免疫学技术在科研中的应用
免疫学在生命科学和医学发展中的重要作用
• 生命科学的发现也推动了免疫学的进步，如分子生物学对基因组的了解，使免疫示的有限基因数目编码 几乎无限蛋白种类的原因
• 蛋白分析技术，结构技术则进一步阐明免疫球蛋白分子的组成、结构，使免疫学家深入理解它们的 功能和相互作用方式。人类基因组的研究，使免疫学发展产生了新的分支，即“反向免疫学（reverse immunology）”,从基因入手，分析免疫原，进行实验性免疫应答，加速了免疫应答分析过程，亦揭示 了免疫应答的复杂性
• 免疫学将在生物安全及国防中发挥重要
•
作用，不容忽视
•
一旦生物战争爆发，各种致命的病毒可能被用作生物武器，如：炭疽、霍乱、天花等，这
时将急需大量疫苗加以预防、治疗
• 目前，一些世界上新发现的病毒如埃博拉病毒等，也有向我国蔓延传入的趋势，需要制备疫苗 以备不时之需
• 我国免疫学发展的方向
• 重点发展 具体说，我们应从临床着眼，发现问题，解决问题。从重大疾病或者我国特有的疾病入手，以
• 免疫系统自身的结构、功能、调控规律，以及与另两大系统的相互交叉调节，是机体本身重要的基 本生命现象，事关机体自身稳定和与外界的适应性联系，值得研究
免疫诊断技术及其在临床医学中的应用
免疫诊断技术及其在临床医学中的应用随着科技的发展，免疫诊断技术在诊治疾病中扮演着越来越重要的角色。
本文将从免疫诊断技术的基础知识、技术特点、应用场景以及未来发展等方面进行讨论，旨在让读者更全面地了解免疫诊断技术及其在临床医学中的应用。
1. 免疫诊断技术的基础知识免疫诊断技术是指利用免疫学原理和技术手段进行疾病的诊断、监测和治疗的方法。
其基础原理在于人体受到病原菌感染时，会产生特异性抗体，通过检测血液、尿液、唾液等样本中的抗体、抗原等免疫成分来判断疾病的存在与否。
目前常见的免疫诊断技术包括酶联免疫吸附试验（ELISA）、放射免疫测定（RIA）、荧光免疫分析法（FIA）、免疫印迹法（Western Blot）等。
这些技术在临床应用中具有不同的优缺点，选择合适的方法对于准确诊断和治疗具有至关重要的作用。
2. 免疫诊断技术的技术特点免疫诊断技术具有多种特点，包括高灵敏度、高特异性、非侵入性、快速准确、重复性好等。
由于其基于免疫学原理，可以检测病原体的抗原和抗体等免疫成分，因此在早期病情的诊断和监测上具有重要的作用，可以大大提高疾病诊断的准确性。
另外，免疫诊断技术具有可靠性强、样本来源广泛、操作简便等特点，使得其不仅在临床医学中广泛应用，同时也成为科研领域中的重要工具。
3. 免疫诊断技术的应用场景免疫诊断技术在临床医学中应用广泛，主要应用于以下几个方面：（1）传染病的诊断和监测。
例如：肝炎、结核病、艾滋病、流感、丙型肝炎等传染病的检测及其疫苗的监测等。
（2）肿瘤标志物的检测。
利用免疫诊断技术可以检测肿瘤标志物如CEA、AFP、PSA等，有助于早期发现恶性肿瘤，对治疗和预后有重要的指导意义。
（3）免疫性疾病的诊断。
免疫诊断技术可以检测自身抗体等免疫成分，用于诊断自身免疫性疾病如风湿性关节炎、系统性红斑狼疮等。
（4）药物浓度测定。
免疫诊断技术可以测定药物浓度如抗生素、激素等，对于调整用药剂量和监测药物的疗效有重要的作用。
免疫印迹的原理和应用
免疫印迹的原理和应用1. 原理免疫印迹（Western Blotting），也称为蛋白质印迹或蛋白免疫印迹，是一种用于检测特定蛋白质的方法。
它基于免疫学技术，通过将样品中的蛋白质分离并转移到固相载体上，然后使用特异性抗体与目标蛋白质结合，最后使用化学发光或染色方法进行可视化。
免疫印迹的原理主要包括以下几个步骤：1.1 蛋白质分离首先，样品中的蛋白质需要被分离开来，常用的方法有聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）和聚丙烯酰胺凝胶二维电泳等。
这些方法能够根据蛋白质的大小、电荷等物理性质将蛋白质分离成不同的带状图案。
1.2 转膜将分离后的蛋白质从凝胶转移到固相载体上，一般使用聚乙烯二烯基氟乙烯膜（PVDF）或硝酸纤维素膜（NC）等。
转膜的方法有湿式转膜和半干式转膜等，其中湿式转膜常用于蛋白质较大的情况，半干式转膜则适用于蛋白质较小的情况。
1.3 结合抗体将转膜后的蛋白质与特异性的抗体结合。
抗体可以是单克隆抗体或多克隆抗体，通过特异性结合目标蛋白质来实现分析和检测。
1.4 可视化最后，通过化学发光或染色等方法将目标蛋白质可视化。
其中，化学发光方法常用于检测蛋白质的表达水平，而染色方法则常用于定性分析。
2. 应用免疫印迹技术在科研和临床诊断中有着广泛的应用。
下面是一些免疫印迹技术常见的应用领域：2.1 研究蛋白质表达和功能免疫印迹技术可用于研究蛋白质的表达和功能。
通过对不同组织或细胞中特定蛋白质的印迹分析，可以了解蛋白质的表达模式以及在细胞功能中的作用。
2.2 肿瘤标志物检测在临床诊断中，免疫印迹技术常用于肿瘤标志物的检测。
例如，可以利用免疫印迹技术检测血清中的癌胚抗原（CEA）和前列腺特异性抗原（PSA）等肿瘤标志物，以辅助肿瘤的早期诊断和疾病监测。
2.3 蛋白质-蛋白质相互作用研究免疫印迹技术还可用于研究蛋白质-蛋白质相互作用。
通过对蛋白质的印迹分析，可以了解不同蛋白质之间的相互作用关系，有助于揭示蛋白质通路和信号转导网络的机制。
免疫学检验技术的研究进展
细胞 ，产生 Ｃ Ｋ或 Ｉ。细胞下方 的固相单克隆抗体就会捕获 Ｃ ｇ Ｋ
１ 研 究进展
１１ 荧光 素 标 记 抗体 技 术 ．
或Ｉ ｇ物质。 细胞被清洗后 ， 加入生物素化 的第二抗体 ， 抗体 和 Ｃ Ｋ
或 Ｉ 物质结合后 ， ｇ 再加以酶做标记的生物素或亲和素反应 ， 以酶 流式荧光免 疫微 球分析技 底物显色 ， 阳性细胞就可形成直径约 ５ ～２ ０ Ｔ大小不等的圆 ０ ０ Ｉ Ｉ
现 代 免 疫 学 检 验 技术 源 于标 记 技 术 在 免 疫 学 中 的应 用 。科
１ ． 酶 联 免疫 斑 点 技 术 ．２ ２
酶 联 免 疫 斑 点 技 术 是 一 种用 于测 定
技 的进步推动免疫检 验技术 的迅速发展 ，正从单一 的免疫诊断
Ｂ细 胞 分 泌 免 疫 球 蛋 白 、 Ｔ细胞 分 泌 细 胞 因 子功 能 的分 析 技 术 ，
定 阳性 Ｔ Ｂ细胞族群 的产生则可以通过斑点直径 的大小 可以直 、 接反映。酶联免疫斑点技术既可用于分泌抗体的 Ｂ细胞 ， 也可用
于分 泌各 类 Ｃ Ｋ的 Ｔ细胞 。 联 免疫 斑 点 技 术 也是 Ｔ细胞 功 能检 酶 测 的标 准 技 术 ， 有 较 高 的检 测 灵 敏度 日 具 。
技术 向单细胞 、 多基 因、 微量化等方面发展 。而哮喘 、 器官和骨髓
移植 、 自身免疫性疾病 、 变态反应 、 淋巴细胞和浆细胞 的恶性肿 瘤 以及 继发性 和原 发性免疫 缺陷 的临床诊 断都客 观要求 免疫
学 检 验 技术 更 加 精确 ， 且能 够 定 量 评 价 临床 治 疗 的 有 效性 。 并
１ ． 元素标记免疫检 验技术 ．１ ３
元素标记 免疫 检验技术 中的标
临床科研常用实验室技术及研究策略
临床科研常用实验室技术及研究策略
临床科研中常用的实验室技术包括但不限于以下几种：
1. 基因测序技术：用于检测和识别基因序列中的变异，以及研究基因与疾病之间的关联。
2. 蛋白质组学技术：用于研究蛋白质的表达、修饰和功能，从而了解蛋白质在疾病发展中的作用。
3. 免疫学技术：包括抗体检测、抗原抗体反应的检测、免疫细胞的鉴定和功能分析等。
4. 细胞培养技术：用于研究细胞生长、分化、凋亡等过程，以及药物筛选和毒性测试等。
5. 动物模型技术：通过建立动物模型来模拟人类疾病，用于研究疾病的发病机制、药物筛选和治疗效果等。
在临床科研中，这些实验室技术常常与研究策略结合使用。
以下是一些常用的研究策略：
1. 观察法：观察法是一种基本的研究策略，通过对研究对象进行观察和记录，收集数据并进行分析，以了解疾病的症状、体征和病情发展。
2. 随机对照试验：随机对照试验是一种常用的临床研究方法，将受试者随机分为试验组和对照组，给予不同的干预措施，比较两组的结果，以评估干预措施的有效性和安全性。
3. 队列研究：队列研究是一种观察性研究方法，将人群按照是否暴露于某因素或按照不同暴露水平分为队列，追踪各队列的结局并比较其差异，以评估暴露因素与结局的关系。
4. 病例对照研究：病例对照研究是一种回顾性研究方法，通过比较病例组和对照组的暴露因素，分析暴露因素与疾病的关系。
5. 横断面研究：横断面研究是一种在特定时间点对特定人群的调查方法，通过收集数据并分析各种因素与疾病的关系。
这些实验室技术和研究策略在临床科研中发挥着重要作用，可以帮助科研人员深入了解疾病的发病机制、探索新的治疗方法、评估治疗效果等，为提高人类健康水平提供有力支持。
竞争elisa原理
竞争elisa原理竞争ELISA（enzyme-linked immunosorbent assay）是一种常用的免疫学实验技术，在医学和科研领域广泛应用。
本文将介绍竞争ELISA的原理及其在实验中的应用。
竞争ELISA的原理是利用酶标记技术，通过酶与酶底物反应的颜色变化来检测样品中特定物质的含量。
竞争ELISA的基本步骤包括涂膜、孵育、洗涤、加底物和反应终止。
在ELISA板的孔中涂覆含有特定抗原的抗体，使其与孔壁结合。
然后，加入待测样品和酶标记抗体，使其与孔中的抗原结合。
在孵育过程中，待测样品中的目标物质与酶标记抗体竞争与抗原结合，形成抗原-酶标记抗体-目标物质复合物。
经过洗涤步骤，将不与抗原结合的物质洗去，以减少干扰。
接下来，加入底物，酶与底物反应产生颜色变化。
最后，通过加入反应终止剂停止酶反应，将颜色的强度与目标物质的含量相关联。
竞争ELISA的优势在于其高灵敏度和高特异性。
它可以定量测定样品中特定物质的含量，并且可以应用于不同类型的样品，如血清、尿液和细胞上清等。
竞争ELISA广泛用于临床诊断、生物医学研究和药物开发等领域。
在临床诊断中，竞争ELISA可以用于检测各种疾病标志物的含量，如肿瘤标志物、病毒抗原和抗体等。
通过测定这些标志物的含量，可以帮助医生进行疾病的早期诊断和预后评估。
在生物医学研究中，竞争ELISA可以用于研究特定蛋白质的表达和分泌水平。
通过测定样品中蛋白质的含量，可以了解其在生理和病理过程中的作用机制，为研究疾病的发生和发展提供重要线索。
在药物开发中，竞争ELISA可以用于筛选和评估药物的活性和剂量。
通过测定药物对特定目标物质的抑制能力，可以评估药物的疗效和毒副作用，为药物的临床应用提供重要依据。
除了竞争ELISA，还有其他类型的ELISA技术，如间接ELISA、夹心ELISA和直接ELISA等。
这些不同类型的ELISA技术在实验步骤和应用领域上有所差异，但都基于酶标记技术和抗原-抗体反应原理。
科研融入免疫学教学的探索与实践
摘要：教学和科研是大学的两项重要职能，两者相统一是高校人才培养可遵循的原则。
免疫学作为医学教学的重要组成部分，应当在实施和贯彻该原则中起先锋作用。
本文从开展文献讨论课开始普及科研知识的学习、实验课开放实验项目培养学生的动手能力、鼓励对科研感兴趣的同学申请课题，并加入老师的科研项目工作中提升科研能力，探讨如何有效地将科研带入免疫教学。
关键词：免疫学；教学科研结合；教学研究*基金项目:吉首大学独立开设实验课基金资助项目(JDDL 2015014);湖南省普通高校实践教学建设基金资助项目([2014］272)作者简介：郭靖(1979-），讲师，博士在读，主要从事医学免疫学教学与科研工作。
（吉首大学医学院微生物与免疫学教研室，湖南 吉首 416000）医学免疫学已成为21世纪生命科学中最前沿的学科之一，是现代医学高等教育的重要基础课程[1]。
可是由于该课主要是从分子和基因水平来阐述概念和理论，非常抽象和复杂，其已被医学生列入最难学的课程之一。
而且近十几年随着分子生物学等理论和生物技术的飞跃，医学免疫学不断有大量新理论和新技术融入，进而又一步加大了教学难度。
所以我们在教学时不仅要跟上知识的变更而且还需要调动学生学习该门课的兴趣。
目前科研与教学相统一的教学理念已深入各高校，我们知道科学研究不仅可以让学生对所学的理论知识进行巩固和更深刻的认识，而且在科研过程中可以接触最前沿的知识和技术。
同时，科研是一种带着问题去解决问题的过程，可大大调动学生学习的主动性和积极性[2]。
这正为我们免疫教学提供了一个良策：用科研去带动学生对免疫学的兴趣，用科研去增强学生对免疫理论和技术的感性认识。
随之而来的问题是如何将科研融入免疫教学，本文将和大家一同探讨科研融入免疫教学之路。
1 文献研讨引入免疫教学医学免疫学在我校主要是针对大二医学生所设的一门基础课程，而短暂的课时仅仅只能将这门学科的整体框架搭建好，里面的许多内容还有待于学生自己去不断学习、补充。
免疫荧光技术在免疫学研究中的应用
免疫荧光技术在免疫学研究中的应用免疫学作为生物学的一个重要分支，在疾病诊断、治疗以及生命科学研究中扮演着重要角色。
而免疫荧光技术作为一种高效、精准的实验手段，被广泛应用于免疫学研究的各个领域。
本文将探讨免疫荧光技术在免疫学研究中的应用，并就其原理、方法和意义进行深入剖析。
一、原理概述免疫荧光技术是利用荧光物质标记抗体或抗原，通过特异性免疫反应将待检测的生物分子标记出来，进而通过荧光显微镜等设备观察其在细胞或组织中的分布和表达水平的一种技术手段。
其原理基于抗原与抗体之间的特异性结合，通过荧光探针的激发和发射实现对待检测分子的定位和定量。
二、方法步骤1. 样品制备：包括细胞培养、组织切片等步骤，确保待检测样品的完整性和可观察性。
2. 抗体标记：将荧光物质标记于特定抗体上，形成荧光标记抗体，常用的荧光物质包括荧光素、荧光蛋白等。
3. 免疫反应：将标记抗体与待检测样品接触，允许其发生特异性结合反应，形成抗原-抗体复合物。
4. 洗涤：去除未结合的抗体和其他非特异性结合物，减少背景信号干扰。
5. 观察分析：利用荧光显微镜等设备观察样品中荧光信号的分布和强度，从而获取目标分子的定位和表达水平信息。
三、应用领域1. 免疫组化：用于检测细胞或组织中特定蛋白质的表达情况，揭示生物体内分子水平的变化和细胞功能的调控机制。
2. 免疫细胞化学：研究免疫细胞中特定分子的定位和相互作用，深入理解免疫细胞活动的调控机制。
3. 免疫荧光染色：用于检测病原微生物或病毒在细胞中的感染情况，为传染病的诊断和治疗提供重要依据。
4. 流式细胞术：结合流式细胞仪，实现对大规模细胞群体中特定蛋白质表达水平的高通量检测和分析。
四、意义与展望免疫荧光技术的广泛应用为免疫学研究提供了强有力的工具支持，促进了对免疫反应机制的深入理解和疾病发病机理的揭示。
随着技术的不断进步和创新，免疫荧光技术将在细胞分子水平的研究、临床诊断和药物研发等方面发挥越来越重要的作用，为人类健康和生命科学的发展做出新的贡献。
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免疫学技术主要相关内容
免疫细胞相关实验技术：单核巨噬细胞、树突状细胞、NK细胞、T细胞、B细胞， 以及这些细胞亚群； 免疫分子相关实验技术：抗原（包括抗原肽）、抗体（包括单抗、多抗、基因工
程抗体）、补体、细胞因子及其受体、HLA、TLR等；
免疫学相关标记技术：荧光、酶、放射、磁珠标记技术和发光分析原理； 免疫学相关蛋白质技术：蛋白质电泳、印迹技术（如 SDS-PAGE、双向电泳、 Western 印迹和斑点印迹）、免疫共沉淀技术等； 免疫学相关检测技术：流式细胞分析和分选技术、细胞凋亡和细胞周期检测技术 、免疫组织化学技术、免疫细胞信号转导研究技术、激光扫描共聚焦显微镜技术 等； 免疫学实验相关动物模型：自身免疫病动物模型（如自身免疫性脑脊髓炎、自身 免疫性甲状腺炎、系统性红斑狼疮等）、感染性疾病动物模型（如利什曼原虫、 弓形虫、巨细胞病毒、李斯特菌等）、肿瘤动物模型、器官移植动物模型等；
免疫共沉淀
（Co-Immunoprecipitation）
原
理
免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation）是以抗体和抗原
之间的专一性作用为基础的用于研究蛋白质相互作用的经典
方法。是确定两种蛋白质在完整细胞内生理性相互作用的有 效方法。 其原理是：当细胞在非变性条件下被裂解时，完整 细胞内存在的许多蛋白质－蛋白质间的相互作用被保留了下 来。如果用蛋白质a的抗体免疫沉淀a，那么与a在体内结合 的蛋白质b也能沉淀下来。这种方法常用于测定两种目标蛋白 质是否在体内结合；也可用于确定一种特定蛋白质的新的作
成的防御功能，乃经遗传而获得
，并非针对特定抗原。
适应性免疫（adaptive immunity）
机体接受病原体等抗原（决定基）异物刺激后所产生、仅针对相应病原体等抗原 异物发挥效应、使之从体内被清除的防御功能。 * 个体接触特定抗原（决定基）而产生。 * 仅针对该特定抗原（决定基）而发生反应。 * 后天获得；有特异性；有记忆性；作用慢而强。
抗原抗体比例影响免疫复合物的大小 抗原抗体反应的两个阶段
11
抗原抗体反应的影响因素
抗原抗体浓度与比例 电解质
* 抗原抗体特异性结合后，亲水性降低，易受电解 质的影响而使表面失去较多的负电荷。
温度
* 适当的温度可增加抗原与抗体分子的碰撞机会， 加速抗原抗体复合物的形成。
酸碱度
* 抗原抗体反应的最适pH在6—8之间，pH过高或过 低，即过碱或过酸，均可影响抗原、抗体的理化 性质。
二、沉淀反应
免疫沉淀反应: (precipitation) 可溶性抗原与相应抗体，在适宜条件下发生结合，
出现的沉淀现象。
液体内沉淀反应 絮状沉淀试验 环状沉淀试验 单向扩散试验 双向扩散试验 免疫电泳 对流免疫电泳 火箭免疫电泳 免疫固定电泳 透射免疫比浊 turbidimetermeasure 散射免疫比浊 nephelomitermeasure
将可溶性抗原或抗体吸附在与免疫无关的颗 粒载体上，形成致敏颗粒，再与相应抗体或抗原 进行反应产生的凝集反应，称为间接凝集反应。 颗粒载体有红细胞、聚苯乙烯乳胶颗粒、活 性炭颗粒，而相应的凝集现象分别称为间接血球 凝集、间接乳胶凝集、间接炭粒凝集反应。
微粒捕获酶免疫分析技术
将已知特异性抗体致敏的免疫微粒与生物素 —亲和素—酶放大系统相结合，最后酶作用于荧 光底物，使之发荧光，通过检测荧光强度判断待 测抗原的含量。 检测肿瘤标记物CAl99、CEA、CAl25、AFP、 性激素、甲状腺素T3T4、叶酸、HIV抗体、HCG等 微量可溶性抗原。
免疫学技术在科研 中的应用
概 述
免疫学技术发展进程的主要阶段
自然的肉眼观察的抗原抗体反应（沉淀反应、凝集反应 ） 加速的肉眼观察的抗原抗体反应（电泳技术、分离技术 ）
标记性免疫技术提高抗原抗体反应的特异性、敏感性
半自动、自动化检验仪器与免疫反应原理结合，加快了 反应过程 标记技术、单克隆技术、高智能自动化技术的最佳组合
性及定量检测的方法。其鉴定蛋白质的敏感性为1—5ng。
WB是进行蛋白质分析时最常用技术之一。
检测可溶性抗原、细胞成分的鉴定与分析，检测与自 身变性细胞核成分结合的抗体(抗核抗体)，HIV的明确诊断
。
28
WB电泳、转膜装置
流 程 图
常见问题及解决方案
注意事项:
1. 免疫印迹杂交的敏感与检测系统有关. 因此, 凝胶 电泳时的蛋白上样量应该保证被检测抗原量不至于太 低, 如果过低应该重新纯化和浓缩使用,或者建议做一 次梯度稀释, 上样电泳后, 直接考马斯亮蓝染色选择 最佳上样量.
Overview of Immunity 免疫的类型
固有免疫 适应性免疫
innate immunity
adaptive immunity
5
固有免疫
病原微生物
innate immunity
固有（innate)/天然(natural) 非特异性（non-specific)免疫 （immunity） * 种群在长期进化过程中逐渐形
可刺激机体产生特异性免疫 应答的物质
产生抗体 刺激机体 致敏淋巴 细胞
抗原决定簇
抗原
适应性免疫
固有免疫与适应性免疫的特点
————————————————————————————— 固有免疫 适应性免疫 ————————————————————————————— 细胞组成 粘膜和上皮细胞、 T淋巴细胞、B淋巴细胞、 吞噬细胞、 NK细胞、 抗原提呈细胞 NK1.1+T细胞、γ δ T细胞 B-1细胞 产生 先天具有 后天经抗原刺激而获得
对流免疫电泳（counter immunoelectrophoresis ）
原 理
是将双向扩散与 电泳技术相结合的一 种方法。将抗原和抗 体在琼脂凝胶孔中电 泳，带负电荷的抗原 向正极运动，带正电 荷的抗体向负极运动 ，二者在琼脂凝胶中 相互作用而形成沉淀 线。
免疫印迹技术
蛋白免疫印迹杂交（Western Blot，WB ）是将蛋白 样本通过聚丙烯酰胺电泳按分子量大小分离，再转移到杂 交膜上，然后通过一抗/二抗复合物对靶蛋白进行特异性定
5. 加样前样品应先离心,尤其是长时间放置的样品,以减 少蛋白质带的拖尾现象
6. 为避免边缘效应,可在未加样的孔中加入等量的样品缓 冲液
7. 样品缓冲液中煮沸的样品可在-20℃存放数月,但是反 复冻融会使蛋白质降解. 8. 为减少蛋白质条带的扩散,上样后应尽快进行电泳,电 泳结束后也应尽快转印. 9. 上样时,小心不要使样品溢出而污染相临加样孔 . 10. 取出凝胶后应注意分清上下,可用刀片切去凝胶的一 角作为标记(如左上角)转膜时也应用同样的方法对PDVF 膜做上标记(如左上角)以分清正反面和上下关系. 11. 转膜时应依次放好PDVF膜与凝胶所对应的电极,即凝 胶对应负极, PDVF膜对应正极.
用搭档。
Co-IP工作示意图
b
a
Y
ab
Y
ba
b
binding wash
a
elution
利用western blot 确定捕获蛋白
41
实 验 步 骤
收获细胞，加入适量细胞裂解缓冲液（含蛋白酶抑制剂），冰上裂解 30min, 细胞裂解液于40C 10,000 rpm 离心10 min后取上清； 取少量裂解液以备 western blot分析，剩余裂解液加1μ g相应的抗 体加入到细胞裂解液，40C缓慢摇晃孵育过夜； 取10μ l protein A琼脂糖珠，用适量裂解缓冲液洗 3 次，每次 3,000 rpm 离心3 min； 将预处理过的10μ l protein A琼脂糖珠加入到和抗体孵育过夜的细 胞裂解液中40C缓慢摇晃孵育2-4h，使抗体与protein A琼脂糖珠偶连 ；
12
常用的抗原抗体反应
凝集反应 沉淀反应
免疫标记技术
13
一、凝集反应
细菌、螺旋体和红细胞等颗粒抗原，在适当电解
质参与下可直接与相应抗体结合出现凝集，称为凝集反
应（agglutination）是最经典的免疫学检测技术。
直接凝集反应 间接凝集反应 间接凝集抑制试验
微粒捕获酶免疫分析技术
间接凝集反应
火箭免疫电泳（rocket immunoelectrophoresis）
原 理
是将单向扩散与电泳 技术相结合的一种方法。 将含有已知抗体的琼脂制 成琼脂板。待检样品加入 阴极侧进行电泳。抗原带 负电荷向阳极移动，并与 抗体结合。在抗原、抗体 比例适当部位形成锥形沉 淀峰，该峰的高度与抗原 量成正比。可快速测出标 本中抗原的含量。
2. 形成凝胶的试剂要有足够的纯度, 激活剂的浓度适 当,不仅可以决定凝胶聚合的速度, 也将影响凝胶的质 量,聚胶时的温度也将影响凝胶聚合的速度. 因此,建议 要根据不同温度下适量增减激活剂的用量以保证分离胶 从加入激活剂起至开始出现凝胶凝聚的时间为15-20分 钟最佳, 对于浓缩胶最佳聚合时间为8-10分钟开始可见 聚合.灌完分离胶加水封闭分离胶与外界氧气的结合.
原 理
将一定量的抗 体混入琼脂凝胶中 ，使待测抗原在凝 胶中自由扩散，与 相应抗体结合形成 沉淀环，沉淀环大 小与抗原浓度呈正 相关。
1.测定沉淀环直径 2.在标准曲线上查找相应抗原浓度
23
双向琼脂扩散实验（ double immunodiffusion ）
原 理
将可溶性抗 原和抗体置于琼 脂凝胶板的对应 孔中，两者各自 在凝胶中向四周 自由扩散，当抗 原与抗体相遇， 在比例合适时形 成沉淀线。
Part III 自身免疫病及实验研究举例
PartI 抗原或抗体的检测
抗原抗体反应的特点
抗原抗体反应的影响因素 常用的抗原抗体反应
抗原抗体反应的特点
高外，主要以氢键、静 电引力、范德华力和疏水键等分子表面的化学基团之 间的非共价方式结合。这种非共价键不如共价键结合 稳定，极易受温度、酸碱度和离子强度的影响而解离 。