中蛋白质的方法。
以下是其操作步骤：
1. 准备样本：将待测的样本加入缓冲液中，并进行混合。
可以将分离物、血浆、血清等作为样本。
2. 准备电泳缓冲液：根据试剂盒说明书或自己的需求，配制电泳缓冲液，并根据实验设计制作所需的pH值和离子强度的缓冲液。
3. 准备抗体：将合适浓度的抗体加入电泳缓冲液中，并进行混合。
4. 将样本和抗体混合：将样本和抗体混合，并在室温下反应一段时间。
5. 将混合物加到电泳槽中：将混合物注入CIEP槽中，并将电极插入电泳槽中。
6. 进行电泳：将电泳槽连接到电源，设置所需的电压和时间进行电泳。
7. 可视化蛋白质：将电泳后的蛋白质进行染色，如使用银染或卡斯林蓝染。
8. 结果分析：根据样品和抗体的反应，可以得到样品中是否存在特定的抗原或蛋白质。
项目五对流免疫电泳试验
项⽬五对流免疫电泳试验项⽬五对流免疫电泳试验 (Counter immunoelectrophoresis test)【实验原理】在适宜缓冲液和电场条件下，由于琼脂凝胶中的抗原和相应抗体在电泳和电渗作⽤下能相对移动，所以⼆者会在加样的两孔之间相遇，并在它们浓度⽐例合适之处形成⽩⾊沉淀线。
据此临床常⽤该⽅法检测抗原，以诊断某些疾病。
【试剂和器材】1．AFP 阳性⾎清、待检⾎清、抗AFP 诊断⾎清。
2． mol/L 巴⽐妥缓冲液。
巴⽐妥钠 10.3 g巴⽐妥 1.84 g先将巴⽐妥置于三⾓烧瓶中，加⼊200ml 蒸馏⽔，加热溶解后再加⼊巴⽐妥钠，最后加蒸馏⽔⾄1000ml 。
3．琼脂凝胶按需要量称取琼脂粉，加⼊ L 巴⽐妥缓冲液，使琼脂浓度为12g/L ，沸⽔浴中溶解⾄澄清。
4．电泳仪、电泳槽、万⽤电表。
5．载玻⽚、绘图笔尖、吸管、滴管等。
【步骤和⽅法】1．制备琼脂凝胶板取溶化的琼脂3~4ml ，浇于载玻⽚上，冷却后打孔。
2．打孔⽤绘图笔尖按图1-6打孔，孔径约3mm ，孔距4~5mm ，挑去孔中凝胶。
3．加样⽤滴管按图1-6分别加⼊抗⾎清、AFP 阳性⾎清、待检⾎清，以加满孔为宜，注意不要溢出。
4．电泳将加好样的琼脂凝胶板置于电泳槽中，抗原孔侧置阴极端，抗体孔侧置阳极端，两端分别以2~3层滤纸或纱布搭桥，使凝胶和槽中缓冲液相接。
按通电源，将电压控制在4~6V/cm 长，或电流3~4mA/cm 宽，电泳30~60min 。
【结果判定】电泳完毕后关闭电源，待15~30min 后取出琼脂凝胶板观察结果，或照相、染⾊后保存。
阳性对照孔与抗⾎清孔之间必须出现沉淀线，否则试验须重做。
待检⾎清孔与抗⾎清孔之间出现⽩⾊沉淀线为阳性，不出现者为阴性。
Ag Ag Ab Ab +_1 阳性对照孔2~4 待检⾎清孔图1-6 对流免疫电泳【注意事项】1．当标本为脂⾎症、陈旧⾎标本或由于α2-巨球蛋⽩可引起假阳性，它靠近阳极呈弧状。
对流免疫电泳
对流免疫电泳概述对流免疫电泳（convection-enhanced immunoelectrophoresis，CEIE）是一种以免疫电泳技术为基础的新型免疫分析技术，也称作免疫对流电泳。
该技术利用特定的对流流动作用，使电泳操作更加稳定和方便，并能够大幅提高样品的灵敏度和准确性。
同时，对流免疫电泳也逐渐被应用于多项临床和实验室检测任务中。
原理对流免疫电泳是一种以聚丙烯凝胶为基质，将试验物聚焦于水平位移平衡的技术。
在试验过程中，聚丙烯凝胶中的样品水平运动会被一个垂直方向的空气流覆盖，形成对流效应，从而使凝胶样品的水平位移保持平衡。
该对流效应可以削减因重力差异而导致的样品层析效应，使得电泳分离更为稳定和准确。
此外，对流免疫电泳还采用一些辅助技术以增强其灵敏度。
例如，将电泳板倾斜，或者增加凝胶浓度都可以提高对流免疫电泳的敏感度。
这些辅助技术都能帮助样品快速进入凝胶中，并且更快速地与抗体结合。
应用对流免疫电泳在临床检测中已经得到了广泛的应用。
例如，对于一些癌细胞检测任务中，样品比较粘稠，传统的免疫电泳无法满足敏感度和特异性要求。
然而，通过使用对流免疫电泳技术，可以更加容易地进一步提高检测的精度和准确性。
此外，对流免疫电泳还可以应用于其他生物样品的检测中，如血清、尿液、脑脊液等。
因此，它在计量、生物药物、食品等许多其他领域也得到了广泛的应用。
优点和局限性对流免疫电泳技术有许多明显的优点。
首先，该技术能够提高样品的敏感度和特异性，从而确保测试结果更加准确和可靠。
其次，对流免疫电泳具有快速的操作速度，并且可靠性较高。
此外，这种技术对富含粘稠物的样品也非常适用。
因此，这种技术受到了广泛的青睐。
尽管对流免疫电泳技术存在很多优点，但仍然存在一些局限性。
例如，在一些情况下，可能会出现样品重叠和遮挡的现象，使得检测时出现误差。
此外，这种技术的设备和实验室条件要求较高，操作工作复杂，具有很高的技术门槛。
因此，在操作过程中必须掌握相关的技术。
免疫学实验 对流免疫电泳 (2)
电泳
将加好样品的板置于电泳槽上，抗原孔置 负极端，抗体孔置正极端。琼脂板两端分 别用四层纱布与0.05mol/L、PH8.6的缓 冲液相连，接通电源。电流以玻片的宽度 计算，为4mA/cm；电压以玻片的长度计 算，为6V/cm；通电30-60min后，切断 电源，观察结果
结果和讨论
将玻片对着光，先观察AFP阳性血清孔与 抗体孔之间的白色沉淀线，然后再观察待 检血清孔与抗体孔之间是否也有沉淀线出 现，如有沉淀线，则表示AFP试验阳性， 否则AFP试验为阴性。如沉淀线不清晰， 可把琼脂板放在湿盒中37℃数小时或置电 泳槽过夜再观察。
免疫电泳技术
免疫电泳技术
是将电泳与免疫扩散相结合的一种常 用的免疫学实验方法 。
沉淀反应
是可溶性抗原与相应抗体在适当 条件下发生特异性结合所出现的沉 淀现象。
分类
絮状沉淀试验 液体内沉淀试验 环状沉淀试验
沉
免疫浊度测定
淀
ห้องสมุดไป่ตู้
反 应
单向琼脂扩散试验 免疫扩散
双向琼脂扩散试验
凝胶内沉淀试验
免疫电泳
火箭免疫电泳 对流免疫电泳
注意事项
1. 电泳时电流不宜过大，以免蛋白质变性。
2. 抗原、抗体的电极方向不能放反。
3. 电泳所需时间与孔间距离有关，距离越大，电泳 时间越长。
4.抗原抗体浓度的比例：当抗原抗体比例不适合时， 均不能出现明显可见的沉淀线。抗原太浓太稀时 都不易出现沉淀线。所以除了应用高效价的血清 外，每份待测样品均可做几个不同的稀释度来进 行检查。
思考题
抗原、抗体的电极反向放反了，会出现什 么结果？？
为什么对流免疫电泳试验的敏感性要比双 向扩散高8-10倍？
在电泳过程中，可见抗原抗体孔均出现色 带泳向阳极，为什么？
对流免疫电泳实验报告
对流免疫电泳实验报告对流免疫电泳实验报告引言：对流免疫电泳是一种常用于生物医学领域的实验技术，它结合了电泳和免疫学的原理，能够用于检测和分离复杂的生物样品中的蛋白质。
本实验旨在通过对流免疫电泳技术的应用，探索其在蛋白质分析中的潜力和应用价值。
实验材料与方法：1. 样品制备：从细胞培养物中收集蛋白质样品，并通过离心将细胞碎片去除，得到纯净的蛋白质溶液。
2. 凝胶制备：制备聚丙烯酰胺凝胶，根据所需分辨率选择合适的凝胶浓度。
3. 样品加载：将蛋白质样品加载到凝胶孔中，注意控制样品的加载量和均匀性。
4. 电泳条件：设置适当的电压和电流，进行电泳分离。
5. 免疫检测：将蛋白质迁移至膜上，进行免疫染色或免疫印迹分析。
实验结果与讨论：通过对流免疫电泳实验，我们成功地分离和检测了目标蛋白质。
在电泳过程中，蛋白质根据其分子量的大小迁移至凝胶不同位置，形成清晰的蛋白质条带。
通过免疫染色或免疫印迹，我们能够特异性地检测目标蛋白质，并确定其分子量和相对丰度。
对流免疫电泳的优势在于其高分辨率和高灵敏度。
凝胶孔的尺寸可以根据需要进行调整，以实现对不同大小蛋白质的分离。
同时，免疫检测使得我们能够选择性地检测特定蛋白质，而不受其他蛋白质的干扰。
这为我们研究蛋白质的功能和相互作用提供了有力的工具。
在实验中，我们还发现凝胶浓度对蛋白质分离的影响。
较低浓度的凝胶可分离较大分子量的蛋白质，而较高浓度的凝胶则适用于分离较小分子量的蛋白质。
这一发现提示我们在实验设计中需要根据目标蛋白质的特性选择合适的凝胶浓度，以获得最佳的分离效果。
除了分离和检测蛋白质，对流免疫电泳还可以用于研究蛋白质的修饰和变异。
通过将不同样品加载到同一凝胶中，我们可以比较它们之间的蛋白质差异，进而探索这些差异对蛋白质功能和疾病发展的影响。
这为我们深入了解蛋白质的多样性和复杂性提供了重要的手段。
然而，对流免疫电泳也存在一些局限性。
首先，样品的制备和加载过程可能引入一定的误差，影响实验结果的准确性。
对流免疫电泳的原理及应用
对流免疫电泳的原理及应用1. 引言对流免疫电泳是一种基于免疫反应原理的电泳技术，能够高效、高灵敏地检测特定的抗原或抗体。
本文将介绍对流免疫电泳的原理和应用。
2. 对流免疫电泳的原理对流免疫电泳基于电泳技术和免疫学原理，通过在电泳过程中，利用特定抗原与抗体间的免疫反应产生的沉淀来检测目标物质的存在与数量。
2.1 免疫反应免疫反应是机体对抗原刺激的免疫系统的反应。
在免疫反应中，抗原与抗体结合形成复合物，这种特异性结合是免疫反应的关键步骤。
2.2 电泳技术电泳技术是一种利用电场作用于带电粒子使其在电场中移动的技术。
在电泳过程中，带电粒子会根据其电荷和大小，在电场中产生移动。
2.3 对流免疫电泳原理对流免疫电泳将免疫反应和电泳技术相结合。
首先，将样品中的目标物与标记有荧光物质的抗体结合，形成复合物。
然后，将复合物置于电泳胶中，施加电场。
目标物与标记有荧光物质的抗体复合物会在电场作用下向电泳胶中移动。
在移动过程中，复合物会与其他成分发生免疫反应，形成可视化的沉淀带。
3. 对流免疫电泳的应用3.1 生物医学研究对流免疫电泳广泛应用于生物医学研究领域。
通过对特定抗原或抗体进行检测，可以研究疾病的发生机制，寻找新的诊断标志物以及监测疗效。
3.2 临床诊断对流免疫电泳在临床诊断中也有重要应用。
例如，可以通过对抗体的沉淀带进行定性和定量分析，检测出特定疾病的存在和严重程度，提供临床诊断的参考依据。
3.3 食品安全检测对流免疫电泳可用于食品安全检测。
例如，可以通过对食品中的特定抗原进行检测，及时发现并防止食品中的有害物质对人体健康造成的威胁。
3.4 环境监测对流免疫电泳还可以用于环境监测。
例如，可以检测水体中的污染物，帮助监测水质污染程度，保护环境和人类健康。
4. 结论对流免疫电泳是一种结合了免疫反应和电泳技术的高效、高灵敏的电泳技术。
它在生物医学研究、临床诊断、食品安全检测和环境监测等领域有着广泛应用。
对流免疫电泳的发展对于提高检测的灵敏度和准确性，推动科学研究和保障公众健康具有重要意义。
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项目五对流免疫电泳试验
(Counter immunoelectrophoresis test)
【实验原理】
在适宜缓冲液和电场条件下，由于琼脂凝胶中的抗原和相应抗体在电泳和电渗作用下能相对移动，所以二者会在加样的两孔之间相遇，并在它们浓度比例合适之处形成白色沉淀线。
据此临床常用该方法检测抗原，以诊断某些疾病。
【试剂和器材】
1．AFP阳性血清、待检血清、抗AFP诊断血清。
2．pH8.6 0.05 mol/L巴比妥缓冲液。
巴比妥钠10.3 g
巴比妥 1.84 g
先将巴比妥置于三角烧瓶中，加入200ml蒸馏水，加热溶解后再加入巴比妥钠，最后加蒸馏水至1000ml。
3．琼脂凝胶按需要量称取琼脂粉，加入pH8.6 0.05mol/L巴比妥缓冲液，使琼脂浓度为12g/L，沸水浴中溶解至澄清。
4．电泳仪、电泳槽、万用电表。
5．载玻片、绘图笔尖、吸管、滴管等。
【步骤和方法】
1．制备琼脂凝胶板取溶化的琼脂3~4ml，浇于载玻片上，冷却后打孔。
2．打孔 用绘图笔尖按图1-6打孔，孔径约3mm ，孔距4~5mm ，挑去孔中凝胶。
3．加样 用滴管按图1-6分别加入抗血清、AFP 阳性血清、待检血清，以加满孔为宜，注意不要溢出。
4．电泳 将加好样的琼脂凝胶板置于电泳槽中，抗原孔侧置阴极端，抗体孔侧置阳极端，两端分别以2~3层滤纸或纱布搭桥，使凝胶和槽中缓冲液相接。
按通电源，将电压控制在4~6V/cm 长，或电流3~4mA/cm 宽，电泳30~60min 。
【结果判定】
电泳完毕后关闭电源，待15~30min 后取出琼脂凝胶板观察结果，或照相、染色后保存。
阳性对照孔与抗血清孔之间必须出现沉淀线，否则试验须重做。
待检血清孔与抗血清孔之间出现白色沉淀线为阳性，不出现者为阴性。
Ag Ag Ab Ab +
_
1 阳性对照孔
2~4 待检血清孔
图1-6 对流免疫电泳
【注意事项】
1．当标本为脂血症、陈旧血标本或由于α2-巨球蛋白可引起假
阳性，它靠近阳极呈弧状。
为排除这种假阳性可用参比电泳鉴别，即阳性对照孔与待检孔间距为0.2cm，在两孔中间相距0.4cm处打抗血清孔，加样后电泳，两沉淀线吻合为阳性，相交为阴性，其它试验条件与以上试验相同。
2．电泳缓冲液的pH值、离子强度、电压和电泳时间对检测结果均有影响，应注意控制。
3．电泳时间随孔间距的增大需适当延长。
当两孔距离为1cm时，电泳时间为1.5～2h；孔间距为0.6cm时，电泳时间为1h。
4．抗原与抗体浓度比例应适当，可通过稀释抗原适当调整，以免出现假阴性。
【方法评价】
1．简便、快速，敏感度比双相免疫扩散法高8~16倍。
2．必须使用高特异性、高亲合力的诊断抗体，否则结果难以解释。
3．必须选用有高电渗作用的琼脂作支撑介质。
【临床意义】
对流免疫电泳在临床常用于定性检测某些抗原，以对某些疾病或传染病作快速诊断。
也可用于抗原的半定量测定，或根据沉淀线位置、形状作抗原和抗体相对浓度的分析。
由于该方法分辨率差，当有多种抗原抗体反应系统存在时，形成的沉淀线常重叠，而难以分辨，所以不用该方法作某种抗原或抗体组分的免疫化学分析。
【思考题】
1．对流免疫电泳试验原理如何?为何选用高电渗作用琼脂作为凝胶介质？
2．为何对流免疫电泳比双相免疫扩散试验敏感性高？
项目六火箭免疫电泳试验
(Rocket immunoelectrophoresis test)
【实验原理】
抗原在含一定浓度抗体的琼脂板一端，在电场作用下，向另一端泳动时抗原抗体复合物形成的沉淀呈圆锥形，状似火箭而得名。
它实质上是在电场作用下的凝胶内单相免疫沉淀试验。
当抗体含量不变时，沉淀峰的高度与抗原浓度成正比。
因此用已知不同浓度标准抗原制成标准曲线，即可求出标本中抗原含量，所以又称单相定量免疫电泳。
【试剂和器材】
1．pH8.6 0.05mol/L巴比妥缓冲液。
2．30g/L缓冲琼脂称取3.0g琼脂粉置250ml三角烧瓶中，加蒸馏水50ml，沸水浴中溶解，然后加入上述巴比妥缓冲液50ml混匀后，置4℃冰箱保存备用。
3．AFP诊断血清。
4．待检样品(脐带血清或肝癌病人AFP阳性血清)。
5．参考血清(已知AFP标准抗原)。
6．电泳仪、电泳槽、37~65℃水浴箱、万用电表。
7．载玻片、打孔器、微量加样器等。
【步骤和方法】
1．取30g/L缓冲琼脂，置水浴煮沸溶化，放52℃水浴平衡。
2．释释血清根据抗体的效价，用0.025mol/L巴比妥缓冲液将抗体作适当稀释(一般作1:20~1:50稀释)，置52℃水浴保温。
3．浇板将稀释抗血清与30g/L缓冲琼脂等量混合，注意保温，防止产生气泡(在水浴中操作，动作要轻缓)，用吸管吸取混匀琼脂迅速滴加于载玻片上，每片琼脂量 3.5ml。
载玻片要放在水平台上，使浇注的琼脂板厚度均匀。
4．打孔取冷凝后的琼脂板，在距一端1.5cm处用打孔器等距离打3个孔，挑去孔内琼脂(图1-7)。
操作中防止孔四周出现裂纹或破损，否则将影响沉淀峰形状，结果不准确。
_
图1-7 火箭免疫电泳图
5．加样用微量注射器分别于孔内准确地加入待检样品以及不同浓度的标准抗原各10l。
6．电泳电泳槽内盛0.05mol/L巴比妥缓冲液。
将加好样品的琼脂板置于其上，抗原孔侧放阴极端，用缓冲液浸湿的双层滤纸两端搭桥进行电泳。
开始电压为2~5V/cm，维持15~20min，然后增加到25~30V/cm(需冷却装置)，电泳1~3h至完全成峰；或5~10V/cm过夜。
7．电泳结束后取下琼脂板，如沉淀峰清晰即可直接判读测量结果，否则可将琼脂板浸泡于10g/L鞣酸生理盐水中会使沉淀峰更明显。
如欲永久保留标本，可将琼脂板进行干燥、染色处理(见双相免疫扩散试验)。
【结果判定】
1．沉淀峰呈尖角火箭形则表示无游离抗原，泳动已到终点；如呈钝圆形或没有峰顶，前端云雾状则表示还未到终点。
2．从抗原孔中心至火箭顶为沉淀峰高度。
以已知标准抗原含量作横坐标，沉淀峰的高度作纵坐标，绘制成标准曲线。
根据待检样品沉淀峰的高度查标准曲线即可计算出待检样品中AFP的含量。
【注意事项】
1．应选用低电渗作用的琼脂糖作凝胶介质，可避免电渗作用所引起的某些标本的火箭峰倒退。
2．抗原过浓会使沉淀峰无峰顶，看不到终点；抗体过浓则沉淀峰太低，降低试验敏感度，甚至沉淀峰无法测量；抗体和抗原浓度应适宜。
3．为防样品向四周扩散，加入样品后应尽快电泳，或在电压为2~3V/cm通过凝胶介质的情况下加入样品，使结果判定更为准确。
标本与标准抗原必须在相同的电泳条件下进行电泳。
4．高压电泳所需时间短，但需冷却装置。
低压电泳方便，峰形清晰，但需时较长。
5．其它注意事项请参考单相免疫扩散试验。
【方法评价】
火箭免疫电泳是在单相免疫扩散基础上发展起来的技术，操作简单，能定量，重复性较好。
灵敏度同单相扩散，可测得g/ml以上的抗原含量，需时短是其优点。
为提高灵敏度，可用少量125I标记的标准抗原和被检抗原共同电泳，在含抗体的琼脂中形成不可见的火箭峰，经洗涤干燥后，用X线胶片显影，可出现同位素显影的火箭峰，这就是目前采用较多的放射自显影技术。
根据放射自显影示踪的峰高即可计算出待检抗原的含量，可测出ng/ml抗原浓度，提高敏感度20~50倍，扩大了应用范围。
可用于多种抗原的定量测定，如AFP、HBsAg等。
【临床意义】
常用于血浆蛋白质、AFP、HBsAg及尿和脑脊液中Ig和补体成分的定量测定。
【思考题】
1．火箭免疫电泳试验原理与单相免疫扩散试验有何不同？
2．为使结果准确，加样时应特别注意什么问题？
（学习的目的是增长知识，提高能力，相信一分耕耘一分收获，努力就一定可以获得应有的回报）。