联合应用骨髓间充质干细胞及pLXSN-bcl-2基因治疗大鼠缺血性脑损伤疗效的研究
三七皂苷联合骨髓间充质干细胞移植促进急性脑损伤的恢复
三七皂苷联合骨髓间充质干细胞移植促进急性脑损伤的恢复李雷兵;王皎月;孙彩【摘要】BACKGROUND:Studies have shown that Panax notoginseng saponins (PNS) has extensive pharmacological basis for the treatment of cerebral ischemic injury, and animal experiments for treatment of brain injury by bone marrow mesenchymal stem cel transplantation are ongoing. However, little is reported about the combined use of PNS and bone marrow mesenchymal stem cel transplantation. <br> OBJECTIVE:To investigate the effect of PNS combined with bone marrow mesenchymal stem cel transplantation on traumatic brain injury in rats. <br> METHODS:Traumatic brain injury models were made in 60 Sprague-Dawley rats by hydraulic shock method. Then, model rats were randomized into model group, cel transplantation group receiving bone marrow mesenchymal stem cel transplantation and combined treatment group undergoing PNS combined with bone marrow mesenchymal stem cel transplantation. Nerve function recovery of the rats and protein expression of nerve growth factor in the brain tissue were evaluated and detected by Bederson scoring and western blot methods, respectively. Morphological changes of the brain tissue and apoptosis in cortical neurons were observed and detected by hematoxylin-eosin staining and TUNEL, respectively. <br> RESULTS AND CONCLUSION:Highest Bederson score was found in the model group, fol owed by the cel transplantation group and combined treatment group (P<0.05), while the protein expression ofnerve growth factor was ranked as fol ows:the combined treatment group>the cel transplantation group>the model group (P<0.05). Inflammatory infiltration and brain edema in the brain were relieved markedly in the combined treatment group compared with the other two groups, and the number of apoptotic neurons was significantly reduced as wel . Our findings suggest that PNS combined with bone marrow mesenchymal stem cel transplantation can promote neurological recovery from traumatic brain injury by increasing the expression of nerve growth factor and reducing neuronal apoptosis.%背景：研究证明，三七皂苷治疗脑缺血损伤有着广泛的药理基础，骨髓间充质干细胞移植治疗脑损伤动物模型的实验研究也已广泛开展，但二者联用鲜有报道。
骨髓间充质干细胞移植联用褪黑素对大鼠脊髓损伤修复的影响的开题报告
骨髓间充质干细胞移植联用褪黑素对大鼠脊髓损伤修复的
影响的开题报告
一、研究背景
脊髓损伤（SCI）是一种严重的神经系统疾病，目前仍然缺乏有效治疗方法。
骨
髓间充质干细胞（BMSCs）移植是一种潜在的治疗方法，通过促进神经再生和减少炎
症反应来改善SCI。
然而，BMSCs的存活和分化可能受到周围环境的影响。
褪黑素（MT）是一种具有抗氧化和抗炎作用的分子，可以通过调节细胞凋亡和自由基清除而促进细胞生存。
因此，本研究旨在探讨BMSCs移植联用MT对大鼠SCI修复的影响。
二、研究目的
本研究旨在评估BMSCs移植联用MT对大鼠SCI的影响，包括行为学、电生理
学和生物化学指标方面的改变，以及对梅巴胺（MA）以及神经元和神经胶质细胞的影响。
三、研究方法与步骤
将72只雄性SD大鼠随机分为4组：对照组、SCI组、BMSCs移植组和BMSCs
移植联用MT组。
所有大鼠均进行SCI操作，在SCI后一周内分别接受不同的处理措施。
在SCI的第7天，通过行为学测试评估大鼠的运动和神经功能状况。
并在第14天、第28天、第42天和第56天进行电生理学和生物化学指标检测。
最后进行组织学检测，评估MA和神经元和神经胶质细胞的变化。
四、研究意义
本研究将进一步了解BMSCs移植联用MT对大鼠SCI的治疗效果和机制，为临
床SCI治疗提供理论和实验基础。
骨髓间充质干细胞移植对大鼠脑缺血再灌注损伤的修复作用
骨髓间充质干细胞移植对大鼠脑缺血再灌注损伤的修复作用许长春;郭云霞;许科鹏【期刊名称】《实用医药杂志》【年(卷),期】2011(28)2【摘要】目的探索骨髓间充质干细胞(MSCS)移植对脑梗死大鼠的脑分化及神经功能的修复作用.方法 30只SD大鼠随机分为假手术组、再灌注组和MSCs移植组.脑缺血再灌注损伤模型采用拴线法建立,术后对各组大鼠进行神经功能损害严重程度评分(NSS)及大脑组织切片观察比较.结果缺血1、7 d MSCs移植组大鼠NSS 与另外两组相比无显著性差异(P>0.05),但14、21 d时MSCS移植组NSS均明显低于缺血对照组(P<0.05).结论 MSCs在损伤后的脑组织内能够存活并且分化为神经元、胶质细胞等,对动物神经损伤后组织重建及功能恢复有一定的修复作用.【总页数】2页(P158-159)【作者】许长春;郭云霞;许科鹏【作者单位】266100,山东青岛,401医院;266100,山东青岛,401医院;266100,山东青岛,401医院【正文语种】中文【中图分类】R743.31;R551【相关文献】1.清热化瘀方联合骨髓间充质干细胞移植对脑缺血再灌注损伤大鼠血管新生的影响[J], 秦红玲;农必华;陈炜;胡玉英;何乾超;胡跃强2.骨髓间充质干细胞移植对大鼠脑缺血再灌注损伤的神经保护作用 [J], 汪皖君;管雅琳;王雅静;于长申;刘首峰;吕凤琼;王世民;王新平3.脑缺血预处理对大鼠脑缺血再灌注损伤保护作用的 Meta 分析 [J], 曾晓鹏;邹晓峰;陈丽4.骨髓间充质干细胞移植对大鼠脑缺血再灌注损伤Livin和Caspase-3表达的影响[J], 李文媛;王莹;孙平;贾桦;佟晓杰5.对羟基苯甲醛对模型大鼠脑缺血再灌注损伤修复作用研究 [J], 杨媛;代蓉;张冰琳;贾媛媛;马琛婧因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
骨髓间充质干细胞移植对缺血性脑损伤大鼠的治疗作用
【 Ａ ｂ ｓ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ 】 ０ ｂ ｊ ｅ ｃ ｔ ｉ ｖ ｅ Ｔ ｏ ｓ ｔ ｕ ｄ ｙ ｔ ｈ ｅ ｅ ｆ ｅ ｃ ｔ ｏ ｆ ｂ ｏ ｎ ｅ ｍａ ｒ ｒ ｏ ｗ ｍ ｅ ｓ ｅ ｎ ｃ ｈ ｙ ｍ ａ ｌ ｓ ｔ ｅ ｍ ｃ ｅ ｌ ｌ ｓ （ Ｂ ＭＳ Ｃ ｓ ） ｔ ｒ ａ ｎ ｓ ｐ ｌ ａ ｎ ｔ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ
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Bcl-2基因转染对骨髓间充质干细胞体外模拟缺血性损伤保护作用的实验研究
Bcl-2基因转染对骨髓间充质干细胞体外模拟缺血性损伤保护作用的实验研究Bcl-2基因转染对骨髓间充质干细胞体外模拟缺血性损伤保护作用的实验研究目的观察Bcl-2基因转染对骨髓间充质干细胞(MSCs)体外模拟缺血性损伤的保护作用,从而为下一步Bcl-2基因修饰的MSCs移植治疗脑缺血的实验研究奠定基础.方法采用密度梯度离心结合贴壁法分离、培养大鼠MSCs,对培养第5代的MSCs进行鉴定;用脂质体转染法对MSCs行人Bel-2(hBcb2)基因转染,转染后用G418进行筛选,然后用免疫荧光细胞化学技术检测其蛋白的表达;采用血清剥夺和缺氧(SOD)处理建立MSCs体外模拟缺血性损伤模型,通过流式细胞术和TUNEL原位细胞凋亡检测评价转染hBcl-2基因的MSCs和未转染的MSCs的凋亡及存活情况.结果密度梯度离心结合贴壁法能有效分离、纯化大鼠MSCs,免疫组化检测显示培养的细胞CD44、CD71表达阳性,而CD45表达阴性;转染hBcl-2基因的MSCs经G418筛选后有hBd-2蛋白的稳定、高效的表达;流式细胞术检测显示和MSCs相比,转染hBcb2基因的MSCs在SOD后及9h凋亡细胞较少,存活细胞较多.TUNEL原位细胞凋亡检测也显示转染hBcl-2基因的MSCs的凋亡明显减少(P<0.05).结论转染hBcl-2基因的MSCs有其蛋白的稳定表达,hBcl-2基因转染可对抗MSCs体外模拟缺血性损伤引起的细胞凋亡,从而具有保护性作用.作者：张小乔梅元武张红郑丽芳郭远瑾徐江华作者单位：张小乔(郧阳医学院附属十堰市太和医院神经内科)梅元武,张红,郑丽芳,郭远瑾,徐江华(华中科技大学同济医学院附属协和医院神经内科,武汉,430022)刊名：卒中与神经疾病ISTIC英文刊名：STROKE AND NERVOUS DISEASES 年，卷(期)：2008 15(3) 分类号：Q813 R743 关键词：Bcl-2 基因转染骨髓间充质干细胞缺血性损伤保护作用。
骨髓基质细胞及bcl-2基因联合治疗脑缺血大鼠疗效以及对IGF-1表达影响的研究
图１１．ｐＬＸＳＮ－ｂｃｌ一２／双酶切ｆｆｒ．ｏｇＩ，Ｘｈｏｎ２．ｍａｒｋｅｒｌ２２、神经功能评分结果：见表ｌ各组在ＭＣＡＯ再灌注１ｄ、３ｄ后神经功能评分组间差异无统计学意义（Ｐ＞０．０５）；再灌注７ｄ、１４ｄ后各治疗组神经功能评分明显低于空白对照组（Ｐ如．０５），而１４ｄ时ＭＳＣｓ＋ｂｃｌ－２组神经功能评分明显低于ｌｏｃｉ．２组及ＭＳＣｓ组（Ｐ＜Ｏ．０５）。
表１，各组神经功能评分（；埘注：・与空白对照组比较Ｐ（ｏ．０５群与ｂｃｌ．２组比较Ｐ＜ｏ．０５▲与ＭＳＣｓ组比ｇＵ＇＜０．０５３、ＢｒｄＵ免疫组织化学染色结果：见表２及图２，３空白对照组和ｂｅｌ．２组未见ＢｒｄＵ阳性细胞，ＭＳＣｓ组和ＭＳＣｓ＋ｂｃｌ一２组在缺血半球有大量ＢｒｄＵ阳性细胞，主要分布在梗死灶周围、大脑皮质和海马等处，对侧半图２，ＭＳＣｓ组ＢｒｄＵ免疫组化染色（４００×）图３，ＭＳＣｓ＋ｂｃｌ．２组ＢｒｄＵ免疫组化染色（４００Ｘ）图４，空白对照组ＩＧＦ．１免疫组化染色（４００Ｘ）图５，ｂｃｌ．２组ＩＧＦ。
１免疫组化染色（４００Ｘ）图６，ＭＳＣｓ组ＩＧＦ．１免疫组化染色（４００×）图７，ＭＳＣｓ＋ｂｃｌ．２组ＩＧＦ．１免疫组化染色（４００Ｘ）图８，空白对照组Ｂｅｌ．２免疫组化染色（４００Ｘ）图９，ｂｅｌ一２组Ｂｃｌ．２免疫组化染色（４００Ｘ）图１０，ＭＳＣｓ组Ｂｅｌ．２免疫组化染色（４００Ｘ）图１１，ＭＳＣｓ＋ｂｃｌ．２组Ｂｃｌ．２免疫组化染色（４００Ｘ）图１２，空白对照组ＴＵＮＥＬ细胞凋亡染色（４００Ｘ）图１３，ｂｃｌ．２组ＴＵＮＥＬ细胞凋亡染色（４００×）２１图１４，ＭＳＣｓ组ＴＵＮＥＬ细胞凋亡染色（４００Ｘ）图１５，ＭＳＣｓ＋ｂｃｌ．２组ＴＵＮＥＬ细胞凋亡染色（４００Ｘ）。
经鞘内注射pLXSN—bcl-2对缺血再灌注大鼠脑梗死体积及caspase-3蛋白的影响
【中 圈 分 类 号 ］ ４ Ｒ７ ３
【文 献 标 识 码 Ｉ Ｂ
【 章 编 号 】 ０ ６ １ ５ （ Ｏ Ｏ） ２ ０ Ｏ — ０ 文 ｌ０ — ９９２ １ １ — １４ １
脑缺 血 再灌 注后 神 经 细胞发 生 坏死 和凋 亡 ， 血 周 围 （ 暗带 区） 缺 半 的 细胞 发 生 延 迟 性 死 亡 即凋 亡 ， 此 ， 少 凋 亡 成 为 治 疗 本 病 的 关 键 。 因 减 Ｃ ｓ ａ ｅ ３ 凋亡 的重要 执 行者 ， ｅ ２ 抗 凋 亡基 因 。本 实 验 旨在 寻 ａ ｐ ｓ－ 是 ｂｌ 是 一 找 一条 有效 的 ， 创伤 小 的途径使 ｂ Ｉ ｃ 一２到达缺 血周 围 区 ， 大程 度 发挥 抗 最 凋 亡作 用 。 １ 材 料 和 方 法 １ １ 动 物及分 组 ： ． 健康 ｗｉ ａ 大 鼠， 重 ２ ０ ３ ０ ， 中 国医 科 大 ｓｒ ｔ 体 ５— ０ｇ由 学 实验 动物 中心 提 供 ， 随 机方 法 分 为 生理 盐水 组 、Ｐ ＸＳ Ｐ Ｘ Ｎ— 按 Ｌ Ｎ、 Ｌ Ｓ ｂｌ ， ２ ｃ一２ 各 ０只 。每组 分为 ＩＲ ２ ｈ ７ ｈ组 。 ／ ４ 、２ １ ２ 主 要试剂 ： 粒 Ｐ Ｘ Ｎ及 Ｐ ｘ Ｎ—ｂ ｌ ． 质 ＬＳ Ｌ ｓ ｃ一２由中 国人 民解 放 军 第 二军 医大 学东 方肝胆 外科 医院钱 其军 博士 惠赠 。 １ ３ 质粒 鉴定 提取 及扩增 ： 照何 志义 等报道 的方 法 提取 质 粒ｌ 然 ． 按 ＿ １ Ｊ 后 用紫 外分 光光 度法测 定提 取的质 粒 Ｐ ＸＳ 及 Ｐ ｘ Ｎ—ｂ ｌ ２ 度 分 Ｌ Ｎ Ｌｓ ｃ 一 浓
Ｂｃ一 ２组 与 生 理 盐 水 组 相 比 ’Ｐ ｏ ０ 空 质 粒 组 与 生 理 盐 水 组 ～ Ｐ ｌ ＜ ． ５，
稳定表达Bcl-2的骨髓间充质干细胞载体的建立及对缺血性损伤保护作用的实验研究
稳定表达Bcl-2的骨髓间充质干细胞载体的建立及对缺血性损伤保护作用的实验研究何凡;何志义;李蕾;秦雪;邓淑敏;刘芳;阮杏林;冯程程【期刊名称】《中国医科大学学报》【年(卷),期】2010(039)008【摘要】目的构建稳定表达Bcl-2基因的大鼠骨髓间充质干细胞(MSC)载体,观察Bcl-2基因转染对骨髓间充质干细胞生物特性的影响及体外模拟缺血性损伤的保护作用.方法用RT-PER技术扩增小鼠Bcl-2 cDNA,慢病毒介导的基因转导骨髓间充质干细胞,转导后的细胞用Puromycin筛选,RT-PER法检测转染后Bcl-2的表达,采用血清剥夺和缺氧(SOD)处理建立MSC体外模拟缺血性损伤模型,通过流式细胞术评价转染Bcl-2基因的MSC和未转染的MSC的凋亡及存活情况.对转导Bcl-2的MSC神经诱导及检测.结果转导Bcl-2基因的MSC经Puromycin筛选后可稳定、高效表达Bcl-2蛋白;流式细胞术检测显示:和MSC相比,转导Bcl-2基因的MSC在SOD后凋亡细胞较少,存活细胞较多.转导Bcl-2基因的MSC仍具有向神经细胞分化的潜能.结论慢病毒介导的Bcl-2基因转导MSC有其蛋白的稳定表达,Bcl-2基因转导可对抗MSC体外模拟缺血性损伤引起的细胞凋亡,从而具有保护性作用,且不影响MSC向神经细胞分化的潜能.【总页数】4页(P599-602)【作者】何凡;何志义;李蕾;秦雪;邓淑敏;刘芳;阮杏林;冯程程【作者单位】中国医科大学,第一附属医院神经内科,沈阳,110001;沈阳军区总医院,神经内科,沈阳,110016;中国医科大学,第一附属医院神经内科,沈阳,110001;中国医科大学,第一附属医院神经内科,沈阳,110001;中国医科大学,第一附属医院神经内科,沈阳,110001;中国医科大学,第一附属医院神经内科,沈阳,110001;中国医科大学,第一附属医院神经内科,沈阳,110001;中国医科大学,第一附属医院神经内科,沈阳,110001;中国医科大学,第一附属医院神经内科,沈阳,110001【正文语种】中文【中图分类】R741【相关文献】1.大鼠缺血性心肌损伤中线粒体磷酸转载体的表达情况及姜黄素的保护作用研究[J], 乔智力;王媛缓;丁兆敏;高凤敏;李雪峰;徐彪2.骨髓间充质干细胞移植对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤的保护作用 [J], 闫迪;耿华瞻;贾蓓;徐瑞;张娅娴;赵冬梅3.Bcl-2重组腺病毒载体在小肠缺血再灌注损伤中的保护作用 [J], 万敬枝;查文良;白育庭;高卉4.人全长HGF基因真核表达载体的构建及在骨髓间充质干细胞中表达的实验研究[J], 俞悦;王学浩5.腺病毒载体介导bcl-2基因转染在离体和在体状态下对损伤运动神经元的保护作用 [J], 杨萍;应大君;宋林;孙建森因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
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８、图像分析及统计学处理
每个标本取两张切片，在光学显微镜下随机于梗死灶边缘、海马及纹状体区计数５个高倍视野（ＨＰＦ，×４００），显微图像分析系统采集图像。
ＢｒｄＵ：细胞核中呈棕黄色颗粒者为阳性细胞，计数阳性细胞数；ＢＤＮＦ、Ｂｃｌ一２：细胞浆中呈棕黄色颗粒者为阳性细胞，分析阳性细胞面积百分比。
ＴＵＮＥＬ：细胞核中有棕黄色颗粒者为阳性细胞，计数凋亡细胞数。
全部资料采用ＳＰＳＳｌ３．Ｏ统计软件包进行统计分析。
各组数据均以Ｍｅａｎｓ±ＳＤ表示，行单因素方差分析进行检验，两两之间的比较采用ＳＮＫ法，Ｐ＜Ｏ．０５表示差异有显著性。
实验结果
１、ＭＳＣ的生物学特性
原代培养三天左右贴壁，７２小时后首次半量换液，七天左右可传代，传至第三代时可基本去除杂细胞，观察到骨髓基质细胞呈梭形和扁平形的典型细胞形态，旋涡状生长（图１）。
三至六代细胞形态稳定，每五～六天传代一次，传至第六代以后细胞内出现大量颗粒及空泡（图２），细胞生长缓慢，大量细胞脱落死亡。
２、ｐＬＸＳＮ－ｂｃｌ一２的鉴定结果（图３）
分光光度计检测质粒浓度为０．６１２９９／ｍｌ，电泳鉴定结果如图所示。
图３，ｐＬＸＳＮ—ｂｃｌ一２双酶切产物电泳鉴定
３、神经功能评分
生理盐水组、单纯ＭＳＣ组、ｂｃｌ一２组内两时间点差异无统计学意义，实验组
明显减少（Ｐ＜０。
０５）。
表５，各组各时间点细胞凋亡情况（；士＿订
细胞凋亡情况
３ｄ１４ｄ
单纯ＭＳＣ组８５．４±３．３６＊９１．８±５．６３＊
单纯ｂｃｌ一２组７８＿＋２．４５＊８３．２±５．９７宰＃实验组５８．６＋４．７２．＃Ａ６１．４±１．８２牛＃△
＃与单纯ＭＳＣ组比较Ｐ＜０．０５
△与单纯ｂｃｌ－２组比较Ｐ＜０．０５
１
２
图１，细胞培养至第三代时的细胞形态照片
２
图２，细胞培养至第七代时的细胞形态照片
图４，空白对照组大鼠１４ｄ海马部位ＢＤＮＦ表达情况免疫组化染色照片（×４００）
图５，单纯ＭＳＣ组大鼠１４ｄ海马部位ＢＤＮＦ表达情况免疫组化染色照片（Ｘ４００）
图６，单纯ｂｃｌ一２组大鼠１４ｄ海马部位ＢＤＮＦ表达情况免疫组化染色照片（×４００）
图７，实验组大鼠１４ｄ海马部位ＢＤＮＦ表达情况免疫组化染色照片（Ｘ４００）
图８，空白对照组大鼠１４ｄ海马部位ｂｃｌ－２蛋白表达情况免疫组化染色照片（Ｘ４００）
图９，单纯ＭＳＣ组大鼠１４ｄ海马部位ｂｃｌ一２蛋白表达情况免疫组化染色照片（Ｘ４００）
图ｌＯ，单纯ｂｃｌ一２组大鼠１４ｄ海马部位ｂｃｌ－２蛋白表达情况免疫组化染色照片（×４００）
图１ｌ，实验组大鼠１４ｄ海马部位ｂｃｌ－２蛋白表达情况免疫组化染色照片（Ｘ４００）
讨论
骨髓间充质干细胞以其特有的优点成为移植治疗脑缺血的重要细胞来源，为脑缺血的细胞治疗和基因治疗奠定了基础【５１。
目前ＭＳＣ对实验大鼠脑梗死的治疗效果已经得到肯定，但是移植入脑的ＭＳＣ面临的一个很大的问题就是细胞凋亡，Ｈａｎａｂｕｓａ等【６ｌ将具有抗凋亡作用的肾上腺髓质素（Ａｄｒｅｎｏｍｅｄｕｌｌｉｎ）与ＭＳＣ联合应用来治疗大鼠局灶性脑梗死，另有文献报道将Ｚ－ＶＡＤ与ＭＳＣｓ联合应用川，均能明显抑制ＭＳＣｓ的凋亡，联合治疗组ＭＳＣ的存活率以及大鼠神经功能恢复都明显优于单纯ＭＳＣ组；说明ＭＳＣ与具有抗凋亡作用的药物联合应用是可行的。
ｂｃｌ一２是一种已知的抗凋亡基因，何等‘８・卅已应用质粒ｐＬＸＳＮ携带ｂｃｌ一２基因治疗大鼠局灶性脑梗死并取得治疗效果，减少脑内的神经细胞凋亡，大鼠的神经功能得到改善，本研究将ＭＳＣ与ｐＬＸＳＮ—ｂｃｌ－２联合作用于大鼠脑缺血模型，并证实两种因素联合作用治疗效果明显优于单因素作用：神经功能评分明显降低、ＢＤＮＦ表达水平显著增多、ＭＳＣ的存活数量明显较多、凋亡细胞数量明显减少。
本实验体外标记ＭＳＣｓ，观察到ＢｒｄＵ染色阳性细胞主要分布在梗死灶周边区。