复方接骨片含药血清对BMP-2沉默的骨髓间充质干细胞体外增殖及分化影响

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接骨宝对实验性骨折愈合过程中BMP-2表达的影响

接骨宝对实验性骨折愈合过程中BMP-2表达的影响
L ANG W e ,C I n HEN — h n HEN a - r Li c u ,C C n e ,HU ANG S i a o G aghuMei l o ee G ag o 20 C i ) T e cn fltdH sil f unzo d aC l g, unz u 50 6 , h a S ia t c l h 1 n [ src] jcie T v sg tte n u n e f i u a n h p es no n op oe ei rti- B -) n Abta tObet : oi et ae h f e c e b oo e x rsi b em rh g nt poen 2(MP 2 a d v n i il oJ g t e o fo c
的 修复 和塑 形 , 短 了骨 折愈 合 的进 程 。 缩 【 关键 词】 骨 宝 ; 接 骨折 愈 合 ; 形 态发 生蛋 白- ; 长 因子 骨 2生
f 中图 分类 号】 8 R6 3
【 文献 标识 码】A
【 文章 编 号】 1 7 — 2 0(0 8 1 b) 0 6 0 6 3 7 1 2 0 ) 2I 一 1 - 3
me h n s o a t r e l gp o td b ig b o b b evn h x rs in a d d srb t no MP- u n rcu e c a im ff cu eh ai rmoe yJe u a y o sr igt ee p e so n it u i fB r n i o 2 d r gfa t r i
a d t er b i fc n rlg o p wee te td wi li old wae.T e s mp e falte mo e a b t we e c l ce n h a b t o o to r u r rae t pan b ie tr h a lso l h d lr b i r ol td s h s e rs e t ey 1 ,3 n e satrt e o e ain o rcu e o a isr s e tv l.T e s mp e frd u r b e p ci l ,2 ,4 a d 5 we k fe h p rt ffa t r frdu ep ciey h a ls o a i swee o — v o sr e yt emeh d o itlg , n M P 2 wa ee td b mmu o ite e sr.E pe so fBMP sa ay e e v d b h to fhsoo y a d B - sd tce yi n h so h mity x r sino -2wa n z d l

二至丸含药血清对成骨细胞增殖、分化及矿化的影响

二至丸含药血清对成骨细胞增殖、分化及矿化的影响

二至丸含药血清对成骨细胞增殖、分化及矿化的影响程敏;王庆伟;刘雪英【期刊名称】《时珍国医国药》【年(卷),期】2013(24)7【摘要】目的研究二至丸含药血清对体外培养大鼠成骨细胞(Osteoporosis,OP)增殖、分化及矿化的影响。

方法二至丸(9,4.5,2.25 g/kg/d)给大鼠连续灌胃7 d,每天2次,于第8天灌胃后1~2 h眼眶取血制备含药血清,采用多次酶消化法获得大鼠原代成骨细胞,将含药血清加入成骨细胞培养液中,采用MTT比色法、碱性磷酸酶(ALP)染色法、茜素红染色法研究其对细胞增殖及功能的影响。

结果二至丸含药血清能不同程度地促进大鼠原代成骨细胞的增殖,二至丸中剂量在24,48,72 h均能显著促进大鼠原代成骨细胞的增殖(P<0.05);二至丸中、小剂量能显著增加大鼠原代成骨细胞ALP活性(P<0.05)和矿化结节的数量(P<0.05),其中二至丸中剂量效果最为显著(P<0.01)。

结论二至丸含药血清具有良好的促进成骨细胞增殖、分化、矿化的作用,其中二至丸中剂量组作用效果尤为显著。

【总页数】3页(P1555-1557)【关键词】二至丸;含药血清;成骨细胞;增殖;分化;矿化【作者】程敏;王庆伟;刘雪英【作者单位】商洛学院;中国人民解和军第四军医大学【正文语种】中文【中图分类】R285.5【相关文献】1.牵张应力环境下六味地黄汤含药血清对成骨细胞增殖分化影响的实验研究 [J], 程婉;汤小康;应航;李敏2.刺老苞根皮含药血清对原代成骨细胞增殖、分化和矿化功能的影响 [J], 依香叫;王松月;李金诚;燕梦云;裴凌鹏3.补肾活血健骨方含药血清对人成骨细胞增殖、分化及矿化功能的影响 [J], 陈巨鹏;黄桂成;李伟东;刘华东;邢润麟4.锁阳含药血清对MC3T3-E1成骨细胞增殖分化及矿化的影响 [J], 武海燕[1];张灵莉[1];冯雪梅[1]5.补肾复方胶囊含药血清对成骨细胞增殖、分化和矿化功能的影响 [J], 姜向坤;刘敏如因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。

中药对骨髓间充质干细胞增殖、凋亡及分化的影响研究进展

中药对骨髓间充质干细胞增殖、凋亡及分化的影响研究进展

中药对骨髓间充质干细胞增殖、凋亡及分化的影响研究进展作者:方健康周轶平李玛琳来源:《中国中药杂志》2014年第15期[摘要] 骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)是一类来源于骨髓的多能干细胞,不仅能够提供造血支持,且具有自我更新、高度增殖以及多向分化的潜能,是目前干细胞研究的热点。

近年来,科研人员就中药对BMSCs的影响开展了一系列的研究,发现有的中药能够促进BMSCs的增殖,有的则能够抑制其凋亡,还有的能够诱导其向成骨细胞、软骨细胞等多个方向分化。

其中,部分研究还就作用机制进行了探讨,作者对其研究进展进行了概述。

[关键词] 中药;骨髓间充质干细胞;增殖;凋亡;分化;研究进展[收稿日期] 2013-12-22[基金项目] 国家自然科学基金项目(30860357)[通信作者] 李玛琳,教授,E-mail:limalinb@[作者简介] 方健康,硕士研究生,E-mail:jackfang1987@骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMCSs)已有半个世纪的研究历史[1],并日益受到研究人员的广泛关注。

BMSCs在一定条件下可向成骨细胞、软骨细胞、心肌样细胞、血管内皮细胞、神经元样细胞、肝细胞、脂肪细胞等多个方向分化。

BMSCs所具备的这种多向分化潜能和自我更新能力,以及较容易获取、体外扩增快、低免疫排斥等优点,使其成为干细胞研究的热点。

近年来,研究人员利用中药对体外培养的BMSCs进行干预,以探索这些中药对BMSCs增殖、凋亡及分化等生命活动的影响。

这些探索将有助于阐明中医药的作用机制,将对我国中医药事业、重大疾病研究、细胞工程、组织工程等生命科学技术领域的发展产生积极的影响。

1 中药促进BMSCs的增殖细胞增殖是生物体最重要的生命活动之一,是生物生长、发育、繁殖、遗传的基础。

近几年研究发现,多种中药对BMSCs的增殖具有一定的促进作用。

复合万古霉素后对载有BMP2的仿生磷酸钙骨替代材料成骨性能影响的研究

复合万古霉素后对载有BMP2的仿生磷酸钙骨替代材料成骨性能影响的研究
针对骨缺损的修复,本课题组研发出了一种 可缓释骨形态发生蛋白2 (Bone Morphogenetic protein -2, BMP2)的仿生磷酸钙骨替代材料
(BMP2 -coprecipated biomimetic calcium phosphate
granules, BioCaP-BMP2)叫 BioCaP-BMP2 因能够 缓释BMP2而具有骨诱导性,更利于修复超过机体 自愈能力的大面积骨缺损(critical-sized bone de­ fects) ,这已在包括大鼠、山羊等多种大面积骨缺 损动物模型中得到验证I"。
中国口腔种植学杂志2019年第24卷第2期
专题研究
.51 .
复合万古霉素后对载有BMP2的仿生
磷酸钙骨替代材料成骨性能影响的研究
王冬赘罗媛彭娟红
要]目的:探讨复合万古霉素后对载有BMP2的仿生磷酸钙骨替代材料(BMP2-coprecipated biomimetic cal­
cium phosphate granules, BioCaP-BMP2)成骨性能的影响.方法:在BioCaP-BMP2上接种BMSCs,观察不同浓度
entiation of BMSCs. Conclusion: Therapeutic concentration of vancomycin will not negatively influence
the osteogenic efficacy of BioCaP-BMP2, which means BioCaP-BMP2 granules carrying vancomycin could be a promising material to treat infectious bone defects.

仙鹿健骨汤含药血清对成骨细胞矿化结节及BMP-2表达影响的实验研究

仙鹿健骨汤含药血清对成骨细胞矿化结节及BMP-2表达影响的实验研究

关键词骨质疏松症成骨细胞碱性磷酸酶实验研究仙鹿健骨汤大鼠仙鹿健骨汤具有温补肾阳、健脾活血的功效,治疗骨质疏松有良效。

本实验利用血清药理学和细胞培养相结合的方法,着重探讨仙鹿健骨汤含药血清对体外培养成骨细胞的矿化功能及对bmp-2表达的影响,从细胞学角度观察探讨此方治疗骨质疏松症的作用机理。

1 材料与方法1.2 实验药品:仙鹿健骨汤组成:仙灵脾、鹿角胶、骨碎补、仙茅、黄芪、白术、仙鹤草、当归。

由温州医学院附属第一医院中药房提供,水煎浓缩后分别含生药0.5g/ml、1g/ml、2g/ml。

α-d3:以色列梯瓦制药工业有限公司生产,批号(95)卫药准字j-10号,水溶液浓度为0.005μg/ml。

氯氨酮:上海第一生化药业有限公司生产,批号国药准字h31021897。

1.3 实验方法:①去势大鼠造模:取40只大鼠,腹腔注射戍巴比妥钠(3μg/100g)麻醉,去除双侧卵巢,逐层缝合,随机分成仙鹿健骨汤低、中、高剂量组(a、b、c组)、α-d3对照组(d 组)、模型组(e组)5组,每组8只;另8只为空白组(f组)。

②血清制备:各组每天均以10ml/kg,分别给予仙鹿健骨汤水提液(a、b、c组)、α-d3水溶液(d组)及生理盐水灌胃(e、f组),1天1次,连续10天。

动物处死前1h再灌胃1次,动物给予氯氨酮麻醉,右心室抽血,采集到的血液,4℃静置4小时,3000r/min离心30min,收集血清,56℃水溶灭活补体。

?-20℃?保存,保存时间不超过3周。

使用前用培养基稀释,过滤膜除菌。

③新生大鼠颅骨成骨细胞制备及培养:取新生大鼠(24小时内),无菌取颅骨,剔除粘附的结缔组织和血管,剪碎约1×1mm?3,加含0.2%的ⅰ型胶原酶和0.1%的透明质酸酶的消化酶消化,消化5个循环,每次20min,其间不时摇动,取3、4、5次消化的细胞悬液,1000r/min离心10min弃上清,沉淀的细胞用10%胎牛血清(fcs)dmem培养液重悬,吹打均匀后,接种到培养瓶中,培养瓶置于37℃,5%co?2孵箱孵育,24小时换液,待细胞80%~90%贴壁后,0.25%胰酶消化使贴壁细胞消化松解,轻摇培养瓶,细胞即脱壁,以终浓度1×10?5/ml接种于培养瓶内,进行传代培养,取第3代细胞。

接骨中药含药血清对成骨细胞生物功能的影响

接骨中药含药血清对成骨细胞生物功能的影响

接骨中药含药血清对成骨细胞生物功能的影响冯伟;傅文彧;张玥;朱雅萍;王君【期刊名称】《上海交通大学学报(医学版)》【年(卷),期】2004(024)007【摘要】目的比较伤科常用单味接骨中药含药血清对成骨细胞生物学功能的影响.方法应用MTT法、对硝基苯磷酸盐法、茜素红染色方法和RT-PCR法,比较伤科常用单味中药当归、自然铜、骨碎补和续断对体外培养成骨细胞的增殖、碱性磷酸酶分泌、矿化结节形成和mRNA表达的影响.结果单味中药当归对早期增殖期的成骨细胞有明显的促增殖和分化的作用;当归和自然铜能增加成骨细胞矿化期矿化结节的形成;当归和续断能上调BMP-2和IGF-Ⅰ mRNA的表达.结论单味接骨中药当归具有刺激体外培养成骨细胞增殖和分化的功能.【总页数】3页(P542-544)【作者】冯伟;傅文彧;张玥;朱雅萍;王君【作者单位】上海第二医科大学,瑞金医院,上海市伤骨科研究所,上海,200025;上海第二医科大学,瑞金医院,上海市伤骨科研究所,上海,200025;上海第二医科大学,瑞金医院,上海市伤骨科研究所,上海,200025;上海第二医科大学,瑞金医院,上海市伤骨科研究所,上海,200025;上海第二医科大学,瑞金医院,上海市伤骨科研究所,上海,200025【正文语种】中文【中图分类】R243;R683【相关文献】1.抗骨松丹杞颗粒含药血清对成骨-破骨细胞共培养体系中破骨细胞功能的影响 [J], 武密山;赵素芝;李恩;白霞2.中药杜仲含药血清对成骨细胞增殖、成骨性的影响 [J], 魏国俊;丁玉芬;侯费祎3.中药杜仲含药血清对成骨细胞增殖、成骨性的影响 [J], 魏国俊;丁玉芬;侯费祎;4.中药续断含药血清对成骨细胞增殖和骨基质蛋白产生的影响 [J], 王威;史红;何永志;顾志敏;郑纺;刘友刚;王超;胡利民5.不同性别大鼠中药含药血清对成骨细胞增殖的影响 [J], 王威;何永志;史红;刘友刚;王超;郑纺;杨琳;顾志敏;鲍丽颖;胡利民因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。

接骨合剂在同种异体骨修复骨缺损过程中BMP2基因的表达

接骨合剂在同种异体骨修复骨缺损过程中BMP2基因的表达

接骨合剂在同种异体骨修复骨缺损过程中BMP-2基因的表达作者:李林,杨玉宝,李成福,金日,金元哲【摘要】目的探讨同种异体骨修复骨缺损过程中骨形态发生蛋白(BMP-2)的表达及接骨合剂的干预作用。

方法采用新西兰大白兔30只,制成左右桡骨为1.5 cm的骨缺损模型,左右侧桡骨骨缺损处用同种异体髂骨骨松质制成颗粒状植骨分成两组:一组用接骨合剂饲养,另一组用普通饲料饲养,于手术后1,2,4,6,8周处死动物取材,标本进行HE、免疫组化及原位杂交染色。

结果实验组和对照组在1周时,实验组和对照组的BMP-2表达呈弱阳性,实验组4周时表达呈强阳性, 6,8周时表达呈阳性,对照组4周时表达呈阳性, 2,6,8周时表达呈弱阳性。

结论接骨合剂对同种异体骨修复骨缺损有明显的促进作用。

【关键词】接骨合剂骨缺损骨形态发生蛋白随着社会的快速发展,交通工具的日益增多,导致车祸越来越多,致使开放性骨折、骨坏死、骨缺损患者增多。

骨折不愈合及骨缺损始终是临床上的治疗难点,治疗方法较多。

中医药治疗骨折已有数千年的历史,过去主要是通过临床疗效观察其药效。

中药治疗骨折的机理主要有改善血液循环,促进血肿的吸收和机化,提高骨痂的质量,促进胶原的形成和促进细胞的活性等[1]。

本实验采用接骨合剂混合常规饲料喂养同种异体移植的骨缺损模型,观察其对骨缺损模型中的骨痂中BMP的表达量及对骨修复的促进作用。

1 材料与方法1.1 接骨合剂饲料的配制100 kg普通饲料加骨碎补250 g,续断250 g,自然铜400 g,土鳖虫100 g。

1.2 试剂BMP多克隆抗体,北京军区总医院提供;SP 试剂盒,北京中山技术有限公司提供;BMP-2原位杂交试剂盒,武汉博士德公司提供;DAB显色系统,北京中山技术有限公司提供;DFPC水,北京华美技术有限公司提供。

1.3 动物新西兰大白兔,体重2.0 ~2.5 kg,雌雄不限,延边大学医学部动物实验室提供。

1.4 动物模型及标本的制备大白兔30只,常规手术方法,制成左右桡骨为1.5 cm的骨缺损模型,左右侧桡骨骨缺损处用同种异体髂骨骨松质制成颗粒植骨分成两组:一组用接骨合剂饲料喂养,一组用普通饲料饲养,术后按每kg体重15万u青霉素,连续肌肉注射3 d。

右归饮含药血清对骨髓间充质干细胞成软骨分化的促进作用及其microRNA表达谱分析

右归饮含药血清对骨髓间充质干细胞成软骨分化的促进作用及其microRNA表达谱分析

右归饮含药血清对骨髓间充质干细胞成软骨分化的促进作用及其microRNA表达谱分析【摘要】目的:本文对采用右归饮含药血清对大鼠骨髓间进行干细胞软骨粉化的充质效应展开分析,并且将进行软骨分化过程中的 microRNA表达谱的变化予以记录,对采用右归饮含药血清进行骨髓间充质干细胞成软骨粉化的促进作用进行论证,探讨右归饮含药血清中的分子机制。

方法:对大鼠进行BMSCS体外培养,慢病毒感染后48小时给予右归饮含药血清干预治疗,进行7天的培养之后,采用II型进行免疫组化染色、Real time pcr方法进行狙击蛋白聚糖表达的检测[1]。

采用micro RNA芯片技术以及生物信息化的方法,对差异micro RNA 进行表达谱变化的分析,预测关键的micro RNA以及靶基因、信号通路。

结果:对于BMSCS 稳定性进行表达,采用右归饮进行治疗和采用转染进行治疗的组的II型胶原免疫组化染色以及甲苯氨蓝染色,呈现出阳性,空载组染色后呈现隐形。

转染组和右归饮组、空载组经过聚集蛋白聚糖的表达、II型胶原mRNA的比较之后,发现有2个micro RNA出现爱你了显著的下调。

信号通路MAPK信号通路、TRAF6基因等呗预测为关键靶基因、信号通路以及micro RNA。

结论:右归饮含药血清能够促进BMSCS成软骨分化,通过阻断MARK信号通路,右归饮发挥了重要的治疗作用。

【关键词】右归饮;骨髓间充质干细胞;micro RNA骨科临床常见疾病包括关节软骨损伤。

该疾病的自我修复能力交叉,一旦发生损伤,会严重影响患者的生活质量,导致关节功能障碍,临床上对于软骨修复的药物,采用传统的软骨移植等外科手术的方法,无法完全将软骨结构等加以修复。

而且会带给患者沉重的经济负担。

因此,根据中医理论的肾藏精、精生髓、髓生骨的研究,采用右归饮治疗软骨缺陷,经过实践证明具有显著疗效。

采用在大鼠骨髓间进行充质干细胞的软骨粉化效应micro RNA芯片技术以及生物信息学方法,通过micro RNA表达谱,论证了右归饮促进BMSCS软骨分化的分子机制[2。

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单 克 隆 抗 体(北 京 中 杉 金 桥 生 物 技 术 有 限 公 司);
LipofectamineTM 2000、Trizol 试剂(GIBCO);DMEM/
F12(1∶1)(美 国 Invitrogen 公 司);兔 抗 鼠 BMP-2
多克隆抗体(Proteintech 公司);复方接骨片(沈阳市
关键词:复方接骨片;骨髓间充质干细胞;骨形态发生蛋白 -2;RNA 干扰;增殖与分化 中图分类号:R714.257 文献标志码:A 文章编号:1673-842X ( 2015) 09- 0005- 0 4
Effect of Compound Jiegu Tablets on the Proliferation and Differentiation of Bone Marrow Mesenechymal Stem Cells with BMP-2 Gene Silencing
第 1 7 卷 第 9 期 2015 年 9 月
· 博导讲坛 ·
辽宁中医药大学学报
JOURNAL OF LIAONING UNIVERSITY OF TCM
Vol. 17 No. 9 Sep .,2015
DOI:10.13194/j.issn.1673-842x.2015.09.001
复方接骨片含药血清对BMP-2沉默的骨髓间充质干细胞体外增殖及分化影响
siRNA2 5'-CAGGAAGCUUUGGGAAAUATT 5'-UAUUUCCCAAAGCUUCCUGTT
siRNA3 5'-AGUGGGAGAGCUUUGAUGUTT 5'-ACAUCAAAGCUCUCCCACUTT
siRNAnc 5'-UUCUCCGAACGUGUCACGUTT 5'-ACGUGACACGUUCGGAGAATT
RNA,测定 RNA 纯度及浓度。β-actin 为内参对照,
按 RT-PCR 试剂盒说明书进行操作。共进行 30 个
循环,计算各组 BMP-2 的表达量。见表 2。
表 2 引物序列
名称
上游引物
下游引物
产物长度
BMP-2 5'- TTCCCGACGCTTCTTCTTCA -3' 5'- CTGGCTGTGGCAGGCTTTAT -3' 161 bp
含药血清的制备,均由中国医科大学实验动物中心
提供。
1.2 主要试剂
Solabio 特 种 胎 牛 血 清(Solarbio 科 技 有 限 公 司
产品);BCA 蛋白浓度测定试剂盒、辣根过氧化物酶
标记山羊抗小鼠 IgG、MTT 细胞增殖检测试剂盒(北
京鼎国昌盛生物技术有限公司);抗小鼠 β-Actin
siRNAl、siRNA2、siRNA3、siRNAnc(表 1)。 表 1 设计合成的大鼠 BMP-2 基因小干扰 RNA(siRNA)和阴性对照(siRNAnc)序列
编号
正义链序列
反义链序列
siRNA1 5'-AGGACGUCCUCAGCGAGUUTT 5'-AACUCGCUGAGGACGUCCUTT
血清,56 ℃水浴灭活 30 min,经 0.22 μm 微孔滤器
过滤除菌,分装,-20 ℃保存。
1.4 原代 BMSCs 的分离培养
取 4 周龄 SPF 级 SD 大鼠双侧股骨及胫骨,剪去
两端骨骺,用 5 mL 无菌注射器吸取 DMEM 培养基,
冲洗髓腔,收集冲洗液,制成细胞悬液。接种于培养
瓶中,置于 37 ℃、5% CO2 培养箱中培养,2 d 后半量 更换培养液,细胞生长达 90% 融合后,按 1∶2 比例
Key words:Compound Jiegu Tablets;BMSCs;BMP-2;siRNA;proliferation and differentiation
骨形态发生蛋白(Bone morphogenetic proteins, BMPs)是 一 类 生 长 分 化 因 子 家 族,其 中 BMP-2 具 有较强的诱导 BMSCs 向成骨细胞分化的能力,是用 于骨骼再生最有效的骨诱导蛋白 [1]。骨质疏松性 骨折患者体内及骨折局部的 BMP-2 均较正常降低, 愈合时成骨细胞数量减少,活性降低,这与骨折患 者 BMP-2 的缺乏密切相关 [2]。本实验利用脂质体
骨科医院药厂)。
1.3 复方接骨片含药血清的制备
采用成年 SPF 级 SD 大鼠,随机分为给药组、空
白对照组,每组 15 只。复方接骨片按大鼠体重转
换系数折算为 SD 大鼠等效剂量后,按中医传统方
法煎制,灌胃剂量 1.5 mL/(只 ·d)。给药组给予
复方接骨片提取液,对照组给予等量蒸馏水,连续
10 d。末次灌胃后 2 h,无菌条件下开胸取血,分离
组(转染时仅加等量 Opti-MEM I 培养液)、脂质体对
照 组(转 染 时 仅 加 等 量 Opti-MEM I 培 养 液 和 脂 质
体)、siRNAnc 组、siRNA1 组、siRNA2 组、siRNA3 组
(转染时分别加 Opti-MEM I 培养液稀释的 siRNAnc、
siRNA1、siRNA2、siRNA3 与脂质体的混合物)。
邬波 1,2,马旭 1,2,柳椰 1,2,付明耀 1,刘素媛 2,王译晗 2,王佳媛 2
(1. 沈阳市骨科医院,辽宁 沈阳 110044;2. 辽宁省创伤性骨关节病重点实验室,辽宁 沈阳 110044)
摘 要:目的:观察复方接骨片含药血清对 BMP-2 沉默的骨髓间充质干细胞体外增殖及分化的影响。方法: 设计三对 BMP-2 siRNA,利用脂质体介导的 siRNA 转染骨髓间充质干细胞,PCR 及 Western blot 法筛选活性;将复 方接骨片含药血清加入 BMP-2 沉默的骨髓间充质干细胞中,MTT 法及碱性磷酸酶法检测细胞增殖和分化情况。 结果:三对 siRNA 中,siRNA3 在抑制 BMP-2 的 mRNA 和蛋白表达的效果最好,抑制率可达 61.6% 和 50.9%;正常骨 髓间充质干细胞加入含药血清,48 h 后可明显提高增殖效率(P<0.05)及碱性磷酸酶活性(P<0.01);骨髓间充质干 细胞转染 BMP-2 siRNA3,48 h 后碱性磷酸酶活性显著降低(P<0.01),72 h 后细胞活性显著降低(P<0.01),而加入 含药血清干预,可显著拮抗上述抑制作用(P<0.01)。结论:复方接骨片含药血清能有效拮抗 BMP-2 siRNA 对骨髓 间充质干细胞体外增殖及分化的抑制作用。
1.5.2 BMP-2 siRNA 的转染及筛选
(1)BMP-2 siRNA 转染 BMSCs:取第三代对数 生 长 期 大 鼠 BMSCs 以 2.5×105 个 / 孔 接 种 在 6 孔 板
上,置于 37 ℃、5% CO2 培养箱内培养,细胞密度达 50%左右开始进行转染。实验共分 6 组:细胞对照
传代,继续扩大培养。
1.5 BMP-2 siRNA 转染大鼠 BMSCs
1.5.1 大鼠 BMP-2 siRNA 的设计及合成
由上海吉玛制药技术有限公司根据 BMP-2 在
GenBank 中 的 序 列 设 计 合 成 3 对 相 应 的 siRNA,和
一对与大鼠基因无同源性的阴性对照,分别命名为
Abstract:Objective :To study the effect of Compound Jiegu Tablets on the proliferation and differentiation of bone marrow mesenechymal stem cells(BMSCs)with BMP-2 gene silencing. Methods: Three BMP-2 siRNA duplexes were designed,and transfected to BMSCs by liposome. One of them with higher silencing activity was screened by PCR and western blot. Serum of Compound Jiegu Tablets were added to BMSCs with BMP-2 gene silencing. Cell proliferation and differentiation were detected by MTT and AKP activity. Results:Transfection of siRNA3 significantly decreased the mRNA and protein expression of BMP-2,the inhibition rate were 61.6% and 50.9%;After the medicated serum added into the normal BMSCs for 48 h,cell proliferation and activity of AKP were significantly increased(P<0.05 or P<0.01);after BMSCs transfected with siRNA3,activity of AKP and cell proliferation were significantly reduced respectively at 48 h and 72 h(P<0.01). The medicated serum could significantly antagonize the effect of the inhibition above(P<0.01). Conclusion:Compound Jiegu Tablets medicated serum could attenuate the inhibitory effect of BMP-2 siRNA and promote the proliferation and differentiation of BMSCs in vitro.
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