引物设计步骤
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1.打开NCBI主页
2.输入基因名称，选择gene，查询
3.选择相应物种（见红框）
4.点击相应基因ID
5.找到mRNA编号，点击
6.点击FASTA格式
7.复制mRNA序列
8.打开PrimerQuest Tool,将mRNA序列复制到框中，染料法点三，探针法点二
9.选择合适的序列，5,端易降解，选中后序列（BLAST进行比对）
10.选择合适的序列比对，并选择物种
11.比对结果中选择相似度较低的序列
还可以在PrimeBank（网址）中直接找