免疫电泳实验报告
工作报告之对流免疫电泳实验报告
对流免疫电泳实验报告【篇一：实验十一免疫电泳】免疫电泳技术抗原与抗体的结合在沉淀反应中，呈一定的分子比例。
不同抗原和抗体之间的分子比例是不同的，但只有在分子比例合适时，才出现可见的沉淀。
所以沉淀能否出现并不完全反映抗原和抗体是否存在和发生结合。
抗原结合多个抗体分子，称抗原为多价；抗体一般只能结合两个抗原分子（igm类抗体分子通常可以结合5个抗原分子）的抗原决定法簇，故为二价。
只有在彼此的结合价饱和时，才出现大量的抗原-抗体复合物沉淀。
当抗原与抗体的比例合适时，即二者结合价彼此饱和，就可形成网状结构的大分子抗原-抗体复合物沉淀，称为等价带。
若比例不合适时，抗体或抗原过量，则虽有抗原、抗体的结合，但不能大量形成网状结构的大分子复合物，沉淀量很少，甚至不出现沉淀。
在抗原、抗体数量关系曲线中，抗体过剩区域称为抗体过剩带，抗原过剩区域称为抗原过剩带。
如图1所示，在等价带的反应液中加入过量的抗原或抗体，沉淀复合物就会有部分溶解，甚至全部溶解的现象。
这是由于新加入的抗原或抗体竞争地结合相应的抗体或抗原，使网状大分子结构破坏，形成小分子复合物，致使沉淀出现溶解，沉淀量减少甚至完全消失。
在沉淀反应中，由于抗原过量而不出现沉淀的现象，称为前带现象。
此时不能误认为无沉淀就是无抗原存在，为了检测就必须稀释抗原。
抗体过量时，称为后带现象，同理需要稀释抗体进行检测。
图1的位置抗原与抗体的结合是依赖于两者分子结构的互补性，故其特异性高。
这种结合也是相当稳定的。
在一定条件下（过酸、过碱或浓盐存在下），二者可以分开，即结合是可逆的。
解离后的抗原、抗体的活性一般保持不变。
双向免疫扩散测定法原理双向扩散法(double diffusion)又称琼脂扩散法，是利用琼脂凝胶为介质的一种沉淀反应。
琼脂或琼脂糖凝胶是多孔的网状结构，大分子物质可以自由通过，这种分子的扩散作用可使分别处于两处的抗原和相应的抗体通过扩散相遇，形成抗原-抗体复合物，比例合适时出现沉淀。
医学免疫学实验二 对流免疫电泳
电场力
负
极
抗原
正
抗体
极
电渗力
将抗原置于负极，将抗体置于正极，电泳后则在两孔 之间相遇，并在比例适当的部位形成肉眼可见的沉淀 线。
实验原理
➢ 本实验基于抗原抗体的等电点彼此不同，一般抗 体（IgG）的等电点为pH5~9，血清蛋白抗原的 等电点为pH4~5，在pH8.2~8.6的缓冲溶液中， 抗体所带负电荷较少，受到电场力较小，同时因 抗体分子较大，受到电渗力较大，在直流电场中 的电渗作用随溶液而向负极迁移；相比而言，抗 原在远高于等电点的PH时，负电荷多，分子也较 小，电泳迁移快，虽也受电渗影响，但电场力是 主要作用力，仍向正极泳动，若抗原抗体相对应 ，则在两者相遇于最适比例处形成沉淀，此即为 对流免疫电泳的阳性结果。
比自由电泳小，对蛋白质的吸附极微。 ➢ 琼脂作为支持体有均匀，区带整齐，分辨率高，重复性
好等优点。 ➢ 电泳速度快。 ➢ 透明而不吸收紫外线，可用紫外检测仪作定量测定。 ➢ 区带易染色，样品易回收，有利于制止备。
然而琼脂中有较多硫酸根，电渗作用大。
➢ 琼脂（糖）电泳常用缓冲液的pH在6-9之间，离 子强度为0.02-0.05。离子强度过高时，会有大 量电流通过凝胶，因而产生热量，使凝胶的水 份量蒸发，析出盐的结晶，甚至可使凝胶断裂 ，电流中断。
实验二
对流免疫电泳
实验目的
➢ 掌握对流免疫电泳技术的原理和方法 ➢ 巩固电泳槽、电泳仪的使用方法 ➢ 提高对抗原、抗体免疫反应的理解
实验原理
抗原（antigen，Ag）: 能诱导（活化或抑制）免疫系统产生免疫
应答，并与相应的抗体或致敏淋巴细胞进行特 异性结合（体内或体外）的物质。 抗体（antibody,Ab)：
免疫固定电泳报告解读
免疫固定电泳报告解读免疫固定电泳（immunofixation electrophoresis，IFE）是一种用于检测和鉴定血液中蛋白质异常的常用实验方法。
它是将血液或尿液样品通过电泳分离，在分离好的蛋白谱上运用特异性抗体与蛋白质相互作用，从而确定和鉴定异常的蛋白质。
免疫固定电泳报告通常包括样品信息、蛋白质电泳图谱、蛋白质特异性抗体反应条带图谱、结果解读等内容。
首先，样品信息部分包括患者的个人信息（如年龄、性别、体重等）和样本信息（如采样日期、样本来源等），这些信息有助于后续结果解释和对疾病的分析。
其次，蛋白质电泳图谱是IFE报告中的重要部分，它显示了分离出的蛋白质在电泳中的迁移情况。
通常有两个图谱，一个是粗合成的蛋白质电泳图谱，一个是膏状电泳图谱。
粗合成的蛋白质电泳图谱显示了总蛋白的分布情况，它通常包括白蛋白、α1球蛋白、α2球蛋白、β球蛋白和γ球蛋白等几个部分。
膏状电泳图谱则更加清晰地显示了不同蛋白质带的迁移情况，有助于各种异常蛋白的鉴定。
第三，蛋白质特异性抗体反应条带图谱也是IFE报告中的关键内容，它用于分析和确定存在于蛋白带中的异常蛋白。
通常使用多个特异性抗体进行反应，例如抗人IgA、IgG、IgM、κ轻链和λ轻链等，以确保对多种异常蛋白的检测。
根据反应条带的位置、强度和特异性，可以确定异常蛋白的类型和数量，如单克隆免疫球蛋白（M蛋白）和多克隆免疫球蛋白。
最后，结果解读部分是IFE报告的关键内容之一。
根据蛋白质电泳图谱和特异性抗体反应条带图谱的结果，对异常蛋白的鉴定和分析进行解释。
需要结合患者的临床病史、症状和其他实验室检查结果，如血清免疫球蛋白测定等，综合判断异常蛋白的意义和可能的疾病诊断。
例如，M蛋白的检测可能与多发性骨髓瘤、淋巴瘤、巨球蛋白血症等恶性血液病相关。
参考内容可以包括相关医学文献、专业书籍和学术期刊等。
例如，可以参考以下文献：1. Kyle RA, Rajkumar SV. Monoclonal gammopathies of undetermined significance: a review. Immunol Rev. 2003;194:112-139.2. Oyama K, Fryman J, Loewenstein JE, et al. The immunofixation technique. A sensitive, specific, and quantitative assay for immunoglobulin. N Engl J Med. 1977;297(6):291-194.3. Landoni F, Costa A, Belli L, et al. Different patterns of HCV SVR in patients with baseline cryoglobulins treated with direct-acting antivirals. J Viral Hepat. 2021;28(4):725-732.总的来说，免疫固定电泳报告是通过分析蛋白质电泳图谱和特异性抗体反应条带图谱来确定和鉴定血液中蛋白质异常的一种实验方法。
免疫学实验教学（复旦大学）实验报告
实验二： 对流免疫电泳实验报告实验者：毛寰宇 时间：2015年3月25日 合作者：周鹏、张国栋一、实验原理对流免疫电泳是双向琼脂扩散与电泳分析的结合产物。
CIEP 是一种加速的免疫双扩散技术。
在琼脂糖凝胶平板的两个孔中分别加入抗原和抗体，抗体侧连接电源正极。
通电后，带负电荷的抗原向抗体孔方向移动，而抗体则由于电渗作用被带向抗原孔侧。
两者相遇时形成沉淀物。
可用于检测抗原，但敏感性较低。
在pH8.6的缓冲液中，大部分蛋白质抗原成分（等电点约3~5）常带较强的负电荷，在电场中向正极移动；而作为抗体的IgG ，等电点偏高(约为5~6)，在pH8.6时带负电荷较少，再加上分子量较大，移动速度慢，所以它本身向正极移动缓慢甚至不移动，这样它就会在凝胶的电渗作用下，随水流向负极，电渗引向负极移动的液流速度超过了IgG 向正极的移动，因此抗体移向负极，在抗原抗体最适比处形成沉淀线。
二、实验材料1、抗原 & 抗体2、微量可调加样器、加样头、玻片3、打孔器、针头、打孔样纸（均放平皿内）4、电泳液、电泳槽、电泳仪、标签纸5、1.2%琼脂糖(加热溶化）、5ml 刻度吸管、吸耳球三、实验步骤1、制版与打孔：取洁净玻片，将1.2%融化的琼脂3~4ml 均匀浇注于玻片上，厚度约1.5~2.0mm 。
待琼脂凝固后，放置于打孔样纸上，按样纸上图形打孔。
2、用水倍比稀释抗体：原液、1: 2、1: 4、1: 8。
3、加样：在加样孔中加入5 μl 待测抗原样品（人IgG ）和抗体（羊抗人IgG 血清）。
靠近负极的孔中加入抗原，正极端的孔中加入抗体，玻片标记抗原抗体方向。
4、电泳：将已加样的琼脂板平放于电泳槽内，以纱布为桥，电压为100v ，时间约30min 。
四、实验结果图1：实验电泳结果A.原液、1:2、1:4稀释抗体条件下均可见沉淀线；1:8稀释度不能见沉淀线。
B.抗体稀释到1:2后，可见沉淀线向抗体侧移动。
1:2和1:4条件下沉淀线位置差异较小。
免疫固定电泳报告解读
免疫固定电泳报告解读免疫固定电泳是一种重要的实验技术，广泛应用于生物医学研究和临床诊断领域。
通过将待检测的抗原与抗体结合后进行电泳分离，可以对蛋白质分子进行定量和定性分析。
本文将针对免疫固定电泳的原理、方法和报告解读进行详细介绍。
**一、免疫固定电泳的原理**免疫固定电泳是结合了免疫学和电泳技术的一种生物化学方法。
其原理基于抗原与抗体结合的特异性，在电泳条件下可以将待检测的蛋白质分子进行分离和检测。
具体步骤如下：1. 样品制备：待检测的蛋白质样品首先与特异性抗体结合，形成抗原-抗体复合物。
2. 电泳分离：将样品加载到电泳凝胶中，施加电场进行电泳分离。
抗原-抗体复合物根据大小和电荷的差异在电场作用下发生迁移，完成分离。
3. 免疫检测：电泳结束后，将凝胶转移到膜上，并进行免疫检测。
通过特异性的抗体标记，可以定量和定性检测抗原的存在。
**二、免疫固定电泳的方法**免疫固定电泳的方法主要包括样品制备、电泳分离和免疫检测三个步骤。
具体操作如下：1. 样品制备：将待检测的蛋白质样品与特异性抗体结合，形成抗原-抗体复合物。
通常采用预实验确定最佳的抗原-抗体比例，以保证实验的准确性。
2. 电泳分离：将样品加载到聚丙烯酰胺凝胶中，施加电场进行电泳分离。
根据抗原-抗体复合物的大小和电荷差异，进行分离。
通常采用双向电泳，以获得更好的分离效果。
3. 免疫检测：电泳结束后，将凝胶转移到膜上，进行免疫检测。
通常采用酶联免疫吸附试验（ELISA）或放射免疫沉淀分析（RIA）等方法，通过特异性抗体标记进行检测。
**三、免疫固定电泳报告解读**免疫固定电泳的报告通常包括电泳图谱和免疫检测结果，解读主要针对以下几个方面：1. 电泳图谱分析：通过电泳图谱可以观察到抗原-抗体复合物的分离情况，包括带电率、分子量等信息。
根据复合物的迁移位置和带电率，可以初步判断抗原的存在和性质。
2. 免疫检测结果：通过免疫检测可以定量和定性地检测抗原的存在。
血清免疫电泳结果解读
血清免疫电泳结果解读
血清免疫电泳是一种常用的实验室检查方法，用于分析血清中各种蛋白质的分子量和分布情况，包括白蛋白、α1球蛋白、α2球蛋白、β球蛋白和γ球蛋白等。
通过血清免疫电泳，可以了解患者血清中各种蛋白质的异常情况，从而协助诊断某些疾病。
以下是血清免疫电泳结果的解读：
1. 正常结果：正常血清蛋白电泳图谱中，可以看到明显的白蛋白、α1球蛋白、α2球蛋白、β球蛋白和γ球蛋白区带，各区带比例正常。
这表明血清中各种蛋白质的含量和分布处于正常状态。
2. 异常结果：如果血清免疫电泳结果出现异常，可能是由于某些疾病或病理状态导致。
例如，如果γ球蛋白区带显著增强，而其他区带减弱，可能是多发性骨髓瘤、巨球蛋白血症等免疫性疾病所致;如果α1球蛋白区带增强，可能是慢性炎症、肝病等;如果α2球蛋白区带增强，可能是恶性肿瘤、肝病等;如果β球蛋白区带增强，可能是急性炎症、自身免疫性疾病等。
需要注意的是，血清免疫电泳结果异常并不一定意味着患有某种疾病，还需要结合其他检查结果和临床表现进行综合分析。
此外，血清免疫电泳结果也会受到实验条件和操作方法的影响，因此解读结果时需要结合具体情况进行分析。
实验-免疫电泳
以0.05mol/L pH8.6巴比妥缓冲液为电泳缓冲液，将加样后的琼脂板置于电泳槽上， 样品孔靠近阴极端，用缓冲液浸湿的双层滤纸搭桥电泳。一般稳定端电压100V， 电泳1h，即可终止电泳。
实验方法
实验报告
双扩散
取出电泳后的琼脂板，挑出中间槽内的琼脂，取50μl兔抗牛IgG血清抗体充满槽 内，注意勿外溢。将琼脂板放于湿盒内，水平置于37℃培养箱中进行双扩散， 24h后观察结果。
实验
免疫电泳
实验原理
免疫电泳是将双向免疫扩散实验与琼脂板区带电泳相结合的一种免疫学分析方法。 抗原样品在琼脂凝胶上进行电泳，不同抗原成分因电泳迁移率不同而被分离为若
干区带。 停止电泳，在琼脂凝胶横槽中加入抗体血清，抗体与不同抗原成分同时双向扩散，
相遇，并在比例适宜处形成沉淀弧线。 根据沉淀线的位置、数量和形状，分析抗原样品中的成分。
实验方法
实验结果
观察沉淀弧的位置和条数，并画出沉淀弧。
实验报告
根据观察结果绘制沉淀弧的位置和条数。
谢谢观看
实验原理
实验原理
实验方法
制板
将洁净玻片置于水平台面上，用移液管吸取4-4.5ml熔化的1.5％盐水琼脂加于载 玻片上，待冷凝。
2-5mm
）
实验方法
实验方法
加样
用微量进样器吸取10μl稀释的牛IgG，兔抗牛IgG（待检测血清）于上、下两小孔 中。
实验2 对流免疫电泳
琼脂扩散技术 ●双向琼脂扩散:
将抗原和抗体分别加入琼脂对应的孔中，二者会向 四周扩散，在二者比例合适处形成白色沉淀线。
●单向琼脂扩散:
将一定量的抗体混合于琼脂中，待琼脂凝固后打孔并加入 抗原，孔中的抗原向四周扩散，在抗原与抗体的比例合适处 呈现白色的沉淀环。沉淀环的大小与抗原的浓度成正比，故 该试验是定量试验。
实验步骤
制板
3－4ml 琼脂
打孔
加样 (5-6ul)
抗体 原倍
抗体 1:2
抗原 抗原
抗体 1:4
抗体 1:8
抗原 抗原
电泳（100V, 30min)
制板与打孔 取洁净玻片，将1.2%融化的琼脂3~4ml均匀 浇注于玻片上(注意不要让琼脂凝掉），厚度约1.5~2.0mm。 待琼脂凝固后，放置于打孔样纸上，按样纸上图形打孔，。
思考题
1.将抗原稀释不同比例后，实验结果有何差异？出现 差异的原因是什么？ 2.实验过程中应该注意什么问题？
请在下周上课前交齐本次实验报告
琼脂中含抗体
Ag
Ag
Ag
Ag
电泳
带电颗粒在电场作用下，向 着与其电性相反的电极移动。
影响电泳迁移速度的因素： 1、带电颗粒的性质：电荷多、分子小泳动快 2、溶液中pH值： pH值离pI越远，解离多，电荷多泳动快 3、电渗作用 4、溶液的离子强度：低离子强度时，迁移速度快 5、电场强度：单位厘米的电位差 越大泳动快 6、吸附作用：介质对样品的滞留作用拖尾
一般抗原蛋白质带负电 荷，虽然也受电渗作用的 影响，但它的电泳迁移率 远远大于电渗作用。
电场力
电渗力
负
极
抗原
正
抗体
极
将抗原置于负极，将抗体置于正极，电泳后则在 两孔之间相遇，并在比例适当的部位形成肉眼可 见的沉淀线。
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免疫电泳实验报告
摘要：本实验运用火箭电泳、微量电泳、双向免疫扩散等方法测定抗体的效价。
关键词：抗体效价测定；火箭电泳；微量电泳；双向免疫扩散
1 前言
免疫电泳(immunoelectrophoresis)的方法很多，主要有单向免疫扩散、双向扩散电泳、对流免疫电泳、微量免疫电泳、免疫火箭电泳、免疫固定电泳等几种方法。
其中比较常用方法有以下三种。
火箭免疫（rocket immunoelectrophoresis），该方法是在琼脂板内掺入适量的抗体，在电场的作用下定量的在含适量抗体的离子琼脂中泳动，当走在前面的抗原遭到琼脂板内的抗体时，形成抗原体复合物而沉淀出来，走在后面的抗原继续在电场的作用下向正极泳动，在向前泳动过程中，遇到了前面抗原所沉淀的抗原抗体复合物，由于抗原的增加造成抗原过量时复合物沉淀溶解，并一同向正极移动而进入新的琼脂板内与未结合的抗体结合，有形成新的抗原抗体复合物沉淀出来，这样不断地沉淀—溶解—再沉淀，直到全部抗原与抗体结合，当比例合适时，可在短时间内出现锥形沉淀线，此沉淀线形似火箭，故称火箭电泳，抗原含量越高所形成的火箭峰愈长，因此依据火箭峰的长度，与标准抗原比较精确地计算抗原的浓。
微量电泳，该方法的原理是不同蛋白质颗粒所带电荷不同，在同一电场中，因泳动速度不同而发生分离，用于抗原、抗体纯度测定，以及临床诊断。
双向免疫扩散（double immunodiffuison）,根据出现沉淀线时抗体的最高稀释度来计算抗体的效价，或者依据沉淀线的出现定性抗原，检测疾病。
2 材料与方法
2．1 材料抗体，抗原，巴比妥钠-HCl缓冲液（pH8.6，0.4M），1.5%琼脂糖凝胶，7%醋酸，电泳仪，温箱，玻璃板，打孔器等。
2．2 方法
2．2．1 火箭电泳法配制巴比妥钠-HCl缓冲液（pH8.6，0.4M）；制备1.5%琼脂糖凝胶，煮沸至完全溶解；取琼脂糖凝胶约15ml，置55 ºC水浴中降温，并加入抗体200μL，共同孵育；将二者混匀，铺火箭电泳板，放置冷凝倍比稀释抗原抗体；电泳板打孔(6孔)，加入已稀释的抗原(约10 μL/孔)；电泳3~4h，电流：30mA/块，电压：100~120V；待火箭电泳结束，用0.1%氨基黑染色10min，7%醋酸脱色至条带清晰。
2．2．2 微量电泳法用移液管取煮沸的琼脂糖凝胶铺板（7.5×2.5cm)，共2块，每块约铺3ml凝胶(双扩同样方法，铺3块)；给微量电泳板打抗圆孔、抗体槽，并在抗原孔内分别加入阳性抗原和阴性抗原(约10μL)；电泳约40~60min ，(电压：4~6V/cm；电流：1~5mA/cm)；电泳结束后，取出抗体槽的凝胶，加入15 μL抗体，置37 ºC温箱过夜。
2．2．3 双向免疫扩散法铺2块板，同微量电泳；给双扩板打孔(梅花形)，每板打2组，一块板中央孔加入未稀释的抗原，每组周围6孔加入倍比稀释的抗体；置于37 ºC温箱孵育24~48hr，测定抗体效价；另一块板中央孔加入未稀释的抗原，每组周围6孔加入倍比稀释的抗体。
置于37 ºC温箱孵育24~48hr，测定抗原效价。
3 结果
3．1 火箭电泳法表：抗原浓度对应的电泳峰值（cm）
Ag(x) 1 0.5 0.25 0.125 0.06125 0.030625
峰值（cm) 1.75 1.55 1.4 1.35 1 0.87
3．2 微量电泳法实验结果表明，1/16抗原孔出现沉淀弧，说明了抗原在此浓度下与抗体反应最为敏感。
3．2 双向免疫扩散法实验结果表明靠阴性抗原处出现沉淀弧，表明了阴性抗原与抗体反应最为敏感。