乳酸菌的生理生化特性
乳酸菌定义
乳酸菌乳酸菌（Lactobacillus）是发酵糖类且主要产物为乳酸的一类无芽孢、革兰氏染色阳性细菌的总称。
凡是能从葡萄糖或乳糖的发酵过程中产生乳酸的细菌统称为乳酸菌。
是一种存在于人类体内的益生菌。
乳酸菌可用于制造酸奶、乳酪、德国酸菜、啤酒、葡萄酒、泡菜、腌渍食品和其他发酵食品。
1、形态特征乳酸链球菌族，菌体球状，通常成对或成链。
乳酸杆菌族，菌体杆状，单个或成链，有时成丝状、产生假分枝。
2、生活习性繁殖：在固体培养基上菌落较小，生长缓慢。
在液体发酵培养基内可以很快地生长，离心洗涤可以获得纯度较高的菌体且兼具需氧和厌氧的性能。
运动：大多数不运动，少数以周毛运动。
活性：普通的乳酸菌，活力极弱，它们只能在相对受限制的环境中存活，一旦脱离这些环境，其自身也会灭亡。
只有经过特殊工艺处理的乳酸菌才能到达肠道。
进入肠内的乳酸菌，必须具备数量多、活力强，才能发挥其生物功效。
3、类型乳酸菌大体上可分为两大类：（1）动物源乳酸菌取自动物，因菌种常处于相对不稳定状态，其生物功效也较不稳定，且在大量食用时，很容易导致人体动物蛋白过敏，即排斥反应。
（2）植物源乳酸菌因为取自植物易被人体吸收，不论摄取多大的量，人体不会产生异体蛋白排斥反应，且植物源乳酸菌比动物源者更具有活力，能比动物源多8倍的数量到达人体小肠内定植，从而发挥其强大而稳定的生物功效。
4、研究历史早在20世纪初，著名的生物学家梅契尼柯夫（Mechnikoff,1845-1916），在他获得诺贝尔奖的“长寿学说”里已明确指出，保加利亚的巴尔干岛地区居民，日常生活中经常饮用的酸奶中含有大量的乳酸菌，这些乳酸菌能够定植在人体内，有效地抑制有害菌的生长，减少由于肠道内有害菌产生的毒素对整个机体的毒害，这是保加利亚地区居民长寿的重要原因。
5000年前人类就已经在使用乳酸菌。
到目前为止，人类日常食用的泡菜、酸奶、酱油、豆豉等，都是应用乳酸菌这种原始而简单的随机天然发酵的代谢产物。
乳酸菌的形态
乳酸菌的形态乳酸菌是一类广泛存在于自然界中的微生物，它们以其特殊的形态和功能在人类生活中发挥着重要的作用。
本文将以乳酸菌的形态为标题，详细介绍乳酸菌的特点和相关知识。
一、乳酸菌的形态特征乳酸菌是一种革兰氏阳性菌，其形态特征主要有以下几个方面：1. 菌体形态：乳酸菌的菌体呈革兰氏阳性，通常为直杆状、短杆状或球形。
这些形态的变化主要受到环境条件的影响。
2. 菌落形态：乳酸菌在琼脂培养基上形成的菌落多为白色、乳白色或乳黄色，呈圆形或不规则形状。
3. 产酸特性：乳酸菌具有产生乳酸的特性，这是其命名的主要依据。
乳酸是一种有机酸，具有酸味和保鲜作用。
二、乳酸菌的分类乳酸菌是一类广泛存在于自然界中的菌群，根据其形态和生理特征，可以将其分为以下几个属：1. 嗜酸乳杆菌属（Lactobacillus）：这是乳酸菌中最常见的属，包括了很多种类。
它们通常是革兰氏阳性、无芽胞、非运动的杆菌，主要存在于动物的消化道和人类的口腔、肠道等部位。
2. 双歧杆菌属（Bifidobacterium）：这是一类革兰氏阳性、无芽胞、非运动的杆菌。
双歧杆菌主要存在于人类的肠道中，对维持肠道微生态平衡具有重要作用。
3. 乳酸链球菌属（Streptococcus）：这是一类革兰氏阳性、无芽胞、非运动的球菌。
乳酸链球菌广泛存在于自然界中，有些种类对人类的健康具有重要意义。
三、乳酸菌的功能和应用乳酸菌以其特殊的代谢特性和功能，在食品工业、医药保健等领域有着广泛的应用。
以下是乳酸菌的一些功能和应用：1. 发酵食品制作：乳酸菌可以利用食品中的糖分，产生乳酸和其他有益物质，从而改善食品的口感和营养价值。
例如，乳酸菌在酸奶、酸乳等乳制品的发酵过程中发挥着重要作用。
2. 肠道健康调节：乳酸菌可以改善肠道微生态平衡，促进有益菌的生长，抑制有害菌的繁殖，从而维护肠道健康。
乳酸菌的益生作用已被广泛研究和应用。
3. 免疫调节：乳酸菌可以增强人体的免疫功能，提高机体抵抗力。
乳酸菌的生理生化鉴定
乳酸菌的生理生化鉴定①过氧化氢酶试验在产细菌素菌株和指示菌菌株的MRS固体平板上分别取适量菌体涂于干净载玻片，滴加15%H 2 O2 溶液。
有气泡产生为阳性反应，无气泡产生为阴性反应。
②糖醇发酵试验不同的糖、醇分别按1%或0.5%的比例加入PY 培养基中，同时加入0.16g/L溴甲酚紫溶液作产酸指示剂。
分别将产细菌素菌株和指示菌菌株按1%接种量接种，37℃培养1～2d，培养液变为黄色则表示产酸，确定为阳性反应。
③淀粉水解试验将产细菌素菌株和指示菌菌株分别按1%接种量接种到含有0.5%可溶性淀粉的PY培养基中，37℃培养1d～2d。
向培养液中加入几滴卢戈氏碘液，如不显色表示淀粉水解阳性反应，显蓝黑色或蓝紫色表示淀粉水解阴性反应。
④精氨酸产氨试验在PY培养基中加入精氨酸溶液，调pH至7.0，灭菌后取新鲜液体培养物2 滴加入精氨酸水解培养基内，将产细菌素菌株和指示菌菌株分别按1%接种量进行接种，同时接种于不含精氨酸的培养基作对照，分别于37℃培养72h。
取少量培养液于比色盘中，加奈氏试剂数滴，产生黄色沉淀且强于不添加精氨酸的对照时才能确定为阳性反应。
⑤从葡萄糖产气试验向PY培养基中加入3%葡萄糖和0.5mL Tween80，再添加6g琼脂和0.16g/L溴甲酚紫1.4mL，做成软琼脂柱。
将产细菌素菌株和指示菌菌株的新鲜培养物穿刺接种到软琼脂柱，37℃培养72h，指示剂变黄表示产酸，琼脂柱内产生气泡证明产气。
⑥生长试验将产细菌素菌株和指示菌菌株分别接种至MRS固体培养基斜面，分别置于15℃和45℃，观察菌体是否能够生长。
⑦pH 耐受性试验将产细菌素菌株和指示菌菌株分别以1%接种量接种在pH4.0 和pH9.0 的MRS液体培养基中，观察菌体是否能够生长。
⑧耐盐性试验将产细菌素菌株和指示菌菌株分别按1%接种量接种于含6.5% 和10% NaCl 的MRS 液体培养基中，观察菌体生否能否生长。
乳酸菌报告
乳酸菌报告引言乳酸菌是一类广泛存在于自然界中的细菌，它们具有许多益生作用，对人类的健康有着重要的影响。
本文将介绍乳酸菌的特点、作用以及应用领域。
乳酸菌的特点乳酸菌是一类革兰氏阳性菌，属于乳杆菌目（Lactobacillales），乳酸菌的特点主要有： 1. 好气性：乳酸菌属于好气菌，可以在有氧环境下进行代谢活动。
2. 发酵能力：乳酸菌具有良好的发酵能力，可以通过发酵代谢产生乳酸等有益物质。
3. 不产生孢子：乳酸菌不产生孢子，这意味着它们易受外界环境的影响。
乳酸菌的作用乳酸菌在人类健康中发挥着重要的作用，主要包括： 1. 促进消化：乳酸菌可以分解食物中的复杂碳水化合物，促进消化吸收，减少腹胀和消化不良的发生。
2. 改善肠道菌群：乳酸菌可以调节肠道菌群的平衡，抑制有害菌的生长，增加有益菌的数量，维护肠道健康。
3. 增强免疫力：乳酸菌可以增强人体的免疫力，提高机体对抗病原微生物的能力，预防疾病的发生。
4. 降低胆固醇：乳酸菌可以分解和代谢胆固醇，降低血液中的胆固醇水平，预防心血管疾病的发生。
乳酸菌的应用领域乳酸菌在食品和医药领域有着广泛的应用，下面介绍几个常见的应用领域： 1. 益生菌饮品：乳酸菌可以制作成益生菌饮品，如酸奶和发酵乳等，通过饮用可以摄入大量的乳酸菌，增加肠道有益菌的数量。
2. 益生菌补充剂：乳酸菌制成的益生菌补充剂可以作为药物或保健品使用，帮助调节肠道菌群平衡和增强免疫力。
3. 化妆品：乳酸菌可以应用于化妆品领域，用于改善皮肤的微生态环境，调节皮肤PH值，改善肌肤质量。
4. 饲料添加剂：乳酸菌可以作为饲料添加剂应用于畜牧业中，改善动物肠道菌群的平衡，促进动物生长和健康。
总结乳酸菌作为一类益生菌，具有重要的生物学作用和应用价值。
通过促进消化、改善肠道菌群、增强免疫力等方面的作用，乳酸菌对人类健康有着积极的影响。
在食品和医药领域，乳酸菌的应用也得到了广泛的认可和推广。
相信随着科学技术的不断发展，乳酸菌的作用和应用将得到进一步的研究和应用。
乳酸菌的概念及其分布
乳酸菌的概念及其分布乳酸菌一词并非生物分类学名词，而是指能够利用发酵性糖类产生大量乳酸的一类微生物的统称．虽然有些霉菌也能产生大量乳酸。
但以乳酸细菌为主要类群。
因而通常将乳酸细菌称之为乳酸菌。
乳酸菌在自然界中广泛分布。
它们不仅栖息在人和各种动物的肠道及其他器官中．而且在植物表面和根际．人类食品．动物饲料．有机肥料．土壤．江．河．湖．海中都发现大量乳酸菌的存在；这类细菌在工业．农业．医药等领域具有很高的应用价值．(二)乳杆菌属1.乳杆菌属的形态特征细胞呈多样形杆状：长或细长杆状．弯曲形短杆状及棒形球杆状，一般成链排列。
革兰氏染色阳性，有些菌株革兰氏染色或甲烯蓝染色显示两极体，内部有颗粒物或呈现条纹。
通常不运动．有的能够运动具有周生鞭毛。
无芽孢。
无细胞色素，大多不产色素．2.乳杆菌属的生理生化特点化能异氧型，营养要求严格，生长繁殖需要多种氨基酸．维生素、肽、核酸衍生物，根据碳水比合物发酵类型，可将乳杆菌属划外力三个类群，即1.同型发酵群：发酵葡萄糖产生85%以上的乳酸，不能发酵戊糖和葡萄糖酸盐。
2.兼异性发酵群：发酵葡萄糖产生85%以上的乳酸，能发酵某些戊糖和葡萄糖酸盐。
3.异型发酵群：发酵葡萄糖产生等物质量的乳酸．乙酸和或乙醇．CO2、PH6．o以上可还原硝酸盐，不液化叫胶．不分解酪素．联苯胺反应阴性，不产生吲哚和H2S，多数菌株可产生少量的可溶性氮；微好氧性，接触酶反应阴性，厌氧培养生长良好，生长温度范围5.5~6.2，最适生长温度30~40℃。
耐酸性强，生长最适PH为5.5~6.2，在PH<=5的环境中可生长．而中性或初始碱性条件下生长速率降低。
自然界分布广泛，极少有致病性菌株。
3.乳杆菌属的代表种（1）保加利亚乳杆菌。
细胞形态长杆状，两端钝圆。
固体培养基生长的菌落量棉花状。
易与其他乳酸菌区别．能利用葡萄糖．果糖．乳糖进行同型乳酸发酵产生D型乳酸(有酸涩味，适口性差），不能利用蔗糖。
该菌是乳酸菌中产酸能力最强的菌种，其产酸能力气菌体形态有关，菌形越大，产酸越多，最高产酸量2%。
乳酸菌的简介
乳酸菌的简介一、乳酸菌的起源根据圣经旧的书上记载，公元前4000多年，人类已经开始发酵乳酸肉制品及蔬菜腌渍物。
直到公元1857年，巴斯德(Pasteur)发现酸乳(sour milk)中有微小生物体存在，将其定名为”levue lactique”，发酵乃微生物作用所致的秘密才首次得以揭露；这是发现乳酸菌的开端。
1873年李斯特(Lister)利用稀释法，由酸乳中纯化分离出Bacterium lactis，也就是目前的Lactococcus lactis，这是乳酸菌最早被分离出来的纪录(廖,1998；李,2000)。
二、乳酸菌的定义乳酸菌一般是指能将碳水化合物发酵分解为乳酸的细菌群(佐佐木隆,1998)。
乳酸菌群具有以下几点特性：1.为革兰氏阳性(gram positive)球菌或杆菌。
2.不产生孢子(nonsporting)且无运动性(nonmotile)3.不具分泌催化酶(catalase negative)之能力。
4.可在有氧环境生长，但以无氧状态下生存较佳，亦有绝对厌氧者。
5.需有碳水化合物、胺基酸、维生素等多种生长因子方能生长之复合营养需求性(complex nutritional requirements)。
6.依代谢途径与最终产物的不同，可分为同质发酵(homofermentative)及异质发酵(heterofermentative)两种乳酸菌。
同质发酵性乳酸菌含有aldolase，最终产物90％-100％为乳酸；异质发酵性乳酸菌具有phosphoketolase，其最终产物除了40％-50％的乳酸外，还包括乙醇、二氧化碳及醋酸等多项产物(Ingledew,1995)。
乳酸菌普遍存在动物体消化道中，因耐酸性佳且可分泌乳酸及抗菌物质等有利于生存的条件，故消化道三大菌群当中最占优势(Nemcova et al. 1997)三、乳酸菌的分类乳酸菌一般包括Lactobacillus (L)、Leuconostoc (Leuc.)、Streptococcus (S)及Pediococcus (Ped.)四属；广义的乳酸菌尚包括Bifidobacterium与Sporolactobacillus 两个属(Jay, 2000)。
乳酸菌微生物
（三）明串珠菌属（Leuconostoc）
2３．．1生．代理形表生种态化—特—特征肠点:膜:状明串珠菌
子 。细 利–化胞用菌固能：蔗落体异球糖特培养形合征养型或成：，豆葡：状聚菌生，糖落长成（小繁对大于殖或量1需短荚.0复链膜mm合排物，列质生光。）长滑，因、形 乳成 最酸特最 用––利通征适、适途圆列（被细革液用常性乙生生：形。右用胞兰体葡不粘长酸长酸旋于、：氏培萄酸液温泡温、糖生灰。球 染养化糖度菜苷产度C白形 色：进O和发2是右522色。酵℃或 阳混行凝5代旋℃；重，豆 性浊血异固糖。要最浆苷状 ，均型牛的适的的， 不匀乳乳乳p主发H成 运。酸。酸3要酵.对动发菌0成菌～或，酵；分株6.成无产）5。链芽。生排孢D型。
平最等–适重无生要芽长生温孢理度功和3能鞭7℃（毛。促，最进不适人运生体长动健p康。H值作6用.5超～过7.其0，它
不乳耐酸酸菌，）酸。性环境（pH≤5.5）对菌体存活不利
精品课件
乳酸菌在食品工业中的应用
精品课件
乳酸菌：发酵食品行业中应用最广泛。 乳酸发酵食品：经过乳酸菌发酵作用制 成的食品。 乳酸菌对人体健康有益。因而，乳酸发 酵食品受到人们重视，在食品工业中占 有重要地位。
精品课件
1．发酵乳制品 （1）酸牛乳（Yoghurt） –①凝固型酸乳 –②搅拌型酸乳（纯酸奶） –③饮料型酸乳（活性乳） （2）干酪（Cheese）。 （3) 酸性奶油 2．果蔬汁乳酸菌发酵饮料 3．益生菌制剂
精品课件
凝固型酸乳的生产
精品课件
一凝、固酸型牛酸乳牛发乳酵的剂制生备产的：工艺流程：
弊端：牛乳变粘、制糖业中糖液黏度增大
精品课件
（四）片球菌属（Pediococcus）
2．生理生化特点:
乳酸菌的检测实训报告
一、实训目的本次实训旨在通过实验操作，掌握乳酸菌的检测方法，了解乳酸菌的基本特性，提高对微生物检测技术的实际操作能力，并加深对乳酸菌在食品、医药等领域的应用认识。
二、实训时间2023年10月25日至2023年11月5日三、实训地点生物实验室四、实训内容1. 乳酸菌样品的采集与处理2. 乳酸菌的分离纯化3. 乳酸菌的形态观察4. 乳酸菌的生理生化特性鉴定5. 乳酸菌产酸能力的测定五、实训方法1. 乳酸菌样品的采集与处理（1）采集：从市场上购买含有乳酸菌的酸奶、酸奶饮料等样品。
（2）处理：将样品用无菌生理盐水进行梯度稀释，制成系列稀释液。
2. 乳酸菌的分离纯化（1）平板划线法：将稀释后的样品涂布在MRS平板上，用无菌接种针进行划线。
（2）培养：将平板置于37℃恒温培养箱中培养24小时。
（3）挑取单菌落：根据菌落的特征，挑取疑似乳酸菌的单菌落。
3. 乳酸菌的形态观察（1）制作临时玻片：将挑取的单菌落涂布在载玻片上，用无菌盖玻片覆盖。
（2）显微镜观察：在显微镜下观察乳酸菌的形态、大小、排列等特征。
4. 乳酸菌的生理生化特性鉴定（1）革兰氏染色：将挑取的单菌落涂布在载玻片上，进行革兰氏染色。
（2）生化反应：进行糖发酵试验、氧化酶试验、V-P试验等。
5. 乳酸菌产酸能力的测定（1）制作MRS培养基：按照实验要求配制MRS培养基。
（2）接种：将挑取的单菌落接种于MRS培养基中。
（3）培养：将培养皿置于37℃恒温培养箱中培养24小时。
（4）测定pH值：使用pH计测定培养基的pH值，计算产酸能力。
六、实训结果与分析1. 乳酸菌样品的采集与处理采集了5个样品，均成功制成系列稀释液。
2. 乳酸菌的分离纯化共分离纯化出10个疑似乳酸菌的单菌落。
3. 乳酸菌的形态观察在显微镜下观察到乳酸菌为杆状，大小约为0.5～1.0μm，排列呈链状。
4. 乳酸菌的生理生化特性鉴定10个疑似乳酸菌均呈革兰氏阳性，能发酵乳糖，不产生硫化氢，氧化酶试验阴性。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
1.形态和培养特征观察采用牛肉膏蛋白胨培养基,将已纯化后的甘油菌种活化后于37℃下培养20～24h ,并进行革兰氏染色及菌体形态和菌落特征的观察。
染色方法参照微生物鉴定实验指导2.生长条件试验(1)耐盐性试验(NaCl 浓度:0. 85 、1. 20 和1. 71) (mol/ L) ;(2)耐酸碱试验(p H :4. 3 、5. 7 、6. 8 、8. 4 、8. 6 和8. 7) ;(3)温度梯度试验(温度: 10℃、30℃、40℃、50℃、55℃、60℃和65℃) 。
分别将参试菌接种于以上处理的液体培养基中培养48 h ,记录生长状况。
3.生理生化试验⑴过氧化氢酶测定将实验菌接种于PGY培养基斜面上,37℃培养20h—24h,取一环接种的培养物,涂于干净的载玻片上,然后在其上滴加3%－—15%的过氧化氢,有气泡则为阳性反应,无气泡为阴性反应。
⑵葡萄糖产酸产气实验在PY基础培养基内加入30g葡萄糖和5%吐温-80,1.6g/100mL的溴甲酚紫1.4mL作指示剂, 在培养基内放置一小倒管,分装试管置37℃培养24h, 经培养后,指示剂变黄表示产酸,倒管内出现气泡,表示产气。
⑶淀粉水解实验接种新鲜的菌种于含有0.5g可溶性淀粉的PY基础培养基中,取少许培养液于比色盘内,同时取未接种的培养液作对照,分别在其中加入卢哥氏碘液.不显色表示淀粉水解,显蓝黑色或蓝紫色时,表示淀粉未水解或水解不完全。
⑷明胶液化实验将实验菌接种于明胶基础培养基中,置37℃培养,以一支未接种的试管作为对照。
将接种的和未接种的对照管置于冰箱或冷水中,等待对照管凝固后记录实验结果,反复观察对比多次。
如对照管凝固时,接种管液化为阳性反应,凝固为阴性反应⑸甲基红（M.R）试验接种实验细菌于PYG培养基，于37℃培养2天后，于培养物中加入几滴甲基红酒精溶液，如呈红色，表示阳性。
⑹乙酰甲基甲醇V-P实验接种新鲜的实验菌种于培养基中, 37℃培养2天后,取培养液1mL在其中加入1ml 10％的NaOH，混匀，再加入3－4滴2%氯化铁溶液。
数小时后，培养基表面的下层出现红色者，为阳性⑺柠檬酸盐取幼龄菌种接种于柠檬酸盐斜面培养基上，适温培养3－7天，培养基呈碱性（蓝色）者为阳性反应，不变者则为阴性⑻酪素水解试验牛奶平板的制备：取5g脱脂奶粉加入50mL蒸馏水中（或用50mL脱脂牛奶），另称1.5g琼脂溶于50mL蒸馏水中，将两液分开灭菌。
待冷至45－50℃时，将两液混匀倒平板，即成牛奶平板。
将平板倒置过夜，使表面水分干燥，然后将菌种点接在平板上，每皿可点接3－5株菌。
适温培养1、3、5天，记录菌落周围和下面酪素是否已被分解而呈透明。
配制该培养基时，切勿将牛奶和琼脂混合灭菌，以防牛奶凝固⑼厌氧生长测定将菌种接入营养肉汤平板后,用密封带包好放入CO2培养箱37℃培养2天后,观察生长情况,生长则为阳性(10)厌氧硝酸盐产气接种封油：以斜面菌种用接种环接种后，用凡士林油（凡士林和液体石蜡为1:1）封管，封油的高度约1厘米。
必须同时接种不含有硝酸钾的肉汁胨培养液作对照。
观察结果：培养2－7d，观察在含有硝酸钾的培养基中有否生长和产生气泡。
如有气泡产生，表示反硝化作用产生氮气，为阳性反应。
但如不含硝酸钾的对照培养基也可产生气泡，则只能按可疑或阴性处理。
(11)石蕊牛奶的反应牛奶中主要含有乳糖和酪蛋白，在牛奶中加入石蕊是作为酸碱指示剂和氧化还原指示剂。
石蕊在中性时呈淡紫色，酸性时呈粉红色，碱性呈蓝色，还原时则自上而下地褪色变白。
观察其产酸、产碱、胨化、酸凝固、凝乳酶凝固、还原情况(12)糖发酵实验将需要测定的糖或醇类等碳水化合物加入PY基础培养基中,按表分装含5mL培养基的试管.分别取0.2mL,被鉴定菌株接到灭菌后的碳水化合物培养基中37℃培养24h,振荡培养。
检测时取培养液少许置于比色盘内,同时取未加碳水化合物的PY培养液作为对照,滴加试剂比较颜色的变化,记录产酸的强弱.附一些培养基：①PY培养基（100mL）：蛋白胨1.0g,酵母提取物1.0g,无机盐溶液4.0mL[盐溶液成分:无水CaCl2 0.2g,MgSO420.0g ,K2HPO4 1.0g, ,KH2PO4 1.0g,NaHCO3 10.0g,NaCl 2.0g](将CaCl2和MgSO4一起溶解于300mL蒸馏水中,再加500mL蒸馏水,一边搅拌一边缓慢加入其他盐类.继续搅拌直到全部溶解,加蒸馏水定容至1000mL,混合后贮备于4℃)②PYG培养基:PY在基础培养液内加入1.0g葡萄糖③营养明胶蛋白胨5g、牛肉膏3g、明胶120g、蒸馏水1000mL、pH6.8～7.0；加热溶解、校正至pH7.4～7.6，分装小管，121℃高压灭菌10min，取出后迅速冷却，使其凝固。
复查最终pH应为6.8～7.0④柠檬酸盐斜面培养基：柠檬酸钠3g NH4H2PO4 1g MgSO4 0.2gK2HPO4 1g NaCl 5g 琼脂15—20g 水1000mL 加热溶解后，调pH至7，再加入1.6%溴麝香草酚蓝指示剂10mL,培养基呈绿色，分装试管，每管5mL，121灭菌30min⑤含硝酸钾的营养肉汤加入2g硝酸钾入营养肉汤4.16S rDNA 序列分析这个LZ另外查好了，很多学问。
5.生长曲线活菌计数方法：采用涂布法,进行菌落计数，每隔一段时间（2-4小时）测实验九细菌的生理生化试验[日期：2009-5-30] 来源：作者：孔庆学[字体：大中小]实验九细菌的生理生化试验1 目的1.1 了解细菌鉴定中常用的生理生化试验反应原理1.2 掌握测定细菌生理生化反应的技术和方法2 原理各种微生物在代谢类型上表现了很大的差异。
由于细菌特有的单细胞原核生物的特性，这种差异就表现的更加明显。
不同细菌分解、利用糖类、脂肪类和蛋白类物质的能力不同，所以其发酵的类型和产物也不相同，也就是说，不同微生物具有不同的酶系统。
即使在分子生物学技术和手段不断发展的今天，细菌的生理生化反应在菌株的分类鉴定中仍有很大作用。
3 材料3.1 菌种大肠埃希氏菌（Escherichia coli）、产气肠杆菌（Enterobacter aerogenes）、普通变形杆菌（Proteus vulgaris）、枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）的斜面菌种3.2 培养基葡萄糖蛋白胨水培养基、蛋白胨水培养基、糖发酵培养基（葡萄糖、乳糖或蔗糖）3.3 试剂40％NaOH溶液、肌酸、甲基红试剂、吲哚试剂、乙醚、1.6%溴甲基酚紫指示剂。
3.4 器具超净工作台、恒温培养箱、高压灭菌锅、试管、移液管、杜氏小套管。
4 流程糖发酵试验→V-P试验→甲基红试验→吲哚试验5 步骤(一) 糖类发酵试验1 目的了解不同细菌分解利用糖的能力及实验原理，并掌握其操作方法．2 原理可根据细菌分解利用糖能力的差异表现出是否产酸产气作为鉴定菌种的依据。
是否产酸，可在糖发酵培养基中加入指示剂溴甲酚紫（即B.C.P指示剂，其pH在5.2以下呈黄色，pH在6.8以上呈紫色），经培养后根据指示剂的颜色变化来判断。
是否产气，可在发酵培养基中放入倒置杜氏小管观察。
3 材料3.2菌种大肠埃希氏菌（Escherichia coli）、产气肠杆菌（Enterobacter aerogenes）、普通变形杆菌（Proteus vulgaris）的斜面菌种3.３培养基葡萄糖、蔗糖和乳糖发酵培养液试管４流程发酵液试管→标记→接种→培养→观察→记录5 步骤5.1 试管标记图9-1 糖发酵产气取分别装有葡萄糖、蔗糖和乳糖发酵培养液试管各Ａ不产气；Ｂ产气4支，每种糖发酵试管中均分别标记大肠杆菌、产气肠杆菌、普通变形菌和空白对照。
5.2 接种培养以无菌操作分别接种少量菌苔至以上各相应试管中，每种糖发酵培养液的空白对照均不接菌。
将装有培养液的杜氏小管倒置放入试管中（图9-1），置37℃恒温箱中培养，分别在培养24h、48h、和72h观察结果。
5.3 观察记录与对照管比较，若接种培养液保持原有颜色，其反应结果为阴性，表明该菌不能利用该种糖，记录用“－”表示；如培养液呈黄色，反应结果为阳性，表明该菌能分解该种糖产酸，记录用“＋”表示。
培养液中的杜氏小管内有气泡为阳性反应，表明该菌分解糖能产酸并产气，记录用“＋”表示；如杜氏小管内没有气泡为阴性反应，记录用“－”表示。
（二）乙酰甲基甲醇试验(V．P试验)1 目的了解鉴别不同肠杆菌科各菌属的乙酰甲基甲醇试验原理，并掌握其操作方法．2 原理某些细菌在葡萄糖蛋白胨水培养液中能分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸缩合，脱羧成乙酰甲基甲醇，后者在强碱环境下，被空气中氧，氧化为二乙酰，二乙酰与蛋白胨中的胍基生成红色化合物，称V－P（+）反应。
3 材料3.1 菌种大肠埃希氏菌（Escherichia coli）、产气肠杆菌（Enterobacter aerogenes）、普通变形杆菌（Proteus vulgaris）、枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）的斜面菌种3.2 培养基葡萄糖蛋白胨培养液的试管４流程培养液试管→标记→接种→培养→观察→记录5 步骤5.1 标记试管取5支装有葡萄糖蛋白胨培养液的试管，分别标记大肠杆菌、产气肠杆菌、普通变形菌、枯草芽孢杆菌和空白对照。
5.2 接种培养以无菌操作分别接种少量菌苔至以上相应试管中，空白对照管不接菌，置37℃恒温箱中，培养24～48h。
5.3 观察记录取出以上试管，振荡2min。
另取5支空试管相应标记菌名，分别加入3～5ml以上对应管中的培养液，再加入40％NaOH溶液10～20滴，并用牙签挑入约0.5～1mg微量肌酸，振荡试管，以使空气中的氧溶入，置37℃恒温箱中保温15～30min后，若培养液呈红色，记录为V.P.试验阳性反应（用“＋”表示）；若不呈红色，记录为V.P.试验阴性反应（用“－”表示）。
注意：原试管中留下的培养液用作甲基红试验。
（三）甲基红试验（M.R.试验）1 目的了解鉴别肠杆菌科各菌属的甲基红试验原理，并掌握其操作方法．2 原理肠杆菌科各菌属都能发酵葡萄糖，在分解葡萄糖过程中产生丙酮酸，进一步分解中，由于糖代谢的途径不同，可产生乳酸，琥珀酸、醋酸和甲酸等大量酸性产物，可使培养基PH值下降至pH4.5以下，使甲基红指示剂变红。
3 材料3.1 菌种同V．P试验3.2 培养基同V．P试验4 流程培养液→指示剂→观察→记录结果5 步骤于V.P.试验留下的培养液中，各加入2～3滴甲基红指示剂，注意沿管壁加入，仔细观察培养液上层，若培养液上层变成红色，即为阳性反应；若仍呈黄色，则为阴性反应，分别用“＋”或“－”表示。
（四）吲哚试验1 目的掌握吲哚试验(Ehrlich法)的原理和方法2 原理有些细菌含有色氨酸酶，能分解蛋白胨中的色氨酸生成吲哚(靛基质)。