Weigert铁苏木素染色液
软骨染色液（番红O法）步骤及注意事项
软骨染色液（番红O法）步骤及注意事项软骨染色液(番红O法)步骤及注意事项货号：G2540规格：100ml有效期：12个月有效产品简介：软骨组织由软骨细胞、软骨基质和纤维组成，软骨组织及其周围的软骨膜构成软骨。
软骨根据基质内所含纤维素成分不同分为透明软骨、弹性软骨、纤维软骨。
软骨染色方法有很多种，例如甲苯胺蓝法、阿利新蓝法、番红O法等。
番红0软骨染色的原理在于嗜碱性的软骨与碱性染料番红O结合呈现红色。
番红O是一种结合多阴离子的阳离子染料，其显示软骨组织是基于阳离子染料与多糖中阴离子基团（硫酸软骨素或硫酸角质素）结合。
自备材料：10%福尔马林固定液、脱钙液、蒸馏水、Weigert铁苏木素、系列乙醇等。
操作步骤（仅供参考）：1.标本的处理：10%福尔马林固定、脱钙、石蜡切片。
2.常规脱蜡至水。
3.入新鲜配制的Weigert染液染色3-5min。
4.酸性乙醇分化液分化15s。
5.蒸馏水洗10min。
6.（可选）在固绿染色液内浸染5min，蒸馏水洗1min。
7.入Safranin O stain内浸染1-2min，蒸馏水洗1min。
8.分别用95%乙醇、无水乙醇脱水。
9.二甲苯透明，光学树脂封固。
染色结果：软骨基质深红色软骨细胞核蓝色软骨细胞浆红色细胞核灰黑色注意事项：1.需要显示细胞核时，尽量采用铁苏木素染色，其着色力强色调浓，一般的苏木素着色力不强。
2.Weigert苏木素染液不可预先配制后放置，配制好后一般24h 失去染色能力。
3.切片在Safranin O stain中染色不宜过长，否则易导致背景的深红色不易分化掉。
4.Safranin O stain染色后，不宜在低浓度乙醇脱水，否则易褪色。
5.95%乙醇脱水时间不宜过长。
6.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
马松三色染色法
马松三色染色法马松三色染色法是一种用于显示组织中纤维的染色技术，特别适用于结缔组织的染色。
该方法使用三种染料：苏木精、酸性品红和丽春红，分别染色细胞核、肌纤维和胶原纤维。
首先，切片需要经过常规脱蜡至水的过程，以确保染色剂能够充分渗透到组织中。
然后，使用配制好的Weigert氏铁苏木素染色液对组织进行染色，以突出显示细胞核。
染色完成后，需要充分水洗，以去除未结合的染料。
接下来是酸性品红染色，用于标记肌纤维。
这个步骤需要在弱酸环境中进行分化处理，以将染色剂与组织中的碱性物质区分开来。
弱酸还能帮助酸性品红更好地渗透到组织中。
最后，使用丽春红品红染色液对胶原纤维进行染色。
在这个步骤中，需要使用弱酸工作液来洗去未结合的染料。
在整个染色过程中，组织固定起着非常重要的作用。
不同的固定液会影响染色时间，因此需要根据具体情况进行调整。
在完成染色后，需要进行常规脱水、透明和封固处理，以便在显微镜下观察。
马松三色染色法的优点在于它能够清晰地显示结缔组织中的胶原纤维和肌纤维，特别是在病理情况下，如器官硬化性疾病和瘢痕组织的鉴别诊断中，该方法能够提供有价值的信息。
此外，该方法具有较高的特异性和灵敏度，能够检测出病理变化中较小的差异。
然而，该方法也有一些局限性。
首先，该方法需要使用多种染料和化学试剂，这使得操作过程相对复杂。
其次，某些组织可能需要特定的处理步骤，例如脱蜡、脱水和固定等。
这需要技术人员具备一定的经验和技术水平。
尽管存在这些局限性，马松三色染色法仍是一种非常重要的病理学技术。
它可以提供关于组织结构和功能的重要信息，有助于病理医生做出准确的诊断和制定治疗方案。
胶原纤维染色
胶原纤维胶原纤维是三种纤维中分布最广泛，含量最多的一种纤维。
广泛分布于各脏器内。
在皮肤、巩膜和肌腱最为丰富。
胶原纤维染色主要用于和肌纤维的鉴别。
一、苦味酸—酸性品红法 (Van Gieson，1889)试剂配制：(一)Weigert氏铁苏木素液A液：苏木素 1g无水酒精 100m1B液：30％三氯化铁液 4ml蒸馏水 100ml纯盐酸 lmlA、B两液需分瓶盛放，A液配制后数天即可用，不宜配制过多，如保存时间过长则染色不良。
平时应密封保存，B液配制后立即可用。
临用前将A、B两液等量混合。
(二)Van Gieson氏染液A液： 1％酸性品红水溶液B液：苦味酸饱和水溶液(约1.2％)A、B两液分瓶盛放。
临用前取A液1份，B液9份混合后使用。
操作方法：1. 组织固定于10％甲醛液，常规脱水包埋。
2．切片脱蜡至水。
3．用Weigert氏铁苏木素液染5～10分钟。
4. 流水稍洗。
5．1％盐酸酒精迅速分化。
6. 流水冲洗数分钟。
7．用Van Gieson氏液染1～2分钟。
8．倾去染液，直接用95％酒精分化和脱水（可放入温箱烤干后，直接透明封片）。
9. 无水酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶封固。
结果:胶原纤维呈鲜红色，肌纤维，胞质及红细胞黄色，胞核蓝褐色。
（二）、Masson 三色染色法丽春红酸性品红液：丽春红 0.7 g ，酸性品红0.3 g，蒸馏水99ml，冰醋酸1 ml苯胺蓝液: 苯胺蓝2 g ，蒸馏水98 ml，醋酸2 ml亮绿液：亮绿0.2g ，蒸馏水100 ml，冰醋酸0.2 ml染色步骤：1. 切片脱蜡至蒸馏水2. 苏木素染5～10分钟3. 盐酸酒精分化4. 流水蓝化，蒸馏水洗(苏木素可不染)5. 丽春红酸性品红液中染5～8分钟6. 蒸馏水洗7. 1% 磷钼酸中染1～3分钟8. 不用水洗直接入苯胺蓝液或亮绿液5分钟 (如染色效果不佳,可在冰醋酸内脱色后重染)9. 水速洗，置60℃温箱中烘干，二甲苯透明,封固结果:胶原纤维蓝色（苯胺蓝复染）或绿色（亮绿复染）,肌纤维、纤维素红色。
masson染色结果分析
Masson三色染色液说明书【产品名称】Masson三色染色液【包装规格】货号：DC0032套组包装规格：8×20ml/盒、8×100ml/盒、8×250ml/盒【预期用途】主要用于组织中结缔组织、肌肉和胶原纤维的组织细胞学染色。
【检验原理】Masson三色染色又称马松染色，是胶原纤维染色权威而经典的技术方法，所谓三色染色通常是指染胞核和能选择性的显示胶原纤维和肌纤维。
该法染色原理与阴离子染料分子的大小和组织的渗透有关：分子的大小由分子量来体现，小分子量易穿透结构致密、渗透性低的组织；而大分子量则只能进入结构疏松的、渗透性高的组织，苯胺蓝的分子量很大，染色后肌纤维呈红色，胶原纤维呈蓝色，主要用于区分胶原纤维和肌纤维。
【主要组成成分】试剂组成主要成分1、Weigert铁苏木素A液苏木素2、Weigert铁苏木素B液三氯化铁3、酸性乙醇分化液乙醇4、蓝化液碳酸盐5、丽春红品红染色液丽春红、品红6、乙酸溶液乙酸7、磷钼酸溶液磷钼酸8、苯胺蓝染色液苯胺蓝【储存条件及有效期】5℃～35℃保存，原包装未开封染色液的有效期为l8个月，在有效期内的已开封染色液建议在开封后6个月内使用完，每次用后应及时拧紧瓶盖，以免挥发或变质。
【样本要求】组织片充分固定和脱蜡。
【检验方法】1、组织固定于Bouin氏固定液(另购)或Zenker氏固定液(另购)或10%中性福尔马林固定液(另购)等，流水冲洗，常规脱水包埋；2、切片常规脱蜡至水；3、取适量的Weigert铁苏木素A液和Weigert铁苏木素B液等量混合,即为Weigert铁苏木素染色液，用Weigert铁苏木素染色液染色，流水稍洗；4、酸性乙醇分化液分化数秒，流水冲洗数分钟；5、蓝化液返蓝数秒，流水冲洗数分钟；6、丽春红品红染色液染色数分钟，流水稍冲洗；7、将蒸馏水:乙酸溶液按一定的比例配制乙酸工作液，用乙酸工作液洗切片；8、磷钼酸溶液处理后，倾去玻片上磷钼酸溶液(不用水洗)；9、苯胺蓝染色液复染，倾去玻片上染色液(不用水洗)；10、用乙酸工作液处理切片，至切片无蓝色脱出(必要时镜下控制)；11、95%乙醇迅速脱水，无水乙醇脱水数次后，二甲苯透明，中性树胶封固。
百度文库-Masson染色液说明书
广州市外显子生物技术有限公司Http//Masson染色液说明书货号：S-1518规格：20ml产品组成：名称规格保存Weigert铁苏木素A液20ml RT避光Weigert铁苏木素B液20ml RT避光丽春红酸性品红染液20ml 2-4℃低温环境磷钼酸溶液20ml 2-4℃低温环境苯胺蓝染液20ml 2-4℃低温环境盐酸酒精分化液1%冰醋酸溶液20ml 2-4℃低温环境20ml 2-4℃低温环境简介：利用两种或三种阴离子染料混合一起或先后作用完成染色，与阴离子染料分子的大小和组织的渗透性有关，根据组织不同的渗透性能，选择分子大小不同的阴离子的染料进行染色，便可把不同组织成分显示出来。
储存条件：本试剂盒应贮存于2-4℃低温环境。
有效期：原包装未开封试剂有效期为12 个月，在有效期内的已开封试剂应在开封后 6 个月内使用完，每次用后应及时拧紧瓶盖，以免挥发或变质。
操作步骤：1.切片脱蜡至水。
2.Weigert铁苏木素使用前Weigert铁苏木素A、B 液等比例混合。
染10-20分钟，流水稍洗。
3.盐酸酒精分化，流水冲洗数分钟。
4.丽春红酸性品红染液染5-10分钟，蒸馏水稍冲洗。
5.磷钼酸溶液处理约5分钟，去掉溶液，不用水洗，直接用苯胺蓝染液复染5分钟。
6.1%冰醋酸处理1分钟，95%酒精脱水。
7.无水酒精脱水，二甲苯透明，中性树脂封固。
注意事项：1.Weigert铁苏木素分A、B两液，应于临用前将两液等份混合使用，而不宜预先混合，否则容易氧化沉淀而逐渐失去染色力。
2.磷钼酸处理时可在镜下控制，见肌纤维呈红色，胶原纤维呈淡红色即可。
染色结果：骨组织×200 结果判定：胶原纤维、粘液、软骨呈蓝色，弹力纤维呈棕色，肌纤维、纤维素和红细胞染红色，细胞核染蓝黑色。
Masson三色法
Masson三色法（根据Masson,1929）一、试剂配制（一）Weigert氏铁苏木素液（可用Herris苏木素代替）甲液：苏木素1g无水酒精（或95％酒精）100ml乙液：29％三氯化铁水溶液4ml蒸馏水95ml （30%三氯化铁溶液则为100ml）盐酸1ml临用时，取甲、乙液等量混合即可应用。
混合时应将乙液加人甲液内，染液呈紫黑色。
铁苏木素不能象明矾苏木素一样配制后可放置贮存备用，因铁与染色剂的色素根会化合生成不溶性沉淀，所以铁作媒染液时，必须与染液分别配制和分别保存，染片时临时混合应用。
由于这是一种铁苏木素，它将胞核染成黑色。
能抵抗在对比染色液中所含分色剂的脱色作用，且不会被光线退色，因此比钾矾苏木素染色较为持久。
（二）丽春红酸性品红液丽春红（Ponceau 2R）0.7g酸性品红（acid fuchsin）0.3g蒸馏水99ml冰醋酸(glacial acetic acid) 1ml（三）1%磷钼酸水溶液磷钼酸（phosphomolybdic acid）1g蒸馏水加至100ml（四）2%苯胺蓝液苯胺蓝（aniline blue）2g冰醋酸（glacial acetic acid ）2ml蒸馏水加至100ml（五）亮绿液亮绿（light green）1g蒸馏水99ml冰醋酸（glacial acetic acid ）1ml（六）Bouin氏液苦味酸饱和液（1.22％）75ml福尔马林25ml冰醋酸5ml此液一般在临用时配制，对皮肤及肌腱有软化作用。
二、操作方法1．组织固定于Bouin氏液，流水冲洗一晚，常规脱水包埋。
2．切片脱蜡至水：（1）二甲苯中脱蜡10分钟×3次，用吸水纸吸干液体；（2）100%乙醇5分钟×2次，用吸水纸吸干液体；（3）95%乙醇5分钟×2次，用吸水纸吸干液体；；（4）流水2分钟，用吸水纸吸干水分；3．Weiger氏铁苏木素染5-10分钟。
HE、Masson、VG、pas、免疫组化、TUNEL染色步骤
包埋，就是将已经经过固定，脱水，透明，浸蜡的组织块从最后的蜡浴取出置入充满熔融石蜡的包埋框内，包埋成块，使组织和包埋剂相熔一体并迅速冷却，这个程序称为包埋。
包埋剂凝固后，进一步加强了组织的硬度和韧度而便于进行切片。
一．石蜡包埋法石蜡包埋法是制作光学显微镜切片的常规方法，它有许多优点，操作简易便于掌握，可进行连续切片，包埋后的组织可以长期保存。
包埋的方法有自动包埋机包埋和手工包埋两种。
手工包埋的步骤如下：1.组织浸入石蜡后，包埋前将组织移入包埋用石蜡杯内。
从恒温箱取出置于三角架上，其下点燃酒精灯，以保持石蜡的溶解状态。
2.准备好包埋框，将包埋用的镊子在酒精灯上加温（防止镊子粘蜡）后，左手持蜡杯，右手把加温的镊子放在蜡口（直立状）倒蜡时让石蜡沿镊子注入包埋框内。
3.迅速镊取组织块放入包埋框石蜡内，切面朝下放正置入框底并轻轻压平，以保证不再有气泡。
4.待石蜡表面凝固前将标签贴于其上，需注意勿使标签与标本混淆，当蜡块冷至蜡面有一层透明蜡膜时，浸入冷水中迅速使其冷却，否则蜡内常形成结晶。
5.蜡块完全硬固后除去铜框，以保证蜡彻底凝固，立即修切，准备制成切片或储藏备用。
二．石蜡包埋的注意事项1.作为包埋组织使用的石蜡不仅由于气候的不同需要加以选择，而且与组织的硬度也有密切关系，过硬的组织最好用硬度较高的石蜡包埋，反之，软组织则应以硬度较低的石蜡包埋。
其熔点一般要求再60。
C左右。
2.包埋用石蜡加温不可过高，以保持其不凝固为度，温度过高容易将组织烫坏，使得组织变硬，变脆，并发生卷曲，收缩变形而不利于切片，甚至影响诊断。
另外注意埋蜡的温度和组织本身的温度，两者是否合适，温度不一致常可造成组织与周围石蜡脱裂的现象，而达不到包埋的作用。
3.包埋用石蜡应掌握用量，以组织全部包埋完毕，石蜡也恰好用完为宜。
4.包埋应注意组织病变面放在下面，并尽可能使组织放平，在不损伤组织的情况下可用镊子轻压。
5.囊壁和消化道等组织包埋时更应注意组织方位，应将组织块直立拉平，不要卷曲。
百度文库-苯胺蓝染色液说明书
广州市外显子生物技术有限公司
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苯胺蓝染色液
产品说明：
苯胺蓝染色液是 Masson 三色染色试剂盒的组成之一。
苯胺蓝染色液主要有苯胺蓝、弱酸等组成，呈酸性，常与丽春红品红染色液等配合使用对胶原纤维进行染色，染色后肌纤维呈红色，胶原纤维呈蓝色，主要用于区分胶原纤维和肌纤维。
产品组成：
货号 产品 规格 储存条件 S-1528 苯胺蓝染液 100ml
2-4℃ -- 说明书
1份
有效期：12个月 操作步骤(仅供参考)： 以Masson 三色染色为例 1.切片脱蜡至水。
2.Weigert 铁苏木素使用前（Weigert 铁苏木素 A 、 B 液等比例混合）。
染 10-20 分钟，流水稍洗。
3.盐酸酒精分化，流水冲洗数分钟。
4.丽春红酸性品红染液染 5-10 分钟，蒸馏水稍冲 洗。
5.磷钼酸溶液处理约 5 分钟，去掉溶液，不用水洗， 直接用苯胺蓝染液复染 5 分钟。
6.1%冰醋酸处理 1 分钟，95%酒精脱水。
7.无水酒精脱水，二甲苯透明，中性树脂封固。
注意事项：
1. 切片脱蜡应尽量干净。
2. 切片入苯胺蓝染色液染色前不要水洗，否则可能出现不着色。
3. 不同染色参照具体的实验要求。
4. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作 染色结果：
神经节组织×400 结果判定：主要用于神经组织、细胞、结缔组织的染色，使胶原纤维呈蓝色。
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北京吉美生物技术有限公司
Weigert 铁苏木素染色液
产品简介：
胶结缔组织狭义上是指其含有的三种纤维：胶原纤维、网状纤维、弹力纤维，而胶原纤维（collagen fiber ）是分布最广、含量最多的一种纤维。
Weigert 铁苏木素染色液是染色力较为强的染色液，主要由苏木素和三氯化铁组成，临用前混合，多用于结缔组织的染色，如masson 三色染色、Van Gieson 染色等。
操作步骤（仅供参考）
1、 根据实验具体要求操作。
2、 一般Weigert 铁苏木素染色液染色1~5min.
注意事项：
1、 临用时配制Weigert 铁苏木素染色液，不可预先配制后放置，不宜长久保存。
2、 上述试剂均有刺激性，请小心操作。
3、 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
有效期：12个月有效。
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