2005年版药典三部部分附录

2005年版药典三部部分附录

录入时间:2006-6-26 9:14:29 来源：其它

2005年版药典三部部分附录

1．无菌检查法（修订）

2．支原体检查法（增修）

3．病毒外源因子检查法（修订）

4．热原质检查法（修订）

5．细菌内毒素检查法（修订）

6．崩解时限检查法（新增）

7．融变时限检查法（新增）

8．最低装量检查法（新增）

9．装量（片重）差异检查法（新增）

10．粒度检查法（新增）

11．抗毒素F（ab）2测定法（修订）

12．絮状单位测定法（新增）

13．A群脑膜炎球菌多糖疫苗多糖分子大小测定法（增修）

14．伤寒Vi多糖分子量大小测定法（新增）

15．乙醇残留量测定法（康卫氏扩散皿法）（新增）

16．蛋白质含量测定（双缩脲法）（新增）

无菌检查法

无菌检查法系指用微生物培养法检查生物制品是否无菌的一种方法。

无菌检查应在洁净度为10000级环境中的局部洁净度100级、单向流空气区域内或无菌隔离系统中进行，其全过程应严格遵守无菌操作，防止微生物污染。单向流空气区、工作台面及无菌隔离系统必须进行洁净度验证。

各种生物制品的无菌检查，均应按照本附录的规定进行，有专门规定者除外。

1 仪器

1.1 取样用灭菌注射器，5、10ml(供直接接种法用)。

1.2 全封闭式集菌培养器，滤膜孔径不大于0.45μm，膜直径约50mm （供薄膜过滤法用）。

1.3 普通显微镜（细菌镜检用）。

2 培养基及其制备方法

培养基应适合需氧菌、厌氧菌或真菌的生长，可按以下处方制备，亦可使用按该处方生产的符合规定的干粉培养基。

2.1 需氧菌、厌氧菌培养基1（流体硫乙醇酸盐1，用于培养需氧菌、厌氧菌）

胰酪蛋白胨(或酪素胰酶消化液，以总氮计2000mg) 15g

酵母浸出粉(或酵母透析液200ml) 5g

葡萄糖 5g

氯化钠 2.5g

L-胱氨酸(或半胱氨酸盐酸盐) 0.5g

硫乙醇酸钠(或硫乙醇酸) 0.5g（0.3ml）

琼脂 0.65～0.75g

刃天青 0.01g

水 1000ml

除葡萄糖和刃天青外，取上述成分加入水中，微温溶解后，调节pH为弱碱性，煮沸，滤清，加入葡萄糖和刃天青，摇匀，调节pH值使灭菌后为7.1±0.2。

在供试品接种前，培养基氧化层的颜色（红色）不得超过培养基深度的1/3，否则，须经水浴煮沸加热20分钟，迅速冷却。只限加热一次，并防止被污染。

2.2 需氧菌、厌氧菌培养基2 (流体硫乙醇酸盐培养基2)

按需氧菌、厌氧菌培养基1处方，删除琼脂，取其余成分，如法配制，即得。

2.3改良马丁培养基（用于培养需氧菌、真菌）

蛋白胨 5g

酵母浸出粉 (或酵母透析液200ml) 2g

葡萄糖 20g

磷酸氢二钾 1g

硫酸镁 (MgSO4 ·7H2O) 0.5g 水 1000 ml

0.1%虎红 2 ml

除葡萄糖外，取上述成分加入水内，微温溶解后，调节pH值约为6.8，煮沸，加葡萄糖溶解后，摇匀，滤清，调节pH值使灭菌后为6.4±0.2。

2.4 营养琼脂培养基

蛋白胨 10g

牛肉浸粉 5g

氯化钠 5g

琼脂 14g

水 1000ml

取上述成分加入水中，微温溶解后，调节pH值为弱碱性，煮沸，滤清，调节pH值使灭菌后为7.2±0.2。上述培养基一般分别按10 ml、40 ml、100 ml或200 ml分装于试管或其他容器中，装量为试管或容器高度的2/5，均以115℃灭菌30分钟。细菌培养基经30-35℃培养3天，改良马丁培养基经20-25℃培养3-5天后，应无菌生长。合格的培养基使用期限不得超过一周。

3 培养基灵敏度检查

3．1 菌种由国家药品检定机构分发。

3.1.1 需氧菌乙型溶血性链球菌(CMCC 32210株)，短芽孢杆菌(7316株)。

3.1.2 厌氧菌生孢子梭状芽孢杆菌(CMCC 64941株)。

3.1.3 真菌、白色念珠菌（ATCC 10231）

3．2 菌液制备

将乙型溶血性链球菌、生孢子梭状芽孢杆菌、短芽孢杆菌分别接种于被检的培养基，经30～35℃培养一定时间 (乙型溶血性链球菌和生孢子梭状芽孢杆菌培养24～48小时，短芽孢杆菌培养18～20小时)后，将乙型溶血性链球菌和短芽孢杆菌分别刮入0.9%无菌氯化钠溶液内制成均匀菌液；生孢子梭状芽孢杆菌先将菌液吸入灭菌的试管内，用0.9%无菌氯化钠溶液制成均匀菌液；白色念珠菌接种在改良马丁培养基上，置20～25℃培养2-3天后，刮入0.9%无菌氯化钠溶液制成均匀菌液。再将以上菌液稀释至与标准比浊管（由国家药品检定机构分发）相同之浓度，然后用0.1%蛋白胨水作10倍系列稀释，分别制成10-8乙型溶血性链球菌菌液，10-7的短芽孢杆菌菌液、10-7生孢子梭状芽孢杆菌菌液及10-6白色念珠菌菌液。

3.3 培养基接种

将10-7的短芽孢杆菌、10-7生孢子梭状芽孢杆菌、10-8乙型溶血性链球菌和10-6 白色念珠菌菌液各1 ml

分别接种到每管9 ml被检培养基中，(用于厌氧菌的培养基在试管中装量高度不得低于7cm)。每种菌液至少接种3管，并用未接种的培养基做对照，将接种乙型溶血性链球菌、生孢子梭状芽孢杆菌的培养基置30～35℃培养3天，接种短芽孢杆菌的培养基置30～35℃培养5天，接种白色念珠菌的培养基置20～25℃培养5天，记录结果。

3.4 结果判定

接种后培养基管数有2/3以上呈现生长，则判为该培养基的灵敏度合格。

培养基灵敏度：乙型溶血性链球菌(32210株)应达到10-8，短芽孢杆菌(7316株)和生孢子梭状芽孢杆菌(64941株)应达到10-7，白色念珠菌（ATCC 10231 株）应达到10-6。

3．5 附注

3.5.1 不应在同一洁净室内同时操作两个菌株。

3.5.2 无菌检查用培养基应每批进行灵敏度检查，合格后方可使用。

3.5.3 各生产单位的质量检定部门应定期抽检无菌检查用培养基的灵敏度。国家药品检定机构应定期抽检各生产单位的无菌检查用培养基。

4 各种培养基的采用

4.1 检查需氧性和厌氧性杂菌，应采用流体硫乙醇酸盐培养基。检查不含汞类防腐剂制品中的需氧性和厌氧性杂菌时，该培养基中可不加硫乙醇酸盐。

4.2 检查真菌和腐生菌时，应采用真菌培养基。

4.3 检查混浊制品时，可采用不含琼脂的硫乙醇酸盐培养基。检查活疫苗时，可适当增加琼脂含量，做成斜面。

5 抽样量及抽检瓶数

5.1 原液及半成品

除半成品除菌后需立即分装、留样作无菌检查的制品外，原液及半成品应每瓶（罐）分别进行无菌检查，其抽样量应至少为0.1%，但不得少于10ml。原液及半成品每开瓶一次，应如上法抽验。体外用诊断制品半成品每批取样至少3ml。

5.2 成品

每亚批均应进行无菌检查，供试品应随机抽取，应具有代表性(包括分装过程的前、中、后供试品或冻干过程不同层冻干柜中的供试品)。成品抽验量分出厂制品抽验量和上市制品监督抽验量两种。

5.2.1 出厂制品抽验量

5.2.1.1 分装量在100支(瓶)或以下者抽检不少于5支，101～500支(瓶)者抽检不少于10支(瓶)，501～10000支(瓶)者抽检不少于20支(瓶)，10001支(瓶)以上者抽检40支(瓶)。

5.2.1.2 每瓶装量在20ml以上的冻干血液制品，每柜冻干200瓶以下者抽检2瓶，200瓶及以上者抽检4瓶。每瓶装量6～20ml抽检数量加倍。5ml和5ml以下者按5.2.1.1项抽检。

5.2.2 上市制品监督抽验量

5.2.2.1 除血液制品外，其他生物制品每批抽检8支(瓶)。

5.2.2.2 血液制品每瓶装量在50ml以下，抽检6瓶，50ml或50ml以上抽2瓶。

表每支(瓶)注射剂抽验量

每支(瓶)制品装量

(ml)

＜0.5

0.5≤V＜5

5≤V＜20

20≤V＜100