白细胞蛋白提取方法
白细胞分离技术汇总
白细胞分离技术汇总白细胞分离技术是现代医学和生命科学领域中重要的研究技术之一，它可以从复杂的生物样本中分离出单一类型的白细胞群体，为后续研究提供优质的样本。
本文将汇总介绍几种常见的白细胞分离技术，包括离心法、梯度离心法、磁珠分离法和流式细胞术。
1. 离心法离心法是最常用的白细胞分离技术之一。
它基于细胞的不同密度和大小，通过离心的作用将白细胞与其他细胞分离开来。
操作步骤如下：1) 收集待分离白细胞的生物样本。
2) 将样本置于离心管中，以适当的离心速度和时间进行离心。
3) 分离后的上清液中富含白细胞，可进一步提取进行后续的研究。
离心法的优点是简单易行，但存在分离效果受离心参数影响大、离心误差较大等缺点。
2. 梯度离心法梯度离心法是一种基于细胞密度差异分离白细胞的方法。
通过在离心管中制备一定浓度的梯度液，使不同密度的细胞在不同位置聚集。
操作步骤如下：1) 准备梯度溶液，常用的是Ficoll-Paque和Percoll。
2) 将生物样本缓慢均匀地加在梯度液上方。
3) 以适当的离心速度和时间进行离心。
4) 离心后，白细胞会沉淀在梯度层中，可通过移液管等工具将其取出。
梯度离心法分离效果较好，分离的白细胞纯度较高，但操作稍复杂。
3. 磁珠分离法磁珠分离法是基于特定抗体磁珠对靶细胞的识别和捕获效应实现白细胞的分离。
操作步骤如下：1) 引入含有特定抗体的磁珠。
2) 与待分离白细胞混合，使抗体与目标白细胞结合。
3) 使用磁力装置将磁珠结合的细胞沉降至管壁，去除其他细胞。
4) 去除磁力场，洗涤和释放细胞，分离出纯净的白细胞。
磁珠分离法具有高选择性和高纯度的优点，但需使用特定抗体磁珠，因此成本较高。
4. 流式细胞术流式细胞术结合了光学、电子和计算机技术，可对细胞进行精确地检测和分离。
操作步骤如下：1) 准备包含目标细胞的单细胞悬浮液。
2) 将细胞悬浮液通过流式细胞仪，仪器通过激光照射和细胞特异性抗体标记进行细胞检测。
3) 检测到目标细胞后，通过电信号将目标细胞单独分离收集。
蛋白质提取的方法和原理
蛋白质提取的方法和原理蛋白质提取是生物化学研究中一项非常重要的工作，它是通过化学或物理方法将目标蛋白质从混合物中提取出来，并获得纯度较高的蛋白样品。
蛋白质提取的方法和原理可以根据不同的需求和样本特点而有所区别，下面我将从样品处理、细胞破碎、蛋白质分离、纯化等方面详细介绍蛋白质提取的常用方法和原理。
一、样品处理样品的类型有很多，包括动物组织、细胞、血液等，每种样品的提取方法都有一定差异。
一般来说，细胞或组织样本在提取之前需要冷冻保存，并进行快速破碎以避免蛋白质降解。
对于血液样本，需要血样离心分离血浆或红细胞，再进行提取。
二、细胞破碎细胞破碎是蛋白质提取的关键步骤，目的是破坏细胞膜和细胞器，并释放蛋白质。
常见的细胞破碎方法有机械破碎、超声波破碎和化学法。
1. 机械破碎机械破碎是最常用的细胞破碎方法之一，可以通过碾磨、研磨、切割等方式破坏细胞。
例如，将样品置于液氮中冷冻后，使用研钵和研杵进行研磨，将细胞研磨成粉末状。
2. 超声波破碎超声波破碎是利用高频高能量的超声波震荡来破碎细胞，通常是在冷冻样品和显微量水中进行。
超声波的震荡可以高效破坏细胞和细胞器，并释放蛋白质。
3. 化学法化学法通常是通过加入化学试剂来破坏细胞。
例如，使用洗涤剂（如SDS、Triton X-100）可以溶解细胞膜，释放细胞内的蛋白质。
三、蛋白质分离蛋白质提取后，需要对蛋白质进行分离，去除杂质和其他成分。
1. 离心离心是最常用的蛋白质分离方法之一，通过不同速度的离心来分离蛋白质。
一般来说，较重的细胞碎片、细胞器和沉淀物会沉积在离心管的底部，而较轻的蛋白质上清液则在上方。
2. 电泳电泳是利用电场将带电蛋白质分离的技术。
常见的电泳方法有SDS-PAGE和凝胶过滤层析等。
SDS-PAGE可以根据蛋白质的大小和电荷来分离，凝胶过滤层析则可以根据蛋白质的分子量和渗透性进行分离。
四、蛋白质纯化蛋白质分离后，还需要进行纯化以获得较高纯度的蛋白样品。
蛋白质提取常用试剂及操作方法
蛋白质提取常用试剂及操作方法一、原料选择和前处理（一）原料的选择早年为了研究的方便，尽量寻找含某种蛋白质丰富的器官从中提取蛋白质。
但至目前经常遇到的多是含量低的器官或组织且量也很小，如下丘脑、松果体、细胞膜或内膜等原材料，因而对提取要求更复杂一些。
原料的选择主要依据实验目的定。
从工业生产角度考虑，注意选含量高、来源丰富及成本低的原料。
尽量要新鲜原料。
但有时这几方面不同时具备。
含量丰富但来源困难，或含量来源均理想，但分离纯化操作繁琐，反而不如含量略低些易于获得纯品者。
一般要注意种属的关系，如鲣的心肌细胞色素C 较马的易结晶，马的血红蛋白较牛的易结晶。
要事前调查制备的难易情况。
若利用蛋白质的活性，对原料的种属应几乎无影响。
如利用胰蛋白酶水解蛋白质的活性，用猪或牛胰脏均可。
但若研究蛋白质自身的性质及结构时，原料的来源种属必须一定。
研究由于病态引起的特殊蛋白质（本斯.琼斯氏蛋白、贫血血红蛋白）时，不但使用种属一定的原料，而且要取自同一个体的原料。
可能时尽量用全年均可采到的原料。
对动物生理状态间的差异（如饥饿时脂肪和糖类相对减少），采收期及产地等因素也要注意。
（二）前处理1.细胞的破碎材料选定通常要进行处理。
要剔除结缔组织及脂肪组织。
如不能立即进行实验，则应冷冻保存。
除了提取及胞细外成分，对细胞内及多细胞生物组织中的蛋白质的分离提取均须先将细胞破碎，使其充分释放到溶液中。
不同生物体或同一生物体不同的组织，其细胞破坏难易不一，使用方法也不完全相同。
如动物胰、肝、脑组织一般较柔软，作普通匀浆器磨研即可，肌肉及心组织较韧，需预先绞碎再制成匀桨。
⑴机械方法主要通过机械切力的作用使组织细胞破坏。
常用器械有：①高速组织捣碎机（转速可达10000rpm，具高速转动的锋利的刀片），宜用于动物内脏组织的破碎；②玻璃匀浆器（用两个磨砂面相互摩擦，将细胞磨碎），适用于少量材料，也可用不锈钢或硬质塑料等，两面间隔只有十分之几毫米，对细胞破碎程度较高速捣碎机高，机械切力对分子破坏较小。
分子生物学实验中常用的蛋白质提取方法
分子生物学实验中常用的蛋白质提取方法蛋白质提取是分子生物学研究中的一个重要步骤，通过提取出目标蛋白质可以进行进一步的分析和研究。
在实验室中，常用的蛋白质提取方法有多种，本文将介绍几种常见且有效的蛋白质提取方法。
一、细胞裂解法细胞裂解是最基本且重要的蛋白质提取步骤，它将细胞破裂，使内部蛋白质释放到裂解液中。
细胞裂解方法有多种，如机械破碎、超声波破碎和冻融破碎等。
其中，机械破碎是最常用的方法之一，它利用高速旋转的研钵或研磨珠对样品进行机械破碎，快速破裂细胞。
二、溶液裂解法溶液裂解法是一种温和的提取方法，适用于含有脆弱或难以裂解的细胞。
该方法通过将细胞置于含有细胞膜破坏剂的缓冲溶液中，使细胞膜破裂释放蛋白质。
常用的溶液裂解剂有洗涤剂（如SDS、Triton X-100等）和脂质体（如Tween 20）等。
三、超声波法超声波法是一种物理破碎的蛋白质提取方法。
它利用高频超声波的振荡作用，产生机械特效，使细胞破裂释放蛋白质。
超声波法可以实现非接触式破碎，不会污染样品，且对细胞结构的损伤较小，适用于多种细胞类型的蛋白质提取。
四、离心法离心法是一种通过差速离心来分离细胞碎片、细胞核或其他蛋白质复合物的方法。
通过调整离心速度和时间，可以使不同大小和密度的颗粒分层沉淀，从而实现蛋白质的分离和提取。
五、柱层析法柱层析法是一种高效的蛋白质提取方法，通过将样品溶液通过填充有特定亲和剂或离子交换基质的柱子，实现目标蛋白质的选择性吸附和洗脱。
柱层析法具有选择性强、分离效果好的特点，适用于高纯度蛋白质的提取。
六、电泳法电泳法是一种通过电场作用将蛋白质分离和提取的方法。
常见的电泳法有聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）、SDS-PAGE等。
通过将样品经过电泳分离，可以将目标蛋白质从其他蛋白质分子中分离出来，实现蛋白质提取的目的。
总结：以上是分子生物学实验中常用的蛋白质提取方法。
根据实验需要和样品特点的不同，选择合适的提取方法对于蛋白质研究的成功至关重要。
蛋白提取实验步骤
蛋白提取实验步骤:1、细胞总蛋白提取A对于悬浮细胞：离心收集细胞，每106细胞加250 Ul RlPA （在使用前数分钟内加入蛋白酶抑制剂），振荡。
如果需要提高蛋白浓度，可以适当减少细胞总蛋白提取试剂体积。
B对于贴壁细胞：a用TBS冲洗细胞2-3次。
最后一次彻底吸干残留液。
b加入适当体积的RIPA （使用前数分内加入蛋白酶抑制剂）于培养板、瓶内3-5分钟。
期间反复晃动培养板、瓶，使试剂与细胞充分接触。
c、用细胞刮刀将细胞及试剂刮下，收集到1.5ml离心管中。
C冰浴30min，期间用移液器反复吹打，确保细胞完全裂解。
D 12000g离心5min,收集上清，即为总蛋白溶液。
2、组织蛋白提取：A组织块用冷TBS洗涤2-3次，去除血污，剪成小块置于匀浆器。
加入10倍组织体积本试剂（使用前数分钟内加入蛋白酶抑制剂）冰上彻底匀浆。
如果需要提高蛋白浓度，可以适量减少该试剂体积。
B将匀浆液转移至1.5ml离心管中，振荡。
冰浴30min,期间用移液器反复吹打，确保细胞完全裂解。
C 12000g离心5min,收集上清，即为总蛋白溶液。
1、组织尽可能新鲜，若不能及时提蛋白，组织标本应保存在-80 C 冰箱，并避免反复冻融。
2、全程必须在冰上进行，避免蛋白降解。
3、蛋白酶抑制剂在水溶液中不稳定，需在RIPA使用前数分钟加入蛋白酶抑制剂。
4、裂解过程中如有溶液粘稠现象可用移液器（200 μ l ）反复吹打，或再加入适量裂解液以保证充分裂解。
5、总蛋白溶液不稳定（蛋白酶依旧有活性）可在-80 C短时间保存，建议立即加入蛋白上样缓冲液变性后与-20 C保存，避免反复精品佳作，安心下载，放心使用冻融。
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蛋白提取方法及注意事项
组织蛋白提取材料准备：组织、冰块、称、超声匀浆器、试剂各种试剂比例：PMSF：Lysis Buffer = 1:1001、将组织称重，减去EP管重量2、每100mg组织加入1mL(1mg ,10ul)试剂，冰上裂解半小时3、匀浆（注意低温操作），开20秒，关2秒，共打20次，每次用水冲洗，擦干，超声完后放冰上4、将匀浆液移至1.5mL预冷离心管5、离心，12000转，4℃，30分钟6、取上清至新的预冷的EP管7、BCA定量8、放入—80℃线粒体蛋白提取材料准备（放冰盒中）：线粒体试剂、EP管、EP管中的组织、枪头、PBS1、用冷PBS清洗细胞2次，洗后吸干上清2、加入A200uL，放冰上10分钟3、匀浆30-40次，每次用清水清洗匀浆器头4、离心500rpm，4℃，5分钟5、将上清移至离心管6、离心1100rpm，4℃，20分钟7、沉淀中加入200uLB，混匀8、离心1100rpm，4℃，20分钟9、弃上清10、加入80-150uL裂解液，放冰上20分钟，每隔5分钟高速震荡15秒，11、得线粒体蛋白12、定量后放-80℃冰箱。
细胞总蛋白提取材料准备：试剂（—20℃）、细胞培养板、EP管（已标记）均放置于冰盒中操作，以防止蛋白降解。
1、吸掉培基2、加入PBS，约1ml/孔左右，用手晃匀3、约5min后倒去PBS，并用枪将PBS尽量吸尽4、加入试剂，摇床振荡10分钟，再置冰上10分钟。
培养器皿面积（cm2）培养液量（ml）细胞量裂解液（ul）96 孔培养板0.32 0.1 10524孔培养板 2 1.0 5×10512孔培养板 4.5 2.0 1066孔培养板9.6 2.5 2.5×106803.5 cm 培养皿8 3.0 2×1066 cm 培养皿21 5.0 5.2×10632010 cm 培养皿55 10.0 13.7×10680025cm2培养瓶25 5.0 5×10675cm2培养瓶75 15～30 2×1075、用黄色枪头将各孔中cell刮下，保证孔底部分都要刮到，根据分组将细胞悬液吸入各个EP管中。
蛋白提取实验步骤
蛋白提取实验步骤：1、细胞总蛋白提取A、对于悬浮细胞: 离心收集细胞，每106细胞加250 ul RIPA （在使用前数分钟内加入蛋白酶抑制剂），振荡。
如果需要提高蛋白浓度，可以适当减少细胞总蛋白提取试剂体积。
B、对于贴壁细胞:a、用TBS冲洗细胞2-3次。
最后一次彻底吸干残留液。
b、加入适当体积的 RIPA（使用前数分内加入蛋白酶抑制剂）于培养板、瓶内3-5分钟。
期间反复晃动培养板、瓶，使试剂与细胞充分接触。
c、用细胞刮刀将细胞及试剂刮下，收集到1.5ml离心管中。
C、冰浴30min，期间用移液器反复吹打，确保细胞完全裂解。
D、12000g离心5min，收集上清，即为总蛋白溶液。
2、组织蛋白提取：A、组织块用冷TBS洗涤2-3次，去除血污，剪成小块置于匀浆器。
加入10倍组织体积本试剂（使用前数分钟内加入蛋白酶抑制剂）冰上彻底匀浆。
如果需要提高蛋白浓度，可以适量减少该试剂体积。
B、将匀浆液转移至1.5ml离心管中，振荡。
冰浴30min，期间用移液器反复吹打，确保细胞完全裂解。
C、12000g离心5min，收集上清，即为总蛋白溶液。
1、组织尽可能新鲜，若不能及时提蛋白，组织标本应保存在-80℃冰箱，并避免反复冻融。
2、全程必须在冰上进行，避免蛋白降解。
3、蛋白酶抑制剂在水溶液中不稳定，需在RIPA使用前数分钟加入蛋白酶抑制剂。
1 / 24、裂解过程中如有溶液粘稠现象可用移液器（200μl）反复吹打，或再加入适量裂解液以保证充分裂解。
5、总蛋白溶液不稳定（蛋白酶依旧有活性）可在-80℃短时间保存，建议立即加入蛋白上样缓冲液变性后与-20℃保存，避免反复冻融。
-----精心整理，希望对您有所帮助!。
蛋白提取方法及注意事项
组织蛋白提取材料准备：组织、冰块、称、超声匀浆器、试剂各种试剂比例：PMSF：Lysis Buffer = 1:1001、将组织称重，减去EP管重量2、每100mg组织加入1mL(1mg ,10ul)试剂，冰上裂解半小时3、匀浆（注意低温操作），开20秒，关2秒，共打20次，每次用水冲洗，擦干，超声完后放冰上4、将匀浆液移至1.5mL预冷离心管5、离心，12000转，4℃，30分钟6、取上清至新的预冷的EP管7、BCA定量8、放入—80℃线粒体蛋白提取材料准备（放冰盒中）：线粒体试剂、EP管、EP管中的组织、枪头、PBS1、用冷PBS清洗细胞2次，洗后吸干上清2、加入A200uL，放冰上10分钟3、匀浆30-40次，每次用清水清洗匀浆器头4、离心500rpm，4℃，5分钟5、将上清移至离心管6、离心1100rpm，4℃，20分钟7、沉淀中加入200uLB，混匀8、离心1100rpm，4℃，20分钟9、弃上清10、加入80-150uL裂解液，放冰上20分钟，每隔5分钟高速震荡15秒，11、得线粒体蛋白12、定量后放-80℃冰箱。
细胞总蛋白提取材料准备：试剂（—20℃）、细胞培养板、EP管（已标记）均放置于冰盒中操作，以防止蛋白降解。
1、吸掉培基2、加入PBS，约1ml/孔左右，用手晃匀3、约5min后倒去PBS，并用枪将PBS尽量吸尽4、加入试剂，摇床振荡10分钟，再置冰上10分钟。
培养器皿面积（cm2）培养液量（ml）细胞量裂解液（ul）96 孔培养板0.32 0.1 10524孔培养板 2 1.0 5×10512孔培养板 4.5 2.0 1066孔培养板9.6 2.5 2.5×106803.5 cm 培养皿8 3.0 2×1066 cm 培养皿21 5.0 5.2×10632010 cm 培养皿55 10.0 13.7×10680025cm2培养瓶25 5.0 5×10675cm2培养瓶75 15～30 2×1075、用黄色枪头将各孔中cell刮下，保证孔底部分都要刮到，根据分组将细胞悬液吸入各个EP管中。
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产品号 BB-3101 BB-3102 BB-3104 BB-3411 BB-3501 BB-3121 BB-3122 BB-3123
白细胞蛋白提取试剂盒
产品组成：
产品组成 规格
白细胞提取液 白细胞蛋白提取液 蛋白酶抑制剂混合物
Hale Waihona Puke BB-3134-1 50T 100ml 25ml 100ul
BB-3134-2 100T 200ml 50ml 200ul
储存条件： 蛋白酶抑制剂-20℃保存；白细胞提取液 2-8℃保存；蛋白提取液室温保存。
酵母蛋白提取试剂盒 昆虫蛋白提取试剂盒 磷酸化蛋白提取试剂盒 总蛋白提取试剂盒（2D 电泳用） 植物蛋白提取盒（2D 电泳用） 细菌膜蛋白提取盒（2D 电泳用）
BB-3125 BB-3126 BB-3105 BB-3181 BB-3183 BB-3187
蛋白酶抑制剂混合物 真菌蛋白提取试剂盒 磷酸酶抑制剂混合物 细菌蛋白提取盒（2D 电泳用） 酵母蛋白提取盒（2D 电泳用） 线粒体蛋白提取盒（2D 电泳用）
BB-3301 BB-3127 BB-3311 BB-3182 BB-3185 BB-3191
有效期： 一年。
产品简介： 贝博白细胞蛋白提取试剂盒适用于白细胞中提取总蛋白。提取过程简单方便，可在 1
小时内完成。该试剂盒含有的蛋白酶抑制剂混合物，阻止了蛋白酶对蛋白的降解，为提取高 纯度的蛋白提供了保证。提取的蛋白可用于 Western Blotting、蛋白质电泳、免疫共沉淀 等下游蛋白研究。
使用方法：
1. 提取液制备：每 500ul 冷的蛋白提取液中加入 2ul 蛋白酶抑制剂混合物，混匀 后置冰上备用。
2. 取 1.5ml 血，静置吸去上层血浆，加入白细胞提取液 1ml，混匀冰上静置 5min。 3. 在 4℃，800rpm 离心 5min，收集底部白细胞沉淀。 4. 重复步骤 2 和 3 一次。 5. 在白细胞中加入 500ul 冷的蛋白提取液，混匀后，在 4℃条件下振荡 15-20 分钟。 6. 在 4℃，14000rpm 条件下离心 15 分钟。 7. 快速将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到白细胞蛋白。 8. 将上述蛋白提取物定量①后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验②。
产品 磷酸化蛋白富集试剂盒 膜蛋白提取试剂盒 活性蛋白提取试剂盒 BCA 蛋白定量试剂盒 植物核蛋白提取试剂盒 细菌膜蛋白提取试剂盒 植物总蛋白提取试剂盒 植物膜蛋白提取试剂盒
产品号 BB-3108 BB-3103 BB-3106 BB-3401 BB-3154 BB-3151 BB-3124 BB-3152