微生物量(1)
高中生物第1章微生物培养技术第3节测定微生物的数量学案中图版选修1
第三节测定微生物的数量一、测定微生物数量的方法测定微生物数量的方法可分为两类：直接计数法和间接计数法.前者常用的是显微镜直接计数法，这种方法是先将待测样品制成悬液，然后取一定量的悬液放在显微镜下进行计数。
该方法适用于纯培养悬浮液中各种单细胞菌体的计数。
后者最常用的是稀释平板计数法，需要将待测样品配制成均匀的系列稀释液并使其均匀分布于平板中的培养基内，经培养后统计培养基中出现的菌落数，从而推算出样品中的活菌数。
利用血球计数板测出的菌体数与平板计数法相比哪个多些？【提示】血球计数板测出的是全部菌体数,而平板计数法只能测出活菌数，而且比实际数偏少。
二、间接计数法的实验设计1．制备土壤稀释液取土壤表层5~10 cm处的土样.准确称取1 g土样，放入盛有99 mL无菌水的锥形瓶中，振荡20 min后制成102倍的稀释液.然后进行系列稀释,得到103、104、105、106倍的系列稀释菌液。
2．取样及倒平板3．培养4．观察记录（1）计数时对于细菌、放线菌以每个培养皿内有30～300个菌落为宜，霉菌以每个培养皿内有10～100个菌落为宜。
（2）计算每克样品菌数公式为：每克土壤样品菌数＝错误!×稀释倍数.预习完成后，请把你认为难以解决的问题记录在下面的表格中问题1问题2问题3问题4一、微生物生长量的测定1.测重量法干重法：将单位体积待测的培养液离心后，用清水洗涤1～5次，放入干燥器中加热干燥，加热温度一般在100～105 ℃之间,再称重。
以细菌为例,一个细胞一般重约10－12～10－13g，也可在较低温度（如40 ℃)下进行真空干燥。
湿重法：将一定量的菌悬液离心或过滤，得到菌体，反复洗涤后称湿重，干重一般为湿重的20%~25％。
2．计数法(1)直接计数法这种方法是利用特定细菌计数板或血球计数板，在显微镜下计算一定容积里样品中微生物的数量。
此法的缺点是不能区分死菌与活菌。
计数板是一块特制的载玻片，上面有一个特定的面积1 mm2和高0。
沉降法检测空气中微生物数量
广东工业大学实验报告实验 二 题目： 沉降法检测空气中微生物数量 第16周 星期 三 第 10-12 节（一） 实验目的1．学习并掌握用沉降法检测空气中的微生物2．了解空气中微生物的分布状况（二）实验原理在我们周围的环境中存在着种类繁多、数量庞大的微生物。
空气中也不例外。
虽然空气不是微生物栖息的良好环境。
但由于气流、灰尘和水沫的流动，人和动物的活动等原因，仍有相当数量的微生物存在。
当空气中个体微小的微生物落到适合于它们生长繁殖的固体培养基的表面时，在适温下培养一段时间后，每一个分散的菌体或孢子就会形成一个个肉眼可见的细胞群体即菌落。
观察大小、形态各异的菌落，就可大致鉴别空气个存在的微生物的种类。
（三)实验器材1、 试剂牛肉蛋白胨培养基配方：牛肉膏 1.0g, 蛋白胨 2g ，NaCl 1g, 琼脂粉 4g 水200mL ，pH 7.2~7.42、仪器及其他用品高压灭菌锅，操作工作台，三角瓶，培养皿，酒精灯，培养箱等（四）实验方法1、倒平板：按常法配置上述培养基，装于500mL 三角瓶中，高压灭菌备用。
冷却至45-47℃左右，在超净工作台，倒8个平板备用。
2、暴露取样在指定的地点各放2皿，将平板皿盖打开，在空气中暴露5min 和10min,时间一到，立即合上皿盖。
3、培养观察： 细菌置于37℃培养，培养48h 计数平板上的菌落，观察各种菌落的形态、大小、颜色等特征。
4、计算1m 3空气中微生物的数目奥梅染斯基（Омелянский）曾建议：如面积为100㎝2的平板培养基，暴露在空气中5分钟，置于37℃培养24小时后所生长的菌落数，相当于10L 空气中的细菌数。
X=2100100r N π⨯⨯ X ：每m 3空气中的细菌数N ：平板暴露5分钟，置37℃培养24小时后生长的菌落数r ：平皿底半径（㎝）（五）实验结果1、列表比较不同放置地点空气菌落种类以及数量的差异？X=01001002=π⨯⨯rN （六）思考题1．对沉降测定法的结果，进行分析。
微生物大小测定及计数
2、在不改变目镜和目镜测微尺，而改用不同放大倍数的物镜来测定同一菌体大小时，其测定结果是否相同，为什么？
答：测定结果不相同。因为在不同倍数的目镜下，细菌大小发生变化，而目镜测微尺每格大小不变，所以测定结果不同。
四、仪器和其他用品：载玻片、盖玻片、显微镜、镊子、接种环、血球计数板、显微测微尺、滴管、酒精灯
五、操作步骤：
1、微生物大小的测定
（1）取下显微镜右目镜，将目镜测微尺放在目镜镜筒内的隔板上，然后放上目镜透镜，将目镜装回镜筒。
（2）校正目镜测微尺：在低倍镜下调节焦距，当清晰看到镜台测微尺的刻度后，用推进器移动镜台测微尺，使两尺在某一区域内两线完全重合，然后分别输出两重合线之间镜台测微尺和目镜测微尺所占的格数。
（2）将血球计数板盖上盖玻片，用无菌毛细管吸取少量摇匀的酿酒酵母菌液，滴在盖玻片的一个顶点，待菌液从盖玻片另一对角流出为满。
（3）先在低倍镜下找到计数室，再用高倍镜计数。每小格内的菌数不能超过8个为宜。当每小格内的菌数过多时，适当稀释。
（4）任选5个中格计数（5个中格不可以挨着；酵母菌出芽计1个菌体；计数时，位于边线上的细胞，记上不记下，计左不计右）
（3）用同样的方法在高倍镜下和油镜下进行校正。并计算目镜测微尺每小格所代表的实际长度。
（4）制酵母菌玻片：用接种环取菌在蒸馏水中涂抹，加热干燥，用美兰染色1’30”，流水脱色，自然干燥。
（5）先在低倍镜和高倍镜下找到菌株，再在油镜下测出酵母菌的长度和宽度。重复3次并记下平均值。
2、酵母菌的显微计数
（1）将血球计数板洗净，再用95%乙醇棉球擦洗，自然干燥。
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微生物大小及数量测定
一、实验目的：
细菌大小通用的计量单位
细菌大小通用的计量单位细菌是一类微生物，其尺寸非常微小，通常以微米（μm）作为计量单位。
微米是国际单位制中的长度单位，1微米等于千分之一毫米，也等于百万分之一米。
对于细菌的大小而言，它们通常处于纳米级别，即10^-9米。
细菌的大小可以有很大的变化，根据不同种类的细菌，其尺寸可能有所差异。
一般来说，典型的细菌大小在0.5至5微米之间。
其中，最常见的细菌大小在1至3微米之间。
例如，大肠杆菌（Escherichia coli）的大小通常在1至2微米之间。
大肠杆菌是人体肠道中普遍存在的一种细菌，它起着消化食物、合成维生素等重要作用。
另外一种常见的细菌，金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）的大小一般为0.5至1微米之间。
金黄色葡萄球菌是一种常见的导致皮肤感染和食物中毒的细菌。
与其他微生物相比，细菌的尺寸相对较小。
例如，真菌的尺寸一般在2至200微米之间，比细菌要大得多。
而病毒的尺寸更小，通常在20至300纳米之间，这意味着细菌的大小是病毒的几倍。
为了更好地理解细菌的微小尺寸，我们可以举一个比喻。
假设我们以1微米为单位，那么10微米将相当于一个沙砾粒子的尺寸。
而人的头发直径约为80微米，所以细菌的尺寸远远小于人的头发的直径。
细菌之所以如此微小，是因为它们的细胞结构相对简单。
细菌细胞主要由细胞膜、细胞壁、质粒、核糖体等组成。
与人类细胞相比，细菌的细胞结构更简单，相应地它们的大小也较小。
虽然细菌非常微小，但它们的存在对地球上的生态系统和人类健康都起着重要作用。
有些细菌是有益的，例如帮助分解有机物质、合成维生素等，而另一些细菌是病原微生物，可以引起疾病。
对细菌进行准确的大小测量和研究，是了解其多样性和生物学特征的重要一步。
综上所述，微米是衡量细菌大小的通用计量单位。
细菌一般处于0.5至5微米之间，其中大肠杆菌和金黄色葡萄球菌是常见的细菌种类，其尺寸分别在1至2微米和0.5至1微米之间。
细菌的微小尺寸使得它们能够在不同的环境中生存和繁殖，对地球上的生态系统和人类健康产生重要影响。
微生物限度检查法名词解释(一)
微生物限度检查法名词解释(一)微生物限度检查法1. 介绍微生物限度检查法（Microbiological Limit Test）是用于评价药品、食品和化妆品等产品中微生物质量的检验方法。
它能够确定样品中是否存在对人体有害的微生物，并对其数量进行定量评估。
2. 相关名词以下是与微生物限度检查法相关的一些常见名词：•微生物限度：指产品中允许存在的微生物或菌群的数量上限。
不同产品类型有不同的微生物限度标准，例如菌落数、霉菌数和大肠菌群数等。
–例如，某药品的微生物限度为每克不超过10个细菌。
•菌落总数：指在特定培养基上，某一样品中培养出的微生物菌落的总数。
–例如，通过菌落总数检验，发现某食品样品中每克菌落总数为100个。
•霉菌数：指在特定培养基上，某一样品中培养出的霉菌菌落的数量。
–例如，某化妆品样品中每克霉菌数为5个。
•大肠菌群数：指在特定培养基上，某一样品中培养出的大肠菌群的数量。
–例如，某食品样品中每克大肠菌群数为0。
3. 检验流程微生物限度检查法的具体流程包括以下几个步骤：1.样品准备：从被检测产品中取样，按照一定的方法进行样品的准备和处理，以便进行后续分析。
2.菌落计数：将样品分别接种在适当的培养基上，并在一定的条件下孵育。
孵育结束后，利用显微镜和计数板等设备，对培养出的微生物菌落进行计数和记录。
3.菌种鉴定：根据菌落的形态、生理特性和生化反应等，对菌落进行鉴定，以确定菌落的种类和数量。
4.结果评价：根据相关的微生物限度标准，将检测结果与标准进行比较，评价样品是否符合质量要求。
5.结果记录：将检测数据和结果进行记录，并生成相应的报告。
4. 应用领域微生物限度检查法广泛应用于以下领域：•药品：验证药品是否符合微生物限度，确保药品的安全和有效性。
•食品：检测食品中是否存在致病菌乃至变质微生物，保障食品的卫生和质量。
•化妆品：评价化妆品中的细菌、霉菌等微生物是否超过限度，确保产品的质量和安全性。
以上就是关于微生物限度检查法的相关名词和解释，以及检验流程和应用领域的简要介绍。
菌落总数cfu计算方法例子(一)
菌落总数cfu计算方法例子(一)菌落总数CFU计算方法菌落总数是微生物学实验中常用的一个指标，用于评估样品中微生物的数量。
通常使用菌落形成单位（Colony Forming Units，CFU）来表示菌落总数。
以下是一些菌落总数CFU计算方法的例子：1. 理论计算法理论计算法是利用该菌落的预期数量，通过稀释法计算得到的菌液浓度来推算菌落总数。
具体步骤如下：1.从样品中取一定容量的菌液，通常在10-100微升之间。
2.将菌液分别进行一系列的稀释，并在每个稀释液上培养菌落。
3.等待适当的培养时间，通常是24-48小时。
4.在培养平板上，选择合适的稀释液，使得菌落数量在30-300之间。
5.计算选择稀释液的菌落数量，并乘以相应的稀释比例，得到菌落总数CFU。
2. 直接计数法直接计数法是将样品中的菌落直接数出，用于菌落数量较少或者时间有限的情况。
具体步骤如下：1.准备一片固体培养基，并将样品均匀涂抹于培养基表面。
2.等待适当的培养时间，通常是24-48小时。
3.使用显微镜观察培养基上的菌落，通过目测或者计数器进行计数。
4.将计数结果作为菌落总数CFU。
3. 浓度计算法浓度计算法是通过计算一定体积的菌液中的菌落总数CFU来推算样品中的菌落总数。
具体步骤如下：1.从样品中取一定体积的菌液，通常在1-10毫升之间。
2.将菌液进行一系列的稀释，并在每个稀释液上培养菌落。
3.等待适当的培养时间，通常是24-48小时。
4.在培养平板上，选择合适的稀释液，使得菌落数量在30-300之间。
5.计算选择稀释液的菌落数量，并乘以相应的稀释比例和体积，得到菌落总数CFU。
以上是菌落总数CFU计算方法的一些例子，不同方法适用于不同情况。
在进行菌落总数测定时，应选择适当的方法，并按照规定的步骤进行操作，以获得准确可靠的结果。
当然，接下来我将继续介绍更多关于菌落总数CFU计算方法的例子：4. 颜色变化计算法某些微生物在培养基上产生特定的颜色变化，可以通过颜色密度与菌落数量之间的关系来推算菌落总数CFU。
高中生物第1章微生物技术第3课时微生物数量的测定同步备课教学案北师大版选修
⾼中⽣物第1章微⽣物技术第3课时微⽣物数量的测定同步备课教学案北师⼤版选修第3课时微⽣物数量的测定[学习导航] 1.阅读教材P17内容，概述测定某种微⽣物数量的⽅法和步骤。
2.结合教材P15～17“测定⼟壤中微⽣物的数量”实验，掌握使⽤平板菌落计数法测定⼟壤中微⽣物的数量。
[重难点击] 1.掌握测定某种微⽣物数量的⽅法和步骤。
2.学会使⽤平板菌落计数法测定⼟壤中微⽣物的数量。
⼀、微⽣物数量测定的⽅法和原理微⽣物数量的测定也是重要的微⽣物技术之⼀，平板菌落计数法是⼀种应⽤⼴泛的微⽣物数量测定⽅法。
1.平板菌落计数法的原理：根据微⽣物在⾼度稀释的条件下，固体培养基上所形成的单个菌落，是由⼀个单细胞繁殖⽽成的，即⼀个菌落代表⼀个单细胞。
2.计算⽅法：从平板上的菌落数推测出每克样品中的菌落数的计算⽅法是：同⼀稀释度的菌落平均数÷0.2÷稀释度×10。
3.优缺点(1)优点：能测出样品的活菌数，可⽤于微⽣物的选种与育种、分离纯化及其他⽅⾯的测定。
(2)缺点：操作烦琐、时间较长、测定值常受各种因素的影响。
4.该⽅法统计的菌落数⽐活菌的实际数⽬低，这是因为当两个或多个细胞在⼀起时，平板上观察到的只是⼀个菌落。
1.为什么分离不同的微⽣物要采⽤不同的稀释度？答案⼟壤中各种微⽣物的数量是不同的，为获得不同类型的微⽣物，就需要按不同的稀释度进⾏分离。
2.平板菌落计数法(1)平板菌落计数法根据操作步骤的不同可分为哪两种？答案①涂布平板法：⽤灭过菌的涂布器将⼀定量(⼀般为0.1 mL)的适当稀释过的菌液涂布在琼脂培养基的表⾯，然后保温培养直到菌落的出现。
记录菌落的数⽬并换算成每毫升样品中的活细胞的数量。
②倒平板法：将已知体积(0.1～1 mL)的适当稀释过的菌液加到灭过菌的培养⽫内，然后倒⼊溶化后冷却⾄45 ℃的琼脂培养基，⽔平晃动混匀，待凝固后保温培养到出现菌落，然后与涂布平板法同样计数。
(2)平板菌落计数法中换算样品的含菌数依据什么数据换算？答案依据稀释倍数、取样接种量和菌落数。
普通微生物学普通微生物学1
指一类细胞核无核膜包裹，只存在核区的单细胞生物。
✓ 细胞核外无核膜包裹，只有核区，称为原核； ✓ 核糖体位于细胞质内，是70S粒子； ✓ 细胞内不含任何由单位膜包裹的细胞器。
包括细菌、放线菌、蓝细菌、衣原体、支原体等。
细菌（bacteria）
是一类结构简单、细胞壁坚韧、主要以二分裂 方式繁殖和水生性较强的原核微生物。 细菌的基本形态： 球、杆、螺旋
螺旋体菌
菌体柔软，用于运动的类似鞭毛的轴丝位于细胞外鞘内。
4. 特殊形态
柄细菌
方形细菌
星形细菌
鞘细菌
二、细菌的大小
细菌的大小测量单位是μm。 ✓ 球菌大小以直径表示，如1 μm ✓ 杆菌大小以其宽度与长度表示，如1 × 6 μm
✓ 螺旋菌大小以其宽度与长度表示，长度指菌体两 端间弯曲形的长度，如1 × 5 μm
链球菌
沿一个平面进行多次分裂，分裂后细胞呈链状排列。 如：溶血链球菌 (Streptococcus Hemolyticus)
四联球菌
细胞分裂沿两个垂直的平面进行，分裂后每4个细 胞特征性地连在一起，呈田字形。
如：四联小球菌(Micrococcus tetragenus)
八球菌
细胞按三个相互垂直的平面进行分裂后，每八个 球菌特征性地连在一起成立方体形。
如：尿素八叠球菌 (Sarcina ureae)
葡萄球菌
细胞无定向分裂，多个新个体形成一个不规则的 群体，犹如一串葡萄。
如：金黄色葡萄球菌 (Staphylococcus aureus)
一、细菌的形态 2. 杆菌（bacillus）
杆菌是细菌中种类最多的类型，因菌种不同，菌 体细胞的长短有所差异。 ✓ 短杆状、长杆状等； ✓ 排列方式有链状、栅状、“八”字状等。大芽肠孢杆杆菌菌
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土壤微生物生物量碳、氮的测定-氯仿熏蒸浸提法
熏蒸：
称鲜土（10目）7.5g于培养皿（或烧杯）中，将培养皿（或烧杯）置于可抽负压的真空干燥器中，分别内置装有50ml无乙醇氯仿及蒸馏水的小烧杯。
用真空泵抽至氯仿沸腾并保持2min，关紧干燥器气阀，将其放入28℃恒温室（或恒温箱）中熏蒸24h。
干燥器移出，放空干燥器，把装氯仿的烧杯移走，干燥器清理干净后，反复抽气除去氯仿直至无气味。
待氯仿去除干净后：
1.在0.01的天平上称熏蒸土壤5g加30ml 0.5M K2SO4溶液，在往复式震荡机上震荡
提取30min，离心、过滤于100ml带盖塑料瓶中。
滤液保存在4℃冰箱中备用，最
好保存不超过一周。
2.剩余土壤2.5g先称重，然后置于烘箱105℃烘 6h，取出称重。
同时做不熏蒸样品的提取：
3.称未熏蒸鲜土2.5g于离心管中，加30ml 0.5M K2SO4溶液，在往复式震荡机上震荡
提取30min，离心、过滤。
滤液保存在4℃冰箱中备用，最好保存不超过一周。
4.同时称未熏蒸土壤2.5g，置于烘箱105℃烘 6-8h，取出称重。
试验方法：
微生物碳：吸浸提液5ml至消煮瓶，加入重铬酸钾标准溶液5ml（称经130度烘干2-3h 的重铬酸钾19.622g，溶于水，定容至1L）、浓硫酸10ml，消煮30min，加入蒸馏水10-20ml 冷却。
加入1-3滴邻菲罗琳指示剂，用硫酸亚铁滴定剩余的重铬酸钾。
（硫酸亚铁的配制及标定见p232）。
微生物氮：吸浸提液5ml于25ml具塞比色管，加入过硫酸钾氧化剂溶液12.5ml，用水定容至25ml，塞紧瓶塞，纱布包好扎紧，放入高压蒸汽灭菌器，加热至120度保持30min，冷却后直接在紫外分光光度计上用波长220和275nm测定。
工作曲线：吸取氮标准溶液（25mg/L）0、0.5、1、2、3、4、5ml分别于25ml比色管中，各加入12.5ml氧化剂溶液，用水定容至刻度，得到氮的标准系列溶液0、0.5、1、2、3、4、
5mg/L，与样品同样消煮测定A220和A275。
1.基本方法：滤液用重铬酸钾—容量法测定有机碳（p231）
2.TOC仪法：前两步所得滤液用TOC仪测定微生物生物量碳、氮；称取熏蒸及不熏
蒸处理土样各3-5g测定水分，用于结果计算。
微生物碳=（熏蒸碳-未熏蒸碳）×2.64
微生物氮=（熏蒸氮-未熏蒸氮）×1.85。