微生物实验(4)_PPT幻灯片
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微生物学实验ppt课件
器材与试剂的选用原则
03
如无菌操作、适用性、经济性等
02
细菌形态与结构观察
细菌培养及形态特征
01
02
03
细菌培养方法
包括需氧培养、厌氧培养 和兼性厌氧培养等，不同 种类的细菌需要不同的培 养条件。
细菌菌落特征
观察细菌在固体培养基上 形成的菌落，了解其形状、 大小、颜色、透明度等特 征。
细菌细胞形态
05
微生物代谢活性测定
生长曲线测定方法
直接计数法
通过显微镜直接观察并计数微生物数量，适用于较大微生物如细 菌、酵母菌等。
比浊法
利用微生物生长引起培养液浊度变化来测定生长曲线，操作简便 但易受杂质干扰。
平板菌落计数法
将待测样品稀释后涂布于固体培养基表面，培养后计数形成的菌 落数，适用于可形成菌落的微生物。
原理
病毒必须寄生在活细胞内才能增 殖，通过提供适宜的细胞环境， 使病毒在细胞内复制并产生子代
病毒。
病毒检测技术及应用
免疫学方法
利用抗原抗体特异性结合的原理，通过酶联免疫吸附试验 （ELISA）、免疫荧光技术等检测病毒抗原或抗体。
分子生物学方法
基于病毒核酸的特异性，利用PCR、实时荧光定量PCR等技术扩增 并检测病毒核酸。
微生物学实验ppt课件
contents
目录
• 实验基础知识 • 细菌形态与结构观察 • 真菌形态与结构观察 • 病毒培养与检测技术 • 微生物代谢活性测定 • 微生物遗传与变异研究 • 微生物生态学及环境因子影响研究
01
实验基础知识
微生物学概述
类生活中的作用：如 生态平衡、发酵工业 等
生理生化鉴定
利用真菌的生理生化特性，如营养需 求、代谢产物等，进行进一步的分类 鉴定。
微生物实验室ppt课件
2021精选ppt
2
•2
微生物实验室的分区
一般分为下列区域: 接样室、样品保存室、培养基配制室、洁净室、生化室 、培养室、仪器室和洗刷消毒室，此外还有办公室。
2021精选ppt
3
•3
2021精选ppt
4
•4
实验室核心工作间的照度不低于350 lx,其他区域照度不低于 200 lx，宜采取吸顶式防水洁净照明灯。
2021精选ppt
16
•16
天平
最大量程：100g、120g等 可读性精度：0.1mg
2021精选ppt
17
•17
精密电子稀释仪
样品量：0.5-1000g（依靠系数调整） 稀释系数：2-1000 液流速度：950ml/min 重量误差精度：<1%
能够准确释放稀释液的重量。
借助经过消毒的均质袋，可对样本进行 准确的稀释，最大程度地减少手工接触 操作，避免样品污染。
实验室的温度宜控制18℃~26℃范围内。
实验室的相对湿度宜控制30%~70%范围内。
在安全柜开启情况下，核心工作间的噪声应不大于68 dB(A)。
------GB 19489-2008 实验室 生物安全通用要求
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5
•5
病原微生物分类
国家根据病原微生物的传染性、感染后对个体或者群体的危害程度， 将病原微生物分为四类： 第一类 指能够引起人类或者动物非常严重疾病的微生物，以及我 国尚未发现或者已经宣布消灭的微生物。（天花病毒）
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10
•10
洁净室分级
洁净度级别 100级
尘粒最大允
≥0.5μm尘粒数
浮游菌/立方米
3,500
微生物实验四放线菌、霉菌、酵母菌的形态观察32页PPT
的形态观察
1、纪律是管理关系的形式。——阿法 纳西耶 夫 2、改革如果不讲纪律，就难以成功。
3、道德行为训练，不是通过语言影响 ，而是 让儿童 练习良 好道德 行为， 克服懒 惰、轻 率、不 守纪律 、颓废 等不良 行为。 4、学校没有纪律便如磨房里没有水。 ——夸 美纽斯
5、教导儿童服从真理、服从集体，养 成儿童 自觉的 纪律性 ，这是 儿童道 德教育 最重要 的部分 。—— 陈鹤琴
66、节制使快乐增加并使享受加强。 ——德 谟克利 特 67、今天应做的事没有做，明天再早也 是耽误 了。——裴斯 泰洛齐 68、决定一个人的一生，以及整个命运 的，只 是一瞬 之间。 ——歌 德 69、懒人无法享受休息之乐。——拉布 克 70、浪费时间是一桩大罪过。——卢梭
1、纪律是管理关系的形式。——阿法 纳西耶 夫 2、改革如果不讲纪律，就难以成功。
3、道德行为训练，不是通过语言影响 ，而是 让儿童 练习良 好道德 行为， 克服懒 惰、轻 率、不 守纪律 、颓废 等不良 行为。 4、学校没有纪律便如磨房里没有水。 ——夸 美纽斯
5、教导儿童服从真理、服从集体，养 成儿童 自觉的 纪律性 ，这是 儿童道 德教育 最重要 的部分 。—— 陈鹤琴
66、节制使快乐增加并使享受加强。 ——德 谟克利 特 67、今天应做的事没有做，明天再早也 是耽误 了。——裴斯 泰洛齐 68、决定一个人的一生，以及整个命运 的，只 是一瞬 之间。 ——歌 德 69、懒人无法享受休息之乐。——拉布 克 70、浪费时间是一桩大罪过。——卢梭
微生物学实验 PPT课件
微生物学实验目录
实验一：光学显微镜的构造和使用方法 实验二: 细菌的革兰氏染色 实验三：酵母水浸片的制备－细胞数及死亡率的测定 实验四：显微镜测微技术 实验五：霉菌形态观察 实验六：培养基的制备与灭菌 实验七：微生物的分离与筛选 实验八：淀粉酶产生菌的检出 实验九：大肠杆菌的主要生化特性 实验十：理化因素对微生物的影响 ---紫外线的杀菌作用 实验十一：食品中杂菌总数及大肠菌群的检验
血球计数板刻有两方格网，每网分九大方格，中间 为计数室。计数室为25×16（16×25）小方格。 计数时常数五个中格的总数，换算出1ml中的总菌 数。
死亡率测定的原理为： 美兰溶液是对细胞无毒性的、弱氧化性 的染液，其氧化态无色，还原态兰紫色。 活细胞具有还原能力，能将美兰溶液还 原为无色，而死细胞不具还原能力。
物镜(接物镜)
如何计算显微镜的放大倍数？
照明系统部分
光 源 ： 内光源与外光源 反光镜 ： 凹面镜与平面镜
聚光镜 ：
升高与降低聚光镜
光 圈 ： 放开与关闭光圈
如何调节观察视野的明暗度？
2.光学显微镜的使用
取镜
放镜
对光 放片
调焦(粗调焦和细调焦)
低倍镜的使用 高倍镜的使用
问题思考：对颜色深的标本与颜色浅的标本在观察过程中有何不同？
二、实验用品
菌种：大肠杆菌斜面菌种； 八叠球菌斜面菌种 试剂：结晶紫染液；蕃红染液； 碘液；95％乙醇 其它：显微镜；载玻片；接种环； 香柏油；酒精灯；擦镜纸
三、 基本原理：
革兰氏染色法是1884年由丹麦病理学家 Christain Gran 创立的。 细菌对革兰氏染色的不同反应是由于它们 细胞壁的成分和结构不同而造成的。 革兰氏阳性菌的细胞壁主要由肽聚糖形成 的网状结构组成，壁厚、类脂质含量低。 革兰氏阴性菌其细胞壁肽聚糖层较薄、类 脂质含量高。
实验一：光学显微镜的构造和使用方法 实验二: 细菌的革兰氏染色 实验三：酵母水浸片的制备－细胞数及死亡率的测定 实验四：显微镜测微技术 实验五：霉菌形态观察 实验六：培养基的制备与灭菌 实验七：微生物的分离与筛选 实验八：淀粉酶产生菌的检出 实验九：大肠杆菌的主要生化特性 实验十：理化因素对微生物的影响 ---紫外线的杀菌作用 实验十一：食品中杂菌总数及大肠菌群的检验
血球计数板刻有两方格网，每网分九大方格，中间 为计数室。计数室为25×16（16×25）小方格。 计数时常数五个中格的总数，换算出1ml中的总菌 数。
死亡率测定的原理为： 美兰溶液是对细胞无毒性的、弱氧化性 的染液，其氧化态无色，还原态兰紫色。 活细胞具有还原能力，能将美兰溶液还 原为无色，而死细胞不具还原能力。
物镜(接物镜)
如何计算显微镜的放大倍数？
照明系统部分
光 源 ： 内光源与外光源 反光镜 ： 凹面镜与平面镜
聚光镜 ：
升高与降低聚光镜
光 圈 ： 放开与关闭光圈
如何调节观察视野的明暗度？
2.光学显微镜的使用
取镜
放镜
对光 放片
调焦(粗调焦和细调焦)
低倍镜的使用 高倍镜的使用
问题思考：对颜色深的标本与颜色浅的标本在观察过程中有何不同？
二、实验用品
菌种：大肠杆菌斜面菌种； 八叠球菌斜面菌种 试剂：结晶紫染液；蕃红染液； 碘液；95％乙醇 其它：显微镜；载玻片；接种环； 香柏油；酒精灯；擦镜纸
三、 基本原理：
革兰氏染色法是1884年由丹麦病理学家 Christain Gran 创立的。 细菌对革兰氏染色的不同反应是由于它们 细胞壁的成分和结构不同而造成的。 革兰氏阳性菌的细胞壁主要由肽聚糖形成 的网状结构组成，壁厚、类脂质含量低。 革兰氏阴性菌其细胞壁肽聚糖层较薄、类 脂质含量高。
实验四微生物大小的测定和酵母菌死活细胞鉴定(详细介绍“目尺”共9张)
在载片上加一滴美蓝染液，挑取酵母与之混匀。
不实同验透 四镜微组生合物放大放大小倍的台数测不定尺同和→，酵目母调尺菌每死焦小活格细→代胞低表鉴的定倍实际镜长度下也，不一使样。目尺与台尺零点对齐，并在某一刻 放 度台。尺→调焦→度低倍上镜下完，全使目重尺与合台尺〔零准点对焦齐，〕并在→某低一刻倍度上、完全高重倍合〔、准焦油〕→镜低下倍、分高倍别、油计镜算下分目别计尺算目每尺格每格所代表的长 所代表的长度。 不同透镜组合放大倍数不同，目尺每小格代表的实际长度也不一样。
实验四微生物大小的测定和酵母菌死活 细胞鉴定
第1页，共9页。
二、实验原理： 1 测微尺的使用
包括目镜测微尺和镜台测微尺。 镜台测微尺是中央局部刻有精确等分线的载片。一般
每格10μm。台尺不直接测大小，只用于校正目尺每 格的相对长度。〔用于标定目尺，使台尺与目尺重 合〕
第2页，共9页。
•目镜测微尺〔目尺〕是一块可放入接目镜内的圆形小玻
2.细菌的个体微小，在进行细胞大小测定时一般应选用油镜 ，以减小误差。
3.进行显微镜计数时应先在低倍镜下寻找大方格的位置，找 到计数室后将其移至视野中央，再换高倍镜观察和计数 。
4.酵母菌计数加样品前，一定将菌液摇匀。
第9页，共9页。
包实括验目 四镜微测生的微物尺大酵和小镜的母台测测定细微和尺酵胞。母菌具死活有细胞新鉴定陈代谢活性，能使美蓝由氧化型〔蓝〕
校正完毕，移走台尺，换上制好的面包酵母的水浸片，先低倍后高倍。
实验四微生变物大为小的复测定原和酵型母菌〔死活无细胞色鉴定〕，染约3 min，死的酵母或衰老的细
2 面包酵母的大小：￠ ＝ ？μm
•片，其中央有精确的等分刻度。不同透镜组合放大倍数不同，目尺 每小格代表的实际长度也不一样。
不实同验透 四镜微组生合物放大放大小倍的台数测不定尺同和→，酵目母调尺菌每死焦小活格细→代胞低表鉴的定倍实际镜长度下也，不一使样。目尺与台尺零点对齐，并在某一刻 放 度台。尺→调焦→度低倍上镜下完，全使目重尺与合台尺〔零准点对焦齐，〕并在→某低一刻倍度上、完全高重倍合〔、准焦油〕→镜低下倍、分高倍别、油计镜算下分目别计尺算目每尺格每格所代表的长 所代表的长度。 不同透镜组合放大倍数不同，目尺每小格代表的实际长度也不一样。
实验四微生物大小的测定和酵母菌死活 细胞鉴定
第1页，共9页。
二、实验原理： 1 测微尺的使用
包括目镜测微尺和镜台测微尺。 镜台测微尺是中央局部刻有精确等分线的载片。一般
每格10μm。台尺不直接测大小，只用于校正目尺每 格的相对长度。〔用于标定目尺，使台尺与目尺重 合〕
第2页，共9页。
•目镜测微尺〔目尺〕是一块可放入接目镜内的圆形小玻
2.细菌的个体微小，在进行细胞大小测定时一般应选用油镜 ，以减小误差。
3.进行显微镜计数时应先在低倍镜下寻找大方格的位置，找 到计数室后将其移至视野中央，再换高倍镜观察和计数 。
4.酵母菌计数加样品前，一定将菌液摇匀。
第9页，共9页。
包实括验目 四镜微测生的微物尺大酵和小镜的母台测测定细微和尺酵胞。母菌具死活有细胞新鉴定陈代谢活性，能使美蓝由氧化型〔蓝〕
校正完毕，移走台尺，换上制好的面包酵母的水浸片，先低倍后高倍。
实验四微生变物大为小的复测定原和酵型母菌〔死活无细胞色鉴定〕，染约3 min，死的酵母或衰老的细
2 面包酵母的大小：￠ ＝ ？μm
•片，其中央有精确的等分刻度。不同透镜组合放大倍数不同，目尺 每小格代表的实际长度也不一样。
实验四、环境中微生物的检测课件
实验四、环境中微生物的检测， 四大类微生物菌落和个体形态的
观察
补做实验一 下周实验课暂停一次
第一部分：环境中微生物的检测
一、背景介绍 什么是微生物 微生物分布
二、实验目的 了解环境中微生物的分布情况
三、实验原理 提供微生物生长所需的营养要素，在实验
室中培养微生物 灭菌的方法和原理 培养基的特性
四、实验方法 1、倒平板
2、环境中微生物的检测
五、实验报告
记录你所培养的微生物的形态
观察时间4月5日（下周四）
12：00——13：00
梅老师班：外间202
尹老师班：里间203
三、个体形态的观察 1、细菌：简单染色法（接种环，取样）
Hale Waihona Puke 、酵母：水封片3、放线菌：插片法
4、霉菌：切片
作业：
1、将观察的细菌、酵母菌、放线菌、霉 菌其菌落特征填入表格
2、划出细菌、放线菌的个体形态简图
3、初步判断你所培养的环境中的微生物 属于哪一大类并说明理由
预习：实验七 生物体内部组织细胞的切片观察（一）
天每
开个
放孩
；子
有的
的花
孩期
子不
是一
菊样
花，
，有
选的
择孩
在子
秋是
天牡
开丹
放花
；，
而选
有择
的在
孩春
➢ He who falls today may rise tomorrow.
子天 是开
梅放
花；
，有
选的
择孩
在子
冬是
天荷
开花
放，
选
择
在
夏
我们，还在路上……
观察
补做实验一 下周实验课暂停一次
第一部分：环境中微生物的检测
一、背景介绍 什么是微生物 微生物分布
二、实验目的 了解环境中微生物的分布情况
三、实验原理 提供微生物生长所需的营养要素，在实验
室中培养微生物 灭菌的方法和原理 培养基的特性
四、实验方法 1、倒平板
2、环境中微生物的检测
五、实验报告
记录你所培养的微生物的形态
观察时间4月5日（下周四）
12：00——13：00
梅老师班：外间202
尹老师班：里间203
三、个体形态的观察 1、细菌：简单染色法（接种环，取样）
Hale Waihona Puke 、酵母：水封片3、放线菌：插片法
4、霉菌：切片
作业：
1、将观察的细菌、酵母菌、放线菌、霉 菌其菌落特征填入表格
2、划出细菌、放线菌的个体形态简图
3、初步判断你所培养的环境中的微生物 属于哪一大类并说明理由
预习：实验七 生物体内部组织细胞的切片观察（一）
天每
开个
放孩
；子
有的
的花
孩期
子不
是一
菊样
花，
，有
选的
择孩
在子
秋是
天牡
开丹
放花
；，
而选
有择
的在
孩春
➢ He who falls today may rise tomorrow.
子天 是开
梅放
花；
，有
选的
择孩
在子
冬是
天荷
开花
放，
选
择
在
夏
我们，还在路上……
微生物实验四细菌的涂片及简单染色法和革兰氏染色法经典法
【实验报告】
• 2）填表
•
表1 细菌形态的描述
【实验报告】
•
2．思考题
•
（1）涂片为什么要固定，固定时应注
意什么问题？
•
（2）你在涂片染色过程中遇到了什么
问题？试分析其中原因？
•
ห้องสมุดไป่ตู้
（3）革兰氏染色中哪一步是关键，为
什么？你如何控制这一步。
•
（4）不经复染这一步，能否区别革兰
氏阳性菌和阴性菌？
• 2、仪器 显微镜(25台)； • 3、材料 载玻片（每组4个），酒精灯（每组1个）
，接种环（每组1个），擦镜纸，二甲苯、香柏油 ，吸水纸，染色缸等；
【实验用品】
• 4、染料 草酸铵结晶紫（Crystal Violet , CV）、沙黄、吕氏碱性美蓝染液。
1）草酸铵结晶紫染液的配制：
A液： 结晶紫
•
染色前必须先固定细菌，其目的有二
：一是杀死细菌，使细胞质凝固，菌体粘
附于玻片上；二是增加其对染料的亲和力
。常用的有加热和化学固定两种方法。固
定时应尽量维持细胞原有形态，防止细胞
膨胀或收缩。
【基本原理】
• 二、革兰氏染色法（经典法）基本原理 • 革兰氏染色反应是细菌分类和鉴定的重
要性状 • 革兰氏染色法（Gram stain）不仅能观
【方法步骤】
• 3、染色
•
⑴初染 将玻片置于玻片搁架上，加草酸铵结
晶紫染色液(加量以盖满菌膜为度)，染色1-2min。
倾去染色液，用自来水小心地冲洗。
•
⑵媒染 滴加(Lugol)碘液，染1-2min，水洗。
•
⑶脱色 滴加95%乙醇2-3次，脱色20-25s立
实验四、环境中微生物的检测PPT课件
谢谢观看
03
实验步骤
样品采集
采集环境中的水样、 土壤样、空气样等， 确保采集的样品具有 代表性。
记录采集时间、地点、 环境条件等信息，以 便后续分析。
使用无菌容器或薄膜 采集样品，避免交叉 污染。
样品处理
将采集的样品进行稀释，使微生物分 散。
对样品进行富集培养，提高微生物的 数量。
对样品进行过滤或离心，使微生物与 杂质分离。
结果应用
环境监测
实验结果可以为环境监测提供依 据，了解环境中微生物的分布和
数量，评估环境质量。
公共卫生
实验结果可以为公共卫生领域提 供参考，了解环境中微生物的种 类和数量，评估其对人类健康的
风险。
科学研究
实验结果可以为科学研究提供数 据支持，深入探究环境中微生物
的生态学和生物学特性。
05
实验总结
实验不足与改进
实验不足
在实验过程中，我发现自己在操作显微镜时还不够熟练，有 时会出现观察不准确的情况。此外，我在实验数据处理方面 也存在一些问题，如数据记录不准确、分析不全面等。
改进方法
为了提高实验的准确性和可靠性，我计划在课后多加练习使 用显微镜，提高自己的操作技能。同时，我也要加强学习数 据处理和分析方面的知识，掌握更多的统计方法和软件应用 技巧。
实验四、环境中微生物的检测ppt 课件
目录
• 实验目的 • 实验原理 • 实验步骤 • 结果分析 • 实验总结
01
实验目的
掌握微生物检测的基本原理
01
微生物检测是利用特定的方法和 技术对环境中的微生物进行检测 和计数，以评估环境卫生状况和 潜在的健康风险。
02
基本原理包括微生物培养法、免 疫学方法、分子生物学方法等， 这些方法基于不同原理，能够对 不同类型的微生物进行检测。
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– 针对β内酰胺类抗生素：产生β内酰胺酶；青霉素结合蛋白（PBP ）的作用位点改变或产生新的对β内酰胺类抗生素不敏感的PBP； 革兰阴性细菌外膜通透性降低和主动外排系统将抗生素泵出胞外 。
• 耐药程度用某药物对细菌的最小抑菌浓度(MIC)表示。
H-O变异
原理：将有鞭毛的普通变形杆菌点种在琼 脂平板上，由于鞭毛的动力使细菌在平板 上弥散生长，菌落形似薄膜(H菌落)；若将 此菌点种在含0.1%石炭酸的培养基上，细 菌失去鞭毛，只能在点种处形成不向外扩 展的单个菌落(O菌落)。此变异是可逆的。
目的要求
• 掌握内毒素测定的实验原理及实验方法。 • 理解细菌变异的原因，观察细菌变异现象，
加深对变异机制的认识。
细菌的变异现象
• 形态结构变异(H-O变异、L型细菌) • 抗原性变异 • 菌落的变异(S-R变异) • 毒力变异 • 耐药性变异
基因型和表型变异的比较
基因型变异 表型变异
基因结构 可逆性 稳定性 环境影响 涉及细菌数
变化
未变
不或极少 可逆
稳定
不稳定
不受影响 受影响
个别
全体
耐药机制
• 针对不同的药物有不同的耐药机制。
– 接合：细胞间通过性菌毛相互沟通，将遗传物质如质粒或染色质 DNA从供体菌转移给受体菌。
– 转导：以噬菌体及其含有的质粒DNA为媒介，介导供体菌耐药基 因转移给受体菌内。
– 转化：少数细菌可从周围环境中摄入裸DNA，并掺入到细菌染色 体中。
鲎试验
• 材料：大肠杆菌裂解物、鲎试剂、标准内毒素、蒸馏水、 小试管、吸管、37℃水浴箱
• 实验方法： 1. 打开3支鲎试剂，每支各加入0.1ml蒸馏水溶解，并编号； 2. 将3支鲎试剂分别加入标准内毒素、蒸馏水、大肠杆菌裂解物各0.1ml，
摇匀。 3. 置37oC水浴箱，15~30min取出。
• 结果记录： +++ 固体 ++ 凝胶 + 粘液 - 未凝固
பைடு நூலகம்
H-O变异
• 菌种：变形杆菌 • 培养基：普通琼脂平板及0.1%石炭酸琼脂
平板
• 实验方法：
1. 本别在普通琼脂平板和0.1%石炭酸琼脂平板的 边缘四端点种变形杆菌；
2. 置37oC培养24h，观察菌落有无迁徙现象。
细菌的致病性
• 荚膜、内毒素、外毒素、酶
• 内毒素的检测-鲎试验 原理：鲎是海洋中的一种冷血节肢动物，其血液 中有一种特殊的变形细胞，内含凝固酶原和可凝 固蛋白。将此变形细胞冻融后制成鲎变形细胞溶 解物（即鲎试剂）。内毒素能激活其中的凝固酶 原使之变成凝固酶而使可凝固蛋白凝结成凝胶状 态。用以检查药液或注射液是否有内毒素污染。 能测出0.01~1.0ng/ml的内毒素。