苏木素-伊红染色液 一步法
HE(苏木素-伊红)染色试剂盒操作说明及注意事项
HE（苏木素-伊红）染色试剂盒操作说明及注意事项货号：G1120规格：3×10ml/3×100ml保存：常温保存，复检期至少1年。
产品内容G1120-10G1120-100苏木素染液10ml100ml分化液10ml100ml伊红染液10ml100ml注意：环境温度时，分化液可能会结晶析出，将分化液37℃水浴融化后即可，不影响使用。
产品说明：苏木精-伊红染色法(Hematoxylin-Eosin staining)，简称HE染色法，是病理学常规制片中最基本的染色方法。
苏木精染液为碱性，主要使细胞核内的染色质与胞质内的核糖体着紫蓝色；伊红为酸性染料，主要使细胞质和细胞外基质中的成分着红色。
染色过程需要优化，着色情况与组织或细胞的种类有关，也随其生活周期及病理变化而改变。
例如，很多细胞在新生时期胞浆对伊红着色较淡或轻度嗜碱，当其衰老时或发生退行性变则呈现嗜伊红浓染。
胶原纤维在老化和出现透明变性时，伊红着色由浅变深。
本产品所包含试剂均为工作液，可直接使用。
操作说明（以下步骤仅供参考）：（一）石蜡组织切片染色。
1．取材组织块，经固定后，常规石蜡包埋，切片。
2．石蜡切片脱蜡水化：①二甲苯（I）中脱蜡5min。
②换用新鲜的二甲苯（Ⅱ），再脱蜡5min。
③无水乙醇5min。
④95%乙醇2min。
⑤80％乙醇2min⑥70%乙醇2min。
⑦蒸馏水2min。
3．苏木素染液染色5-20min(具体时间根据染色结果和实验要求调整)，自来水冲洗。
4．分化液分化30s。
5．自来水浸泡15min或温水（约50℃）5min。
6．置伊红染液几秒-2min(具体时间根据染色结果和实验要求调整)，自来水冲洗。
7．自来水浸泡5min。
8．脱水，透明，封片：①95％乙醇（I）1min②95％乙醇（Ⅱ）1min③100％乙醇（I）1min④100％乙醇（Ⅱ）1min⑤二甲苯石炭酸（3：1）1min⑥二甲苯（I）1min⑦二甲苯（Ⅱ）1min⑧中性树胶封固，镜下观察。
标本脱水的过程
标本脱水的过程
第一天：晚上标本进入50%-60%的乙醇；
第二天：早晨进入70%-80%的乙醇，晚上6点进入第一瓶95%乙醇，晚上11点-12点进入第二瓶95%乙醇；
第三天：早晨8点进入第一瓶无水乙醇，10点进入第二瓶无水乙醇，12点进入第一瓶二甲苯，下午1点半进入第二瓶二甲苯，3点进入第一瓶熔蜡（60-65摄氏度），4点半进入第二瓶熔蜡，6点半从蜡缸中拿出来，此时即可包埋标本或选择以后任意时间包埋。
试剂配置
1、苏木素染色液
甲液：碘酸钠0.2克，明矾（水合硫酸铝铵）17.6克，溶解于730毫升蒸馏水。
乙液：苏木素2.3克，溶解于乙二醇250毫升。
甲液和乙液混合后加入20毫升冰乙酸即为染色液
2、伊红染色液
储备液：伊红20克溶解于500毫升蒸馏水，过滤，滤液加浓盐酸10毫升，过滤，滤渣用蒸馏水洗3遍，将滤渣烘干后溶解于1000毫升95%乙醇中。
工作液：取适量储备液加入等量95%乙醇即可。
3、饱和碳酸锂溶液（自来水）
4、1%盐酸分化液（自来水）
1毫升39%浓盐酸+99毫升蒸馏水。
苏木素伊红染色实验流程
苏木素伊红染色实验流程
选材料，这可得仔细挑。
咱们得找那些合适的组织标本，才能
进行后面的实验。
挑好后，咱们就得处理它们了，让它们的形态和
结构固定下来，这样才能看得更清楚。
染色啦！首先，咱们得把标本泡进苏木素染料里，这样细胞核
就能染上漂亮的蓝色。
等它们吸饱染料后，咱们再用水洗一洗，去
掉多余的染料，让细胞核的颜色更均匀。
接下来，就是给细胞质上色了。
这时候，咱们用伊红染料，把
细胞质染成红色。
跟蓝色的细胞核一对比，特别明显！染完色，再
洗一洗，去掉多余的染料，标本就准备好了。
最后一步，封片！咱们把标本固定在玻璃片上，再盖上一层薄
薄的封片剂，这样，细胞的样子就被永久地保存下来了。
以后想看，直接在显微镜下瞅一眼就行！
整个实验过程得特别小心，每个步骤都不能马虎。
只有这样，
咱们才能看到清晰、准确的染色效果，为医学研究提供有用的帮助。
石蜡切片(苏木精-伊红对染法)
石蜡切片制作(苏木精-伊红对染法)实验原理：石蜡切片是最基本的切片技术，冰冻切片和超薄切片等都是在石蜡切片基础上发展起来的。
苏木素与伊红对比染色法（简称H.E.对染法）是组织切片最常用的染色方法。
这种方法适用范围广泛，对组织细胞的各种成分都可着色，便于全面观察组织构造，而且适用于各种固定液固定的材料，染色后不易褪色可长期保存。
经过HE染色，细胞核被苏木素染成蓝紫色，细胞质被伊红染色呈粉红色。
一、器材及试剂：1. 器材：切片刀，切片机，恒温箱，蜡杯，酒精灯，解剖刀，解剖剪，解剖盘，培养皿，镊子，单面刀片，毛笔，包埋盒，染色缸，盖玻片，载玻片，玻片盘，树胶，树胶瓶，显微镜，温度计，脸盆，水浴锅。
切片机，切片刀，温台，恒温箱，解剖刀，镊子，剪刀，解剖针，单面刀片，小台木，洒精灯，包埋纸盒，染色缸，烧杯，水盆，熔蜡炉，蜡杯。
2．试剂：中性福尔马林固定液、各种浓度的酒精、二甲苯、石蜡、蜂蜡、苏木精染液， 1%伊红酒精溶液，1%盐酸酒精溶液，甘油蛋白粘片剂，中性树胶。
卡诺（Carnoy）固定液，埃利希苏木精染液，1%伊红酒精溶液，1%盐酸乙醇液，各级酒精（30%、50%、70%、80%、90%、95%、100%），二甲苯，甘油蛋白粘片剂，中性树胶。
3. 材料：鼠肝、肾、心肌、骨骼肌或其他组织、大豆或小麦、绿豆、洋葱、大蒜、蚕豆的根、茎、叶等。
二、实验原理：石蜡切片是最基本的切片技术，冰冻切片和超薄切片等都是在石蜡切片基础上发展起来的。
苏木素与伊红对比染色法（简称H.E.对染法）是组织切片最常用的染色方法。
这种方法适用范围广泛，对组织细胞的各种成分都可着色，便于全面观察组织构造，而且适用于各种固定液固定的材料，染色后不易褪色可长期保存。
经过HE染色，细胞核被苏木素染成蓝紫色，细胞质被伊红染色呈粉红色。
三、试剂配法：1．中性甲醛固定液：甲醛（37%-40%，市售，本所购买即为此浓度） 100mL磷酸氢二钠 6.5磷酸二氢钾（钠） 4g双蒸水 900mL 2．苏木精、伊红染色液为碧云天产品3．1%盐酸乙醇液盐酸 1份70%酒精 100份4．甘油蛋白贴片剂：蛋白 50 ml甘油 50 ml水杨酸钠（防腐剂） 1g配制时将鸡蛋一个打破入碗或杯中，去蛋黄留下蛋白，用玻棒调打成雪花状泡沫，然后用粗纸或双层纱布过滤到量筒中，经数小时或一夜，即可滤出透明蛋白液。
苏木素伊红混合染色液(一步法)
苏木素伊红混合染色液(一步法)简介：苏木素(Hematoxylin)和伊红(Eosin)联合染色，简称HE染色，是病理学常规制片中最基本的染色方法，应用极其广泛。
苏木精是从原产中南美的洋苏木中提取出来的浅黄褐色的结晶，是一种碱性染色剂，它在被氧化后生成苏木素，同媒染剂(常用的是三价的铝或盐铁)一起使用，能够使细胞核染色。
在病理诊断、教学和科研工作中，常用HE染色对正常组织和病变组织进行形态结构观察。
在HE染色的组织切片中，细胞核呈蓝色，细胞浆呈红色，二者形成鲜明的对比，易于观察分析。
Leagene苏木素伊红混合染色液是把苏木素和伊红混合在一起，只需对细胞、组织等样本染色一次，既能使苏木素上色亦可使伊红上色的新型染色液，可用于染色样本的类型有石蜡切片、冰冻切片、血液涂片、培养细胞以及体液涂片(如宫颈粘液涂片、脑脊液涂片等)等，本产品尤其适用于血液涂片和体液涂片染色。
染色原理：1、细胞核染色的原理：苏木素为碱性天然染料，可使细胞核着色。
细胞核内染色质的成分主要是DNA，在DNA 双螺旋结构中，两条核苷酸链上的磷酸基向外，使DNA双螺旋的外侧带负电荷，呈酸性，很容易与带正电荷的苏木素碱性染料以离子键或氢键结合而被染色。
苏木素在碱性溶液中呈蓝色，所以细胞核被染成蓝色。
2、细胞浆染色的原理：伊红是一种化学合成的酸性染料，在一定条件下可使细胞浆着色。
细胞浆的主要成分是蛋白质，为两性化合物，细胞浆的染色与染液的pH值密切相关。
当染色液pH值在胞浆蛋白质等电点(4.7～5.0)以下时，胞浆蛋白质以碱式电离，则细胞浆带正电荷，就可被带负电荷的酸性染料染色。
伊红在水中离解成带负电荷的阴离子，与胞浆蛋白质带正电荷的阳离子结合，使细胞浆着色，呈现红色。
3、分化作用：染色后，用某些特定的溶液将组织过多结合的染色剂脱去，这个过程称为分化作用，所用的溶液称为分化液。
在HE染色中常用盐酸乙醇作为分化液，因酸能破坏苏木素的醌型结构，使组织与色素分离而退色。
细胞爬片he染色方法[整理版]
![细胞爬片he染色方法[整理版]](https://img.taocdn.com/s3/m/41258eed760bf78a6529647d27284b73f2423649.png)
细胞爬片HE染色方法一、原理苏木素（Hematoxylin）－伊红（Eosin）染色法，简称HE染色法。
HE染色法采用两种染料即碱性染料苏木素和酸性染料伊红分别于细胞核和细胞质发生作用，使细胞的微细结构通过颜色而改变它的折光率，从而在光镜下能清晰地呈现出细胞图像。
该染色过程既有化学反应，又有物理作用参与。
从化学反应看，组织细胞内含有酸性物质和碱性物质，细胞的酸性物质与碱性染料的阳离子结合，而细胞核的碱性物质与酸性染料的阴离子结合，使其中酸性细胞核被碱性的苏木素染成蓝色，而碱性的胞浆被酸性染料伊红染成红色。
其结果胞核呈蓝色，胞浆呈红色。
从物理现象看，主要有吸附、吸收之说。
HE 染色提供良好的核浆对比染色，是细胞化学染色最常用的一种方法。
二、实验用品1、固定液：常用95％乙醇和冰丙酮2、苏木精染液：称取苏木精粉0.5g，铵矾24g溶解于70ml蒸馏水中，然后取NaIO 31g，水5ml，再加入甘油30ml和冰醋酸2ml，混合均匀，滤纸过滤，备用。
3、伊红染液：称取0.5g水溶性伊红染液，溶于100ml蒸馏水中。
4、稀盐酸乙醇溶液：用75%乙醇配制1％盐酸。
5、系列浓度的乙醇、二甲苯、中性树胶。
6、培养瓶、培养皿、眼科镊、盖玻片、载玻片、显微镜。
三、实验步骤1、样品制备：对于贴壁生长细胞，胰酶消化，调整细胞浓度约1×105/ml，滴加于盖玻片上（置于6孔板中），培养相应时间后，取出细胞爬片，用PBS洗涤3次。
2、样品固定：95％乙醇固定20min，PBS洗涤2次，每次1mi n。
3、染核：苏木素染液染色2－3min，自来水洗涤。
4、分色：镜下观察，若细胞核染色过深，用1％盐酸酒精溶液分色数秒，自来水洗涤。
5、染胞质：浸入伊红染液染色1min，自来水洗涤。
6、吹干或自然晾干细胞爬片后，中性树胶封片。
HE染色法
苏木素 1克
碘酸钠 0.2克
钾明矾 50克
水合氯醛 50克
蒸馏水 1000ml
柠檬酸 1克
将苏木素及碘酸钠用蒸馏水加温溶解,呈樱 桃红色,再加入钾矾, 使溶液变为兰紫色,煮沸5min后,再加入水合氯醛搅拌,此时液体变为红紫色,溶解完后加入柠檬酸,取下冷却,滤过后即可使用。此液能长久保存。
(三)Harris氏苏木素液:
苏木素 0.9克 铵明矾(或钾)20克
甲液 无水酒精 10ml 乙液 蒸馏水 200ml
一氧化汞 0.5～1克
甲、乙两液分别溶解,然后两液混合,加热熬沸,再加入一氧化汞, 以玻棒搅至溶液呈深紫色,置于凉水中急速冷却,静置一夜后,滤过密封保存。用前若加入少许5%冰醋酸,则染色效果更好。此液经2～3个月后,着色力减退,故宜少配。
(3)入苏木素染液,1%盐酸分化,水洗 兰化;
(4)入0.5～1%酸性复红液5～30min,水洗 至红色不退;
(5)蒸馏水洗30秒钟以上,入买洛里氏染色液20min,流水冲洗2～5min;
Devil入95%酒精分化,入无水酒精脱水,二甲苯透明,封固。
结果:胶元纤维, 网状纤维呈深红色、粘液、淀粉样物呈淡兰色,纤维素、 肌纤维、胶质纤维酸性颗粒呈红色.红细胞、髓鞘呈红色,细胞核呈兰色。
3.移入90%酒精中(二瓶),约2min。
4.移入80%酒精中(二瓶),约2min。
5.移入70%酒精中,约2min。
6.移入水中,洗去酒精,约2～3min。
7.移入蒸馏水中,约2min。
(二)染色:
1.移入苏木素中,浸染8～15min,一般以稍深染为宜。
2.移入水中,洗去苏木素和浮色,约1～2min。
(仅供参考)苏木素伊红染色液说明书
苏木素-伊红染色液（H-E）说明书【产品名称】苏木素-伊红染色液（H-E）H&E Staining System【产品编号】HE-500ml,HE-1000ml,HE-2500ml【包装规格】苏木素染色液500ml、1000ml2500ml；伊红染色液500ml、1000ml 2500ml；返蓝染色液500ml、1000ml2500ml。
【预期用途】主要用于对细胞组织进行染色。
【检验原理】苏木素-伊红染色液（H-E）由3部分组成：苏木素染色液、伊红染色液和返蓝染色液。
苏木素氧化后与金属媒染剂作用，可形成不可替代的细胞核颜料。
带有正电荷的苏木素-金属媒染剂复合体，易与细胞核内DNA上带负电荷的磷酸基团结合，因而使细胞核染色形成特定的蓝色。
伊红染色液是一种广泛用于组织学染色中与苏木素染色形成对比的染料（HE染色法）。
此染色法可观察到清晰的细胞结构。
样本中细胞核可经苏木素染色呈蓝色，细胞质经伊红染色呈粉红色。
伊红是一种阴离子染料，可将红细胞染成亮红色，同样也可对其他基本的细胞组分（细胞质，胶原及肌纤维）进行染色。
返蓝染色液为组织学染色试剂，可替代水洗，快速使核染色质和核膜显现蓝色。
由于其坚硬度和碱性，水冲洗后改变苏木素染核后的颜色。
使用BioGnost 返蓝染色液，粘附在玻片上的样本不会发生像使用其他返蓝染色液时发生降解。
【主要组成成分】苏木素：乙二醇、苏木素、碘酸钠、硫酸铝；伊红：伊红、乙醇；返蓝染色液：碳酸锂。
【储存条件及有效期】保证产品包装完整的情况下，储存温度在+15°C和+25°C 之间。
保持储存环境干燥，不要放置于寒冷的环境中，不要冷冻产品，避免直接阳光直射。
产品使用效期为2年，具体效期见标签。
【适用仪器】不适用【样本要求】使用合适的设备仪器收集组织样本，并标记清楚，根据操作说明进行实验。
为避免发生错误，染色及诊断过程最好由具相关专业知识的技术人员操作。
根据标准医疗诊断实验室标准镜检诊断。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
苏木素-伊红染色液(H-E)说明书
【产品名称】
苏木素-伊红染色液(H-E）
【型号】
苏木素染色液分别为：Mayer型、改良Harris型、改良Lillie-Mayer型；
伊红染色液分别为：水溶型、醇溶型；
苏木素-伊红染色液混合型。
【包装规格】
货号：DH0006
单瓶包装规格分别为：100ml、250ml、500ml、5000ml；
每套/盒包装规格分别为：2×100ml/盒、2×250ml/盒、2×500ml/盒、2×5000ml/盒。
【预期用途】
主要用于对细胞组织进行染色。
【检验原理】
苏木素(Hematoxylin)和伊红(Eosin)联合主要用于对细胞组织进行染色，简称HE染色，是病理学常规
制片中最基本的染色方法，应用极其广泛，苏木素-伊红染色是生物学、组织学、病理学及细胞学等学科必
不可少的最基本的染色方法，在病理诊断、教学与科研中广泛应用，具有重要价值，细胞中的细胞核是由
酸性物质组成，它与碱性染料(苏木素)的亲和力较强；细胞浆则相反，它所含的碱性物质与酸性染料(伊红)
的亲和力较大。
因此细胞或组织切片经苏木素-伊红染色液染色后，细胞核被苏木素染成鲜明的蓝紫色，细
胞浆、肌纤维、胶元纤维等呈不同程度的红色，红细胞则呈橙红色。
【主要组成成分】
试剂组成主要成分苏木素染色液(改良Lillie-Mayer)或木素染色液(改良Harris)或木素染色液(Mayer) 苏木色精伊红染色液(水溶)或伊红染色液(醇溶) 伊红
苏木素-伊红染色液混合型苏木色精、伊红【储存条件及有效期】
5℃～35℃保存，原包装未开封染色液的有效期为18个月，在有效期内的已开封染色建议在开封后6
个月内使用完，每次用后及时拧紧瓶盖，以免挥发或变质。
【样本要求】
涂片和切片必须充分固定，石蜡切片要充分脱蜡。
【检验方法】
l、石蜡切片于二甲苯I、II中各脱蜡若干分钟；
2、经无水乙醇和95%乙醇各约若干分钟，经8O%乙醇若干分钟，自来水冲洗若干分钟；
3、苏木素染色液(改良Lillie-Mayer或改良Harris)染色若干分钟，自来水洗若干分钟；或苏木素染色液(Mayer)染色若干分钟；或苏木素-伊红染色液(混合型)染色若干分钟；
4、苏木素染色后用l%盐酸乙醇溶液分化数秒(l%盐酸乙醇溶液配制：99m1 75%乙醇加1ml浓盐酸）；
若用苏木素染色液(Mayer)和苏木素-伊红染色液(混合型)染色后则不需分化；
5、自来水冲洗返蓝若干分钟；亦可用碳酸锂水溶液返蓝若干秒，自来水洗若干分钟；
6、入伊红染色液(水溶)染色若干分钟，稍洗；若用伊红染液(醇溶），切片应先经80%乙醇脱水后，再
入伊红染液(醇溶)染色若干分钟(忌水洗）；此步骤苏木素-伊红染色液(混合型)不适用。
7、95%乙醇I、II中各调色约若干秒，时间不宜过长；
8、无水乙醇I、II中各脱水若干分钟，二甲苯I、II中各透明I、II中各透明若干分钟；
9、封片胶封片，镜检。
【检验结果的解释】
细胞核呈蓝紫色，细胞质、间质、各种纤维呈不同程度的红色。
【检验方法的局限性】
仅供细胞和组织形态学观察染色使用。
【注意事项】
1、温度较低时苏木素染色液不易着色，可适当延长染色时间。
2、苏木素染色液(改良Lillie-Mayer)染色时，亦可考虑不用分化，但应相应缩短苏木素染色时间。
3、苏木素染色液(改良Lillie-Mayer)、苏木素(改良Harris)不含汞等有毒物质，其着色强度可能会因使用日期不同而稍有差异，故开封后可先试染，根据试染结果稍调整苏木素染色时间以保证较佳染色效果。
4、盐酸乙醇分化时间应根据染色结果的具体情况而定。
5、碳酸锂水溶液的配方：取本产品附送的碳酸锂粉末一包，完全溶解于1000ml蒸馏水中，即为碳酸锂水溶液。
6、该染色液主要用于组织切片的染色，亦可用于某些细胞染色，但染色时间应作调整。
7、本产品仅用于体外诊断，应由专业人士使用及进行结果的判读。
8、使用前应详细阅读说明书，并做好个人卫生防护，在有效期内使用，生产日期、生产批号和失效日期见包装。
9、用后应按医院或环保部门要求处置废弃物。
【基本信息】
备案人/生产企业名称：安徽雷根生物技术有限公司
住所：淮北凤凰山经济开发区凤冠路三期标准化厂房三号厂房。