植物组织蛋白质提取方法汇总
蛋白质提取方法(个人总结篇)
植物蛋白质提取方法汇总（本人经验总结）一、植物组织蛋白质提取方法1、根据样品重量（1g样品加入3.5ml提取液，可根据材料不同适当加入），准备提取液放在冰上。
2、把样品放在研钵中用液氮研磨，研磨后加入提取液中在冰上静置（3-4小时）。
3、用离心机离心8000rpm40min4℃或11100rpm20min4℃4、提取上清液，样品制备完成。
蛋白质提取液：300ml1、1Mtris-HCl（PH8）45ml2、甘油（Glycerol）75ml3、聚乙烯吡咯烷酮（Polyvinylpolypyrrordone）6g这种方法针对SDS-PAGE，垂直板电泳！二、植物组织蛋白质提取方法氯醋酸—丙酮沉淀法1、在液氮中研磨叶片2、加入样品体积3倍的提取液在-20℃的条件下过夜，然后离心（4℃8000rpm 以上1小时）弃上清。
3、加入等体积的冰浴丙酮（含0.07%的β-巯基乙醇），摇匀后离心（4℃8000rpm 以上1小时），然后真空干燥沉淀，备用。
4、上样前加入裂解液，室温放置30分钟，使蛋白充分溶于裂解液中，然后离心（15℃8000rpm以上1小时或更长时间以没有沉淀为标准），可临时保存在4℃待用。
5、用Brandford法定量蛋白，然后可分装放入-80℃备用。
药品：提取液：含10%TCA和0.07%的β-巯基乙醇的丙酮。
裂解液：2.7g尿素0.2gCHAPS溶于3ml灭菌的去离子水中（终体积为5ml），使用前再加入1M 的DTT65ul/ml。
这种方法针对双向电泳，杂质少，离子浓度小的特点！当然单向电泳也同样适用，只是电泳的条带会减少！三、组织：肠黏膜目的：WESTERN BLOT检测凋亡相关蛋白的表达应用TRIPURE提取蛋白质步骤：含蛋白质上清液中加入异丙醇：（1.5ml每1mlTRIPURE用量）倒转混匀，置室温10min离心：12000 g，10min，4度，弃上清加入0.3M盐酸胍/95％乙醇：（2ml每1mlTRIPURE用量）振荡，置室温20min离心：7500g，5 min，4度，弃上清重复0.3M盐酸胍/95％乙醇步2次沉淀中加入100％乙醇2ml充分振荡混匀，置室温20 min离心：7500g，5min，4度，弃上清吹干沉淀1％SDS溶解沉淀离心：10000g，10min，4度取上清-20度保存（或可直接用于WESTERN BLOT）存在的问题：加入1％SDS后沉淀不溶解，还是很大的一块，4度离心后又多了白色沉定，SDS结晶？测浓度，含量才1mg/ml左右。
植物蛋白质提取方法汇总
植物蛋白质提取方法汇总一、植物组织蛋白质提取方法1、根据样品重量(1g样品加入3.5ml提取液，可根据材料不同适当加入)，准备提取液放在冰上。
2、把样品放在研钵中用液氮研磨，研磨后加入提取液中在冰上静置(3-4小时)。
3、用离心机离心8000rpm40min4?或11100rpm20min4?4、提取上清液，样品制备完成。
蛋白质提取液:300ml1、1Mtris-HCl(pH8)45ml2、甘油(Glycerol)75ml3、聚乙烯吡咯烷酮(Polyvinylpolypyrrordone)6g这种方法针对SDS-PAGE，垂直板电泳～二、植物组织蛋白质提取方法氯醋酸―丙酮沉淀法1、在液氮中研磨叶片2、加入样品体积3倍的提取液在-20?的条件下过夜，然后离心(4?8000rpm以上1小时)弃上清。
3、加入等体积的冰浴丙酮(含0.07%的β-巯基乙醇)，摇匀后离心(4?8000rpm 以上1小时)，然后真空干燥沉淀，备用。
4、上样前加入裂解液，室温放置30分钟，使蛋白充分溶于裂解液中，然后离心(15?8000rpm以上1小时或更长时间以没有沉淀为标准)，可临时保存在4?待用。
5、用Brandford法定量蛋白，然后可分装放入-80?备用。
药品:提取液:含10%TCA和0.07%的β-巯基乙醇的丙酮。
裂解液:2.7g尿素0.2gCHAPS溶于3ml灭菌的去离子水中(终体积为5ml)，使用前再加入1M的DTT65μl/ml。
这种方法针对双向电泳，杂质少，离子浓度小的特点～当然单向电泳也同样适用，只是电泳的条带会减少～三、组织:肠黏膜目的:WESTERN BLOT检测凋亡相关蛋白的表达应用TRIPURE提取蛋白质步骤: 含蛋白质上清液中加入异丙醇:(1.5ml每1mlTRIPURE用量)倒转混匀，置室温10min离心:12000 g，10min，4度，弃上清加入0.3M盐酸胍/95%乙醇:(2ml每1mlTRIPURE用量) 振荡，置室温20min 离心: 7500g，5 min，4度，弃上清重复0.3M盐酸胍/95%乙醇步2次沉淀中加入100%乙醇 2ml充分振荡混匀，置室温20 min离心: 7500g，5min，4度，弃上清吹干沉淀1%SDS溶解沉淀离心:10000g，10min，4度取上清-20度保存(或可直接用于WESTERN BLOT) 存在的问题:加入1%SDS后沉淀不溶解，还是很大的一块，4度离心后又多了白色沉定，SDS结晶,测浓度，含量才1mg/ml左右。
不同组织的蛋白提取方法99
不同组织的蛋白提取方法2017-07-18不同组织的蛋白提取方法一、植物组织蛋白质提取方法1、根据样品重量（1g样品加入3.5ml提取液，可根据材料不同适当加入），准备提取液放在冰上。
2、把样品放在研钵中用液氮研磨，研磨后加入提取液中在冰上静置（3-4小时）。
3、用离心机离心8000rpm40min4℃或11100rpm20min4℃4、提取上清夜，样品制备完成。
蛋白质提取液：300ml1、1Mtris-HCl（PH8）45ml2、甘油（Glycerol）75ml3、聚乙烯吡咯烷酮（Polyvinylpolypyrrordone6g这种方法针对SDS-PAGE，垂直板电泳！或者用三氯醋酸―丙酮沉淀法，离子浓度小的1、在液氮中研磨叶片2、加入样品体积3-204℃8000rpm以上13、的β-巯基乙醇），摇匀后离心（4℃8000rpm以上14、上样前加入裂解液，室温放置30分钟，使蛋白充分溶于裂解液中，然后离心（15℃8000r pm以上1小时或更长时间以没有沉淀为标准），可临时保存在4℃待用。
5、用Brandford法定量蛋白，然后可分装放入-80℃备用。
药品：提取液：含10%TCA和0.07%的β-巯基乙醇的丙酮裂解液：2.7g尿素0.2gCHAPS溶于3ml灭菌的去离子水中（终体积为5ml），使用前再加入1M的'DTT65ul/ml。
二、组织：肠黏膜应用TRIPURE提取蛋白质步骤：含蛋白质上清液中加入异丙醇：（1.5ml每1mlTRIPURE用量）倒转混匀，置室温10min离心：12000g，10min，4度，弃上清加入0.3M盐酸胍/95％乙醇：（2ml每1mlTRIPURE用量）振荡，置室温20min离心：7500g，5min，4度，弃上清重复0.3M盐酸胍/95％乙醇步2次沉淀中加入100％乙醇2ml充分振荡混匀，置室温20min离心：7500g，5min，4度，弃上清吹干沉淀1％SDS溶解沉淀离心：10000g，10min，4度取上清-20度保存（或可直接用于BLOT存在的问题：加入1％SDS4度离心后又多了白色沉定，SDS左右。
植物蛋白质的提取方法及举例
植物蛋白质提取关键点：a、种子研磨充分 b、蛋白质尽量溶解 c、蛋白质尽量沉淀所需药品：NaCl、C2H5OH、(NH4)2SO4、NaOH、H Cl、CH3COOH﹑Na2SO4﹑冰水注：Na2SO4,芒硝，禁与强酸、铝、镁相配。
药品溶解度：NaCl，36g[20℃]; (NH4)2SO4，76.7g[25℃]; Na2SO4, 19.5g[20℃]其中溶解蛋白质的常用中性盐是NaCl、(NH4)2SO4、Na2SO4、Mg2SO4等①、盐析法﹕原理：蛋白质在水溶液中的溶解度取决于蛋白质分子表面离子周围的水分子数目，亦即主要是由蛋白质分子外周亲水基团与水形成水化膜的程度以及蛋白质分子带有电荷的情况决定的。
蛋白质溶液中加入中性盐后，由于中性盐与水分子的亲和力大于蛋白质，致使蛋白质分子周围的水化层减弱乃至消失。
同时，中性盐加入蛋白质溶液后由于离子强度发生改变，蛋白质表面的电荷大量被中和，更加导致蛋白质溶解度降低，之后蛋白质分子之间聚集而沉淀。
由于各种蛋白质在不同盐浓度中的溶解度不同，不同饱和度的盐溶液沉淀的蛋白质不同，从而使之从其他蛋白中分离出来。
简单的说就是将硫酸铵、硫化钠或氯化钠等加入蛋白质溶液，使蛋白质表面电荷被中和以及水化膜被破坏，导致蛋白质在水溶液中的稳定性因素去除而沉淀。
步骤：溶解蛋白质→离心→取上清液，盐析（低温）→离心沉淀蛋白质→透析②﹑等电点法（本方法中最好不要用Na2SO4）：原理：在等电点时，蛋白质分子以两性离子形式存在，其分子净电荷为零(即正负电荷相等)，此时蛋白质分子颗粒在溶液中因没有相同电荷的相互排斥，分子相互之间的作用力减弱，其颗粒极易碰撞、凝聚而产生沉淀，所以蛋白质在等电点时，其溶解度最小，最易形成沉淀物。
等电点时的许多物理性质如黏度、膨胀性、渗透压等都变小，从而有利于悬浮液的过滤。
步骤：溶解蛋白质→离心→取上清液，调节PH，析出蛋白质→离心沉淀蛋白质→ 透析③、有机溶剂法：原理：有机溶剂能降低溶液的电解常数，从而增加蛋白质分子上不同电荷的引力，导致溶解度的降低；另外，有机溶剂与水的作用，能破坏蛋白质的水化膜，故蛋白质在一定浓度的有机溶剂中的溶解度差异而分离的方法，称“有机溶剂分段沉淀法”，它常用于蛋白质或酶的提纯。
植物蛋白质提取方法
植物蛋白质提取方法1.机械破碎法机械破碎法是最常用的蛋白质提取方法之一、这种方法使用高速离心或超声波破碎将植物细胞破碎，释放细胞内的蛋白质。
然后通过离心或过滤将残渣去除，得到植物蛋白质溶液。
2.酸碱提取法酸碱提取法是利用酸碱条件使植物细胞膜溶解，从而释放出蛋白质。
首先将植物材料切碎，然后浸泡在酸碱溶液中。
酸性条件下可溶解细胞壁，碱性条件下可溶解细胞质膜，从而释放蛋白质。
最后通过离心或过滤将杂质去除，得到纯化的植物蛋白质。
3.毛细管电泳法毛细管电泳法是一种利用电场和毛细管将植物蛋白质按照电荷和大小进行分离的方法。
首先将植物材料研磨成粉末，然后将粉末溶解在缓冲液中，再将溶液注入毛细管。
通过施加高电压，蛋白质会被带动在毛细管中移动，根据蛋白质的电荷和大小的不同，移动速度也不同，从而实现分离。
4.总蛋白质沉淀法总蛋白质沉淀法是一种简单且高效的蛋白质提取方法。
首先将植物样品研磨成粉末，然后加入缓冲液进行溶解。
接着加入有机溶剂如酒精或丙酮，使蛋白质沉淀。
将沉淀经过离心后，去除上清液，然后用溶液再次洗涤沉淀。
最后用适当的溶剂溶解沉淀，得到纯净的植物蛋白质。
5.亲和层析法亲和层析法是利用一些特定亲和剂与目标蛋白质之间的特异结合来分离纯化蛋白质的方法。
首先将亲和剂固定在其中一种固定相上，列入柱中。
然后将植物蛋白质样品加入柱中，目标蛋白质与亲和剂结合，其他杂质被洗脱。
然后调整条件，将目标蛋白质洗脱下来，得到纯化的植物蛋白质。
综上所述，植物蛋白质提取方法有多种选择，根据实际需求和植物材料的特性，可以选择合适的提取方法进行蛋白质的纯化。
这些方法都有各自的优缺点，需要根据具体的实验条件和目的进行选择。
植物蛋白提取
植物蛋白提取概述植物蛋白提取是一种研究领域，致力于从植物中提取纯度较高的蛋白质。
蛋白质是生命体中重要的组成部分，对于人类的健康和发展有着重要的作用。
植物蛋白提取技术不仅可以应用于食品工业，还可以应用于药物研发、生物学研究等领域。
提取方法1. 碱提取法碱提取法是最常用的植物蛋白提取方法之一。
它是通过将植物材料与碱性溶液进行混合，使蛋白质溶解在溶液中，然后通过离心等方法将蛋白质和其他杂质分离。
2. 酸提取法酸提取法与碱提取法类似，只是使用酸性溶液来溶解蛋白质。
酸提取法可以提取到一些碱性蛋白质，如谷蛋白等。
3. 酶解法酶解法是利用特定的酶将植物材料中的蛋白质降解为较小的分子量，然后再进行分离和纯化。
酶解法可以提取到一些难溶于水的蛋白质。
冷冻法是一种常用的非溶剂提取方法。
将植物材料冷冻后进行研磨，使细胞壁破裂，然后通过离心等方法将蛋白质和其他杂质分离。
提取步骤植物蛋白提取的一般步骤如下：1.准备植物材料：选择新鲜植物组织作为原料，并将其洗净去除杂质。
2.研磨处理：将植物样品研磨成细粉末。
3.溶解溶液：根据不同的提取方法选择合适的提取溶液，如碱性溶液、酸性溶液或酶解液等。
4.提取过程：将细粉末与提取溶液进行混合，并进行适当的搅拌或震荡，使蛋白质溶解在溶液中。
5.分离纯化：通过离心、过滤或电泳等方法将蛋白质和其他杂质进行分离。
6.蛋白质浓缩：将分离得到的蛋白质溶液进行浓缩，以提高蛋白质的纯度。
7.纯化蛋白质：利用离子交换层析、凝胶过滤层析或逆流色谱等方法对蛋白质进行纯化。
8.蛋白质质量分析：对提取得到的蛋白质进行质量分析，如电泳、质谱等方法。
植物蛋白提取技术具有广泛的应用领域，包括但不限于以下几个方面：1. 食品工业植物蛋白是一种重要的食品添加剂，可以用于增加产品的营养价值、改善质地和口感等。
植物蛋白提取技术可以提取大豆蛋白、豌豆蛋白等常用的植物蛋白原料，被广泛应用于肉制品、豆制品、蛋制品等食品加工工艺中。
植物提取蛋白质的方法
植物提取蛋白质的方法植物提取蛋白质是一项关键的实验技术，它可以用于分离纯化和研究各种不同的植物蛋白质。
在这篇文章中，我将介绍一些常见的植物提取蛋白质的方法。
一、机械法提取蛋白质机械法提取蛋白质是最常见的提取方法之一。
机械方法能够充分破碎植物细胞壁，释放细胞液中的蛋白质。
这一方法相对简单，并且适用于大多数植物材料。
首先，将植物样品切碎，例如使用搅拌器或切割机。
然后，将样品置于高速搅拌器中，加入一定量的提取缓冲液。
提取缓冲液的选择会因不同植物而异，常见的包括Tris-HCl缓冲液、PBS缓冲液等。
随后，搅拌样品，使其充分混合，一般搅拌时间为30分钟到1小时。
搅拌完成后，使用离心机将混合液离心，离心时间和速度会因样品的不同而有所变化。
离心完成后，上清液中富含蛋白质，可以用于进一步的分离纯化。
二、化学法提取蛋白质化学法提取蛋白质是一种革命性的方法，它可以应用于很多不同类型的植物材料。
化学法提取蛋白质通常使用表面活性剂来破坏细胞膜，从而释放蛋白质。
一个常用的化学法是使用Tween-20。
首先，将植物样品切碎，然后将样品与一定量的提取缓冲液一起加入离心管中。
提取缓冲液中含有Tween-20等表面活性剂，作用是破坏细胞膜结构。
然后，使用离心机将混合液离心，离心时间和速度的选择会因样品的不同而有所不同。
离心完成后，上清液中富含蛋白质，可以用于进一步的分离纯化。
化学法提取蛋白质相比机械法来说，可以更彻底地破坏细胞膜，更有效地释放蛋白质。
但是，使用化学方法也要注意表面活性剂的种类和浓度，过高的浓度可能会使得蛋白质变性。
三、酶解法提取蛋白质酶解法提取蛋白质是一种选择性高、过程温和的方法。
它利用酶的特异性作用，选择性地降解植物组织中的细胞壁，从而释放蛋白质。
酶解法的步骤较为简单。
首先，将植物样品切碎，然后加入适量的酶解缓冲液和适当浓度的酶。
酶解缓冲液的选择会因不同酶而异，常见的包括PBS缓冲液和Tris-HCl缓冲液等。
植物蛋白质组研究技术
植物蛋白质组研究技术（内部使用）一、蛋白质提取方法：直接研磨法：将植物材料剪碎于加有一定量的样品缓冲液（材料g：缓冲液ml＝1:4）的预冷的研钵中，冰上进行研磨至匀浆。
4o C下15000 rpm离心15 min，上清夜即为蛋白质抽提液。
电泳前将该提取液在相同条件下再离心一次即可。
该方法适用于极幼嫩的植物组织或幼苗以及白化、黄化苗等。
TCA/丙酮沉淀法：A）植物组织在液氮中研磨成精细的粉末后加入10％TCA（丙酮为溶剂）在－20o C下沉淀1 h以上（可以过夜）。
溶液在4o C下15000 rpm离心15 min。
沉淀用丙酮清洗三次（至丙酮为无色止），相同条件下离心后，沉淀真空干燥（约5 min 即可）。
真空干燥后所得的干粉按每30 mg加1ml样品缓冲液进行溶解（室温下1 h以上）。
可以进行振荡或超声波助溶。
溶解后的样品4o C下15000 rpm离心15 min后取上清液即为蛋白质提取液。
B）植物组织在匀浆缓冲液中4o C下研磨至匀浆【样品于缓冲液之比（g/ml）随样品的不同而有所不同，一般幼嫩或含水量比较丰富的组织为1：3－4，而生理年龄较老的组织约为1：8－10】。
匀浆液4o C下15000 rpm离心15 min后取上清液，往上清中加入50％TCA（水为溶剂）至TCA浓度为10％，冰上沉淀30 min，相同条件下离心，沉淀用丙酮清洗3次，离心后真空干燥即可得蛋白干粉。
将蛋白干粉按所需的比例溶于样品缓冲液中（振荡助溶1 h）即可。
酚抽提法：植物组织在匀浆缓冲液中4o C下研磨至匀浆【样品于缓冲液之比（g/ml）随样品的不同而有所不同，一般幼嫩或含水量比较丰富的组织为1：3－4，而生理年龄较老的组织约为1：8－10】。
匀浆液4o C下15000 rpm离心15 min后取上清液，往上清夜中加入相同体积的Tris饱和酚（pH 8.0）上下倒置充分混匀后15000 rpm离心5－10 min。
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用200毫摩每升的tris-cl 和62.5毫摩每升的tris-cl,我们研究室一般用１００毫摩每升的tris-cl，pH 8.0 ．另外，最好加１５０毫摩每升的ＮaCl，用来分离以弱电荷结合到多糖上的蛋白。
2我提的蛋白难溶，请问怎么解决？1、请问这是为什么呢？怎么解决？
2、溶解时是先在100℃沸水浴后在涡旋吗？
3、涡旋时产生大量泡沫，对蛋白有影响吗？
4、是在常温溶解还是在4℃？或-20℃？
5、一般溶解需要多长时间？怎样才算溶解充分了？
我也是做植物叶片的，建议你可以用TCA-丙酮沉淀，方法如下：
1、在液氮中研磨叶片30min，加PVP，和石英砂
2、加入样品体积3倍的提取液(丙酮溶液1)在-20℃的条件下过夜，然后离心（4℃10000rpm以上1小时）弃上清。
3. 每份加入9ml丙酮溶液II，捣碎沉淀，常温振动混匀，-20℃沉淀1h；10000rpm，4℃离心15min，弃上清.
4. 每份加入9ml丙酮溶液II，常温振动混匀，-20℃沉淀1h；10000rpm，4℃离心15min，弃上清.
5. 每份加入9ml 80%丙酮溶液III, 常温振动混匀，-20℃沉淀1h, 10000rpm，4℃离心15min，弃上清6．干燥成硬块，磨成粉磨-20℃保存待用。
第二个问题：
37度水浴
第三个问题：
涡旋时产生大量泡沫，没有影响
第四个问题：
37度溶解
第五个问题
1个小时，中间混匀数次
出现这种情况是很正常的，要是全部都溶了倒是不太正常。
用沉淀法浓缩蛋白都存在一个变性的问题，在具体的操作过程中，有一部分蛋白变性了，所以会不溶解。
操作的时候尽量保持低温！
溶解的时候可以在常温下，蛋白变成粉末后，立即加1*SDS上样缓冲液，用加样器吹打，大约5分钟就好，可以用来进行下一步的实验了。
也可以在4度溶解过夜。
涡旋时产生大量泡沫，个人认为影响不大
一般溶解半个小时就很充分了，但仍会有很多不溶物！可以离心弃掉！丙酮沉淀之后要干燥，这个过程一定不要时间太长，不然样品干燥得过了，就很难溶了。
即使你加上了硫脲，高浓度尿素也不行。
我的经验是只要半个小时左右就足够了，表面上看上去比较干就可以了。