lipofectamine2000原理
LIPOFECTAMINE2000转染试剂转染步骤
LIPOFECTAMINE2000转染试剂转染步骤转染是指将外源DNA或RNA导入到目标细胞中的过程，LIPOFECTAMINE2000是一种常用的转染试剂。
下面是使用LIPOFECTAMINE2000进行转染的详细步骤：步骤一：细胞处理1.1培养要转染的细胞株，并确保细胞达到70%-80%的密度。
1.2使用无菌PBS洗涤细胞，将细胞悬浮于含有10%FBS的完全培养基中。
1.3通过计数细胞数来得到适当的细胞密度，以确保每个孔或皿中有足够的细胞进行转染。
步骤二：DNA/RNA和转染试剂的配制2.1在无菌离心管中配制DNA/RNA和转染试剂的混合液。
按照试剂的说明书中的推荐比例将DNA/RNA和转染试剂混合在一起，并使用无菌PBS 或者培养基和其它试剂进行稀释。
2.2轻轻摇晃混合液，避免产生气泡。
步骤三：转染3.1将配制好的转染混合液加入到每个孔或皿中，并轻轻摇晃培养皿/板使其均匀分布。
3.2将细胞和转染试剂混合液共孵育4-6小时，在37℃的CO2培养箱中进行转染反应。
转染时间可以根据目标细胞的特性进行调整。
步骤四：更换培养基4.14-6小时后，将转染混合液完全去除，并用预温热的完全培养基洗涤细胞，以去除未吸附的DNA/RNA和转染试剂。
4.2加入足够的完全培养基来覆盖细胞，尽量减少液体涡流，以避免对转染效率的不良影响。
步骤五：细胞培养和分析5.1将培养皿/板放回37℃的CO2培养箱中，并进行适当的培养条件。
5.2根据实验需要的时间点收集转染后的细胞进行后续的实验和分析。
需要注意的是，转染步骤中的各种参数（例如细胞密度、转染试剂的浓度和比例等）可能因不同的实验目的和目标细胞而有所不同。
因此，在具体操作中请参考所使用转染试剂和目标细胞的说明书，并根据实验需要进行相应的优化。
【DNA转染质粒转染lipo2000】DNA转染干货篇：质粒转染试剂的比较
【DNA转染质粒转染lipo2000】DNA转染干货篇：质粒转染试剂的比较今天我们一起来了解一下质粒转染相关的一些技术背景和方法，随着基因与蛋白功能研究的深入，质粒转染目前已成为实验室研究工作中经常涉及的基本方法。
DNA转染干货篇质粒转染试剂的比较一、质粒转染原理以及应用质粒转染是指利用不同的载体物质携带质粒DNA通过直接穿膜或膜融合的方法将外源DNA分子导入真核细胞，使外源基因表达，从而针对某个基因和蛋白质的功能进行一系列生物学功能研究的方法。
随着分子生物学和细胞生物学研究的不断深入，DNA转染已经成为研究和控制真核细胞基因功能的常规实验工具。
质粒转染在研究基因功能、调控基因表达、突变分析和蛋白质生产等生命科学前沿研究中，应用越来越广泛。
二、质粒DNA转染方法质粒DNA导入细胞有多种方法，包括物理介导（电穿孔法、显微注射和基因枪）、化学介导（磷酸钙共沉淀法、载体转染法等）和生物介导（原生质体转染、病毒介导的转染）三类途径。
这三类技术中，又以载体转染法最为常用。
国际上应用较早的转染载体多为脂质体类载体，但此类转染载体细胞毒性较大，转染效率往往也不够理想。
近年类，纳米生物材料类载体的应用逐渐增多，此类载体最大的优点是细胞毒性较低，部分品牌载体的转染效率也显著优于脂质体类载体。
三、如何选择DNA转染试剂显然，质粒转染能否成功的关键在于质粒转染试剂的选择，目前常用的DNA转染试剂有RFect系列质粒DNA转染试剂、Lipo2000等。
如何选择合适的质粒DNA转染试剂，一般可从以下几个方面考虑：1.对质粒DNA有较高的转染效率。
转染效率的确定，常用的是使用荧光定量PCR、荧光显微镜和流式细胞仪检测等方法。
金标准无疑是检测目标基因的mRNA水平，因为转染试剂不仅要把质粒DNA转染进入细胞，还应及时把转入细胞的DNA释放出来，发挥基因表达或基因调控的作用。
通过荧光显微镜判断转染效率至少存在两方面的问题：1、荧光显微镜看到的荧光点可能是非特异吸附的结果；2、有些转染试剂能够将质粒DNA转染入细胞，但不能充分释放，导致基因表达或基因调控效率并不高。
Invitrogen_Lipofectamine2000
Lipofectamine™ 2000前言Lipofectamine™ 2000试剂是一项专利配方，用于高效转染Stealth™ RNA或者短的干扰RNA（siRNA）到哺乳动物细胞，以进行RNAi分析（1，2）。
该说明书提供了一般的指导以及使用Lipofectamine™ 2000转染Stealth™ RNA或者siRNAj进入哺乳动物细胞的步骤。
提供推荐的起始使用试剂剂量。
为了获得最佳的RNAi实验结果，需要针对哺乳动物细胞系和目的基因优化转染的条件。
影响基因阻断水平（Gene Knockdown Level）的因素在RNAi实验中，有许多因素影响目的基因表达程度的降低（例如：基因阻断），包括：·转染效率·目的基因转录效率·蛋白质稳定性·所选择特异StealthTMRNA或者siRNA序列的效率·所选择哺乳动物细胞系的生长特征当设计转染和RNAi实验时，需要考虑这些因素。
如果需要更多的信息帮助您成功的进行RNAi实验，查阅标题为"RNAi成功的七个步骤"的文献。
随同StealthTMRNA订货可以得到说明书，也可以从我们的网站（）下载或者通过与技术服务联系获得说明书。
转染的一般性指导使用Lipofectamine™ 2000转染Stealth™ RNA或者siRNA进入哺乳动物细胞时，遵从以下一般性指导：1 为了获得最佳基因阻断结果，每一种细胞系转染Stealth™ RNA或者siRNA的量都需要经过实验确定。
如果您是首次转染您的细胞系，推荐尝试使用几个Lipofectamine™ 2000的浓度，并在20-100nM范围内改变Stealth™ RNA或者siRNA的浓度，以确定达到最佳基因阻断水平所需要的条件。
高浓度的Stealth™ RNA或者siRNA可能具有细胞系依赖性。
注：我们推荐开始时使用40nM Stealth™ RNA或者siRNA。
lip2000转染说明书
4. 哺乳动物细胞siRNA转染4.1 转染方法：将制备好的siRNA、siRNA表达载体或表达框架转导至真核细胞中的方法主要有以下几种：磷酸钙共沉淀；电穿孔法；DEAE-葡聚糖和polybrene；机械法；阳离子脂质体试剂。
目前用的最多的是阳离子脂质体法。
4.1.1 磷酸钙共沉淀将氯化钙，RNA(或DNA)和磷酸缓冲液混合，沉淀形成包含DNA且极小的不溶的磷酸钙颗粒。
磷酸钙-DNA复合物粘附到细胞膜并通过胞饮进入目的细胞的细胞质。
沉淀物的大小和质量对于磷酸钙转染的成功至关重要。
在实验中使用的每种试剂都必须小心校准，保证质量，因为甚至偏离最优条件十分之一个pH都会导致磷酸钙转染的失败。
4.1.2 电穿孔法电穿孔通过将细胞暴露在短暂的高场强电脉冲中转导分子。
将细胞悬浮液置于电场中会诱导沿细胞膜的电压差异，据认为这种电压差异会导致细胞膜暂时穿孔。
电脉冲和场强的优化对于成功的转染非常重要，因为过高的场强和过长的电脉冲时间会不可逆地伤害细胞膜而裂解细胞。
一般，成功的电穿孔过程都伴随高水平（50%或更高）的毒性。
4.1.3 DEAE-葡聚糖和polybrene带正电的DEAE-葡聚糖或polybrene多聚体复合物和带负电的DNA分子使得DNA 可以结合在细胞表面。
通过使用DMSO或甘油获得的渗透休克将DNA复合体导入。
两种试剂都已成功用于转染。
DEAE-葡聚糖仅限于瞬时转染。
4.1.4 机械法转染技术也包括使用机械的方法，比如显微注射和基因枪（biolistic particle）。
显微注射使用一根细针头将DNA，RNA或蛋白直接转入细胞质或细胞核。
基因枪使用高压microprojectile将大分子导入细胞。
4.1.5 阳离子脂质体试剂在优化条件下将阳离子脂质体试剂加入水中时，其可以形成微小的（平均大小约100-400nm）单层脂质体。
这些脂质体带正电，可以靠静电作用结合到DNA的磷酸骨架上以及带负电的细胞膜表面。
Invitrogen Lipofectamine
Lipofectamine® 2000 DNA 转染方案
见第 2 页。
组分
96 孔
24 孔
DNA 最终用量/孔
100 ng
500 ng
Lipofectamine® 2000 最终用量/孔
0.2–0.5 μL
1.0–2.5 μL
6孔
2500 ng
5.0–12.5 μL
质粒 DNA 和 siRNA的共转染
使用 Lipofectamine® 2000 转染试剂同时转染质粒 DNA 和 siRNA，每 1 μg DNA 加入 30 pmol (~0.6 μg) siRNA。
mRNA 的转染
2
份不同体积的 Lipofectamine® 试剂
Lipofectamine® 2000 转染 试剂
1, 1.5, 2, 2.5 μL
2, 3, 4, 5 μL
6, 9, 12, 15 μL
Opti-MEM® 培养基
125 μL
250 μL
700 μL
3
使用 Opti-MEM® 培养基稀释 DNA
DNA (0.5–5 μg/μL)
2.5 μg
5 μg
14 μg
4
5
5
6
将稀释的 DNA 加到稀释的 Lipofectamine® 2000 转染试
剂中(体积比 1:1)
孵育
将 DNA-脂质体复合物加入到 细胞中
稀释的 DNA 总量
稀释的 Lipofectamine® 2000 转染试剂总量
Lipofectamine 2000细胞转染实验步骤 注意事项
Invitrogen阳离子转染试剂Lipofectamine 2000细胞转染实验步骤注意事项2010-07-10 16:16Invitrogen的细胞转染试剂：Lipofectamine 2000Lipofectamine 2000是最为人熟知的转染产品之一。
已知可为517种细胞（见下面连接地址）提供高转染效率（表达转基因细胞的百分数）和活性（细胞抽提物中转入基因的酶产物活性）。
特点两个关键性特点使得Lipofectamine 2000试剂的转染步骤快速简便：（1）DNA-阳离子脂质体试剂的复合体可以直接加入到细胞培养基中，有血清也不怕（2）转染后不需要除去Lipofectamine 2000试剂，无需换培养基操作流程事实上Lipofectamine系列产品操作流程都是又快又简单：稀释DNA 以及Lipofectamine 2000，混合2种稀释液保温20分钟，加入培养细胞中孵育24－96小时检测结果。
下面是Invitrogen提供的详细流程和注意事项。
转染前一天，胰酶消化细胞并计数，细胞铺板，使其在转染日密度为90%。
细胞铺板在0.5ml含血清，不含抗生素的正常生长的培养基中。
对于每孔细胞，使用50μl无血清培养基（如OPTI-MEMⅠ培养基）稀释0.8μg-1.0μg DNA。
对于每孔细胞，使用50μl OPTI-MEMⅠ培养基稀释1μl-3μl LIPOFECTAMINE 2000试剂。
Lipofectamine 2000稀释后保温5分钟（在30分钟内同稀释的DNA 混合。
保温时间过长会降低活性。
）注意：即使Lipofectamine 2000使用OPTI-MEMⅠ稀释，细胞也可以使用D-MEM培养。
如果D-MEM做为Lipofectamine 2000的稀释液，必须在5分钟内同稀释的DNA混合。
混合稀释的DNA（第2步）和稀释的Lipofectamine 2000（第3步）。
在室温保温20分钟。
LIPOFECTAMINE2000转染试剂转染步骤
LIPOFECTAMINE2000转染试剂转染步骤1.准备转染试剂：取出存储在-20℃的LIPOFECTAMINE2000试剂，并将其溶解在适量的去离子水或者PBS缓冲液中，制备转染试剂。
2. 根据实验需要确定转染的质粒DNA量和细胞数量。
一般来说，每个转染需要1-2ug的质粒DNA，细胞密度则根据细胞类型的不同而有所变化。
3.将准备好的转染试剂和质粒DNA混合在一起。
首先将质粒DNA加入到含有LIPOFECTAMINE2000的管中，并轻轻混合均匀，然后将混合物静置15-30分钟，使其形成脂质-DNA复合物。
4.在脂质-DNA复合物静置的同时，准备待转染的细胞。
将细胞用无血清培养基洗涤一次，并将其悬浮在新的无血清培养基中。
5.将静置好的脂质-DNA复合物滴加到细胞中。
将脂质-DNA复合物滴加到含有细胞的培养皿中，并轻轻摇晃培养皿，使复合物均匀分布在细胞表面。
6.将转染后的细胞培养在37℃的CO2培养箱中孵育。
具体培养时间视实验需求而定，一般来说，24-48小时后可以进行下一步实验。
7. 检测转染效率。
可以通过荧光显微镜观察细胞内是否表达了目的基因或荧光标记，也可以采用Western blotting或者RT-PCR等方法进行进一步的检测。
总的来说，LIPOFECTAMINE2000转染试剂转染步骤相对简单，但需要注意的是在每一步操作中都要轻柔并避免产生气泡，以确保脂质-DNA复合物可以均匀地与细胞相结合，从而提高转染效率。
同时，在实验过程中需要注意质粒DNA的质量和浓度，以及细胞的健康状态，这些因素都会对转染效果产生影响。
希望以上介绍对您有所帮助，祝您实验顺利。
LIPOFECTAMINE2000转染试剂转染步骤
LIPOFECTAMINE2000转染试剂转染步骤转染是一种将外源DNA或RNA导入到细胞内的技术，以研究基因功能、蛋白质表达、细胞信号转导等方面的问题。
LIPOFECTAMINE2000是一种常用的转染试剂，广泛应用于多种细胞系中。
以下是LIPOFECTAMINE2000转染试剂转染步骤的详细介绍。
一、细胞种植与处理准备1.1细胞传代：将细胞进行传代，以保证其在良好的状态下进行实验。
1.2细胞密度调整：将细胞于适宜培养皿中培养至60-80%的密度，以保证细胞的适宜转染。
1.3细胞处理准备：在转染前，将细胞用无酶EDTA或胰酶剥离并重新悬浮在适宜的培养基中，以保持细胞的完整性和适宜的状态。
二、试剂配制2.1DNA或RNA的制备：将外源DNA或RNA在无菌条件下制备，并使用纯化试剂进行纯化和浓缩。
2.2转染试剂配制：将冻干的LIPOFECTAMINE2000转染试剂通过加入合适的无菌水，稀释成适宜浓度的转染试剂。
三、转染操作3.1转染试剂与DNA/RNA的混合：将适量的LIPOFECTAMINE2000转染试剂与DNA或RNA混合在无菌的管中，轻轻混合均匀。
注意，避免过量试剂和核酸的使用，以减少细胞的毒性和副作用。
3.2孵育混合物：将混合物在常温条件下孵育15-30分钟，以促使脂质体与核酸形成稳定的复合体。
四、转染过程4.1转染试剂与细胞的混合：将混合物缓慢滴加到处理好的细胞培养基上，缓慢摇晃培养皿以使混合物均匀分布。
4.2转染时间及培养条件：将细胞放置在转染液中，保持静止状态，同时将培养皿放回培养箱中，在37℃、5%CO2的恒温恒湿条件下进行转染。
转染时间需要根据细胞系和转染试剂的要求进行优化，一般为4-6小时。
4.3转染液的去除：将转染液小心去除，并将细胞用含有适宜抗生素或筛选剂的培养基洗涤一次，以去除残留的转染试剂。
五、细胞处理及分析5.1细胞培养：将细胞放回恒温恒湿培养箱中，用适宜培养基进行细胞的培养。
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lipofectamine2000原理Lipofectamine2000是一种常用于转染细胞的试剂，它的原理是通过脂质体介导的转染技术，将外源DNA或RNA导入到细胞内。
这种转染方法被广泛应用于基因功能研究、蛋白表达和基因治疗等领域。
脂质体是由脂质分子组成的小囊泡，可以与细胞膜融合并释放其内部所带的DNA或RNA分子。
Lipofectamine2000是由一种阳离子脂质和一种阴离子脂质组成的复合物，这种复合物能够与DNA 或RNA形成稳定的复合体。
当Lipofectamine2000和DNA或RNA共同存在于培养基中时，它们会自发地结合在一起，形成脂质体-核酸复合物。
脂质体-核酸复合物具有良好的转染效果，主要有以下几个原因。
首先，脂质体可以提供稳定的保护作用，保护DNA或RNA免受外界环境的影响。
其次，脂质体能够与细胞膜融合并被细胞摄取，将DNA或RNA导入到细胞内。
此外，Lipofectamine2000还可以增加细胞膜的通透性，使DNA或RNA更容易进入细胞。
Lipofectamine2000的使用方法相对简单。
首先，将所需的DNA 或RNA与Lipofectamine2000按照一定比例混合，形成脂质体-核酸复合物。
然后将复合物加入到细胞培养基中，与细胞共同孵育一段时间。
在此过程中，脂质体-核酸复合物与细胞相互作用，将
DNA或RNA导入到细胞内。
最后，可以利用适当的实验方法检测转染效果，如荧光显微镜观察、PCR检测等。
尽管Lipofectamine2000在转染实验中具有诸多优势，但也存在一些局限性。
首先，该方法对细胞类型有一定的选择性，不同细胞株对Lipofectamine2000的响应程度不同。
其次，脂质体-核酸复合物的稳定性较差，容易受到环境因素的影响。
此外，Lipofectamine2000的转染效率可能受到多种因素的影响，如DNA或RNA浓度、孵育时间等。
为了提高转染效率，研究人员还不断改进Lipofectamine2000的配方和使用方法。
例如，可以通过优化Lipofectamine2000和DNA 或RNA的比例、调整细胞密度和孵育时间等方式来改善转染效果。
此外，还可以结合其他转染方法或辅助技术，如电穿孔、病毒载体等，来提高转染效率。
Lipofectamine2000是一种常用的转染试剂，通过脂质体介导的转染技术，将外源DNA或RNA导入到细胞内。
它具有操作简便、转染效果稳定等优点，被广泛应用于生命科学研究和基因治疗等领域。
随着科学技术的不断发展，相信Lipofectamine2000在未来会有更广阔的应用前景。