生物亚急、亚慢、慢毒试验声明模板
亚慢性和慢性毒理实验
3. 染毒途径
❖ 外来化合物的染毒途径，应当尽量模拟人类接触 受试化学物质的方式，并且亚慢性与慢性毒作用 研究的染毒途径应当一致。
❖ 亚慢性和慢性毒性试验常用经胃肠道、呼吸道、 皮肤染毒三种途径；药物临床前毒性试验中，动 物染毒途径应尽可能与人的用药途径一致。
胃肠道染毒
❖ 经胃肠道染毒毒物最好采用喂饲法，即将受试物 与食物或饮水混匀，使实验动物自然摄入。
❖ 在慢性毒性研究中，工业毒理学要求每天吸入4～ 6h，环境毒理学一般要求每天吸入8h。
❖ 凡需要在吸入期间喂食、喂水时，要注意防止受 试化学物质污染食物、饮水及食具。
经皮染毒
❖ 经皮染毒的去毛部位面积一般不大于动物体表总 面积的10%～15%，大鼠约为20～50cm2，每次染 毒4～6h，应防止动物舔食。
研究期限(月)相当于人(月) 1 3 6 12 24 34 101 202 404 808 12 36 72 145 289 6.5 20 40 81 162 6.5 20 40 81 162 4.5 13 27 61 107
❖ 慢性毒性实验的期限应依受试物的具体要求和实 验动物的物种而定，工业毒理学要求6个月，环境 毒理学和食品毒理学要求一年以上。如慢性毒性 试验与致癌试验结合进行则染毒期限最好接近或 等于动物的预期寿命。
❖ 2. 研究受试物亚慢性和慢性毒作用的靶器官； ❖ 3. 研究受试物亚慢性和慢性毒性剂量-反应(效应)
关系，确定其观察到有害作用的最低剂量 (LOAEL)和未观察到有害作用的剂量(NOAEL)， 提出此受试物的安全限量参考值；
4. 研究受试物亚慢性和慢性毒性损害的可逆性；
5. 亚慢性毒性试验为慢性毒性试验的剂量设计及 观察指标选择提供依据；
一种是啮齿类，一种是非啮齿类，常用大鼠和狗。 选择两种实验动物是为了降低外源化学物对不同 物种动物的毒作用特点不同所造成的将实验结果 外推到人的偏差。在亚慢性经皮毒性试验时，也 可考虑用兔或脉鼠。 ❖ 亚慢性和慢性试验选用雌雄两种性别，如某种药 物临床上只用于一种性别，此时可选用单性别的 动物。
短期、亚慢性和慢性毒性作用
试验周期在3个月以内的，在最后一 次给药后24小时和恢复期结束时各 进行一次各项指标的全面检测 试验中期检测指标
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（6）特异性指标及其他
特异性指标
能反映毒物对机体毒作用本质的特征性指 标，常与其毒作用机制有关，可作为效应 生物学标志 根据受试物毒性资料，增加一些相关检查项目
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（二）长期毒性试验的注意事项
专业化人才设计项 目实施管理 试验项目管理 保障设施仪器状态良好 专业培训的实验人员
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试验设计合理
足够高的剂量以能观察到受试物的毒性作 用，动物死亡率不能超出10% 阴性结果 严格控制技术规范
可采取多设一个剂量组的方式
成功的试验设计 明确的剂量-反应关系 理想的LOAEL NOAEL
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试验动物环境 标准化 国际化 控制检测条件 检测仪器和辅助条件 短期内准确可靠 长期稳定可比
外源化学物的一般毒性作用
subacute toxicity/repeat dose toxicity subchronic toxicity chronic toxicity 公共卫生与热带医学学院 张文娟 毒理学系 zhangwj11@
第三节
短期、亚慢性和慢性毒性作用
一 概述
研究长期重复接触化学物毒作用的必要性 长期重复接触化学物毒作用分类
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（2）实验室检测项目 血液学：RBC HGB WBC PLT
PT PTA Fbg ALP ALB
血液生化学指标：AST ALT
BUN TP GLU Crea
T-BIL T-CHO 21
（3）系统尸解和病理组织学检查 心 肝 肾 脾 肺 肾上腺 甲状腺 睾丸 卵巢 子宫 脑 前列腺
脏器相对重量（relative organ weight)
三颗针颗粒的急性和亚慢性毒性试验报告
目前 ，由 大肠 杆 菌 等 细 菌 导 致 的腹 泻 是 畜 禽 养 殖 场 广 泛流 行 的疾 病 ，腹 泻 严 重 者 甚 至 脱 水 死 亡 ，给 收 稿 日期 ：２０１７一ｌ１—１０ 作者简 介 ：李超 （１９８３一），女 ，河南人 ，助理研 究员，研 究方 向 ：中兽 药开发与研制。
＿Ｉｙ 兽
２０１８·０３期 ·总第 ３３１期
快速 缓 解 症 状 、对 肠 道 有较 好保 护 作 用 ，尤 其 能 治疗 耐药性细菌 引起的畜禽腹 泻的药物。三 颗针颗 粒是 纯 中 药 制 剂 ，其 主 要 有 效 成 分 为 小 檗碱 ，有清 热燥 湿 、抗 茵 消 炎 、泻 火 解 毒 等 功 效 。 实 验 室 前 期 Ｉ临床 应 用发现 ，该 中药制剂对细菌性腹泻和 胃肠炎等 有不 错 的 疗 效 。 本 试 验 旨在研 究 三 颗 针 颗粒 对 小 鼠 的 急 性 、亚 慢 性 毒 性 ，观察 该 制 剂 的 毒 性 作 用 ，以对 药 物 的安全性做 出客观评价 ，为其临床应用提供科 学依 据 。 １ 材 料 与 方 法 １．１ 试剂 与设备 谷 草转氨 酶（ＡＳＴ）、谷丙 转氨酶 （ＡＬＴ）、白蛋 白（ＡＬＢ）、总 蛋 白（ＴＰ）、尿 酸 氨 （ＢＵＮ）、 肌 酐 （ＣＲＥ）试 剂 盒 ，清 洗 液 ，稀 释 液 ：主 要 设 备 包 括 ＢＳ—ｌ８０全 自动 生 化 分 析 仪 、ＢＣ一２８００Ｖｅｔ兽 用 全 自动 血 液 细 胞 分 析 仪 。 以上 产 品 均 来 自深圳 迈 瑞 生 物 医 疗 电子股 份 有 限公 司。 １．２ 试验药物 三颗针颗粒 ，含 １ ｇ生药／ｇ颗粒 ，由 四川 省 新兽 药 工程 技术 研 究 中 心 自制 。 １＿３ 实验 动 物 ＳＰＦ级 昆 明 系小 白 鼠 １２０只 ，雌 雄 各半 ，体重 １８—２２ｇ，由四川省医学科学院实验动物研 究所养殖研究 室公司提供 ，实验 动物许 可证号 为 ： ＳＹＸＫ（川 ）２０１３—１６。 动 物 检 疫 驯』化 时 间 为 ７ｄ，室 温 ２０～２５ｃｃ，相 对 湿度 ６０％ ，自然 光 照 。 １．４ 急性毒性试验 根据文献报道ｌ１ｌ，采用上下法 测 定 三颗 针 颗粒 的 ＬＤ∞，详 细记 录 动 物毒 性 反 应 情 况 和 死亡 情况 ，用 ＡＯＴ４２５ＳｔａｔＰｇｍ软件计 算半数致死 量 （ＬＤ ）及 其近 似 置 信 区 间 。 １．５ 亚ｌ陧性 毒 性试 验 １．５．１ 剂 量 与 分 组 将 小 鼠 随 机 均 分 为 ４组 ，即 三 颗针 颗 粒 高 、中 、低 剂 量 组 和 生理 盐 水 对 照 组 。根 据 三颗 针 颗 粒 的用 药原 则 ，采 用 口服 灌 胃 ，按 体 重 和 分 组计 算 给 药 量 并定 时给 药 ，每 日 １次 ，连续 给 药 ４２ｄ， 要 及 时 按体 重 变 化调 整 给 药 量 。具 体 剂量 和 分 组 见 表 １。 １．５．２ 检 查 项 目 （１）一 般 指 标 ：每 天观 察 小 鼠 的 采
《Myostatin基因编辑牛肉90天大鼠亚慢性毒性试验》范文
《Myostatin基因编辑牛肉90天大鼠亚慢性毒性试验》篇一一、引言随着现代生物技术的飞速发展，基因编辑技术如CRISPR-Cas9等在农业领域的应用日益广泛。
Myostatin基因编辑牛肉便是基因编辑技术在农业畜牧业中的一个典型应用案例。
Myostatin基因的编辑能促进肌肉生长，提升肉类品质。
然而，此技术的应用安全性及对食用动物的长期健康影响一直是社会和科研的关注焦点。
为此，本文将针对Myostatin基因编辑牛肉的亚慢性毒性进行大鼠试验，旨在探究其潜在的生物学效应和安全性能。
二、试验材料与方法1. 试验材料Myostatin基因编辑牛肉，未编辑牛肉；实验大鼠。
2. 试验方法选择健康成年大鼠，将其分为两组，分别以编辑过Myostatin 基因的牛肉（实验组）和未编辑牛肉（对照组）作为其主要食物，为期90天的喂养期。
试验期间详细记录大鼠的健康状况，如食欲、行为及体态等变化。
并于定期的时间节点收集大鼠血液样本及肌肉样本，用于进行生物学分析。
三、试验过程与观察指标1. 试验过程本试验为亚慢性毒性试验，以90天为周期，观察并记录大鼠的健康状况和生长情况。
2. 观察指标观察并记录大鼠的食欲、活动能力、体态变化、体重增长等指标，同时收集血液和肌肉样本进行生化分析、病理学检查等。
四、试验结果与分析1. 试验结果经过90天的喂养期，实验组和对照组大鼠在食欲、活动能力、体态等方面均无明显差异。
在体重增长方面，两组大鼠也未出现显著差异。
血液样本和肌肉样本的生物学分析结果显示，两组大鼠的生理生化指标均处于正常范围。
2. 结果分析通过对试验结果的分析，我们可以得出Myostatin基因编辑牛肉在亚慢性毒性方面并未对大鼠产生明显的负面影响。
大鼠的食欲、活动能力、体态及生理生化指标均无明显异常，这表明Myostatin基因编辑牛肉在短期内对大鼠的健康并未产生不良影响。
五、讨论与结论本试验通过90天的大鼠亚慢性毒性试验，探讨了Myostatin 基因编辑牛肉的安全性。
急性、慢性和亚慢性毒性实验
急性、慢性和亚慢性毒性实验急性毒性试验（一）经典的急性致死性毒性试验通过试验得到化合物引起动物死亡的剂量—反应关系并求得LD50（ LC50）1、实验动物常用的实验动物是小鼠或大鼠。
一般受试动物应是雌、雄各半；若雌、雄动物对待测化学物毒性的敏感程度有明差异，则应分别求出各自的LD50;如果试验是为畸形试验做剂量准备，也可仅做雌性动物的 LD50 试验。
小动物每组 10 只，狗等大动物可每组 6 只。
2、染毒剂量设计首先要了解化学毒物的结构式、分子量、常温常压下的状态、纯度、杂质成分与含量、溶解度、挥发度、PH 等理化性质。
对于新的受试化学物，找出与受试化学毒物结构与理化性质近似的化学物的毒性资料，并以文献资料中相同的动物种系和相同接触途径所测得的LD50（LC50）值作为受试化学物的预期毒性中值，先用少量动物，以较大的剂量间隔（一般按几何级数）染毒，找出找出10%~90%（或0％~100％）的致死剂量范围，然后在这个剂量范围内设几个剂量组。
改良寇氏法最好设 5 个剂量组，每组 10 只动物，雌雄各半，剂量组要求以等比级数设置。
根据以下公式计算出剂量分组：i=（lgLD90-lgLD10）／（n-1）或：i=（lgLD100-lgLD0）／（n-1）式中 i 为组距（相邻的两个剂量组对数剂量之差）;n 为设计的剂量组数。
有的毒性较小，此时可不再求其LD50,而应进行限量试验。
在用大鼠或小鼠进行试验时，一般用20只动物，雌雄各半。
单次染毒剂量一般限定为5g/kg （体重），对于食品毒理学试验，限量要求为15g/kg（体重）。
如果实验动物无死亡或仅有个别动物死亡（死亡率低于50%），则可得出LD50大于限量的结论。
3、观察染毒后一般要求观察14天，依据14天内动物的总死亡情况计算LD50。
在实际工作中，依据受试物有关测试规程要求确定观察期的长短。
观察内容包括：（1）动物死亡情况：包括动物死亡数及各自的死亡时间。
亚慢性、慢性毒性及其评价方法
• 在卫生毒理学实际工作中，蓄积作用试验多用小 鼠或大鼠为实验动物，一般以死亡为指标，其K 值计算公式如下： K= LD 50 (n）/LD 50 (1) LD 50 (n)表示引起一半动物死亡的累积总剂量 LD 50 (1)表示引起一半动物死亡的一次剂量 意义：K值越小，表示化学物的蓄积毒性越大
功能蓄积可能是
❑ 由于贮存体内的化学物或其代谢产物的数 量极微，不能检出物质的蓄积 ❑ 或者是由于每次机体接触化学物之后所引 起的损害累积所致
蓄积作用的检测有两类方法
• 理化方法：应用化学分析或其他技术测定 化学物进入机体以后，在体内含量变化的 过程 该方法可确定化学物的半减期，故可 作为检测物质蓄积的方法
慢性毒性的剂量选择
• 阴性对照组 • 低剂量组 亚慢性阈剂量1/100 • 中剂量组 亚慢性阈剂量1/50～1/10 • 高剂量组 亚慢性阈剂量1/5~1/2 • 组距：2~5倍，最低不小于2倍
染毒组剂量的选择可参考三组数据
一是以亚慢性阈剂量1/5-1/2剂量为慢性毒
性试验的最高剂量，以这一阈剂量的1/501/10为慢性毒性试验的预计阈剂量组，并以 其1/100 为预计的慢性无作用剂量组
Ⅲ 生物半减期法 ➢ 生物半减期法是用毒物动力学原理阐明 外源化学物在机体内的蓄积作用特征。
四、局部毒作用
• • • • • • • 1.皮肤原发性刺激试验 2.皮肤致敏反应试验 3.光致敏反应 4.光刺激试验 5.眼刺激试验 6.其他粘膜刺激试验 7.替代（体外）试验
二、慢性毒性作用 （chronic toxicity)
（一）概念 慢性毒性：是指实验动物或人长期 （甚至 终生）反复接触外源化学物所产生的毒性 效应。
• 慢性毒性试验的试验期限，应依受试物的 具体要求和实验动物的物种而定 • 如用大鼠试验期限可为1年，用狗则试验期 限可1～2年 • 慢性毒性试验可终生接触受试物 • 如果慢性毒性试验与致癌试验结合进行， 则实验动物染毒时间最好接近或等于动物 的预期寿命
生物学评价试验要求样板2017
公司名称样品名称生物学评价试验要求1. 要求1.1 细胞毒性：细胞毒性反应应不大于X级。
1.2 皮内反应：试验样品与溶剂对照平均记分之差应不大于X。
1.3 皮肤刺激：试验样品的原发性刺激指数应小于X。
1.4迟发型超敏反应：试验样品应无迟发型超敏反应。
1.5 热原：在试验条件下，3只家兔体温升高均应低于0.6℃，并且3只家兔体温升高总和应低于1.3℃，无热原反应。
1.6 与血液相互作用试验：1.6.1 血栓形成：样品与对照比，无统计学差异或优于对照，如有差异，样品与对照的百分比在85%-115%之间。
1.6.2 凝血：样品与对照比，无统计学差异或优于对照，如有差异，样品与对照的百分比在85%-115%之间。
1.6.3 血小板：样品与对照比，无统计学差异或优于对照，如有差异，样品与对照的百分比在85%-115%之间。
1.6.4 血液学：样品与对照比，无统计学差异或优于对照，如有差异，样品与对照的百分比在85%-115%之间。
1.6.5 补体系统：样品与对照比，无统计学差异或优于对照，如有差异，样品与对照的百分比在85%-115%之间。
1.6.6 溶血：试验样品的溶血率应小于5%。
1.7 急性全身毒性：在试验观察周期内，试验样品应无急性全身毒性反应。
1.8植入试验：植入后试验样品组和对照材料组的局部生物学反应相比较，应无显著性差异。
1.9亚急/亚慢/慢性毒性试验：试验样品应无亚急/亚慢/慢性毒性反应，且试验样品组和对照组相比较，应无显著性差异。
1.10 眼刺激：试验样品应不引起眼刺激反应。
1.11 口腔刺激：试验样品的刺激指数应不大于X。
1.12 阴道刺激：试验样品的刺激指数应不大于X。
1.13 阴茎刺激：试验样品的刺激指数应不大于X。
1.14 直肠刺激：试验样品的刺激指数应不大于X。
注：企业根据被检样品的性质和风险类别选择X值。
1.15 遗传毒性1.15.1 体外哺乳动物细胞基因突变试验：在试验条件下，试验样品的体外哺乳动物细胞基因突变试验结果应为阴性。
亚慢性毒性试验
亚慢性毒性试验2.3.9.1 目的（1)检测消毒剂较长期染毒对实验动物的毒性作用及其靶器官，并确定其最大未观察到有害作用剂量。
（2)为慢性毒性和致癌试验的剂量设计提供依据。
2.3.9.2 实验动物一般用啮齿类动物，首选大鼠。
所用大鼠应为 4周～6 周龄者。
全部试验至少需用 80 只动物。
2.3.9.3 试验分组将实验动物随机分为4组(3个剂量组和1个对照组)，每组20只动物，雌雄各半。
选择受试物剂量时，高剂量组应出现明显的毒性反应，但不引起死亡，如果出现动物死亡应不超过 10%；中间剂量组应可观察到轻微的毒性效应；低剂量组应不引起任何毒性效应(属未观察到有害作用剂量)。
至于具体的剂量选择，可考虑高剂量为LD50的1/20~1/5，高、中、低3个剂量间的组距以3倍~5倍为宜，最低不小于2倍。
另以受试物溶剂代替受试物进行试验，作为阴性对照组。
2.3.9.4 操作程序（1）采用灌胃方式或将受试物掺入饲料经口染毒。
（2）灌胃法每天灌胃1次，每周称体重，并按体重调整受试物给予量。
如受试物掺入饲料时，应定期称饲料消耗量，计算消毒剂摄入量。
（3）试验期为3个月(90d)，末次染毒后24h检测各项观察指标，然后处死实验动物，做病理学检查。
2.3.9.5 观察指标观察指标，可因消毒剂毒理作用不同而异，一般至少包含以下方面。
（1）临床观察：观察动物中毒表现，每周称量体重1次，食物消耗量至少1次~2次。
（2)血液学检查：包括血红蛋白含量、红细胞数、白细胞及其分类计数、血小板数、网织红细胞数等。
（3)血液生物化学检查：例如天冬氨酸氨基转移酶、丙氨酸氨基转移酶、碱性磷酸酶、尿素氮、肌酐、血清总蛋白和白蛋白、总胆固醇、总胆红素等。
必要时，可根据所观察到的受试物毒性效应，或与受试物化学结构相似物质的毒性作用，选择其他一些生化指标。
（4)脏器重量：测量主要脏器(如肝、肾、肾上腺、睾丸等)的脏器重量和脏器系数。
（5)病理学检查：实验结束时，处死所有动物，进行系统解剖和肉眼观察，并将主要器官和组织（如心、肺、肝、肾、脾、脑、肾上腺、睾丸、卵巢、胃肠和系统解剖时发现的异常组织等）固定、保存。
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重复接触全身毒性（亚急性/亚慢性/慢性全身毒性）
试验声明
由____________________公司生产的________________，检测编号__________，在进行重复接触全身毒性（亚急性/亚慢性/慢性全身毒性）试验时，按临床最高剂量_____________（单位为 g/kg体重、mL/kg体重或cm2/cm2人体表面积等等）的___倍换算为大鼠/小鼠剂量_____________（单位为 g/kg体重、mL/kg体重或cm2/cm2表面积等等），接触途径为植入/腹腔/静脉/其他适宜途径:__________，接触方式为一次接触/每周7天接触/其他： ，接触周期为_____________。
若测试样品以供试液方式接触，则需要浸提，浸提比例： ，浸提温度： ，浸提时间： ，浸提介质： 。
其他需要说明问题：无/其他： 。
注：本声明采用限度试验（即采用一种适宜的试验样品剂量进行的单剂量组试验，以判定是否存在毒性危害），若采用多个剂量组来判定毒性反应，另外特殊注明。
_________________________公司（盖章）
___年___月___日。