经典免疫学技术
免疫学实验方法
免疫学实验方法免疫学实验方法是免疫学研究的重要部分，它通过一系列的技术手段来识别、分析免疫系统中的各种生物分子、细胞和组织，以及它们之间的相互作用。
这些方法在免疫学领域广泛应用于疾病诊断、药物研发、疫苗研究等方面，对促进免疫学的发展和应用发挥了重要作用。
下面将介绍一些常用的免疫学实验方法。
一、ELISA法ELISA（酶联免疫吸附试验）是一种用于检测抗体或抗原的免疫学实验方法。
该方法通过将待测抗体或抗原与固相物质结合，再加入酶标记的二抗来进行标记，最后通过酶底物的底物变色反应或荧光底物的发光反应来检测待测抗体或抗原的存在量。
二、流式细胞仪流式细胞仪是一种用于分析和计数悬浮细胞的仪器，它利用激光照射细胞，通过细胞膜上的特异性抗体标记来检测细胞的表面标记物和内部细胞器的性质和分布，对免疫细胞的表型和功能进行高效的分析。
三、免疫印迹法免疫印迹法是一种用于检测蛋白质的免疫学实验方法，通过电泳将待测蛋白分离，再将其转移到膜上，最后使用特异性抗体和标记的二抗来检测待测蛋白的存在量和大小。
四、免疫组化法免疫组化法是一种用于检测组织中特定蛋白的免疫学实验方法，通过将组织切片后进行脱水、脱脂和脱水处理，再使用特异性的抗体来标记待测蛋白，并观察标记物的颜色变化或发光情况来确定蛋白的位置和表达量。
五、免疫沉淀法免疫沉淀法是一种用于检测蛋白相互作用的免疫学实验方法，通过将待测抗体与蛋白结合，再使用蛋白A/G琼脂糖或磁珠等材料将蛋白抗原免疫沉淀下来，最后使用核酸酶或质谱技术来分析蛋白的互作关系。
以上介绍的是一些常用的免疫学实验方法，它们在免疫学研究中起着举足轻重的作用，不仅在科研领域有重要应用，同时在临床诊断和治疗中也有着广泛的运用。
希望以上内容能够对您有所帮助。
免疫学的应用
天然被动免疫（Natural passive immunity）：新生动物通过 母体胎盘、初乳或卵黄从母体获得某种特异性抗体，从 而获得对某种病原体的免疫力。
天然主动免疫（natural active immunity）：动物在感染某种 病原微生物耐过后，产生的对病原体再次侵入的不感染 状态。
人工被动免疫（Artificial passive immunity）：将免疫血清或 自然发病后康复动物的血清人工输入未免疫动物，使其获 得对某种病原的抵抗力。
三、 佐剂与免疫增强剂
佐剂（Adjuvant）：能非特异性地增强机体对抗原的特异 性免疫应答，发挥辅佐作用的物质。
佐剂作用： 使抗原缓慢释放 延长抗原在体内停留时间 扩大抗原的表面积 促进局部的炎症反应 增强吞噬细胞的吞噬与抗原提呈
佐剂的类型
油水乳剂：矿物油、乳化剂 微生物及代谢产物：脂多糖、分支杆菌、霍乱毒素等 细胞因子：白介素、干扰素等 脂质体：胆固醇类 蜂胶：蜂蜜 人工合成：胞壁酰二肽
培养后,用适量甲醛灭活，加佐剂制成。 安全，易保存，但免疫性能不如活苗，成本高
2. 弱毒疫苗：用弱毒或无毒菌株或毒株经大量繁殖而制成。 用量小，产生免疫快，维持时间较长，成本低
现代疫苗的种类
活疫苗：活的疫苗，如强毒、弱毒、异源苗
灭活疫苗：病原微生物经物理化学方法灭活后仍保持其抗原性， 接种后使动物产生特异性抵抗力。
6. 干扰素（IFN）的测定：病变抑制法
二、 免疫防治
免疫分为：先天性免疫（非特异性免疫） 后天性免疫（获得性免疫）
天然 获得 免疫
获得性 免疫
人工 获得 免疫
天然被动免疫 天然主动免疫 人工被动免疫
人工主动免疫免疫血清Fra bibliotek活疫苗
免疫学的发展史
免疫学的发展史
1、免疫学科的开创时期
18世纪，英国医生Jenner观察到挤奶女工在患牛痘
后不易得天花的事实后，发明了用牛痘苗预防天花的方法，开创了人工免疫，这可视为免疫学科的建立
2、经典免疫学时期【19～2o世纪初)
①法国免疫学家P~teur和德国细菌学家Koch，在方法学上创造性地解决了细菌的分离培养
②发明了酿毒疫苗，创建了人工主动免疫方法。
1881年P'dstet
③发现了抗毒索，创立了人工被动免疫方。
Behfing于1891年
④人体免疫系统的解剖结构和生理功能的研究。
如比利时Border发
⑤形成了抗原抗体概念，建立起血清学检测方法
⑥抗原抗体理化性质的研究以及抗原抗体反应特异性的化学基础研究
⑦体液免疫与细胞免疫学说的提出
⑧对免疫效应双重性的认识
3、近代免疫学时期(20世纪初～20世纪50年代)
1942年，Chase等人深人研究Koch现象．证明了结核菌素反应不是由抗体引起，而是由致敬细狍引起，证明了机体免疫是包括体液免疫和细胞免疫两种形式的
1945年，Owe．发现天然耐受
澳大利亚免疫学家Burl~ 提出了自身耐受形成的假说
1953年，Bellhggham，Medav,-ar在小鼠俸内成功地进行了人工诱导耐受实验，给予Butt~ 学说以有力支持。
同年，Grubar等人建立的免疫电泳技术促进了对蛋白质抗原性的免疫化学分斩，从而发现了抗体分子的不均一性，但抗体的纯化遇到了困难。
1958年，Burbe【提出关于抗体生成的克隆选择学说
4、现代免疫学时期c20世纪60年代～2l世纪初)。
《经典的免疫学反应》课件
免疫学反应的类型
免疫应答的主要类型
深入研究细胞免疫和体液免疫两种主要类型的免疫应答。
组织特异性免疫反应
了解免疫系统如何产生对病原体特异性的免疫反应。
细胞介导和体液介导免疫反应
探索免疫反应中细胞和体液之间的协作与作用。
免疫学反应的调节机制
刚性
了解刚性调节机制如何控制免疫反应的强度和持续性。
长期持续的免疫学研究
随着科技的发展，免疫学的研究从未停止。持续探索新的免疫反应类型、调节机制和疾病治疗方法。
应对免疫挑战的未来展望
1 个性化免疫治疗
观察和利用病人自身的免疫系统来对抗疾病。
2 免疫学与生命科学的跨学科合作
整合生物学、工程学和计算机科学的知识以推动免疫学的发展。
3 免疫学治疗的广泛应用
从癌症治疗到自动免疫疾病，免疫学治疗越来越多地应用于临床实践。
《经典的免疫学反应》 PPT课件
探索免疫学的基础知识，了解免疫系统的定义、组成部分和研究方向。
免疫学反应的阶段
1
免疫细胞的激活和增殖
2
了解免疫细胞对感染的反应与增殖的过
程。
3
感染的识别和信号传导
从细菌感染到免疫细胞的警报和信号传 递。
免疫反应的效应和调节机制
探索免疫反应对病原体的效应以及调节 机制的作用。
培养个人的免疫系统
了解如何通过良好的饮食、适度的锻炼和减少压力来增强自己的免疫系统。
提高免疫系统的抵抗能力
充分了解免疫系统如何应对不同的病原体，保持自身的健康和稳定。
免疫学十大经典实验
免疫学十大经典实验免疫学是研究机体免疫系统的科学，它关注的是人体如何识别、应对和清除外来病原体以及自身异常细胞的过程。
在免疫学的发展历程中，通过一系列经典实验的探索，我们逐渐了解了免疫系统的工作原理和机制。
下面列举了十个免疫学的经典实验。
1. 阿尔密特实验（Almroth Wright's Experiment）阿尔密特实验是免疫学的开创性实验之一，他通过注射不同剂量的破伤风毒素来研究机体对破伤风的免疫反应。
实验结果表明，注射较小剂量的破伤风毒素可以引起机体免疫反应，产生保护性抗体，从而提高机体对破伤风的抵抗能力。
2. 杰奇-梅特克夫实验（Jules Bordet and Octave Gengou's Experiment）杰奇-梅特克夫实验是用来检测补体的经典实验，补体是一组血浆中的蛋白质，可以识别和破坏病原体。
实验中，研究者将红细胞与抗原结合，然后加入血清，通过观察红细胞的溶解来判断补体的活性。
3. 布瓦尔-杜塞特实验（Paul Ehrlich and Emil von Behring's Experiment）布瓦尔-杜塞特实验是研究抗体的经典实验，抗体是免疫系统产生的一种特殊蛋白质，可以识别和结合病原体，从而协助机体清除病原体。
实验中，研究者注射不同剂量的破伤风毒素到动物体内，观察抗体产生的情况。
4. 阿夫拉螺旋体实验（Alexander Fleming's Experiment）阿夫拉螺旋体实验是研究抗生素的经典实验之一，通过观察抗生素对细菌生长的影响来评估抗生素的效果。
实验中，研究者将阿夫拉螺旋体接种在培养皿中，然后在不同区域施加抗生素，观察细菌的生长情况。
5. 麻风病菌实验（Albert Calmette's Experiment）麻风病菌实验是研究麻风病菌的经典实验之一，通过接种麻风病菌到动物体内，观察动物的症状和病理变化，以及麻风病菌的传播途径和致病机制。
免疫学经典书籍
免疫学经典书籍
1.《免疫生物学》(Immunobiology)：本书由美国哈佛大学免疫学专家CharlesJaneway等人所著，是免疫学领域最重要的经典教材之一。
2.《免疫学原理》(Principles of Immunology)：本书由美国免疫学界泰斗Abul K. Abbas等人所著，是一本系统、全面的免疫学教材。
3.《免疫学基础》(Basic Immunology)：本书由美国免疫学专家William E. Paul等人所著，是一本深入浅出、生动易懂的免疫学教材。
4.《免疫学简史》(A Short History of Immunology)：本书由英国免疫学家Arthur M. Silverstein所著，介绍了免疫学的发展历程和重要人物，是一本充满趣味性的免疫学读物。
5.《免疫学实验技术手册》(Manual of Immunological Methods)：本书由美国免疫学专家Nima Rezaei等人所著，详细介绍了常用的免疫学实验技术，是免疫学实验室必备的参考书。
以上书籍均为免疫学领域的经典之作，对于免疫学爱好者和从事免疫学研究的人员来说，都是必读的好书。
- 1 -。
医学免疫学沉淀反应
医学免疫学沉淀反应在医学免疫学的领域中，沉淀反应是一项十分重要的实验技术。
它不仅有助于我们对疾病的诊断和监测，还在科研领域发挥着关键作用。
沉淀反应的原理其实并不复杂。
简单来说，就是当可溶性抗原与相应抗体在特定条件下结合时，会形成肉眼可见的沉淀物。
这一过程基于抗原与抗体的特异性结合，只有当两者的结构和电荷相互匹配时，才能发生有效的反应。
沉淀反应的类型多种多样。
其中，环状沉淀反应是比较经典的一种。
在这种反应中，将抗原溶液小心地叠加在抗体溶液之上，在两者的界面处，如果存在对应的抗原抗体，就会形成白色的沉淀环。
这种方法虽然简单直观，但灵敏度相对较低，如今在实际应用中已经不那么常见。
另一种常见的沉淀反应是絮状沉淀反应。
在这个实验中，抗原和抗体溶液混合后，会出现肉眼可见的絮状沉淀物。
然而，这种反应的结果判断往往比较主观，容易受到多种因素的影响，比如溶液的浓度、温度以及混合的方式等。
相较于上述两种方法，免疫比浊法在现代医学中的应用更为广泛。
它通过测量溶液中抗原抗体复合物形成后导致的浊度变化，来定量分析抗原或抗体的含量。
这种方法具有快速、准确、自动化程度高等优点，尤其适用于临床实验室对大量样本的检测。
在实际应用中，沉淀反应有着广泛的用途。
比如在疾病诊断方面，当我们怀疑一个人感染了某种病原体时，可以通过检测患者血清中针对该病原体的特异性抗体来辅助诊断。
如果检测结果显示存在相应的沉淀反应，就提示患者可能已经感染了该病原体。
再比如，在血液制品的质量检测中，沉淀反应可以帮助检测其中是否存在杂质或异常蛋白。
这对于保障血液制品的安全性和有效性至关重要。
不仅如此，沉淀反应在自身免疫性疾病的诊断中也发挥着重要作用。
自身免疫性疾病患者体内常常会产生针对自身组织或细胞的抗体，通过沉淀反应检测这些抗体的存在，可以为疾病的诊断提供有力的依据。
然而，沉淀反应也并非完美无缺。
它可能会受到一些因素的干扰。
比如，标本的采集和处理不当可能会影响抗原或抗体的活性，从而导致假阴性或假阳性结果。
酶联免疫吸附反应的技术进展及应用
ELISA的基本原理是利用抗原-抗体反应的特异性，将特异性抗体或抗原固相 化在固体表面上，再与待测样本中的相应抗原或抗体发生特异性结合，加入酶标 记的二抗，最后通过底物显色反应，定量或定性分析待测样本中的抗原或抗体。
随着生物技术的不断发展，ELISA技术也在不断进步。在抗体方面，越来越 多的重组抗体和基因工程抗体被应用于ELISA中，这些抗体的制备过程更加简单， 纯度和特异性更高。在标记技术方面，酶标记物的选择更加多样化，如碱性磷酸 酶、β-半乳糖苷酶、辣根过氧化物酶等，以满足不同检测需求。同时，一些新 型的检测系统，如微孔板、磁性颗粒和纳米材料等被引入到ELISA中，使得检测 更加灵敏、快速和自动化。
6、洗涤：清洗，去除未结合的酶标记抗体或抗原。
7、显色：加入底物溶液，酶催化底物生成有色产物，根据颜色深浅判断抗 原或抗体的浓度。
8、终止反应：加入终止液，停止酶催化反应。
9、读数：在酶标仪上读取各孔的光密度值，根据标准曲线计算抗原或抗体 的浓度。
三、ELISA酶联免疫吸附试验原 理
ELISA酶联免疫吸附试验基于抗原抗体反应的特异性。抗原和抗体分别固定 在固相载体和酶标记物上，当两者相遇时，发生特异性结合。通过洗涤步骤去除 未结合的成分，仅留下结合在固相载体上的抗原-抗体复合物。然后加入酶标记 的抗体或抗原，进一步与复合物中的抗原或抗体结合。最后加入底物溶液，酶催 化底物生成有色产物，根据颜色深浅判断抗原或抗体的浓度。
酶联免疫吸附反应的技术进展及应 用
酶联免疫吸附反应（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay，ELISA）是一 种基于抗原-抗体反应的经典免疫分析方法。在过去的几十年里，ELISA技术取得 了显著的技术进展，使其在生物医学、环境保护、食品检测等领域中的应用越来 越广泛。本次演示将介绍ELISA的技术进展及其在不同领域中的应用情况，并通 过案例分析探讨其优缺点和发展趋势。
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间接凝集试验
间接凝集反应是将可溶性抗原（或抗体） 吸附在一种与免疫无关的惰性颗粒表面， 使其成为致敏载体，在与相应的抗体或抗 原反应，在电解质存在的条件下，载体颗 粒被动地发生凝集。
（正向）间接凝集试验 正向）
反向间接凝集试验
间接凝集抑制试验
自身红细胞凝集试验
抗球蛋白试验
抗球蛋白试验是1945年由Coombs建立的一 抗球蛋白试验是1945年由Coombs建立的一 种抗球蛋白抗体参与的血凝试验，用于检 测抗红细胞不完全抗体，因此又称为 Coombs试验 Coombs试验
根据其原理可以分为
透射免疫比浊（turbidimetry）、 透射免疫比浊（turbidimetry）、 散射比浊（nephelometry） 散射比浊（nephelometry） 速率散射比浊（rate nephelometry）。 速率散射比浊（rate nephelometry）。
透射免疫比浊试验
直接凝集反应
直接凝集反应是颗粒性抗原在电解质参与 下直接与相应抗体结合，出现凝集。反应 中的抗原可以称为凝集原（agglutinogen）， 中的抗原可以称为凝集原（agglutinogen）， 参与反应的抗体称为凝集素（agglutinin）。 参与反应的抗体称为凝集素（agglutinin）。
双扩散实验结果
免疫电泳技术
免疫电泳技术（immunoelectrophoresis technique） 免疫电泳技术（immunoelectrophoresis technique） 是可溶性抗原和抗体在直流电场的作用下，在凝 胶内加速定向运动，彼此相遇结合，在比例合适 处形成可见的沉淀物。
免疫电泳技术包括以下几种具体方法
体外的抗原抗体反应表现为沉淀、凝集、细 胞溶解、补体结合、中和反应等反应现象。
沉淀反应
沉淀反应（precipitation）是可溶性抗原与相 沉淀反应（precipitation）是可溶性抗原与相 应抗体在电解质存在的条件下发生特异性 结合所出现的沉淀现象。
单向扩散试验
这是一种定量试验，一般是用已知的抗体测未知 的抗原。由于抗体已于凝胶混合，不会在扩散， 仅抗原从小孔向四周扩散，因此称为单向琼脂扩 散试验。
第八章 经典免疫学技术
经典免疫学技术主要包括
沉淀反应 凝集反应 免疫球蛋白测定 补体介导的溶解技术
抗原抗体反应（antigenreaction） 抗原抗体反应（antigen-antibody reaction）是 抗原与相应抗体之间所发生的特异性结合反应。 抗原与相应抗体之间所发生的特异性结合反应。 它既可发生在体内，也可发生在体外。 它既可发生在体内，也可发生在体外。
免疫固定电泳（IgAκ型） 免疫固定电泳（IgAκ型
免疫浊度测定
免疫浊度测定（immunoturbidimetry）是将 免疫浊度测定（immunoturbidimetry）是将 现代光学测量仪器与自动分析检测系统相 结合应用于沉淀反应。抗原抗体在液相中 特异性结合形成免疫复合物，复合物微粒 对光线的干扰可用仪器检测出来，并对抗 溶性抗原定量测定。
投射免疫比浊法是在180° 投射免疫比浊法是在180°角，即在直射角度上 测定光透射强度。
散射免疫比浊试验
在光路的5 在光路的5°～96°角的方向上测量散射光 96° 强度和被测溶液中微粒浓度关系相应抗体 在电解质存在的条件下，特异性结合，出 现肉眼可见的凝集现象，称为凝集反应
对流免疫电泳 火箭免疫电泳 免疫电泳 免疫固定电泳
对流免疫电泳结果
对流免疫电泳是将双向免疫扩散与电泳相结合 的定向加速的免疫扩散技术。
火箭电泳示意图
火箭免疫电泳是将单向免疫扩散与电泳相结合的 一项定量检测技术
免疫电泳基本过程
免疫电泳结果
免疫固定电泳
免疫固定电泳是区带电泳与沉淀反应相结 合的技术。首先将样本进行区带电泳，然 后将浸有抗体的滤纸贴于其上，让抗原抗 体发生沉淀反应，洗脱游离的抗体，形成 的沉淀保留在凝胶中
直接Coombs试验 直接Coombs试验
间接Coombs试验 间接Coombs试验
补体介导的溶解技术
血清补体总活性测定（CH50试验） 血清补体总活性测定（CH50试验）
单向琼脂扩散试验的基本过程
单向琼脂扩散试验的结果
抗原含量与沉淀环直径的关系 Mancini曲线 Mancini曲线
抗原含量与沉淀环直径的关系 Fahey曲线 Fahey曲线
双向琼脂扩散试验
在琼脂内抗原和抗体在凝胶中不同孔内各 自向四周扩散，彼此在相遇处特异性结合， 形成白色沉淀线，称为双向琼脂扩散