流式细胞仪分选共23页文档
流式细胞仪细胞分选的操作步骤
细胞分选的简要操作步骤一、上样前的准备FACSCalibu可以分选细胞进行培养或功能性研究，而这些研究需要清洁环境以保持分选后细胞不受污染继续培养，因此在样本制备，上机检测分选等过程中需严格按无菌技术操作。
1、应用无菌技术制备下列无菌工作液。
3L 70%乙醇（用无菌蒸馏水配制）5L无菌蒸馏水5L无菌PBS2、在干净的鞘液筒中加入3L 70%乙醇。
盖紧盖子，振摇鞘液筒，确保桶内壁被乙醇充分洗涤。
安好鞘液筒。
3、将过滤器短接，否则乙醇将破坏滤膜。
4、用70%乙醇冲洗收集管接口处，并喷洒进样口处的空气。
5、在收集管接口处安装2支BD 50ml收集管（若不使用浓缩器）。
6、放上一支装有70 %乙醇的进样管。
7、设分选门（画一个空门使机器进行分选操作）。
9、从Acquire menu选择SortSetup。
在Sort Gate菜单中选择步骤7设定的分选门。
按液流控制键RUN。
10、在Setup 方框中打叉，点击Acquisition Control 菜单中Acquire。
11、跑乙醇直至2支收集管注满（每管注满需要9min ），点击Pause, Abort。
12、再重复上述步骤2次，共需要1h。
13、断开鞘液筒，在鞘液筒中加入500mL无菌蒸馏水，振摇鞘液筒，倒掉液体，反复操作直至洗净桶内壁残余乙醇。
14、在鞘液筒中加入3L无菌蒸馏水，盖紧盖子。
安好鞘液筒。
15、在收集管接口处安装2支新的收集管。
16、放上一支装有无菌蒸馏水的进样管。
17、点击Acquisition Control 菜单中Acquire。
18、跑无菌蒸馏水直至2支收集管注满（每管注满需要9min），点击Pause Abort。
19、再重复上述步骤2次，共需要1h。
20、断开鞘液筒，在鞘液筒中加入3L无菌PBS盖紧盖子。
安好鞘液筒。
21、在收集管接口处安装2支新的收集管。
22、放上一支装有无菌PBS的进样管。
23、点击Acquisition Control 菜单中Acquire。
流式细胞仪分选细胞的原理
流式细胞仪分选细胞的原理一、仪器原理流式细胞仪是一种利用流体动力学原理，结合光学和电子仪器技术，对细胞进行快速检测、分类和分选的仪器。
其主要原理是通过细胞在液体中的流动来实现对细胞的分选和分类。
二、流式细胞仪的组成流式细胞仪主要由液体系统、光学系统和电子系统三部分组成。
1.液体系统：液体系统包括进样系统、流动系统和废液系统。
进样系统负责将待检样品引入流动系统；流动系统则通过液体的流动将细胞送到光学系统进行检测；废液系统则负责将已经检测过的样品排出。
2.光学系统：光学系统由激光器、光学镜头、滤光片和光电倍增管等组成。
激光器产生的激光经过光学镜头聚焦后，照射到流动的细胞上，细胞反射、散射或荧光发射的光信号被光学镜头收集并通过滤光片进行过滤，最后由光电倍增管转化为电信号。
3.电子系统：电子系统主要由数据采集卡、计算机和控制软件组成。
数据采集卡负责将光电倍增管转换的电信号进行放大和数字化处理，然后传输给计算机；计算机通过控制软件对数据进行处理、分析和展示。
三、细胞的分选原理流式细胞仪的分选功能是通过细胞的特征参数来进行判断和分选的。
1.散射光信号分选：散射光信号是细胞受到激光照射后，由于细胞的大小、形状和内部结构的不同，产生的光信号。
通过检测散射光信号的强度和角度，可以判断细胞的大小和形态，从而实现对细胞的初步分选。
2.荧光信号分选：荧光信号是细胞在受到特定荧光染料激发后发射的光信号。
通过检测细胞的荧光强度和荧光颜色，可以判断细胞内特定荧光标记物的存在与否，从而实现对特定细胞类型的分选。
3.双参数联合分选：双参数联合分选是指根据细胞的两个或多个特征参数进行综合分析和判断。
比如可以根据细胞的大小和形状、荧光强度和颜色等参数进行综合判断，实现对多种细胞类型的准确分选。
四、应用领域流式细胞仪广泛应用于生物医学研究、临床诊断和药物研发等领域。
1.生物医学研究：流式细胞仪可以对细胞的免疫表型、细胞周期、细胞凋亡等进行快速检测和分析，帮助科研人员深入了解细胞的生理和病理过程。
流式细胞仪细胞分选的操作步骤
细胞分选的简要操作步骤一、上样前的准备FACSCalibur可以分选细胞进行培养或功能性研究，而这些研究需要清洁环境以保持分选后细胞不受污染继续培养，因此在样本制备，上机检测分选等过程中需严格按无菌技术操作。
1、应用无菌技术制备下列无菌工作液。
●3L 70% 乙醇（用无菌蒸馏水配制）●5L 无菌蒸馏水●5L 无菌PBS2、在干净的鞘液筒中加入3L 70% 乙醇。
盖紧盖子，振摇鞘液筒，确保桶内壁被乙醇充分洗涤。
安好鞘液筒。
3、将过滤器短接，否则乙醇将破坏滤膜。
4、用70%乙醇冲洗收集管接口处，并喷洒进样口处的空气。
5、在收集管接口处安装2支BD 50ml收集管（若不使用浓缩器）。
6、放上一支装有70 % 乙醇的进样管。
7、设分选门（画一个空门使机器进行分选操作）。
9、从Acquire menu选择SortSetup 。
在Sort Gate菜单中选择步骤７设定的分选门。
按液流控制键RUN。
10、在Setup方框中打叉，点击Acquisition Control菜单中Acquire。
11、跑乙醇直至2支收集管注满（每管注满需要9min），点击Pause，Abort。
12、再重复上述步骤2次，共需要1h。
13、断开鞘液筒，在鞘液筒中加入500mL 无菌蒸馏水，振摇鞘液筒，倒掉液体，反复操作直至洗净桶内壁残余乙醇。
14、在鞘液筒中加入3L无菌蒸馏水，盖紧盖子。
安好鞘液筒。
15、在收集管接口处安装2支新的收集管。
16、放上一支装有无菌蒸馏水的进样管。
17、点击Acquisition Control菜单中Acquire。
18、跑无菌蒸馏水直至2支收集管注满（每管注满需要9min），点击Pause，Abort。
19、再重复上述步骤2次，共需要1h。
20、断开鞘液筒，在鞘液筒中加入3L 无菌PBS，盖紧盖子。
安好鞘液筒。
21、在收集管接口处安装2支新的收集管。
22、放上一支装有无菌PBS的进样管。
23、点击Acquisition Control菜单中Acquire。
Flow Cytometer Sorting Technology 流式细胞分选
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食管癌细胞系-17 SP（分选后）--Aria II
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MoFlow XDP
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实际案例分析
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实际案例分析
24
Another sort . . .
25
Sorting results: pure or not ?
Signal
Noise
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实际案例分析
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实际案例分析
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实际案例分析
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CD4： L CD19： FL CD8： R CD56： FR
30
CD4： L
31
CD19： FL
32
CD8： R
33
CD56： FR
34
CD45RO4: CD45RA4: CD45RO8: CD45RA8:
L FL R FR
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43
谢谢！
一、分选速度
二、分选纯度
三、分选得率
四、分选活性
5
分选参数设定
一、分选速度： 1、DDF，液滴振荡频率 Nozzle＝70um，DDF＝90KHz (60-100)，SP=70Psi (60-70)
Nozzle＝100um，DDF＝30KHz (20-35)，SP=20Psi(15-25)
Nozzle＝85um，DDF＝45KHz (40-50)， SP=30-45Psi Nozzle＝130um，DDF＝10-15KHz，SP=10Psi
44
14
分选参数设定
Claim: “High purity and yield is maintained and is independent of the event rate” at event rates up to 100Ke/s
流式细胞仪分选课件
TETRAMER 文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。
抗原递呈细胞（APC）携带抗原片段通过与TCR复合物结合，在APC和T细胞的 MHC相容和其它共刺激分子的相互作用下激活T细胞并产生细胞免疫效应。 MHC-四聚体染色技术用于抗原特异性T细胞分析的原理在于体外模仿上述抗 原递呈的过程来实现对特异性T细胞的鉴定，通过流式细胞仪这种高通量分 析仪器对标本中这群细胞进行分析
相应地，CD8+T细胞也可以分 为Tc1和Tc2
Th1细胞：介导细胞免疫、细 胞毒性T细胞的生长和活化 、巨噬细胞的活化、介导 迟发型过敏反应。其功能 亢进将导致炎症慢性迁延 ，器官特异性自身免疫病 ，急性排异反应和接触性 皮炎等的发病和免疫病理 损伤。
Th2细胞 ：介导体液免疫，促 进B细胞的生长、活化和分 化，是IgG1和IgE类抗体的 转换因子，其功能亢进将 导致特异性过敏反应，参 与高IgE综合症和嗜酸性粒 细胞增多症。
对AIDS病人的诊断、疗效和预后有重要的指导意 义，一般认为CUTOFF值为200/ul.
绝对计数是加入浓度已知的标准微球与标本一起 测定，流式细胞仪控制软件在设置后能自动计算 出浓度
对任何细胞群体都可以进行绝对计数
Th1Th2细胞因子分泌细胞测定 文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。
1. 肿瘤的早期诊断。 2. 肿瘤的良恶性判断。 3. 观察细胞的增殖状态及周期分布。 4. 疗效监测
细胞功能分析 文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。
1.吞噬功能试验 2.氧爆发试验 3.根据T淋巴细胞分泌细胞因子的不同将CD4+或 CD8+分为介导细胞免疫的I型细胞和介导体液 免疫的II型细胞. 4.药物泵的功能检测 5.NK细胞的肿瘤杀伤活性检测 6.血小板的粘附,聚集功能检测
分选型流式细胞仪的工作原理
分选型流式细胞仪的工作原理分选型流式细胞仪（sorting flow cytometer）是一种用于细胞分选和分析的高级仪器。
它基于流式细胞仪原理，通过将细胞悬浮液以单个细胞为单位通过检测点，实现对细胞的分选和分析。
本文将详细介绍分选型流式细胞仪的工作原理。
分选型流式细胞仪主要由光学系统、流体系统、信号采集系统和控制系统四个部分组成。
光学系统包括激光器、衍射光学系统和荧光光学系统，用于激发和检测细胞中的荧光标记物。
流体系统包括进样系统和分选系统，用于将细胞引入仪器并进行分选。
信号采集系统包括光敏元件和信号处理电路，用于检测和采集光学信号。
控制系统包括仪器控制软件和数据处理软件，用于控制仪器运行和处理采集到的数据。
在分选型流式细胞仪中，细胞悬浮液首先通过进样系统引入仪器。
进样系统通常采用压力驱动的方式，将细胞悬浮液注入进样装置，然后通过微细管道将细胞单个引入检测点。
进样时，仪器会根据预设的参数对细胞进行分类，将目标细胞和非目标细胞分开。
当细胞通过检测点时，激光器会对细胞进行激发，激发光线经过衍射光学系统和荧光光学系统后，被光敏元件接收。
衍射光学系统通过多个透镜和光栅，将光线聚焦到细胞上，使细胞中的荧光标记物发射出的光线进入荧光光学系统。
荧光光学系统通过滤光片和光学透镜，将目标波长的荧光信号聚焦到光敏元件上。
光敏元件通常是一种高灵敏度的光电二极管或光电倍增管，用于将光信号转换为电信号。
信号处理电路对电信号进行放大、滤波和数字化处理，然后传输到控制系统进行进一步处理。
控制系统根据预设的参数，对采集到的数据进行分析和判断，判断细胞的类型和特征。
根据判断结果，控制系统可以对细胞进行分选。
分选系统通过电磁阀和压力控制装置，将目标细胞和非目标细胞分开。
当控制系统判断某个细胞为目标细胞时，会通过信号控制电磁阀，开启对应的通道，使目标细胞通过分选系统，进入收集装置。
而非目标细胞则会被排除到废液中。
分选型流式细胞仪的工作原理基于光学原理和电子技术，通过对细胞的荧光标记物进行激发和检测，实现对细胞的快速分选和分析。
流式细胞仪细胞分选的操作步骤
细胞分选的简要操作步骤一、上样前的准备FACSCalibur可以分选细胞进行培养或功能性研究，而这些研究需要清洁环境以保持分选后细胞不受污染继续培养，因此在样本制备，上机检测分选等过程中需严格按无菌技术操作。
1、应用无菌技术制备下列无菌工作液。
●3L 70% 乙醇（用无菌蒸馏水配制）●5L 无菌蒸馏水●5L 无菌PBS2、在干净的鞘液筒中加入3L 70% 乙醇。
盖紧盖子，振摇鞘液筒，确保桶内壁被乙醇充分洗涤。
安好鞘液筒。
3、将过滤器短接，否则乙醇将破坏滤膜。
4、用70%乙醇冲洗收集管接口处，并喷洒进样口处的空气。
5、在收集管接口处安装2支BD 50ml收集管（若不使用浓缩器）。
6、放上一支装有70 % 乙醇的进样管。
7、设分选门（画一个空门使机器进行分选操作）。
9、从Acquire menu选择SortSetup 。
在Sort Gate菜单中选择步骤７设定的分选门。
按液流控制键RUN。
10、在Setup方框中打叉，点击Acquisition Control菜单中Acquire。
11、跑乙醇直至2支收集管注满（每管注满需要9min），点击Pause，Abort。
12、再重复上述步骤2次，共需要1h。
13、断开鞘液筒，在鞘液筒中加入500mL 无菌蒸馏水，振摇鞘液筒，倒掉液体，反复操作直至洗净桶内壁残余乙醇。
14、在鞘液筒中加入3L无菌蒸馏水，盖紧盖子。
安好鞘液筒。
15、在收集管接口处安装2支新的收集管。
16、放上一支装有无菌蒸馏水的进样管。
17、点击Acquisition Control菜单中Acquire。
18、跑无菌蒸馏水直至2支收集管注满（每管注满需要9min），点击Pause，Abort。
19、再重复上述步骤2次，共需要1h。
20、断开鞘液筒，在鞘液筒中加入3L 无菌PBS，盖紧盖子。
安好鞘液筒。
21、在收集管接口处安装2支新的收集管。
22、放上一支装有无菌PBS的进样管。
23、点击Acquisition Control菜单中Acquire。
流式单细胞分选技术
流式单细胞分选技术流式单细胞分选技术是一种用于研究和分析单个细胞的高效方法。
它可以将细胞从复杂的混合样本中分离出来，并对其进行快速和准确的分类。
这项技术在生物医学研究和临床诊断中具有广泛的应用前景。
在过去的几十年中，随着单细胞研究的兴起，研究人员逐渐意识到细胞之间的差异可能比我们想象的要大得多。
传统的细胞分析方法通常是对大量细胞进行群体研究，而忽略了个体细胞的差异。
然而，每个细胞都是独特的，其功能和表型可能受到多种因素的影响。
因此，单细胞分选技术的出现填补了这一研究空白。
流式单细胞分选技术的基本原理是通过细胞悬浮液在流式细胞仪中以单个细胞的形式通过激光束。
根据细胞的特异性标记，如细胞表面标记物或荧光染料，流式细胞仪可以快速检测并分辨不同细胞类型。
根据检测到的信号，流式细胞仪可以将目标细胞捕获并分离出来，从而实现单细胞的分选。
流式单细胞分选技术的关键在于细胞的特异性标记。
常用的标记方法包括荧光染料标记、抗体标记、基因表达标记等。
通过选择适当的标记方法，研究人员可以根据需要选择特定类型的细胞进行分选。
这种技术不仅可以用于分离不同类型的细胞，还可以分离具有不同表型的同一类型的细胞，如肿瘤细胞中的不同亚群。
流式单细胞分选技术的应用广泛。
在生物医学研究中，它可以用于研究细胞的发育和功能，揭示细胞的多样性和异质性。
在肿瘤学研究中，它可以用于分离和分析肿瘤细胞亚群，帮助了解肿瘤的发生和发展机制。
此外，流式单细胞分选技术还可以应用于临床诊断，如癌症早期诊断和预测治疗效果。
尽管流式单细胞分选技术在细胞研究领域取得了巨大的进展，但仍面临一些挑战。
首先，细胞样本的准备和处理过程可能会影响到分选的结果。
其次，目前的流式细胞仪的分辨率和速度仍有限，无法满足大规模单细胞分选的需求。
此外，单细胞的高通量分选和分析需要更复杂的数据处理和分析方法。
总的来说，流式单细胞分选技术为研究人员提供了一种高效、准确和全面的分析单细胞的方法。