乳酸脱氢酶 医学生用的生化学习
乳酸脱氢酶
乳酸脱氢酶科技名词定义中文名称：乳酸脱氢酶英文名称：lactate dehydrogenase;LDH定义：广泛存在的催化乳酸和丙酮酸相互转换的酶。
L-乳酸脱氢酶(编号：EC 作用于L-乳酸；D-乳酸脱氢酶(编号：EC 作用于D-乳酸，两者均以NAD＋为氢受体。
在厌氧酵解时，催化丙酮酸接受由3-磷酸甘油醛脱氢酶形成的NADH的氢，形成乳酸。
应用学科：生物化学与分子生物学（一级学科）；酶（二级学科）本内容由全国科学技术名词审定委员会审定公布求助编辑百科名片催化机理乳酸脱氢酶是一种糖酵解酶。
乳酸脱氢酶存在于机体所有组织细胞的胞质内，其中以肾脏含量较高。
乳酸脱氢酶是能催化乳酸脱氢生成丙酮酸的酶，几乎存在于所有组织中。
同功酶有五种形式，即LDH－1（H4）、LDH-2（H3M）、LDH－3（H2M2）、LDH-4（HM3）及LDH-5（M4），可用电泳方法将其分离。
LDH同功酶的分布有明显的组织特异性，所以可以根据其组织特异性来协用诊断疾病。
正常人血清中LDH2，〉LDH1。
如有心肌酶释放入血则LDH1〉LDH2，利用此指标可以观察诊断心肌疾病。
目录基本信息临床意义乳酸脱氢酶及其同工酶的简介血清乳酸脱氢酶（LDH）同工酶测定及意义乳酸脱氢酶高的原因乳酸脱氢酶偏低的原因乳酸脱氢酶（LDH）实验基本信息临床意义乳酸脱氢酶及其同工酶的简介编辑本段基本信息英文名称：LDH（lactate dehydrogenase）序列信息：1 gsgcnldsar frylmg长度:16 aa{物种来源:Homo sapiens (human)}正常范围：血清～L；尿560～2050U/L；脑脊液含量为血清的1/10。
编辑本段乳酸脱氢酶及其同工酶的简介乳酸脱氢酶[1]（LD）分子量为135～140KD，由两种亚单位组成：H（表示heart）和M（表示muscle）。
它们按不同的形式排列组合形成含4个亚基的5种同工酶，即：LD1（H4）、LD2（H3M1）、LD3（H2M2）、LD4（HM3）、LD5（M4）。
生化试验四垂直板聚丙烯酰胺凝胶连续电泳分离乳酸脱氢酶同工酶
聚丙烯酰胺凝胶电泳的类型
连续系统 是指电泳系统采用相同孔径的凝胶、 缓冲系统等条件下进行区带电泳，是利用蛋白质分子 的电荷效应进行分离，凝胶的分子筛效应不明显，一 般只用于分离一些比较简单的样品，缺点是分辨率不 高。优点是制胶简单快捷，缓冲系统的pH恒定，可以 防止样品进胶后因pH变化发生凝聚和沉淀，缓冲系统 组成简单。
检查合格后方可离开！
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乳酸脱氢酶同工酶活性染色
用活性染色对LDH进行鉴定，将凝胶浸泡在活性染色 液中，LDH与底物的反应，用甲硫吩嗪(PMS)作为电子的 中间载体，氯化硝基四氮唑蓝(NBT)作为最终电子受体， 底物脱下的氢最后传递给NBT，NBT被还原后，产生蓝紫 色的不溶于水的物质以对LDH定位。反应式如下：
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双蒸水
2.5ml 1次
3号试剂（凝胶浓度7.5%，Ph8.9） 10ml 2次
➢ 置小烧杯中,混匀,迅速注入到二块玻璃板之间(短玻璃 朝负极),凝胶加至横板的0.5cm处；
➢ 在室温中聚合20-30分钟。
➢ 注意：acr/bis有神经毒/制胶时避免产生气泡
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3. 加样40ul / 样品槽（注意样品编号，加样顺 序）；接冷却管（流速要小）
3.对pH和温度变化较稳定,几乎无吸附和电渗 作用；
4.样品用量少，灵敏度可达10-6g;
5.凝胶孔径可调节；
6.分辨率高。
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凝胶的总质量浓度T和交联度C决定凝胶的有效 孔径。凝胶的三维网状结构具有分子筛效应，不同 大小和形状的大分子通过孔径时所受的阻滞力不同， 加上大分子的电荷效应，使各种大分子迁移率不同 得以分离。 大多数蛋白质在7.5%凝胶中能得到满意的结果，所 以这个浓度的凝胶称为标准胶。 当分析一个未知样品时，常用标准胶或梯度凝胶来 测试，而后确定适宜的凝胶浓度。
乳酸脱氢酶乳酸底物法_概述及解释说明
乳酸脱氢酶乳酸底物法概述及解释说明1. 引言1.1 概述乳酸脱氢酶乳酸底物法是一种常用的生化实验方法，通过利用乳酸脱氢酶催化反应，将乳酸转化为丙酮酸，并同时生成NADH。
该实验方法可以用来测定样品中乳酸的含量，广泛应用于医学、生物学和食品工业等领域。
1.2 文章结构本文主要分为五个部分进行介绍。
首先，在引言部分将对乳酸脱氢酶乳酸底物法进行概述。
接下来，第二部分将详细介绍乳酸脱氢酶的基本原理以及乳酸底物法的工作原理。
第三部分将介绍该实验方法的具体步骤和执行要点。
在第四部分，我们将展示和解读实验结果，并对数据进行分析与讨论。
最后，在第五部分中给出本次实验的主要结论，并对未来进一步研究和应用进行展望。
1.3 目的本文旨在向读者提供关于乳酸脱氢酶乳酸底物法的全面了解。
通过介绍该实验方法的原理、步骤和结果分析，读者将能够掌握该方法的基本操作技巧，并了解其在不同领域中的应用场景和价值。
对于有意开展相关研究或者需要使用该方法的科研人员和实验室来说，本文将提供一份有用的参考资料。
2. 乳酸脱氢酶乳酸底物法概述：2.1 乳酸脱氢酶简介：乳酸脱氢酶（Lactate Dehydrogenase，简称LDH）是一种重要的代谢酶，存在于多种生物体内。
它主要参与细胞内的糖酵解过程，在无氧条件下将产生的乳酸转化为丙酮酸，从而供能给细胞。
LDH在各种组织中广泛分布，包括肝脏、肌肉、心脏等，因此具有广泛的应用价值。
2.2 乳酸底物法原理：乳酸底物法利用了LDH对乳酸的催化作用。
该方法通过将待测样品中的乳酸与辅助底物（如双硫苏糖）反应，同时加入LDH作为催化剂，在一定条件下观察和测定产生的反应物（如NADH）含量变化。
由于LDH能够特异性地催化乳酸生成丙酮酸的反应，所以可以通过测量NADH生成速率来间接确定待测样品中乳酸浓度的高低。
2.3 应用场景和价值：乳酸脱氢酶乳酸底物法具有一定的应用价值。
首先，该方法操作简便、快速，不需要复杂的设备和步骤，适用于实验室中对乳酸浓度进行初步检测与筛选。
普通而熟悉的生化指标-乳酸脱氢酶
普通而熟悉的生化指标-乳酸脱氢酶乳酸脱氢酶（LDH）为含锌离子的金属蛋白，分子量为135-140kD，是糖无氧酵解及糖异生的重要酶系之一，可催化丙酸与L-乳酸之间的还原与氧化反应，也可催化相关的α-酮酸。
LDH广泛存在于人体组织中，以肾脏含量最高，其次是心肌和骨肌。
红细胞内LDH约为正常血清的100倍。
乳酸脱氢酶（LDH）分子量为135～140KD，由两种亚单位组成：H（表示heart）和M（表示muscle）。
它们按不同的形式排列组合形成含4个亚基的5种同工酶，即：LD1（H4）、LD2（H3M1）、LD3（H2M2）、LD4（HM3）、LD5（M4）。
由于LD几乎存在于所有体细胞中，而且在人体组织中的活性普遍很高，所以血清中LD的增高对任何单一组织或器官都是非特异的。
在AMI时升高迟、达峰晚，故对早期诊断价值不大。
由于半寿期长（10～163小时），多用于回顾性诊断，如对入院较晚的AMI病人、亚急性MI的诊断和病情监测。
LDH在组织中的分布特点是心、肾以LD1为主，LD2次之；肺以LD3、LD4为主；骨骼肌以LD5为主；肝以LD5为主，LD4次之。
血清中LD含量的顺序是LD2>LD1>LD3>LD4>LD5。
乳酸脱氢酶同工酶是观察心肌疾病、肝胆疾病等的指标之一。
临床意义1.乳酸脱氢酶同工酶结果要与临床症状结合才能做出准确判断。
2.LDH1和LDH2升高，且LDH1/LDH2>1见于：急性心肌梗死、溶血性贫血、急性镰刀型红细胞贫血、巨幼红细胞贫血等恶性贫血。
急性肾皮质坏死及各种血管内外溶血症(若无LDH1升高，可排除溶血性贫血)。
3.LDH5升高：骨骼肌炎症、损伤及退化、肝损伤(肝硬变、肝炎、肝过度充血)、癌。
4.单纯LDH1升高：细菌性细胞瘤(如，畸胎瘤、睾丸细胞瘤及卵巢坏死性细胞瘤)。
5.总LDH升高而同工酶谱正常见于：心脏病、肝病、骨骼肌病、瘤及其他功能性失调症。
医学检验·检查项目：乳酸脱氢酶(LDH,LD)_课件模板
骨的原发性淋巴瘤、老年人心肌梗死、心 肌梗死、急性心肌梗死、肝硬化、心肌梗 死后心包炎、严重急性呼吸综合征、心房 心肌梗死、右室心肌梗死、非ST段抬高心 肌梗死、无痛性心肌梗死、妊娠性心肌梗 死、青年心肌梗死。
谢谢！
医学检验·各论 乳酸脱氢酶(LDH,LD)
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别名： 乳酸脱氢酶。
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简介： 乳酸脱氢酶是一种糖酵解酶。乳酸脱
氢酶存在于机体所有组织细胞的胞质内， 其中以肾脏含量较高。
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相关检查： 血清乳酸脱氢酶（LDH）、血清乳酸脱氢 酶同工酶（LDHI）、乳酸脱氢酶同工酶、 心肌酶谱。
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相关症状： 肌梗死、心肌坏死广泛、心肌缺氧、虹 膜表面形成灰白色肿瘤结节、腰背痛、关 节疼痛。
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临床意义：
增高：见于肝炎、肝硬化、肝癌、心 肌梗死、横纹肌损伤、心肌炎、恶性肿瘤、 肾病、肺梗死、巨幼细胞贫血、白血病、 恶性淋巴瘤及妊娠等。
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正常值： 血清：100～300U／L； 尿：560～
2050U／L； 脑脊液含量为血清的1／10。
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乳酸脱氢酶
乳酸脱氢酶科技名词定义中文名称：乳酸脱氢酶英文名称：lactate dehydrogenase;LDH定义：广泛存在的催化乳酸和丙酮酸相互转换的酶。
L-乳酸脱氢酶(编号：EC 1.1.1.27)作用于L-乳酸；D-乳酸脱氢酶(编号：EC 1.1.1.28)作用于D-乳酸，两者均以NAD ＋为氢受体。
在厌氧酵解时，催化丙酮酸接受由3-磷酸甘油醛脱氢酶形成的NADH的氢，形成乳酸。
应用学科：生物化学与分子生物学（一级学科）；酶（二级学科）本内容由全国科学技术名词审定委员会审定公布催化机理编辑本段基本信息英文名称： LDH（lactate dehydrogenase）序列信息：1 gsgcnldsar frylmg长度:16 aa{物种来源:Homo sapiens (human)}正常范围：血清 135.0～215.0U/L；尿 560～2050U/L；脑脊液含量为血清的1/10。
编辑本段乳酸脱氢酶及其同工酶的简介乳酸脱氢酶[1]（LD）分子量为135～140KD，由两种亚单位组成：H（表示heart）和M（表示muscle）。
它们按不同的形式排列组合形成含4个亚基的5种同工酶，即：LD1（H4）、LD2（H3M1）、LD3（H2M2）、LD4（HM3）、LD5（M4）。
LD催化丙酮酸与乳酸之间还原与氧化反应，在碱性条件下促进lactic acid向pyruvic acid方向的反应，而在中性条件下促进pyruvic acid向lactic acid的转化（为逆反应）。
LD是参与糖无氧酵解和糖异生的重要酶。
由于LD几乎存在于所有体细胞中，而且在人体组织中的活性普遍很高，所以血清中LD的增高对任何单一组织或器官都是非特异的。
在AMI时升高迟、达峰晚，故对早期诊断价值不大。
由于半寿期长（10～163小时），多用于回顾性诊断，如对人院较晚的AMI病人、亚急性MI的诊断和病情监测医学教育`网搜集整理。
LD在组织中的分布特点是心、肾以LD1为主，LD2次之；肺以LD3．LD4为主；骨骼肌以LD5为主；肝以LD5为主，LD4次之。
乳酸脱氢酶活力测定(精)
匀浆缓冲液：
10m mol/L pH6.5磷酸氢二钾磷酸二氢钾缓冲液。
操作方法
（一）制备肌肉匀浆 （二）LDH活力测定 （三）蛋白质含量测定 （四）数据处理
（一）制备肌肉匀浆
取瘦猪肉（或兔肉）一块除去脂肪及筋膜等，称取20g， 按W/V=1/4比例加入4℃预冷的10m mol/L pH6.5磷酸氢 二钾-磷酸二氢钾缓冲液，用组织捣碎机捣碎，每次10s， 连续3次。将匀浆液倒至烧杯中，置4℃冰箱提取过夜， 过滤后的红色液体为组织提取液，量总体积。
乳酸脱氢酶活力测定
目的要求
（1）学习LDH活力测定原理； （2）测定动物肌肉组织提取液LDH活力 及比活力。
原理
乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase，简称LDH）广泛存在于动物、 植物及微生物细胞内，是糖代谢酵解途径的关键酶之一，可催化 如下反应： LDH 乳酸 +NAD+ 丙酮酸+NADH+H+ pH7.4-7.8
（二）LDH活力测定
实验时预先将丙酮酸溶液及NADH溶液放在25 ℃ 水浴 中预热。取2只光径为1cm的石英比色皿，在一只比色 皿中加入0.1mol/L pH7.5磷酸盐缓冲液3ml，置紫外分 光光度计中，于340nm处调A值为0；另一只比色皿用 于测定LDH活力，依次加入2.9ml丙酮酸溶液、0.1ml NADH溶液，加盖摇匀后测定A340nm，然后加入经稀释 （20倍）的酶液10μl，立即计时，每隔0.5min测A340nm， 连续测定3min。以A对时间作图，取最初线性部分， 计算Δ A340nm/min减少值。
思考题
脑脊液生化乳酸脱氢酶 生化法
脑脊液生化乳酸脱氢酶生化法1. 脑脊液生化乳酸脱氢酶（LDH）是一种重要的生化指标，它在临床诊断和疾病监测中具有很高的价值。
脑脊液是由脑室系统分泌的，主要是通过脑脊液循环而进入脊髓和大脑皮质脑脊液围绕着大脑和脊髓，起着保护和支撑作用。
脑脊液的生化指标对于了解脑脊液循环和神经系统健康状况具有重要意义。
2. 对脑脊液生化乳酸脱氢酶的检测可以帮助我们了解神经系统的代谢情况，并且可以在很多疾病的诊断和治疗中提供重要的参考依据。
其中，乳酸脱氢酶是一种重要的生化酶，它参与乳酸的代谢过程，特别是在神经系统的能量代谢中具有关键的作用。
通过检测这一酶的水平，我们可以了解神经系统的能量代谢情况，从而帮助诊断和治疗相关的疾病。
3. 在临床实践中，脑脊液生化乳酸脱氢酶的测定通常是通过生化分析来完成的。
这种方法可以明确地测定乳酸脱氢酶酶的活性和水平，为临床医生提供重要的信息。
通过生化方法测定脑脊液生化乳酸脱氢酶，可以帮助我们更好地了解神经系统的代谢情况，以及可能存在的疾病状态。
生化法是一种非常有效的方法来评估乳酸脱氢酶水平，从而帮助我们更好地了解神经系统的健康状况。
4. 作为一个重要的生化指标，脑脊液生化乳酸脱氢酶的变化可以反映出神经系统的代谢情况，对于疾病的诊断和治疗具有重要的指导意义。
在临床实践中，我们应该重视脑脊液生化乳酸脱氢酶的检测，并结合临床病史和其他检查结果，全面评估患者的神经系统健康状况。
也应该不断完善和提高相关的检测方法，以更好地服务于临床医学的实践。
总结：脑脊液生化乳酸脱氢酶是神经系统代谢情况的重要指标，在临床诊断和疾病监测中具有很高的价值。
通过生化方法测定脑脊液生化乳酸脱氢酶，可以帮助我们更好地了解神经系统的健康状况，对于疾病的诊断和治疗具有重要的指导意义。
脑脊液生化乳酸脱氢酶的检测和评估尤为重要，对于提高神经系统健康水平和服务于临床医学的实践具有重要的意义。
脑脊液生化乳酸脱氢酶（LDH）作为神经系统代谢情况的重要指标，在临床诊断和疾病监测中具有关键的价值。
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乳酸脱氢酶
由于红细胞和血小板中含有大量的LD，故 由于红细胞和血小板中含有大量的LD，故 严禁使用溶血标本，在采用血浆标本时必 须3000转/分离心15分钟除去血小板。 3000转 分离心15分钟除去血小板。 LD活性能被巯基试剂所抑制，硼酸、丙二 LD活性能被巯基试剂所抑制，硼酸、丙二 酸、草酸以及EDTA都是竟争性抑制剂。 酸、草酸以及EDTA都是竟争性抑制剂。
乳酸脱氢酶
逆向反应的最适PH为7.4-7.8，其显著的优点在于 逆向反应的最适PH为7.4-7.8，其显著的优点在于 NADH用量少，仅为正向反应的3%左右，而反应 NADH用量少，仅为正向反应的3%左右，而反应 速度比前者快3 速度比前者快3倍，灵敏度高 但丙酮酸与NADH的稳定性较差，过量的丙酮酸 但丙酮酸与NADH的稳定性较差，过量的丙酮酸 对LD活性的抑制作用较大。 LD活性的抑制作用较大。 LD活性测定正反都可应用，但检验学会酶学组专 LD活性测定正反都可应用，但检验学会酶学组专 家推荐选择正向反应。
乳酸脱氢酶
按照LD同工酶的分布将组织分为3 按照LD同工酶的分布将组织分为3类： 以LD1为主，这类组织以心肌为代表 以LD5为主，这类组织以肝脏肌代表 以LD3为主，以肺、脾为代表 当组织损伤时，其中所含同工酶释放到血 液中，引起同工酶活性变化。
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常用于急性心肌梗死的鉴别诊断。 在急性心肌梗死LD 在急性心肌梗死LD1和LD2活性均升高，但 LD1升高更早更明显，导致LD1/ LD2比例增 升高更早更明显，导致LD 大。
乳酸脱氢酶
LDH在AMI诊断中的评价 LDH在AMI诊断中的评价 1）总LDH不能单独诊断AMI，LDH单独诊断AMI的特异性只 LDH不能单独诊断AMI，LDH单独诊断AMI的特异性只 不能单独诊断AMI 单独诊断AMI 有53%，可用于AMI的排除诊断。 53%，可用于AMI的排除诊断。 AMI的排除诊断 2）LDH在胸痛后8-12h出现，7-12天恢复正常，时间长， LDH在胸痛后 12h出现， 12天恢复正常，时间长， 在胸痛后8 出现 天恢复正常 可以用于就诊较迟的患者 可以用于就诊较迟的患者。 用于就诊较迟的患者。 3）如果CK-MB和cTn等已经有阳性结果，没有必要检测LDH。 如果CK MB和cTn等已经有阳性结果，没有必要检测LDH CKLDH。 等已经有阳性结果 4）LDH不能用于溶栓治疗的监测。 LDH不能用于溶栓治疗的监测。 不能用于溶栓治疗的监测
乳酸脱氢酶
LD由 型和H型亚单位构成5种同工酶，H LD由M型和H型亚单位构成5种同工酶，H4 （LD1）、MH3（LD2）、M2H2（LD3）、 ）、MH ）、M M3H1（LD4）、和M5（LD5）。 ）、和M 不同组织有其特征性同工酶。心肝肾脏和 红细胞所含LD同工酶比例相近，以LD 红细胞所含LD同工酶比例相近，以LD1和 LD2为主。
乳酸脱氢酶
乳酸脱氢酶
LD几乎存在于各种组织中，心、肺、肝、 LD几乎存在于各种组织中，心、肺、肝、 肾、红细胞、骨骼肌和皮肤的急性损伤， 以及恶性肿瘤等疾患均致此酶增高，故其 特异性差。LD活性增高主要见于心肌梗死、 特异性差。LD活性增高主要见于心肌梗死、 肺梗死、病毒性肝炎、肝硬化、肾脏疾病、 某些恶性肿瘤、白血病以及非恶性疾病如 传染性单核细胞增多症、贫血、肌营养不 良，胰腺炎等。一些肿瘤转移所致的胸膜 水中LD活性往往有升高。目前临床主要用 水中LD活性往往有升高。目前临床主要用 于心肌梗死，肝病和恶性肿瘤的辅助诊断。
乳酸脱氢酶
不同的LD同工酶以温度的敏感性是不同的， 不同的LD同工酶以温度的敏感性是不同的， 组织提取液若放于-20℃过夜，LD4和LD5将 组织提取液若放于-20℃过夜，LD4和LD5将 丧失全部的活性。血清标本应放于室温下。 如果血清标本需要存放较长时间，应加入 10mg/ml的 10mg/ml的NAD+或3.1mg/ml的谷胱甘肽后 3.1mg/ml的谷胱甘肽后 于4 ℃保存。 LD活性测定也可用抗凝血浆，但不同的抗 LD活性测定也可用抗凝血浆，但不同的抗 凝剂对LD测定的影响不同，草酸盐和 凝剂对LD测定的影响不同，草酸盐和 EDTA能抑制LD活性，而肝素影响不大。 EDTA能抑制LD活性，而肝素影响不大。
乳酸脱氢酶
是糖酵解和糖异生的一个重要酶。含有锌 离子，能可逆催化乳酸（L）和丙酮酸（P 离子，能可逆催化乳酸（L）和丙酮酸（P） 之间的氧化还原反应。 乳酸+NAD 丙酮酸+NADH+H 乳酸+NAD+→丙酮酸+NADH+H+ 其中L P为正向反应， 其中L → P为正向反应， P → L为逆向反应。 L为逆向反中正向为 正反两向反应的最适PH不同，其中正向为 8.8-9.8。其优点是乳酸和NAD 8.8-9.8。其优点是乳酸和NAD+稳定性好， 且NAD+纯品易得，价格较低，过量乳酸对 LD活性抵制较小，反应线性较好，缺点是 LD活性抵制较小，反应线性较好，缺点是 需要较高的底物浓度，反应速度较慢。