伊红染色液溶液的配制方法
常用染色液的配制
一、常用染色液的配制⒈碘—碘化钾（I2-KI）溶液能将淀粉染成蓝紫色，蛋白质染成黄色，也是植物组织化学测定的重要试剂.配方:碘化钾2g ;蒸馏水300ml ；碘1g先将碘化钾溶于少量蒸馏水中，待全溶解后再加碘，振荡溶解后稀释至300mL，保存在棕色玻璃瓶内.用时可将其稀释2—10倍,这样染色不致过深，效果更佳。
⒉苏丹Ⅲ(sudanⅢ或Ⅳ)能使木栓化、角质化的细胞壁及脂肪、挥发油、树脂等染成红色或淡红色，是著名的脂肪染色剂。
配方：（1)苏丹III或苏丹Ⅳ干粉；95％酒精10ml ；过滤后再加入10ml甘油（2)先将苏丹III或IV溶解在50ml丙酮中，再加入70％酒精50ml.（3）苏丹III 70%乙醇的饱和溶液.⒊1％醋酸洋红（aceto carmine）酸性染料，适用于压碎涂抹制片，能使染色体染成深红色,细胞质成浅红色。
配方：洋红1g ；45％醋酸100ml煮沸2h左右，并随时注意补充加入蒸馏水到原含量，然后冷却过滤，加入4％铁明矾溶液1～2滴（不能多加，否则会发生沉淀)，放入棕色瓶中备用.⒋改良苯芬品红染色液（Carbol fuchsine) 核染色剂。
配制步骤：先配成三种原液，再配成染色液。
原液A:3g碱性品红溶于100ml 70％酒精中。
原液B：取原液A10ml加入到90ml 5％石炭酸水溶液中。
原液C：取原液B 55ml，加入6ml冰醋酸和6ml福尔马林（38％的甲醛）.（原液A和原液C可长期保存，原液B限两周内使用）染色液：取C液10～20ml，加45％冰醋酸80～90ml，再加山梨醇1～，配成10％～20％浓度的石炭酸品红液，放置两周后使用，效果显著(若立即用，则着色能力差）。
适用范围：适用于植物组织压片法和涂片法，染色体着色深，保存性好，使用2～3年不变质。
山梨醇为助渗剂，兼有稳定染色液的作用,假如没有山梨醇也能染色，但效果较差。
⒌中性红(neutral red)溶液用于染细胞中的液泡,可鉴定细胞死活。
冰冻切片染色步骤
冰冻切片染色的步骤如下：
冰冻切片染色的步骤如下：
1.配制染色液和分化液。
根据所需的染色效果，配制染色液和分化液。
例如，
伊红染色液的配方是在95%乙醇100ml中加入1g伊红，玻璃棒搅拌均匀；
1%盐酸酒精分化液的配方是36%-38%的盐酸1ml加入75%乙醇99ml中混匀。
2.将切片放入苏木精染液中染色一定时间，根据实际需要决定染色时间。
3.自来水洗去浮色。
4.进入分化液进行分化处理。
5.自来水冲洗半小时以上，使切片蓝化。
6.过滤后加入伊红染色液染色一定时间。
7.再次自来水洗去浮色。
8.加入伊红染色液染色一定时间，使切片呈现出所需的染色效果。
9.最后进行脱水、透明、封片等处理，完成染色过程。
请注意，在进行冰冻切片染色时，应调整试剂和制片过程中各步骤的时间，所制冰冻切片应染色鲜明，结构清晰。
HE染色基本流程
HE（Hematoxylin & Eosin）染色基本流程苏木精—伊红染色法简称HE染色法，它是最常用的普通染色方法。
苏木精是阳离子染料，将细胞核内的嗜碱性物质染成蓝紫色。
伊红是阴离子染料，将细胞质和胶原纤维等染成粉红色。
1、二甲苯脱蜡三道，每道30min2、无水乙醇两道，每道5min3、95%乙醇两道，每道5min4、80%乙醇5min5、70%乙醇5min6、50%乙醇5min7、蒸馏水3-5min8、苏木素染色液5-10min，根据染色结果和气温调整时间9、浸自来水冲洗多余的染色液10、0.5%盐酸酒精分色（70%酒精配制）3-10seconds11、水洗蓝化15-30min12、50%乙醇5min13、70%乙醇5min14、80%乙醇5min15、伊红染色液（95%乙醇配制）60seconds16、95%乙醇两道，每道5min17、无水乙醇两道，每道5min18、乙醇+二甲苯（1:1）5min19、二甲苯三道，每道5min20、中性树胶封片HE染色注意事项：1. 染色时调节pH值很重要。
如果组织块在福尔马林中固定时间长，组织酸化而影响细胞核着色。
因此，自来水中冲洗时间要长一些或在饱和碳酸锂水溶液中处理10-30min，这样可以使细胞核着色较深。
染伊红时胞浆着色不佳，可在伊红溶液中滴加1-2滴冰醋酸。
2. 切片染苏木精后，分色这一步是关键，应在显微镜下控制进行，一般以细胞核染色清楚（晰）而细胞质基本无色为佳。
如果过分延长分色时间将导致染色太浅，应重新染色后再行分色。
3. 切片经酒精脱水后，入二甲苯时可出现白色不透明状态，此为脱水不彻底，应将切片退回无水酒精，更换酒精、二甲苯，以求彻底脱水与透明。
4. 在染色过程中不要让切片干燥，以免切片收缩、变形，影响神经元形态。
5. 切片从二甲苯取出或进入二甲苯前，切片周边均应擦干净或吸干多余水分。
6. 最后封固时，要用中性树脂，防止日后褪色，盖片要选大于组织块的面积，如漏出一部分不久将会褪色，所用树脂浓度要适当，树脂封固时不能有气泡。
常用染色剂及配制
常用染色剂及配制常用染色剂及配制供组织学诊断用的优秀常规染色剂，不仅须使细胞核和细胞浆有选择性着染，也要使结缔组织着色。
苏木素-伊红染色的切片适当分色，可使这些结构得以区分，胞核表现为蓝色，胞浆和结缔组织纤维呈各种色调的粉红，因此这是一种最常用的常规染色剂。
一、苏木素-伊红染色的基本原理苏木素是最早用于生物学上的天然染色剂之一，百余年来，一直是生物学实验室最常用的组织学中细胞核的染料，它是从苏木树的树心中提炼出来的，为浅褐色结晶或淡黄褐色的粉末状物。
易溶于乙醇、甘油，也可溶于热水。
苏木素本身没有染色能力，它经过氧化后，能产生具有染色能力的苏木红，苏木红又称为氧化苏木素或苏木因。
苏木素变成苏木红的过程叫作“成熟”。
成熟的方法一般有两种：一种是把配制好的苏木素液在开口瓶中放置两个月以上，让其在日光和空气中的氧的作用下使之氧化。
故一般地盛苏木素的瓶子放在向阳处，时间愈长，染色的效果愈好。
常配制一大瓶，备长期使用。
另一种方法是在苏木素液中加入氧化剂，如磺酸钠，过锰酸钾，氧化汞，双氧水等。
用这种方法成熟与用第一种方法者不同的是，它放置时间愈长，染色的效果愈低。
这是因为苏木红被继续氧化可生成无色的化合物，故一次不宜配制过多，还应放置40C冰箱内避光保存以延长使用时间。
它的优点是配制后即可使用。
成熟的苏木素对组织并无亲和力，须加入含金属离子的媒染剂，才能达到染色的目的。
一般用于明矾苏木素的媒染剂为钾明矾或氨明矾。
主要是利用明矾中的铝离子和苏木红结合形成的铝沉淀色素为紫蓝色，对染色质有很大的亲和力，水和酒精都不能使其褪色。
用于铁苏木素的媒染剂是三价铁离子，苏木红的铁沉淀色素为黑蓝色，不溶于水，因此，故不能配制大量含媒染剂的混合液，一般用时现配，或在染色过程中，先用铁明矾媒染，然后再染苏木素，如磷钨酸苏木素染色即是。
常规苏木素染色的对比染色是用伊红，也有采用焰红，因为焰红比伊红色泽更鲜明，此外还有采用橘黄G，比布里希猩红，波尔多红等作为对比染色。
伊红染色液(醇溶) 操作步骤及注意事项
伊红染色液(醇溶)操作步骤及注意事项规格：100ml/500ml货号：G1108保存：常温避光保存，有效期为1年。
产品说明：伊红(Eosin)又称曙红，属人工合成染料中的呫吨类染料，为桃红色或粉红色的粉末。
伊红(醇溶)分子式为C20H8Br4O5，分子量为649.9。
伊红最适宜不苏木精配合染色以显示正常或病理组织的形态结构。
伊红染色液(醇溶)采用特有防腐剂，操作简单，丌使用汞、甲醇等有毒试剂。
常用于组织切片或培养细胞的染色，染色后细胞浆呈粉红色或红色。
自备材料：系列乙醇、4%多聚甲醛操作说明：1、样品处理a)对于石蜡切片：1)二甲苯（I）中脱蜡5-10min。
2)换用新鲜的二甲苯（Ⅱ），再脱蜡5-10min。
3)无水乙醇5min。
4)90%乙醇2min。
5)70%乙醇2min。
6)蒸馏水2min。
b)对于冰冻切片：经固定的切片置蒸馏水2min。
c)对于培养细胞：①4%多聚甲醛固定10min以上，②蒸馏水洗涤2min，③换用新鲜的蒸馏水，再洗涤2min。
2、伊红染色对于上述处理好的样品，伊红染色液染色0.5-2min(根据染色结果和要求调整时间)。
如果需要直接观察，可以用70%乙醇洗涤2次。
如需脱水、透明后封片按后续步骤进行，70%乙醇洗涤后仍可按照后续步骤进行脱水、透明和封片处理。
注：如果用于免疫组化等染色后的复染，参考上述步骤在其它染色完成后进行伊红染色。
3、脱水、透明、封片或进行其它染色a)脱水、透明、封片：1)95%乙醇脱水2min。
2)更换新鲜的95%乙醇再脱水2min。
3)二甲苯透明5min。
4)更换新鲜的二甲苯，再透明5min。
5)用中性树胶或其它封片剂封片。
6)显微镜下观察，细胞浆呈粉红色或红色。
b)进行其它染色：如果进行免疫荧光染色或进行Hoechst等荧光染料的染色，在伊红染色液染色后：70％乙醇洗涤2次，每次2min。
PBS或生理盐水或TBS或TBST等用于免疫染色或荧光染料染色的溶液浸泡5min。
苏木素伊红(HE)染色试剂盒说明书
苏木素伊红(HE)染色试剂盒货号：AG1120规格：3×10ml/3×100ml保存：常温保存，复检期至少1年。
注意：环境温度低时，分化液可能会结晶析出，将分化液37℃水浴融化后即可，不影响使用。
产品说明：苏木精-伊红染色法(Hematoxylin-Eosin staining )，简称HE 染色法，是病理学常规制片中最基本的染色方法。
苏木精染液为碱性，主要使细胞核内的染色质与胞质内的核糖体着紫蓝色；伊红为酸性染料，主要使细胞质和细胞外基质中的成分着红色。
染色过程需要优化，着色情况与组织或细胞的种类有关，也随其生活周期及病理变化而改变。
例如，很多细胞在新生时期胞浆对伊红着色较淡或轻度嗜碱，当其衰老时或发生退行性变则呈现嗜伊红浓染。
胶原纤维在老化和出现透明变性时，伊红着色由浅变深。
本产品所包含试剂均为工作液，可直接使用。
操作说明（以下步骤仅供参考）：（一）石蜡组织切片染色。
1．取材组织块，经固定后，常规石蜡包埋，切片。
2．石蜡切片脱蜡水化：①二甲苯（I ）中脱蜡5min 。
②换用新鲜的二甲苯（Ⅱ），再脱蜡5min 。
③无水乙醇5min 。
④95%乙醇2min 。
⑤80％乙醇2min⑥70%乙醇2min 。
⑦蒸馏水2min 。
3．苏木素染液染色5-20min(具体时间根据染色结果和实验要求调整)，自来水冲洗。
4．分化液分化30s 。
5．自来水浸泡15min 或温水（约50℃）5min 。
6．置伊红染液几秒-2min(具体时间根据染色结果和实验要求调整)，自来水冲洗。
7．自来水浸泡1-2min 。
8．脱水，透明，封片：①95％乙醇（I ）1min②95％乙醇（Ⅱ）1min③100％乙醇（I ）1min 产品内容AG1120-10AG1120-100苏木素染液10ml 100ml 分化液10ml 100ml 伊红染液10ml 100mlShanghai Acmec Biochemical Co.,Ltd.Tel ：400-900-4166WEB ：④100％乙醇（Ⅱ）1min⑤二甲苯石炭酸（3：1）1min⑥二甲苯（I）1min⑦二甲苯（Ⅱ）1min⑧中性树胶封固，镜下观察。
(仅供参考)苏木素伊红染色液说明书
苏木素-伊红染色液（H-E）说明书【产品名称】苏木素-伊红染色液（H-E）H&E Staining System【产品编号】HE-500ml,HE-1000ml,HE-2500ml【包装规格】苏木素染色液500ml、1000ml2500ml；伊红染色液500ml、1000ml 2500ml；返蓝染色液500ml、1000ml2500ml。
【预期用途】主要用于对细胞组织进行染色。
【检验原理】苏木素-伊红染色液（H-E）由3部分组成：苏木素染色液、伊红染色液和返蓝染色液。
苏木素氧化后与金属媒染剂作用，可形成不可替代的细胞核颜料。
带有正电荷的苏木素-金属媒染剂复合体，易与细胞核内DNA上带负电荷的磷酸基团结合，因而使细胞核染色形成特定的蓝色。
伊红染色液是一种广泛用于组织学染色中与苏木素染色形成对比的染料（HE染色法）。
此染色法可观察到清晰的细胞结构。
样本中细胞核可经苏木素染色呈蓝色，细胞质经伊红染色呈粉红色。
伊红是一种阴离子染料，可将红细胞染成亮红色，同样也可对其他基本的细胞组分（细胞质，胶原及肌纤维）进行染色。
返蓝染色液为组织学染色试剂，可替代水洗，快速使核染色质和核膜显现蓝色。
由于其坚硬度和碱性，水冲洗后改变苏木素染核后的颜色。
使用BioGnost 返蓝染色液，粘附在玻片上的样本不会发生像使用其他返蓝染色液时发生降解。
【主要组成成分】苏木素：乙二醇、苏木素、碘酸钠、硫酸铝；伊红：伊红、乙醇；返蓝染色液：碳酸锂。
【储存条件及有效期】保证产品包装完整的情况下，储存温度在+15°C和+25°C 之间。
保持储存环境干燥，不要放置于寒冷的环境中，不要冷冻产品，避免直接阳光直射。
产品使用效期为2年，具体效期见标签。
【适用仪器】不适用【样本要求】使用合适的设备仪器收集组织样本，并标记清楚，根据操作说明进行实验。
为避免发生错误，染色及诊断过程最好由具相关专业知识的技术人员操作。
根据标准医疗诊断实验室标准镜检诊断。
伊红溶液配制方法__解释说明
伊红溶液配制方法解释说明1. 引言1.1 概述伊红溶液是一种常用的有机染料，在科学研究和实验操作中具有广泛的应用。
其配制方法的准确性和可重复性对于获得准确的结果至关重要。
本文将详细介绍伊红溶液的配制方法，包括材料准备、配制步骤以及需要注意的事项。
1.2 文章结构本文共分为5个章节：引言、伊红溶液配制方法、结果与讨论、应用与意义以及结论。
通过依次阐述这些内容，读者将能够全面了解伊红溶液配制方法及其在科学研究中的应用和意义。
1.3 目的本文旨在提供一个清晰明了的指导，使读者能够正确并有效地配制伊红溶液。
通过深入剖析实验结果和讨论影响因素，我们还希望揭示伊红溶液在某领域中的应用及对其他实验操作的启示和借鉴意义，并展望该领域未来对伊红溶液配制方法研究所能做出的贡献。
最终，通过总结要点，我们希望读者能够获得对伊红溶液配制方法的全面认识，并能够应用于实际科研工作中。
以上是文章“1. 引言”部分的详细内容。
2. 伊红溶液配制方法2.1 材料准备为了配制伊红溶液，我们需要以下材料：- 伊红固体粉末（一般为碳铁蓝或三环蓝）- 无水酒精或蒸馏水- 碱性溶液（如氨水或氢氧化钠溶液）- 醋酸乙酯或二甲苯2.2 配制步骤下面是伊红溶液的配制步骤：1. 量取适量的伊红固体粉末。
根据所需的浓度，可以使用天平准确称取所需的质量。
2. 将伊红固体粉末加入一个干燥的容器中。
3. 慢慢加入一定量的无水酒精或蒸馏水。
用玻璃棒轻轻搅拌混合，直到伊红完全溶解。
4. 在另一个容器中，配置一定浓度的碱性溶液。
5. 将步骤3中得到的伊红溶液倒入配置好的碱性溶液中。
注意要缓慢倾倒，同时用玻璃棒轻轻搅拌混合。
6. 继续搅拌溶液，直到获得均匀的颜色。
根据需要可以再次调整溶液的浓度。
2.3 注意事项在伊红溶液配制过程中，需要注意以下几点：- 配制过程中使用的容器和工具应干燥、清洁，以免杂质污染溶液。
- 每一步骤中加入的溶液量要适量，避免过多或不足导致浓度偏差。
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伊红染色液配制方法
溶液的配制方法如下：
华越洋伊红染色液：100ml
伊红染料配方较多在常规配方中，有的染色效果好，但操作较繁琐，且消耗较多试剂。
有的操作简单，但染色时间长，染液有效期短，常需加入冰醋酸，但加入剂量不易掌握，量少达不到促染作用，加入过多染液易沉淀，且引起色调不正，特别是容易褪色，染色结果不能长期保存。
为此，对伊红Y染色液配制进行了改进。
改进后的方法具有操作简便、经济、染色性质稳定、着色力强且持久颜色鲜艳等优点；
制备方法：伊红Y1G，蒸馏水90ML，苦味酸饱和水溶液10ML。
将蒸馏水加入伊红，待其全部溶解后，加入苦味酸饱和水溶液。
染色结果观察：染色时间0.5-1分钟。
伊红所着的颜色鲜艳，层次分明，与蓝色的细胞核对比突出。
伊红Y（四嗅荧光素二钠盐，分子式：C20-H6O5Br4NO2）是一种酸性红色胞浆性染料，室温下，在水中的溶解度度远大于在酒精中的溶解度。
它在溶液反应中，由于钠离子的存在而呈碱性状态。
苦味酸[分子式：（NO2）3C6HOH]是一种较强的酸性染料，它的颜色是由硝基发色团所致，染色性能是由羟基助色团产生的。
苦味酸具有三种作用：1本身是一种胞浆染料，具有染色作用。
2又是一种酸，加入伊红Y染色液中，使染色造成比胞浆等电点略为酸性的环境，抑制了部分氨基酸中羟基官能团，从而使氨基酸中氨基官能团和酸性染料结合，增加了染液与组织间的亲和力，起到促染作用。
3苦味酸又是一种氧化剂，在染色体中经过氧化物作用后，使染色剂与组织成份结合的更牢固。
组织着色鲜艳，染色后不易褪色，因而切片可长期保存。
华越洋伊红染色液操作简单，不使用汞、甲醇等有毒试剂，可以用于组织切片或培养细胞的染色。
本伊红染色液染色后细胞浆呈粉红色或红色。
本染色液可以和免疫荧光染色或免疫组化染色配合使用。
一方面可以在本伊红染色液染色后进行免疫荧光染色或其它染料的染色，另一方面也可以在免疫组化染色后再进行伊红复染。
本染色液可以重复使用，直至认为效果不佳时再换用新的染色液。
一个包装的本染色液至少可以染色200个样品。