苏木素伊红混合染色液(一步法)
苏木素伊红染色实验流程
苏木素伊红染色实验流程
选材料，这可得仔细挑。
咱们得找那些合适的组织标本，才能
进行后面的实验。
挑好后，咱们就得处理它们了，让它们的形态和
结构固定下来，这样才能看得更清楚。
染色啦！首先，咱们得把标本泡进苏木素染料里，这样细胞核
就能染上漂亮的蓝色。
等它们吸饱染料后，咱们再用水洗一洗，去
掉多余的染料，让细胞核的颜色更均匀。
接下来，就是给细胞质上色了。
这时候，咱们用伊红染料，把
细胞质染成红色。
跟蓝色的细胞核一对比，特别明显！染完色，再
洗一洗，去掉多余的染料，标本就准备好了。
最后一步，封片！咱们把标本固定在玻璃片上，再盖上一层薄
薄的封片剂，这样，细胞的样子就被永久地保存下来了。
以后想看，直接在显微镜下瞅一眼就行！
整个实验过程得特别小心，每个步骤都不能马虎。
只有这样，
咱们才能看到清晰、准确的染色效果，为医学研究提供有用的帮助。
常用染色步骤HE,马松,糖原
常用染色步骤HE,马松,糖原联系人:周昌斌137******** 133********苏木素伊红染色液一.苏木素伊红染色液套装组合:Harris苏木素染色液50ml水溶性伊红染色液50ml苏木素染色分化液50ml苏木素染色返兰液50ml概述:苏木素伊红染色是组织病理学经典的常规染色方法,历经上百年的应用历史至今仍无可替代。
因此,苏木素伊红染色是病理切片制作中极为重要的技术环节。
二.染色方法:1. 切片脱蜡二甲苯I 5分钟,2. 切片脱蜡二甲苯II 5分钟,3. 100%1、100%2、95%1、95%2、70%梯度乙醇各30,秒钟,4. 自来水流水冲洗1分钟,5. 苏木素染色5—8分钟(依染液新旧调整染色时间),6. 自来水流水冲洗1分钟,7. 进入分化液分化数秒钟,8. 自来水流水冲洗1分钟,9. 进入返兰液处理5—10秒钟,10. 自来水流水冲洗2分钟,11. 进入伊红染色液1-3分钟,12. 自来水冲洗30—60秒钟,13. 75%I、75%II乙醇脱水分色各10秒钟,14. 95%乙醇1、95%乙醇2各脱水10秒钟,15. 100%乙醇1、100%2脱水30-60秒钟,16. 二甲苯1、二甲苯2透明各1分钟,17. 中性树胶封固。
三.染色技术要点:苏木素染色液在静止由于时染液表面于空气中的氧分子接触极液体代表面水分蒸发会产生氧化作用并形成氧化膜。
因此,在使用前应使用滤纸吸附去除氧化膜以免污染切片。
一般情况下应建立良好的使用习惯,每隔2~3天将苏木素染液彻底过滤一次。
为保证HE切片的恒定染色质量建议每500ml苏木素染色液染1200~1500张切片为宜。
苏木素染色液在用于免疫组织化学染色的的复染时应注意调控染色时间,核染色过浅不易辨识组织结构而核染色过深则喧宾夺主,一般复染的时间应控在10-30秒以内。
此外,复染后的分化和返兰步骤不应省略否则将造成整张切片呈淡蓝色,使DAB呈现土黄色。
分化和返兰步骤是HE染色关键点,应在染色实践中依据分化液和返兰液的新旧调整分化和返兰的处理时间。
苏木素伊红混合染色液(一步法)
苏木素伊红混合染色液(一步法)简介：苏木素(Hematoxylin)和伊红(Eosin)联合染色，简称HE染色，是病理学常规制片中最基本的染色方法，应用极其广泛。
苏木精是从原产中南美的洋苏木中提取出来的浅黄褐色的结晶，是一种碱性染色剂，它在被氧化后生成苏木素，同媒染剂(常用的是三价的铝或盐铁)一起使用，能够使细胞核染色。
在病理诊断、教学和科研工作中，常用HE染色对正常组织和病变组织进行形态结构观察。
在HE染色的组织切片中，细胞核呈蓝色，细胞浆呈红色，二者形成鲜明的对比，易于观察分析。
Leagene苏木素伊红混合染色液是把苏木素和伊红混合在一起，只需对细胞、组织等样本染色一次，既能使苏木素上色亦可使伊红上色的新型染色液，可用于染色样本的类型有石蜡切片、冰冻切片、血液涂片、培养细胞以及体液涂片(如宫颈粘液涂片、脑脊液涂片等)等，本产品尤其适用于血液涂片和体液涂片染色。
染色原理：1、细胞核染色的原理：苏木素为碱性天然染料，可使细胞核着色。
细胞核内染色质的成分主要是DNA，在DNA 双螺旋结构中，两条核苷酸链上的磷酸基向外，使DNA双螺旋的外侧带负电荷，呈酸性，很容易与带正电荷的苏木素碱性染料以离子键或氢键结合而被染色。
苏木素在碱性溶液中呈蓝色，所以细胞核被染成蓝色。
2、细胞浆染色的原理：伊红是一种化学合成的酸性染料，在一定条件下可使细胞浆着色。
细胞浆的主要成分是蛋白质，为两性化合物，细胞浆的染色与染液的pH值密切相关。
当染色液pH值在胞浆蛋白质等电点(4.7～5.0)以下时，胞浆蛋白质以碱式电离，则细胞浆带正电荷，就可被带负电荷的酸性染料染色。
伊红在水中离解成带负电荷的阴离子，与胞浆蛋白质带正电荷的阳离子结合，使细胞浆着色，呈现红色。
3、分化作用：染色后，用某些特定的溶液将组织过多结合的染色剂脱去，这个过程称为分化作用，所用的溶液称为分化液。
在HE染色中常用盐酸乙醇作为分化液，因酸能破坏苏木素的醌型结构，使组织与色素分离而退色。
(仅供参考)苏木素伊红染色液说明书
苏木素-伊红染色液（H-E）说明书【产品名称】苏木素-伊红染色液（H-E）H&E Staining System【产品编号】HE-500ml,HE-1000ml,HE-2500ml【包装规格】苏木素染色液500ml、1000ml2500ml；伊红染色液500ml、1000ml 2500ml；返蓝染色液500ml、1000ml2500ml。
【预期用途】主要用于对细胞组织进行染色。
【检验原理】苏木素-伊红染色液（H-E）由3部分组成：苏木素染色液、伊红染色液和返蓝染色液。
苏木素氧化后与金属媒染剂作用，可形成不可替代的细胞核颜料。
带有正电荷的苏木素-金属媒染剂复合体，易与细胞核内DNA上带负电荷的磷酸基团结合，因而使细胞核染色形成特定的蓝色。
伊红染色液是一种广泛用于组织学染色中与苏木素染色形成对比的染料（HE染色法）。
此染色法可观察到清晰的细胞结构。
样本中细胞核可经苏木素染色呈蓝色，细胞质经伊红染色呈粉红色。
伊红是一种阴离子染料，可将红细胞染成亮红色，同样也可对其他基本的细胞组分（细胞质，胶原及肌纤维）进行染色。
返蓝染色液为组织学染色试剂，可替代水洗，快速使核染色质和核膜显现蓝色。
由于其坚硬度和碱性，水冲洗后改变苏木素染核后的颜色。
使用BioGnost 返蓝染色液，粘附在玻片上的样本不会发生像使用其他返蓝染色液时发生降解。
【主要组成成分】苏木素：乙二醇、苏木素、碘酸钠、硫酸铝；伊红：伊红、乙醇；返蓝染色液：碳酸锂。
【储存条件及有效期】保证产品包装完整的情况下，储存温度在+15°C和+25°C 之间。
保持储存环境干燥，不要放置于寒冷的环境中，不要冷冻产品，避免直接阳光直射。
产品使用效期为2年，具体效期见标签。
【适用仪器】不适用【样本要求】使用合适的设备仪器收集组织样本，并标记清楚，根据操作说明进行实验。
为避免发生错误，染色及诊断过程最好由具相关专业知识的技术人员操作。
根据标准医疗诊断实验室标准镜检诊断。
石蜡切片(苏木精-伊红对染法)
石蜡切片制作(苏木精-伊红对染法)实验原理：石蜡切片是最基本的切片技术，冰冻切片和超薄切片等都是在石蜡切片基础上发展起来的。
苏木素与伊红对比染色法（简称H.E.对染法）是组织切片最常用的染色方法。
这种方法适用范围广泛，对组织细胞的各种成分都可着色，便于全面观察组织构造，而且适用于各种固定液固定的材料，染色后不易褪色可长期保存。
经过HE染色，细胞核被苏木素染成蓝紫色，细胞质被伊红染色呈粉红色。
一、器材及试剂：1. 器材：切片刀，切片机，恒温箱，蜡杯，酒精灯，解剖刀，解剖剪，解剖盘，培养皿，镊子，单面刀片，毛笔，包埋盒，染色缸，盖玻片，载玻片，玻片盘，树胶，树胶瓶，显微镜，温度计，脸盆，水浴锅。
切片机，切片刀，温台，恒温箱，解剖刀，镊子，剪刀，解剖针，单面刀片，小台木，洒精灯，包埋纸盒，染色缸，烧杯，水盆，熔蜡炉，蜡杯。
2．试剂：中性福尔马林固定液、各种浓度的酒精、二甲苯、石蜡、蜂蜡、苏木精染液，1%伊红酒精溶液，1%盐酸酒精溶液，甘油蛋白粘片剂，中性树胶。
卡诺（Carnoy）固定液，埃利希苏木精染液，1%伊红酒精溶液，1%盐酸乙醇液，各级酒精（30%、50%、70%、80%、90%、95%、100%），二甲苯，甘油蛋白粘片剂，中性树胶。
3. 材料：鼠肝、肾、心肌、骨骼肌或其他组织、大豆或小麦、绿豆、洋葱、大蒜、蚕豆的根、茎、叶等。
二、实验原理：石蜡切片是最基本的切片技术，冰冻切片和超薄切片等都是在石蜡切片基础上发展起来的。
苏木素与伊红对比染色法（简称H.E.对染法）是组织切片最常用的染色方法。
这种方法适用范围广泛，对组织细胞的各种成分都可着色，便于全面观察组织构造，而且适用于各种固定液固定的材料，染色后不易褪色可长期保存。
经过HE染色，细胞核被苏木素染成蓝紫色，细胞质被伊红染色呈粉红色。
三、试剂配法：1．中性甲醛固定液：甲醛（37%-40%，市售，本所购买即为此浓度）100mL磷酸氢二钠 6.5磷酸二氢钾（钠）4g双蒸水900mL2．苏木精、伊红染色液为碧云天产品3．1%盐酸乙醇液盐酸1份70%酒精100份4．甘油蛋白贴片剂：蛋白50 ml甘油50 ml水杨酸钠（防腐剂）1g配制时将鸡蛋一个打破入碗或杯中，去蛋黄留下蛋白，用玻棒调打成雪花状泡沫，然后用粗纸或双层纱布过滤到量筒中，经数小时或一夜，即可滤出透明蛋白液。
苏木素-伊红染色切片褪色的解决办法
（ 稿 日期 ：０ ０ ０ — ２ 收 ２ １－ ６ ０ ）
有机溶剂， 与水互不相溶， 因此需要借助乙醇使组织切片从无
水状态进入到 乙醇 中进行染色反应Ｉ ④放人 １０ 。 】 。 ０ ％乙醇 Ⅱ ５
ｍｎ ⑤放人 ９％乙醇 ５ｍｎ再放入 ８％ ７％７醇各 ５ｍｎ ｉ。 ５ ｉ， ０ 、０ － － ， ｉ，
水水洗是洗去未与组织 结合 的染液 ，将切片表面的浮色洗干
１～ ４ ， ２２ 盖玻片 自 ｈ 动脱落。②将带有组织的盖玻片用镊子整
齐地夹放在染 色架 ， 泡入二 甲苯 Ⅱ溶液 以浸过盖玻 片为宜 ， 时
间 ３ ～ ５ｍ ｎ 洗净黏附在组织上的 中性树胶 吸水 纸吸干 Ｏ ４ ｉ， 用 液体 。③放入 １０ ０ ％乙醇 Ｉ ｎ 由于二 甲苯属于非水性 的 ５ｍｉ，
不易脱落 ， 将其浸泡在二甲苯 Ｉ 溶液时 ， 放人 ３ ～ Ｏ℃烤箱内 ７４
陈旧褪色的石蜡切 片重染方法 ，通常都采 用酸性高锰 酸
钾氧化 、 酸氧化 漂白还原 法日 １ ％冰醋酸１ 高锰酸钾 、 草 和 ０ ３ ］ ， 草 酸氧化漂 白还原法会使组织略带 酸性 ， 破坏组 织正 常结构 ， 形 成空洞和脱落。１ ％冰醋酸脱色法通常需要 ２ ３ｂ作用 时间 ０ － ， 长， 不易掌握 。 笔者 经过 反复试 验证 明 Ｈ Ｅ染色 ，％盐 酸 乙醇分 色 和 １ １ ％氨水 溶液返蓝 ， 重染着色效 果理想 ， 苏木 素染 色后的 自来
３ 章克萍 ， 龙飞． 组织苏木素 一 伊红染 色的石蜡切片褪色后 还原 对 比染色 ． 实用临床医学 ， ０ ８ １ ９ ： ６ ２ ０ ， （ ） １．
来水流水 冲洗 １～ ０ ｉ。 ０２ ｎ ⑩蒸馏水过洗 １２ 。 ｍ ⑩放入 ８％、 ｓ ０ ７％乙醇各 ５ ｉ ⑩ ０ ％ ０ ｎ ｍ 。 ． 伊红乙醇溶液 ３５ ｉ ５ ￣ ｎ ｍ 伊红乙醇
小实验之苏木精伊红染色实验（HE）
小实验之苏木精伊红染色实验（HE）今天小笔为大家带来的是个小小的实验，虽然小，而且很多时候采用自动染色机能帮你实现，但是，原理及试剂的配置仍然是学习的要点哦，小白们还是要搞搞清楚哒~~~~所以，这主要是一篇戳原理的推文，嘿嘿原理H&E (hematoxylin-eosin staining)染色是较为成熟的实验技术，应用广泛，是组织学及病理学检查的基本方法。
针对的是石蜡切片的样本（注意哦，有的小伙伴会用冰冻切片的片子去做，这是不好的！因为冰冻切片一般较厚，会使得染色结果不能够判断，太厚了啦）苏木精染料呈碱性，能够把细胞核内染色质与胞浆内的核酸（称为嗜碱性部分）染为蓝紫色；而伊红为酸性的染料，能将嗜酸性部分比如细胞质核细胞外基质中的成分染为红色。
细胞核内DNA很容易与苏木精以离子键结合，使得细胞核被染为蓝色。
伊红在水中电离后带阴离子，可以与蛋白质结合，使得比如细胞浆、红细胞、结缔组织等染红色。
通过苏木精染色处理后，再利用伊红染胞浆，从而使得各组分呈现出鲜明的对比色，从而可以明确的看出各种组织的病变。
步骤1. 试剂配置：哈瑞（Harris）苏木素液A液：苏木素1 g 无水酒精10 mlB液：硫酸铝钾20 g 纯净水200 ml配制方法：称取KAlSO4·12 H2O 36.72 g及苏木素1 g，分别溶解后混合，加热煮沸后，徐徐加入红色氧化汞0.5 g，此时有大量气泡产生（故容器宜大，以防液体溢出），然后将染液迅速冷却，冷却后过滤。
每100 ml加入冰醋酸6 ml，并加入甘油（丙三醇）10 ml。
混匀后即可使用。
2. 染色步骤：1）取组织的石蜡切片，二甲苯脱蜡，经乙醇逐步脱水：二甲苯（I）5 min；二甲苯（II）5 min; 100％乙醇2 min；95％的乙醇1 min；80％乙醇1 min；75％乙醇1min；蒸馏水洗2 min （各两次，然后把水吸干）。
2）苏木素染色5 min，自来水冲洗（吸干水）。
苏木精-伊红染色使用说明
苏木精-伊红染色使用说明【试剂配制】苏木精染液苏木精配方很多，现介绍常用的是Harris苏木精染液。
苏木精1g95％乙醇溶液10ml钾矾或铵矾20g蒸馏水200ml氧化汞0.5g冰醋酸8.0ml先将苏木精溶于乙醇溶液。
钾矾加温溶解烧瓶后，将倒入，继续加热1min。
加热停止后，缓慢加入氧化汞0．5g，再继续加热煮沸1min。
迅速将烧瓶移人冰水内。
染液冷却呈深色时，加冰醋酸过滤后即可使用。
棕色磨口瓶保存。
室温保存2个月，4℃保存4个月左右。
1.0％伊红染液将1.0g水溶性伊红溶100ml蒸馏水中，每100ml伊红液中加0.2ml冰醋酸。
【实验步骤】(1)石蜡片经脱蜡、水化，单层细胞片经漂洗固定。
(2)苏木素染液染5～10min(染色时间与温度、染液成熟度有关)。
(3)自来水换数次，标本转为深蓝色。
(4)分色：浸入1％稀盐酸乙醇液(100ml 75％乙醇溶液中加1d盐酸)分色数秒钟至1min，脱去多余的蓝浮色，标本转为淡紫红色镜下呈紫红色，胞质无色或灰蓝色(后者为幼稚细胞)。
(5)蓝化：自来水浸洗10min或数小时，甚至更长，标本从淡紫红色转为鲜艳的浅蓝色。
注意：为缩短自来水浸洗时间，使苏木素更加显色，可将标本置淡氨水溶液(400ml自来水加氨水2滴)中10min，切片很快呈鲜艳的浅蓝色，经此处理的标本，要经自来水充分浸洗，否则会影响伊红染色。
(6)蒸馏水漂洗。
(7)伊红染液5～10min，进行对比染色。
(8)用蒸馏水洗去玻片的浮色,经70％、80％、90％梯度乙醇溶液脱水各一次，再分别经95％、100％乙醇溶液脱水各两次，每次1min。
(9)浸入二甲苯两次，每次1min。
中性树胶封片【注意事项】(1)Harris苏木精染液即配即用，不能久存，宜少量配用。
(2)HE染色时，除大批标本采取浸染外，一般以滴染为好。
染液反复使用而被水稀释,使特异性染色和染色速度下降。
(3)苏木精染液出现沉淀现象，是染液变质的一种指示，但滤液仍可使用一段时间。
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苏木素伊红混合染色液(一步法)
货号：G4520
规格：100ml/500ml
保存：RT避光，12个月有效。
产品说明：
苏木素(Hematoxylin)和伊红(Eosin)联合染色，简称HE染色，是病理学常规制片中最基本的染色方法，应用极其广泛。
苏木精是从原产中南美的洋苏木中提取出来的浅黄褐色的结晶，是一种碱性染色剂，它在被氧化后生成苏木素，同媒染剂(常用的是三价的铝或盐铁)一起使用，能够使细胞核染色。
在病理诊断、教学和科研工作中，常用HE染色对正常组织和病变组织进行形态结构观察。
在HE染色的组织切片中，细胞核呈蓝色，细胞浆呈红色，二者形成鲜明的对比，易于观察分析。
苏木素伊红混合染色液是把苏木素和伊红混合在一起，只需对细胞、组织等样本染色一次，既能使苏木素上色亦可使伊红上色的新型染色液，可用于染色样本的类型有石蜡切片、冰冻切片、血液涂片、培养细胞以及体液涂片(如宫颈粘液涂片、脑脊液涂片等)等，本产品尤其适用于血液涂片和体液涂片染色。
自备材料：
1.盐酸乙醇分化液
2.蓝化液，如稀氨水、碳酸锂溶液等
3.系列乙醇
操作步骤(仅供参考)：
1.切片预处理：取血液涂片或体液涂片置于95%乙醇固定20-60s，用蒸馏水水洗10s。
2.苏木素伊红混合染色液滴染0.5~2min。
3.水洗10~20s。
4.用0.2%盐酸乙醇分化10s，水洗10s。
5.用0.1%碳酸锂水溶液返蓝10s，水洗10s。
6.封片，光学显微镜下观察、拍照。
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染色结果：
细胞核蓝色
细胞质红色
注意事项：
1.切片脱蜡应尽量干净。
系列乙醇应经常更换新液。
2.盐酸乙醇分化时间应根据细胞涂片的具体情况而定。
3.蓝化液常使用0.2～1%氨水或Scott促蓝液或0.1～1%碳酸锂溶液。
4.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
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