实验十 酵母菌死活细胞鉴别
03-03-013实训指南-酵母菌的死活细胞鉴别与镜检计数
实训安排
序号
具体实训内容
学时生产指令），发放引导文；
组织几个学习小组；每组各选出一名组长各学习，教师组织引导问题的回答
10分钟
引导教学
分组讨论
2
各学习小组成员根据各自学习，通过讨论等方式，确定酵母死活细胞鉴别及镜检计数的方案。
20分钟
3
根据酵母死活细胞鉴别及镜检计数的方案，教师参与实施；在实践操作过程中要注重与实际相结合，整个过程要模拟实际工厂微生物检测操作。这个过程中师生共同分析、解决问题。
50分钟
4
各组成员对酵母死活细胞鉴定结果及镜检计数结果进行评价；
各班组成员对任务的组织、策划、产物的观测等过程进行自评和互评；
教师就各组成员在不同阶段的个方面的表现情况进行评价；
教师根据操作过程中存在的问题提问，学生通过讨论方式尝试给出解释方法，教师总结归纳解决方法。
10分钟
分组讨论
教师监督
5
撰写、提交实训报告和实训总结
小组总结
03-03-012实训报告-酵母菌的死活细胞鉴别与镜检计数
子情境：活性干酵母发酵过程检验-酵母菌的死活细胞鉴别与镜检计数
实训报告书
专业:生物技术及应用
班级:生物
姓名：
学号:
谷氨酸发酵过程控制控制
实训报告
姓名：
同组人员：
实验日期：
实地点：
指导教师：
成绩：
1.酵母死活细胞鉴别？
（1）菌悬液制备
取原始菌液10ml吸入90ml无菌水中，稀释度为10-1
（2）美兰染色
载玻片中央加一小滴0.1%美蓝染色液，然后再加一小滴预先稀释至适宜浓度的酵母发酵液，混匀后从侧面盖上盖玻片，并吸去多余的水分和染色液
（3）死活细胞鉴别
制好的染色片置于显微镜的载物台上，放置约3min后进行镜检，先用低倍镜，后用高倍镜进行观察，以下为电子照片
2.镜检计数
（1）加样品
将血细胞计数板盖上盖玻片，再用滴管将刚混匀的菌悬液由盖玻片边缘滴一小滴，让菌液沿缝隙靠毛细渗透作用自动进入计数室。
（2）计数
取计数室内四角及中心五个中方格细胞进行计数，计数结果为168个
（3）计算
1ml菌液中的总菌数=50000*168*10=8.4*107
教师评语：
报告条理清晰，内容鲜明，数据真实可靠。在实训操作过程能够严格按照步骤进行，存在疑问以及问题及时跟老师沟通，跟同组同学进行讨论。实训报告规范写作。但未对酵母成活率进行计算，数据分析的内容还应更加完善。
微生物实验思考题参考答案及知识要点
微生物实验思考题参考答案及知识要点一．酵母菌形态观察及死活细胞鉴别1.吕氏碱性美蓝染液浓度和作用时间的不同对酵母菌死细胞数量有何影响?是分析其原因。
美蓝是一种无毒性的染料，它的氧化型呈蓝色，还原型无色。
用美蓝对酵母的活细胞进行染色时，由于细胞的新陈代谢作用，细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝由蓝色的氧化型变成为无色的还原型。
因此，具有还原能力的酵母活细胞是无色的，而死细胞或代谢作用微弱的衰老细胞则呈蓝色或淡蓝色，借此即可对酵母菌的死细胞和活细胞进行鉴别。
美蓝浓度高了，代谢不太活跃的活细胞也会被染色，从而使观察到的死细胞较多，活细胞较少；反之，则代谢微弱的细胞也能还原美蓝，不被染色，从而使观察到的死细胞较少，活细胞较多。
二. 细菌的简单染色和革兰氏染色1. 革兰氏染色中那一步是关键?为什么？你是如何操作的？革兰氏染色的关键步骤是：乙醇脱色（是脱色时间）。
如果脱色过度，革兰氏阳性菌也可被脱色而被误认为是革兰氏阴性菌；如脱色时间过短，革兰氏阴性菌也可被脱色而被误认为是革兰氏阳性菌。
脱色时间的长短还受涂片的厚薄，脱色是玻片晃动的快慢及乙醇用量的多少等因素的影响，难以严格规定（脱色是应当控制速度，脱色时间一般为20—30s）。
2. 固定的目的之一是杀死菌体，这与自然死亡的菌体有何不同？自然死亡的菌体本身已经部分自溶，结构已经改变。
固定杀死细菌时细菌结构是保持死亡时的状态的。
3. 不经复染这一步能否区分革兰氏阳性菌和阴性菌？能。
在酒精脱色后，不被酒精脱色而保留紫色者为革兰氏阳性菌（G＋），被酒精脱色为革兰氏阴性菌。
最后一步用番红染液复染，是为了让结果更清楚。
4. 涂片为什么要固定，固定适应注意什么问题？a 杀死细菌并使菌体黏附与玻片上；b 增加其对染料的亲和力。
固定时应注意：手持玻片，菌膜朝上，在微火过3次（手指触摸玻片反面，不烫手为宜），固定时应尽可能维持细胞原有形态，防止细胞膨胀或收缩。
三. 霉菌、放线菌的形态观察1. 镜检时，如何区分基内菌丝与气生菌丝？一般气生菌丝颜色较深，直生或分枝丝状，比基内菌丝粗；而基内菌丝色浅、发亮，可看到横隔膜，继而断裂成球状或杆状小体。
酵母菌形态观察及死活鉴别
酵母菌形态观察及死活鉴别
一、实验目的
1.认识并观察酵母菌的形态特征，并掌握酵母菌与细菌形态特征的区别。
2.学习鉴别死活细胞的实验方法。
二、实验原理
1、酵母菌是单细胞的真核微生物，菌体比细菌大而且不运动。
2、本实验是通过美蓝染液浸片和碘液浸片来观察酵母的形态
美蓝是一种无毒性的染料，它的氧化型呈蓝色，还原型无色。
用美蓝对酵母活细胞染色时，由于细胞的新陈代谢作用，细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝由蓝色的氧化型变为无色的还原型，而对代谢作用微弱或死细胞，无此还原能力或还原能力极弱，而被美蓝染成蓝色或淡蓝色。
因此，不仅用此法可观察酵母细胞形态，也可用来鉴别酵母菌的死细胞和活细胞
三、实验器材
酵母悬液、美蓝染色液、革兰氏染色用的碘液、显微镜、载玻片、盖玻片
四、实训步骤
1、水-碘浸片观察
在载玻片中央滴一滴碘液，取一滴酵母悬液放在碘液中混匀，盖上盖玻片后镜检。
2、美蓝浸片观察
（1）在载玻片中央加一滴美蓝染色液，滴加一滴酵母菌放在染液中，混合均匀，染液不宜过多。
注：染液不宜过多或过少，否则，在盖上盖玻片时，菌液会溢出或出现大量气泡。
（2）将制片放置约3min 后镜检，先用低倍镜然后用高倍镜观察酵母的形态和出芽情况，并根据颜色来区别死活细胞。
五、实验报告
绘图说明你所观察到的酵母菌的形态特征
六、注意事项
1、染色液不宜过多或过少，否则在盖上盖玻片时，菌液会溢出或出现大量的气泡，影响观察。
2、盖片时斜着放不易产生气泡。
1。
酵母菌形态观察及死活细胞的观察
实验五
结束
实验5-3：美蓝染色死活细胞鉴定
• 美蓝为无毒染料，其氧化型呈蓝色，还原型无色。 • 通过美蓝染色，检验细胞的还原能力。活细胞还
原能力强，在特定时间内将美蓝还原为无色。 • 老化、死亡细胞呈蓝色、淡蓝色。
思考题
• 为什么目镜测微尺必须用镜台测微尺来校 正？
• 在显微镜下直接测定微生物数量有什么优 缺点？
镜下测定微生物大小的方法。 • 学习使用血球记数板测定微生物数量的方
法。
实验材料
• 显微镜、目镜测微尺、镜台测微尺、血球 记数板、酵母菌悬液、盖玻片、美蓝、无 菌滴管、吸水纸、擦镜纸、香柏油、擦镜 油。
实验程序
• 5- 1 :测定微生物的大小 • 5- 2 :测定微生物数量 • 5- 3 :酵母的形态特和美蓝
实验五
酵母菌形态观察及死活细胞的观察 微生物细胞大小测定 微生物数量的测定
酵母菌形态观察及死活细胞的观察； 微生物细胞大小和数量的测定
• 目的要求 • 实验材料 • 实验程序 • 思考题
目的要求
• 观察酵母形态，加深理解酵母的形态特征 • 美蓝染色鉴定酵母的死活 • 学习使用目镜测微尺和镜台测微尺在显微
• 菌体大小的测定：取下镜台测微尺，将细菌染色标本置于载物 台上，然后在油镜下用目镜测微尺测量菌体的长和宽。
实验5-2:测定微生物数量
实验5-2实验程序 （测定微生物数量）
• 方法：活菌计数法——平板菌落计数法；总菌计数法——血 球计数板或霍瑟（Peroff Hausser）细菌计数板（二者原 理和部件相同，只是厚薄不同而已）。
染色鉴定酵母的死活
实验5-1:酵母的形态特和美蓝染 色鉴定酵母的死活
实验5-1a：Yeasts(unicellular fungi)
酵母菌的形态观察及死活细胞鉴别-学时
实验一酵母菌的形态观察及死活细胞鉴别活细胞数目比例有什么影响？4. 如何测定酵母菌死亡率？简述其原理。
5. 标本片上的某一物象，第一次看到后如何再次找到它?一、实验目的与要求1. 了解普通光学显微镜的构造及原理，正确掌握使用显微镜的方法；2. 观察酵母菌的形态及出芽生殖方式；3. 学习区分酵母菌死活细胞的实验方法；4. 掌握酵母菌的一般形态特征及其与细菌的区别。
二、实验原理1. 酵母菌酵母菌是不运动的单细胞真核微生物，其大小通常比常见细菌大几倍甚至十几倍，不必染色即可用显微镜观察其形态。
但由于细胞个体大，采用涂片的方法制片有可能损伤细胞，一般通过美蓝染液水浸片或水-碘液浸片法来观察酵母细胞。
大多数酵母以出芽方式进行无性繁殖，有的分裂繁殖；有性繁殖是通过接合产生子囊孢子。
本实验通过美蓝染液水浸片和水一碘液水浸片来观察酵母的形态和出芽生殖方式，并对酵母细胞进行死活染色鉴别。
2. 美蓝染液图1：酵母菌美蓝浸片观察3min（10×40）图2：酵母菌美蓝浸片观察30min（10×40）三、实验设备及材料1. 菌种酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae) 或卡尔酵母(Saccharomyces calsbergensis)培养2 天左右的豆芽汁液体培养物(需稀释)。
2. 溶液或试剂：0.1%和0.05%吕氏碱性美蓝溶液(或0.01%美蓝水溶液)，革兰氏染色用碘液等。
3．器材：显微镜，擦镜纸，吸水纸，盖玻片、酒精灯、接种环、镊子、胶头滴管、小烧杯、洗瓶等等。
四、实验步骤与内容1．美蓝浸片的观察（1）在载玻片中央加一滴0.1%吕氏碱性美蓝染色液，然后按无菌操作接种环挑取少量酵母菌放在染液中，并用接种环将其混合均匀，酒精灯上灼烧清洗接种环。
注：染液不宜过多或过少，否则，在盖上盖玻片时，菌液会溢出或出现大量气泡。
用接种环将菌体与染液混合时，不要剧烈涂抹，以免破坏细胞。
水，取少许酵母菌苔放在水-碘液中混匀，盖上盖玻片后镜检。
酵母菌的形态观察与死活鉴定
实验三酵母菌的形态观察与死活鉴定
一、实验目的与内容
1、实验目的：
2、实验内容：
二、实验原理
三、实验器材
1.供试菌种
2.试剂
3.器皿
四、实验步骤
(一)美蓝浸片观察
(二)水-碘浸片观察
(三)酵母菌死亡率计算
酵母死亡率一般用百分数表示，即死亡细胞占总细胞的百分数。
在一个视野里计数死细胞和活细胞，共计数5~6个视野，记录并计算。
死亡率=死细胞总数/(死、活细胞总数)×100%
五、注意事项
六、实验结果分析
七、实验报告
1.绘图说明你所观察到的酵母菌的形态特征，注明菌名与放大倍数。
2.三线表记录吕氏碱性美蓝、碘染液浓度和作用时间对死活细胞数的影响。
八、思考与探究
1.吕氏碱性美蓝染液浓度和作用时间的不同，对酵母菌死细胞数量有何影响?试分析其原因。
酵母菌的形态观察及死活细胞的鉴定
实验七酵母菌的形态观察及死活细胞的鉴定一、实验目的1.观察酵母菌的形态特征、出芽生殖方式，并掌握酵母菌与细菌形态特征的区别。
2.学习鉴别死活细胞的实验方法。
二、实验原理酵母菌是单细胞的真核微生物，菌体比细菌大而且不运动。
酵母菌的繁殖方式分为无性繁殖和有性繁殖两种，以无性繁殖为主。
芽殖是酵母菌普遍的无性繁殖方式，少数为裂殖；有性繁殖是产生子囊和子囊孢子。
本实验是通过美蓝染液水浸片和水一碘液水浸片来观察酵母的形态和芽殖方式。
美蓝是一种无毒性的染料，它的氧化型呈蓝色，还原型无色。
用美蓝对酵母活细胞染色时，由于细胞的新陈代谢作用，细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝由蓝色的氧化型变为无色的还原型，而对代谢作用微弱或死细胞，无此还原能力或还原能力极弱，而被美蓝染成蓝色或淡蓝色。
因此，不仅用此法可观察酵母细胞形态，也可用来鉴别酵母菌的死细胞和活细胞。
三、试剂与器材1.材料酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)或卡尔酵母(Saccharomyces calsbergensis)培养2天左右的麦芽汁(或豆芽汁)液体培养物。
2.试剂0.05％和O.1％吕氏碱性美蓝染色液、革兰氏染色用的碘液。
3.器材显微镜、载玻片、盖玻片、接种环、洒精灯等。
四、实验内容1.美蓝浸片观察酵母培养→制片→染色→镜检→30分钟后再镜检2.水-碘浸片观察五、关键步骤及注意事项1.染液不宜过多或过少，否则，在盖上盖玻片时，菌液溢出或出现大量气泡。
2.用镊子取一块盖玻片，先将一侧与菌液接触，然后慢慢将盖玻片放下，使其盖在菌液上，盖玻片不宜平着放下，避免气泡产生。
六、思考题1.吕氏碱性美蓝染液浓度和作用时间的不同，对酵母菌死细胞数量有何影响?试分析其原因。
2.在显微镜下，酵母菌有哪些突出的特征区别于一般细菌? 实验七酵母菌的形态观察及死活细胞的鉴定一、实验目的1.观察酵母菌的形态特征、出芽生殖方式，并掌握酵母菌与细菌形态特征的区别。
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实验器材
活材料：酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）斜面或培养液
染液:O.1%美蓝染色液
器材：显微镜、载玻片、盖玻片、镊 子、擦镜纸、接种环。
实验步骤
1、取美蓝染色液一滴，置于载玻片中央。 2、用滴管吸取少许菌悬液，加一滴至染色液中，染 色3分钟。 3、用镊子取一块盖玻片，先将一边与菌液接触，再 慢慢放下盖在菌液上，尽量避免产生气泡。 4、先用低倍镜再用高倍镜观察酵母菌的形态和出芽 情况，并根据颜色来区别死、活细胞。
2、染色原理
美蓝是一种无毒性的染料，氧化型呈蓝色，还原型 是无色。用美蓝对酵母菌的活细胞进行染色时，由 于细胞的新陈代谢作用，细胞内具有较强的还原能 力，能使美蓝由蓝色的氧化型变成无色的还原型。 因此，具有还原能力的酵母活细胞是无色的或淡蓝 色，而死细胞或代谢缓慢的衰老细胞则被美蓝染成 蓝色，借此即可对酵母菌的死、活细胞进行鉴别。
实验十
酵母菌的形态观察及 死、活细胞鉴别
目的要求
观察酵母菌形态及出芽生殖方式; 掌握鉴别酵母菌死、活细胞的染色
方法。
基本原理
1、酵母菌的形态特征
酵母菌是单细胞真菌，菌体比细菌大，多呈 圆形、卵圆、圆柱形，有的呈分枝状假菌丝。 酵母菌的繁殖方式比较复杂，无性繁殖以出芽
生殖为主；有性繁殖是通过接合产生子囊孢子。
5、染色半小时后，再观察一下死、活细胞数目是否 增加。
实验报告
绘图说明你所观察到的酵母菌的形态特征。