平面色谱法学习指导(山西医科大学)
第十九章 平面色谱法第一节 内容和要求1．基本内容 本章内容包括平面色谱分类；平面色谱参数：比移值和相对比移值、分配系数和保留因子、分离度和分离数，比移值与分配系数（保留因子）的关系；薄层色谱法的基本原理及类型，吸附薄层色谱中吸附剂和展开剂及其选择，薄层色谱操作步骤及定性定量分析；高效薄层色谱法；薄层扫描法；纸色谱法。
2．基本要求 本章要求掌握薄层色谱和纸色谱的基本原理，常用的固定相和流动相，比移值和相对比移值、分配系数和保留因子、分离度和分离数，比移值与分配系数（保留因子）的关系。
吸附色谱中固定相和流动相的选择。
熟悉平面色谱法分类，薄层色谱中薄层板的种类，薄层色谱操作步骤，显色方法，影响薄层色谱比移值的因素，面效参数与分离参数，定性、定量分析方法。
了解各种类型色谱的操作方法，薄层扫描法，高效薄层色谱法，应用与示例。
第二节 要点和难点（一）平面色谱的基本术语和公式1. 定性参数：比移值（R f ）与相对比移值（R r ）0f L L R = (s )(i )(s ) f (i ) f r L L R R R == 2.R f 与分配系数（K ）和保留因子（k ）的关系ms f 11V /KV R += f 11R k =+ 3.面效参数：理论塔板数（n ）与塔板高度（H ）2)(16W L n = nL H 0= 4.分离参数：分离度（R ）与分离数（SN ）)(2)()(2212112W W d W W L L R +=+-=1)()(1210210-+=W W L SN （二）主要平面色谱类型色谱类型分离原理 载体 固定相 流动相 R f 顺序 吸附薄层色谱吸附 硅胶 有机溶剂 极性小的R f 值大 正相薄层色谱分配 硅胶 水 有机溶剂 极性小的R f 值大 反相薄层色谱分配 硅胶 硅胶键合相 水-有机溶剂 极性小的R f 值小 纸色谱 分配 滤纸 水 水-有机溶剂 极性小的R f 值大（三）吸附薄层色谱条件的选择被测组分的极性大，吸附剂的活度小，流动相极性大；被测组分的极性小，吸附剂的活度大，流动相极性小。
1．被分离物质的极性与结构的关系（1）基本母核相同，基团极性愈大，分子极性愈强；极性基团数目增加，分子极性增强。
常见的取代基极性大小顺序：烷烃<烯烃<醚类<硝基化合物<二甲胺<脂类<酮类<醛类<硫醇<胺类<酰胺<醇类<酚类<羧酸类。
（2）分子双键愈多，共轭度愈大，吸附性愈大。
（3）空间排列影响极性，如能产生分子内氢键的分子极性下降。
2．吸附剂的活度选择 被分离物质的极性大，吸附剂活度要小，以免吸附太牢，不易洗脱；被分离物质的极性小，则吸附剂的活度要大，以免不被吸附，而无法分离。
可改变活化温度和时间来控制吸附剂的活度。
3．展开剂的极性单一溶剂的极性顺序：石油醚<环己烷<二硫化碳<四氯化碳<三氯乙烷<苯、甲苯<二氯甲烷<氯仿<乙醚<乙酸乙酯<丙酮 <正丙醇<乙醇<甲醇<吡啶<酸<水。
4．混合溶剂选择的一般规则 先用单一的中等极性展开剂试验，得出合适的极性。
再改用二元展开剂，调节比例达到预期的极性，得到混合展开剂。
目的是通过混合展开剂的极性和溶剂的强度，使各组分具有适宜的R f值，从而达到良好的分离。
（四）分析方法1.定性分析（1）比移值R f定性：与对照品的R f值比较定性，但重现性差。
（2）相对比移值R r定性：与文献R r值或对照品的R r值比较定性。
2.杂质检查（1）杂质对照品比较法：配制一定浓度的试样溶液和规定限定浓度的杂质对照品溶液，在同一板上展开，试样中杂质斑点颜色不得比杂质对照品斑点颜色深。
（2）主成分自身对照法：首先配制一定浓度的供试品溶液，然后将其稀释一定倍数得到另一低浓度溶液，作为对照溶液。
将试样溶液和对照溶液在同一板上展开，试样溶液中杂质斑点颜色不得比对照溶液主斑点颜色深。
3.定量分析（1）洗脱法（2）直接定量法：目视比较法和薄层扫描法。
第三节精选例题1．试推测下列化合物在硅胶薄层板上，以石油醚-苯（4:1）为流动相展开时的R f值次序，并说明理由。
N NNNOCH3偶氮苯对甲氧基偶氮苯N N H O N NN N H O苏丹黄 苏丹红 N N NH 2N N OH对氨基偶氮苯 对羟基偶氮苯答：根据组分在吸附色谱薄层板上展开的机理，组分的极性越大，R f 越小；组分的极性越小，R f 越大。
六种化合物的分子结构均含有偶氮苯母核，根据取代基的极性便可排列出六种化合物的极性顺序。
苏丹红、苏丹黄及对羟基偶氮苯均带有羟基官能团，他们的极性较强。
但苏丹红、苏丹黄上的羟基H 易与相邻氮原子形成分子内氢键，而使它们的极性大大下降，致使其极性小于对氨基偶氮苯。
苏丹红极性大于苏丹黄，是因为苏丹红的共轭体系比苏丹黄长。
所以六种化合物的极性次序为：偶氮苯<对甲氧基偶氮苯<苏丹黄<苏丹红<对氨基偶氮苯<对羟基偶氮苯；可推测R f 值次序为：偶氮苯>对甲氧基偶氮苯>苏丹黄>苏丹红>对氨基偶氮苯>对羟基偶氮苯。
2．吸附薄层色谱中，欲使被分离极性组分R f 值变小，一般可采用哪些方法？答：（1）增加吸附剂的活度 在薄层活化时，适当提高活化温度和延长活化时间，使吸附剂含水量减少，提高吸附剂的活度。
（2）降低展开剂极性 选择更弱极性的有机溶剂或降低混合溶剂终极性溶剂的比例，降低展开剂极性。
对于具有酸碱性的组分，改善或调节展开剂的pH 也可使组分的R f 值变小。
3．用薄层色谱法分离组分1和组分2时，当二组分存在有1f R >2f R ，W 1≈W 2，试证明2f )-R 成立。
证明：∵2f 211R k =+ ，22f 2f 1R k R -=，222222f f 2f 2f f f (1)/11(1)R R k R k R R /R -==-++- 由 22114k k n R +-=αα， ∴22114k k n R +-=αα2f )R =- 4．化合物A 在薄层板上从原点迁移7.6cm ，溶剂前沿距原点16.2cm 。
(1)计算化合物A 的R f 值；(2)色谱条件相同时，当溶剂前沿移至距原点14.3cm 时，化合物A 的斑点应在此薄层板的何处？解：f 07.60.4716.2L R L === L = L 0×R f = 14.3×0.47=6.7(cm)5．已知A 与B 两组分的相对比移值为1.5。
当B 物质在某薄层板上展开后，斑点距原点8.3cm ，溶剂前沿到原点的距离为16cm ，问若A 在此板上同时展开，则A 组分的展距为多少？A 组分的R f 值为多少？解：∵51BA fB fA r .L L R R R === ∴412385151B A ...L .L =⨯==(cm) 780164120A fA ..L L R ===6．在一定的薄层色谱条件下，当溶剂的移动速度为0.15cm/min 时，测得A 、B 组分的R f 值分别为0.47和0.64。
计算A 和B 组分的移动速度。
解：∵000f t u ut L L R ==， 在平面色谱中0t t = ∴ 0f u u R = 07001504700f A ...u R u =⨯=⋅=(cm/min) 09601506400f B ...u R u =⨯=⋅=(cm/min)7．用薄层扫描法在高效薄层板上测得如下数据： L 0=82mm ，R f =0的物质半峰宽为 1.9mm ，R f =1的物质半峰宽为 3.1mm ，求该薄层板的分离数。
解： 1511391821)()(1210210=-+=-+=..W W L SN第四节 练习和自测（一）问答题1．简述影响薄层色谱比移值和相对比移值的因素。
2．薄层色谱法有哪些显色方法？它们的应用范围如何？3．简述薄层色谱板的类型。
并说明它们的异同？4．简述平面色谱比移值和分配系数关系式（ms f 11V /KV R +=）的意义。
5．薄层色谱法展开之前先进行“饱和”一定时间，若不“饱和”就展开，可能会出现什么现象？6．说明薄层扫描外标一点和外标两点定量方法的原理及适用条件。
7．按分离机理，纸色谱属于那种色谱？固定相是什么？展开剂应如何选择？8．某组分在硅胶A 板上，以苯-甲醇（1:3）为展开剂的R f 值为0.60；在硅胶B 板上，用相同的展开剂R f 值为0.45，问A 、B 两块板，哪一块板的活度大？（二）填空题1．判断两组分能否用平面色谱法分离的依据是__ _值。
其值相差愈_ ___，分离效果愈好。
2．展开剂的极性 ，固定相的极性 ，称为正相薄层色谱；展开剂的极性 ，固定相的极性 ，称为反相薄层色谱。
3．在薄层色谱中定性参数R f 值的数值在 之间，而R r 。
4．在吸附薄层色谱中，常以 为固定相， 为流动相，极性小的组分在板上移行速度较 ，R f 值较 。
5．薄层色谱板的“活化”作用是_ ___、_ 。
6．要使二组分通过平面色谱分离的先决条件是它们的 不同或不同。
7．在平面色谱法中，色谱过程中样品与流动相的迁移时间是 ，但迁移距离。
在柱色谱中，样品与流动相的迁移距离是，但迁移所需时间，组分的分配系数越大，保留时间越。
8．薄层色谱法的一般操作程序是。
9．荧光薄层板与普通薄层板的区别为。
在紫外灯下，荧光薄层板呈绿色荧光底色，被检测的物质一般呈。
10．薄层色谱用于药品杂质限量检查的方法有和。
（三）选择题1．进行纸色谱时，滤纸所起的作用是（）。
A．固定相；B．展开剂；C．吸附剂；D．惰性载体2．薄层色谱中常用的显色剂为（）。
A．茚三酮试液；B．荧光黄试液；C．碘；D．硫酸乙醇溶液3．薄层色谱中，使两组分相对比移值发生变化的主要原因是（）。
A．改变薄层厚度；B．改变展开剂组成或配比；C．改变展开温度；D．改变固定相种类4．在薄层色谱中，以硅胶为固定相，有机溶剂为流动相，迁移速度快的组分是（）。
A．极性大的组分；B．极性小的组分；C．挥发性大的组分D．挥发性小的组分5．某组分在薄层色谱中展开，10min时测得比移值为R f，20min时的展开结果是（）。
A．比移值加倍；B．R f值不变；C．组分移行距离增加，但小于2倍；D．组分移行距离增加，但大于2倍6．下列色谱参数中数值在0～1之间的是（）。
A．R f；B．R r；C．R´；D．k7．三种阿片生物碱，其结构如下，若用薄层色谱法分离，硅胶为固定相，氯仿等有机溶剂为流动相，R f值最小的是（）。
O H H O O NC H 3 OH CH 3O O N CH 3CH 3O O N CH 3OCH 3A ．吗啡；B ．可待因；C ．蒂巴因8．纸色谱中常用正丁醇-乙酸-水（4:1:5）作展开剂，展开剂正确的配制方法是（ ）。
第14章 平面色谱法
14.1 概述 14.2 平面色谱法的技术参数 14.3 固定相、载体与薄层板 14.4 样品制备与点样 14.5 平面色谱法的展开 14.6 展开后处理与斑点定位 14.7 定性分析 14.8 定量分析 14.9 在药学领域的应用
14.1 概述
平面色谱法是指组分在以平面为载体的固定相和 流动相之间进行展开而实现分离和分析的一种色 谱方法，包括： ① 薄层色谱法(TLC)，是用载板上涂布的薄层物质 作为固定相的平面色谱法。 ② 纸色谱法(PC)，是用纸作为固定相或载体的平面 色谱法。
14.2 平面色谱法的技术参数 14.2.1 定性参数 14.2.2 相平衡参数 14.2.3 面效参数 14.2.4 分离参数
14.2 平面色谱法的技术参数>> 14.2.1 定性参数
1. 比移值 2. 相对比移值
Li Rf L0
Rr
展开剂前沿
Rf(i) Rf(s)
Li Ls
L0
Li
14.2 平面色谱法的技术参数>> 14.2.2 相平衡参数
2. 相平衡参数的对比移值和分离效果的影响 相平衡参数分配系数和容量因子决定着Rf的大小，进 而决定着平面色谱的分离结果。而相平衡参数从根本 上取决于组分、固定相和展开剂三者之间的性质，当 组分和固定相选定后，比较灵活实用的策略是对展开 剂进行优化选择。此外，展开过程中的温度、压力等 外界因素也会影响热力学参数的大小，影响比移值。
14.5 平面色谱法的展开
2. 展开方式：一维单向展开、单向多次展开、增量(减量) 单向多次展开。 3. 展开设备：俗称层析缸，常用的有上行展开室、下行 展开室、水平展开室、全自动展开室等。 4. 影响展开的因素：平面色谱是开放型色谱，影响因素 较多，主要有固定相的厚度和均匀程度、环境相对湿 度、溶剂蒸气、温度、展开方式、展开距离等。
平面色谱法-su
汇报人：XX
01 单 击 添 加 目 录 项 标 题 02 平 面 色 谱 法 的 概 述 03 平 面 色 谱 法 的 技 术 发 展 04 平 面 色 谱 法 的 实 验 操 作 05 平 面 色 谱 法 的 应 用 实 例 06 平 面 色 谱 法 的 未 来 展 望
目录
01 添加章节标题
实验步骤：样 品处理、色谱 展开、显色、
测量等
实验注意事项： 避免阳光直射、 保持色谱板平 整、防止样品
污染等
实验步骤
准备实验材料：色谱板、样品、溶剂、显色剂等 制作色谱板：在色谱板上均匀涂抹样品，晾干 展开色谱：将色谱板放入溶剂中，使样品在色谱板上展开 显色：在色谱板上喷洒显色剂，使样品显现出来 观察结果：在紫外线灯下观察色谱，分析样品的组成和含量
检测生物体内的有机污染 物
在其他领域的应用
医药领域：分 离药物中的有
效成分
食品领域：检 测食品中的添 加剂和污染物
环境领域：监 测环境中的污 染物和生态变
化
化工领域：分 离化工产品中 的杂质和副产
物
06 平面色谱法的未来 展望
技术创新和改进
提高分辨率：通过改进色谱仪和检测器，提高分辨率，使分析结果更加精确。
对未来科学发展的影响
平面色谱法在药 物分析中的应用
平面色谱法在环 境监测中的应用
平面色谱法在食 品分析中的应用
平面色谱法在生 物医学研究中的 应用
THNK YOU
汇报人：XX
加快分析速度：通过优化色谱条件，提高分析速度，缩短分析时间。
扩展应用范围：通过开发新的色谱模式和检测方法，扩展平面色谱法的应用范围，使其能 够应用于更多领域。
提高自动化程度：通过引入自动化设备和软件，提高平面色谱法的自动化程度，降低操作 难度，提高分析效率。
平面色谱法
薄层色谱法： 1938年 产生 20世纪60年代 发展和普及 20世纪80年代 仪器化薄层色谱法 (instrumental thin layer chromatography))
第一节 平面色谱法的分类和原理
• 平面色谱法的分类 • 平面色谱法参数
一、平面色谱法的分类
按操作方式分为薄层色谱法、纸色谱法、 薄层电泳法。
分类 正相色谱：流动相的极性比固定相小。 反向色谱：流动相的极性比固定相大。
在正相色谱中，极性大的组分在固定 相中保留时间大，分配系数大，Rf值 小； 在反相色谱中，极性大的组分在固定 相中保留时间短，分配系数小，Rf值 大；
二、吸附薄层色谱的吸附剂和展开剂
(一)吸附剂 吸附薄层色谱法的固定相(stationary phase)为吸附剂，常用吸附剂有硅胶、 氧化铝和聚酰胺等。
2、氧化铝 氧化铝可分为中性(pH7.5),碱性 (pH9.0)和 酸性(pH4.0)三种。
应用范围： 碱性氧化铝用来分离中性或碱性化合物， 如生物碱、脂溶性维生素等。 中性氧化铝适用于酸性及对碱不稳定的 化合物的分离。 酸性氧化铝可用于酸性化合物的分离。
表19-1 硅胶与氧化铝的活度与含水量的关系
常见化合物的极性由小到大为： 烷烃( CH3, CH2 )＜烯烃( CH CH ) ＜醚( OCH3, OCH2 )＜硝基化合物 ( NO2)＜酯＜酮( C O)＜醛( CHO)
＜胺( NH2)＜醇( OH)＜酚(Ar OH) ＜羧酸( COOH)。
常用溶剂的极性强弱： 水＞酸＞吡啶＞甲醇＞乙醇＞正丙醇
c.硅胶GF254板的制备 取硅胶GF254板5g, 加入15～17mL 4‰ 的CMC-Na，调成糊状。去除气泡后，
＞丙酮＞乙酸乙酯＞乙醚＞氯仿＞二 氯甲烷＞甲苯＞苯＞三氯乙烷＞四氯 化碳＞环己烷＞石油醚
平面色谱法习题答案
平面色谱法思考题和习题1．在薄层色谱中，以硅胶为固定相，氯仿为流动相时，试样中某些组分R f 值太大，若改为氯仿－甲醇(2:1)时，则试样中各组分的R f 值会变得更大，还是变小？为什么？以硅胶为固定相的为吸附薄层色谱，应以吸附机制来解释。
试样中某些组分R f 值太大，若改为氯仿－甲醇(2:1)时，则试样中各组分的R f 值会变得更大，其原因主要是甲醇极性强，与组分竞争硅胶表面的吸附位点，降低了硅胶对组分的吸附能力，至使R f 值变得更大。
此时应加入适量极性小的溶剂如环已烷以降低展开剂的极性；或通过增加硅胶的吸附活性使R f 变小。
2．在硅胶薄层板A 上，以苯－甲醇(1:3)为展开剂，某物质的R f 值为0.50，在硅胶板B 上，用相同的展开剂，此物质的R f 值降为0.40，问A 、B 两种板，哪一种板的活度大？以硅胶为固定相的为吸附薄层色谱，用B 板展开时，试样中组分的R f 值变小，其原因是B 板硅胶的吸附活性大使R f 变小。
因此可看出B 板的活度大。
3、在一定的薄层色谱条件下，已知A 、B 、C 三组分的分配系数顺序分别为K A ﹤K B ﹤K C 。
三组分在相同条件下R f 值顺序如何？分配系数越大，保留时间越长，R f 值越小，因此三组分在相同条件下R f 值顺序R f A ﹥R f B ﹥R f C ﹥4．试推测下列化合物在硅胶薄层板上，以石油醚－苯（4:1）为流动相，六种染料的R f 值次序，并说明理由。
极性次序的排列则根据这些分子的分子结构，它们均具有偶氮苯基本母核，根据取代基的极性大小，很易排出次序。
苏丹红、苏丹黄及对羟基偶氮苯均带有羟基官能团，但苏丹红、苏丹黄上的氢原子易与相邻氮原子形成分子内氢键，而使它们的极性大大下降至对氨基偶氮苯之后，苏丹红极性大于苏丹黄，则因苏丹红的共轭体系比苏丹黄长。
根据吸附色谱溶质在薄层板上移行次序是极性小的组分R f 大。
六种染料的极性次序为：偶氮苯<对甲氧基偶氮苯<苏丹黄<苏丹红<对氨基偶氮苯<对羟基偶氮苯。
平面色谱法学习指导(山西医科大学)
第十九章 平面色谱法第一节 内容和要求1．基本内容 本章内容包括平面色谱分类；平面色谱参数：比移值和相对比移值、分配系数和保留因子、分离度和分离数，比移值与分配系数（保留因子）的关系；薄层色谱法的基本原理及类型，吸附薄层色谱中吸附剂和展开剂及其选择，薄层色谱操作步骤及定性定量分析；高效薄层色谱法；薄层扫描法；纸色谱法。
2．基本要求 本章要求掌握薄层色谱和纸色谱的基本原理，常用的固定相和流动相，比移值和相对比移值、分配系数和保留因子、分离度和分离数，比移值与分配系数（保留因子）的关系。
吸附色谱中固定相和流动相的选择。
熟悉平面色谱法分类，薄层色谱中薄层板的种类，薄层色谱操作步骤，显色方法，影响薄层色谱比移值的因素，面效参数与分离参数，定性、定量分析方法。
了解各种类型色谱的操作方法，薄层扫描法，高效薄层色谱法，应用与示例。
第二节 要点和难点（一）平面色谱的基本术语和公式1. 定性参数：比移值（R f ）与相对比移值（R r ）0f L L R = (s )(i )(s ) f (i ) f r L L R R R == 2.R f 与分配系数（K ）和保留因子（k ）的关系m s f 11V /KV R += f 11R k=+ 3.面效参数：理论塔板数（n ）与塔板高度（H ）2)(16WL n = n L H 0= 4.分离参数：分离度（R ）与分离数（SN ）)(2)()(2212112W W d W W L L R +=+-= 1)()(1210210-+=W W L SN（二）主要平面色谱类型色谱类型分离原理 载体 固定相 流动相 R f 顺序 吸附薄层色谱吸附 硅胶 有机溶剂 极性小的R f 值大 正相薄层色谱分配 硅胶 水 有机溶剂 极性小的R f 值大 反相薄层色谱分配 硅胶 硅胶键合相 水-有机溶剂 极性小的R f 值小 纸色谱 分配 滤纸 水 水-有机溶剂 极性小的R f 值大（三）吸附薄层色谱条件的选择被测组分的极性大，吸附剂的活度小，流动相极性大；被测组分的极性小，吸附剂的活度大，流动相极性小。
平面色谱法全解课件
土壤污染物检测案例展示
1 2
案例一
某农田土壤中农药残留的分离与测定
采样方法
使用不锈钢钻头采集农田土壤
分离方法
3
硅胶柱色谱分离
土壤污染物检测案例展示
01
测定方法
GC-MS检测
02
结果
成功分离和测定了农田土壤中的农药残留，包括有机氯农药、有机磷农
药等
03
案例二
某工业区土壤中重金属的分离与测定
土壤污染物检测案例展示
点样、展开与显色
点样
用毛细管或点样器将样品开剂进行展开，使各组分分离 。
显色
对于需要显色的组分，可以采用显 色剂进行显色，以便观察和测量。
03
平面色谱法分离原理与影响
因素
分离原理介绍
平面色谱法是一种基于不同物质在固 定相和流动相之间分配平衡的差异， 实现物质分离的物理化学方法。
药物杂质检查案例展示
案例一
采用薄层色谱法对某中成药中的有关 物质进行检查。通过制备薄层板、点 样、展开、显色等步骤，对有关物质 进行定性鉴别和限量检查，从而对该 中成药的质量进行控制。
案例二
采用高效液相色谱法对某化学药中的 有关物质进行检查。通过色谱柱分离 、检测器检测等步骤，对有关物质进 行定性鉴别和限量检查，从而对该化 学药的质量进行控制。
原理
基于不同物质在固定相和流动相 之间的分配平衡，在流动相推动 下，不同物质在固定相上的移动 速度不同，从而实现分离。
发展历程与现状
发展历程
平面色谱法自20世纪初诞生以来， 经历了近百年的发展，逐渐成为一种 成熟的分离技术。
现状
目前，平面色谱法在多个领域得到广 泛应用，如医药、食品、环保等。随 着科技的不断进步，平面色谱法也在 不断创新和完善。
分析化学-平面色谱法
有机污染物和农药残留。Fra bibliotek土壤污染物分析
平面色谱法可用于分析土壤中 的有害物质，如农药残留、重
金属和多环芳烃。
在其他领域的应用
生物样品分析
平面色谱法可用于分离和检测生物样品中的化合物，如氨基酸、肽类和蛋白质。
化妆品成分分析
通过平面色谱法可分析化妆品中的成分，以确保产品的安全性和有效性。
药物成分分离
平面色谱法可用于分离药物中的 不同成分，如有效成分、杂质和 降解产物。
药物质量控制
通过平面色谱法对药物进行定性、 定量分析，可确保药物的质量和 安全性。
药物代谢研究
平面色谱法可用于研究药物的代 谢过程，了解药物在体内的变化 和转化。
在食品分析中的应用
食品添加剂检测
01
平面色谱法可用于检测食品中的添加剂，如防腐剂、色素和抗
在1903年和1944年被发明。
发展历程
随着材料科学和制备技术的进步， 平面色谱法的固定相和分离介质不 断得到改进和发展，提高了分离效 果和灵敏度。
未来展望
随着分析化学和生命科学领域的需 求不断增长，平面色谱法在微型化、 自动化和智能化方面仍有很大的发 展空间。
02 平面色谱法的原理
分离原理
分配原理
自动化进样系统
开发自动化的进样装置，实现平面色谱法的连续进样和自动检测， 提高分析通量和效率。
在线样品处理与进样
将样品预处理与平面色谱法联用，简化样品前处理过程，降低人为误 差和提高分析结果的可靠性。
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快速色谱
通过优化分离介质和流动相，缩短分离时间和提高分离效率，适 用于对时间敏感的样品分析。
平面色谱法
（四）分离参数：
1、分离度（resolution; R）：
R 2(L2 L1) /(W1 W2 )
2d /(W1 W 2)
平
d
面 色
谱
A
B
分
离
度
F
的
W1
W2
示
X
d
意 图
2、分离数：SN 定义：相邻斑点分离度为1.177时，在Rf=0 和
Rf=1两种斑点之间能容纳的色谱斑点数。（一板为 10， 高效可达20）
SN L0 /(b0 b1) 1
第二节 薄层色谱法 (TLC) 一、薄层色谱法 的主要类型 （一）吸附薄层色谱法 固定相为吸附剂的薄层色谱法 （二）分配薄层色谱法 各组份的K在固定相与流动相中不等
二、吸附薄层色谱的吸附剂和展开剂 （一）吸附剂 1、硅胶 2、氧化铝
表 硅胶的活度与含水量的关系
（二）相平衡参数 K、к与Rf 值的关系
R' 1 1 k
Rf
1
1 KVs / Vm
（三）面效参数：
1、理论塔板数（number of theoretical plate; n）：
n 16(L /W )2
2、塔板高度（height of theoretical plate; H）：
H L0 / n
第三节 纸色谱法 一、纸色谱法的分离原理 二、纸色谱法的实验条件
1、色谱纸的选择 2、固定相 3、展开剂的选择
Hale Waihona Puke 1、比移值(retardation facter;Rf)：是溶质移动距离 与流动相移动距离之比。
前沿
L0
原点
展 开 溶 剂
B A
L1
Rf
平面色谱法
二、吸附薄层色谱的吸附剂和展开剂
吸附剂
硅胶：多孔性微粒，表面带有硅醇基， 呈弱酸性。 原理：硅醇基(吸附中心)与极性基团 形成氢键（吸附性）。 组分与硅醇基形成氢键（被吸附） 的能力不同而分离。 应用：酸性和中性物质的分离，如 有机酸酚类、醛类等
硅胶
活度与含水量的关系：含水量高，活性级高， 活度低。 活化：加热至100℃左右，除去吸附水提高 活度。（注意温度不可过高） 分离效率：与其粒度、孔径及表面积等有关。
第二节 平面色谱法
在平面上进行分离的一种色谱方法， 主要包括薄层色谱法和纸色谱法。
纸色谱法(PC) 薄层色谱法(TLC)
第一节
平面色谱法的分类和原理
分类
薄层色谱法：
吸附薄层色谱法 分配薄层色谱法 分子排阻薄层色谱法
离子交换
纸色谱法:分配
薄层电泳法
平面色谱法参数
定性参数 相平衡参数 面效参数 分离参数
b. 硬板的制备 硬板即粘合薄层，即在吸附剂中加入粘合剂。常 用的粘合剂有羧甲基纤维素钠（CMC-Na)和煅石膏 (CaSO4· 1/2H2O)。
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硅胶- CMC-Na板制备：取CMC-Na7.5g加 1000mL水，加热使溶解，放置使澄清。取上 清液100mL，分次加入硅胶约33g，调成糊状
所以Rf值与K之间关系可用下式表示：
a
b
c
Rf =
1
起始线 A
Vs Vm
B
1+k
Rf值的测量示意图
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定性参数2
相对比移值(relative Rf；Rr)
Rr = Rf (i)/Rf (s)=L(i)/L(s)
分析化学要用化学基础第十三章平面色谱法
三、操作方法 3.展开 ➢ 展开剂不与被测组分发生化学反应； ➢ Rf值要求在0.3~0.8之间，Rf值之间应相差0.05以上； ➢ 易于获得边缘整齐的圆形斑点； ➢ 尽可能不用高沸点溶剂做展开剂，便于干燥。
三、操作方法 4.显色
➢ 紫外灯显色 ➢ 显色剂喷洒 ➢ 压板法 ➢ 侧吮法
四、操作条件 1.吸附剂的选择
➢ 硅胶 硅胶H、硅胶G、硅胶HF254
四、操作条件 2.展开剂的选择
➢ 分离中各斑点的Rf值要求在0.3~0.8之间，Rf值之间应相差0.05 以上；
➢ 如果做碱性物质分离时，在展开剂中可适当加入碱性溶剂， 如氨水或吡啶等；如分离酸性物质时，可在展开剂中适当加 入酸性溶剂如乙酸、甲酸等。
五、定性和定量 1.定性 ➢ 薄层色谱定性分析的依据是：在固定的色谱条件下，相同 物质的Rf值相同。
茚三酮(0.3g茚三酮溶于100ml醋 酸)80℃加热，呈红色斑点
三、操作方法 2.展开
➢ 上行展开法 ➢ 下行展开法 ➢ 双向展开法 ➢ 辐射水平展开法
三、操作方法
3.显色 ➢ 展开完毕后，取出滤纸，在展开剂到达的前沿用铅笔轻轻划
一记号，在室内晾干，即可观察到色斑，然后在紫外灯下观 察荧光斑点，标出位置、大小，并记录颜色及强度。 ➢ 如某些组分既不显色斑，又不显荧光，则可根据组分的特性 反应，喷洒合适的显色剂，使色谱斑点显色。 ➢ 需要加热后才能显色的则可用烘箱或电吹风加热。
二、仪器与材料 2.点样器
➢ 常用点样器：具有支架的微量注射器（平口）或定量毛细管 （无毛刺）；
➢ 点样位置正确、集中。
二、仪器与材料
3.色谱滤纸
➢ 质地均匀平整，具有一定机械强度，不含影响展开效果的 杂质；