丝状真菌
丝状真菌
丝状真菌（霉菌）分离筛选方法霉菌生长在偏酸性有机质丰富的环境中，种类多，形态各异，细胞结构多样。
霉菌是一些丝状真菌统称，同酵母菌一样不是分类学的名词。
一.丝状真菌（霉菌）分离筛选1.培养基：1.1 PDA 培养基： 马铃薯一葡萄糖培养基（同酵母）并添加80%乳酸数滴（5mL/L ）或0.05 %去氧胆酸钠以抑制细菌生长，葡萄糖改为蔗糖。
注：土壤适于马丁或马玲薯一葡萄糖培养基 ，河泥 霉变材料 生物膜适用于查氏 马丁培养基或PDA 培养基1.2 察氏培养基：蔗糖30g/L FeSO 4 0.01g/L NaNO 32.0g/L MgSO 4 0.5g/L KC1 0.5g/L K 2HPO 4 1.0g/L PH6.7-7.01.3马丁培养基： 葡萄糖10g/L 蛋白胨5g/L KH 2PO 41g/L MgSO 40.5g/L 孟加拉红（0.1%）3.3mL 灭菌后使用前加入。
临用时每升培养基加入 1.0%链霉素 3.0mL PH 自然。
1.4特定培养基：橘皮培养青霉 甜酒曲培养根霉。
2.分离纯化：混菌和涂布法将样品梯度稀释（10-4、10-5、10-6），混菌和涂布于平板，25-28℃倒置培养3-7d ， 挑取不同典型单菌落孢子或菌丝进行反复划线纯化。
据菌落质地、颜色是否纯培养物，若有杂菌重复纯化一次。
对于形成固定菌落的（青霉 曲霉等）可用稀释平板混菌法分离纯化，菌落不定型蔓延繁殖的（根霉 毛霉），两菌落及易接触混杂，分离时采取较高稀释度或以培养16-24h 内生长菌丝接种。
根霉菌分离筛选：属于毛霉目，蔓延繁殖，没有一定的菌落形态，易与其他霉菌混生，故分离时采取大稀释度，早移植，可在培养基添加0.1℅去氧胆酸钠，防止蔓延。
可利用形态特征鉴别。
样品：酒药 培养基：葡萄糖豆芽汁培养基（豆芽汁100mL ，酵母膏2g 葡萄糖3g PH 自然。
豆芽汁制备：黄豆100g ，加水1000mL ，煮30-40min ，取汁备用）。
丝状真菌定量方法
丝状真菌定量方法
丝状真菌定量方法是一种用于测定样品中丝状真菌数量的科学技术方法。
以下列举了几种常用的丝状真菌定量方法：
1. 真菌培养方法：将样品接种在含有适宜培养基的培养皿中，以促进真菌生长。
经过一定时间后，可以通过观察菌落数量、形态和颜色的变化，来定量检测丝状真菌数量。
2. 过滤膜法：将样品通过过滤膜，然后将过滤膜置于含有适宜培养基的培养皿中。
经过一段时间后，可以通过观察过滤膜上真菌菌落的形成情况，来定量检测丝状真菌数量。
3. 分子生物学方法：使用分子生物学技术，如PCR（聚合酶
链反应）或实时荧光定量PCR，来检测样品中丝状真菌的特
定基因序列。
根据目标基因序列的检测结果，可以定量评估丝状真菌的存在情况和数量。
4. 基于荧光信号的定量方法：使用荧光标记的探针结合真菌特定的核酸或蛋白质分子，来检测样品中的丝状真菌。
通过读取荧光信号的强度或数量，可以定量评估丝状真菌的存在和数量。
以上所列举的方法仅为常用的丝状真菌定量方法之一，实际的选择应根据具体的研究目的和样品类型来确定。
丝状真菌的分类和临床意义
丝状真菌的分类和临床意义丝状真菌是一类单细胞真菌，常见于环境中的土壤、水体、植物和动物体内，它们的菌丝结构类似毛茸茸的线状物，因此得名为丝状真菌。
丝状真菌广泛存在于自然界中的各种生态系统中，包括陆地和海洋环境。
它们对于土壤生态系统的结构和功能发挥着重要的作用，并且对其它生物的生长和分解有显著的影响。
此外，丝状真菌还具有一定的临床意义，它们可以引起人类和动物的感染和疾病。
担子菌类包括蘑菇、牛肝菌等，它们的菌丝具有多核细胞和细胞小器官。
担子菌类真菌的特点是产生担子架、担子和孢子，孢子一般位于担子顶端。
这些菌类主要分布在陆地的森林、草地和湿地以及淡水和海洋等环境中。
它们对生态系统的物质循环和生物多样性的维持起着重要作用。
子囊菌类包括酵母菌和霉菌等。
酵母菌是一种单细胞真菌，主要通过无性生殖产生分裂孢子。
酵母菌广泛存在于自然界中，例如果实中常见的酵母菌Saccharomyces cerevisiae，可以用于发酵食品和酿造啤酒。
霉菌则是一种多细胞真菌，它们的菌丝通常呈现分枝状。
霉菌通常通过产生分生孢子进行繁殖，这些孢子可以通过风、水和动物传播。
霉菌广泛分布在土壤、植物和动物体内，它们在分解有机物质和生物降解等方面起着重要作用。
丝状真菌对人类和动物的健康具有一定的临床意义。
它们可以引起真菌感染，尤其是对免疫系统虚弱的人群。
丝状真菌感染主要包括浅部真菌感染和深部真菌感染。
浅部真菌感染通常发生在体表和黏膜表面，例如皮肤感染（如癣菌感染）、口腔念珠菌病、阴道念珠菌感染等。
这些感染通常由丝状真菌的孢子或菌丝直接接触皮肤或黏膜引起，常见的致病菌包括白色念珠菌（Candida albicans）等。
深部真菌感染则是指真菌进入体内，侵入内脏器官或血液循环系统。
典型的深部真菌感染包括肺曲霉病、念珠菌血症等。
这些感染通常发生在免疫系统受损、器官移植、长期使用抗生素或化疗等情况下，丝状真菌通过呼吸道、消化道或直接侵入伤口进入体内。
丝状菌名词解释
丝状菌名词解释丝状菌是一类真菌，其特点是菌体呈丝状，分生孢子在生长过程中形成菌丝。
丝状菌广泛分布于自然界中，包括土壤、水体、空气、植物、动物等各种环境中。
丝状菌在生态系统中扮演着重要的角色，它们能够分解有机质，促进土壤肥力的提高，同时也是许多植物和动物的病原体。
丝状菌的分类丝状菌属于真菌界，包括了多个属和种。
其中最常见的属包括链霉菌属、放线菌属、真菌丝属等。
这些菌属的分类依据主要是其形态特征、生长习性、生理生化特征等。
丝状菌的分类研究对于深入了解其生物学特性、生态学功能以及应用价值具有重要意义。
丝状菌的形态特征丝状菌的形态特征是其分类的重要依据之一。
丝状菌的菌体通常呈丝状，由许多细胞组成。
菌丝的长度和直径不一，通常为微米级别。
在生长过程中，菌丝会分支，形成复杂的菌丝网络。
丝状菌的分生孢子也是其形态特征之一，分生孢子通常呈球形或卵圆形，大小为微米级别。
丝状菌的生长习性丝状菌的生长习性是其分类和应用的重要依据之一。
丝状菌的生长需要适宜的环境条件，包括温度、湿度、光照等因素。
丝状菌通常是革兰氏阳性菌，可以利用各种有机物质作为碳源和能源。
丝状菌的生长速度较慢，需要较长时间才能形成成熟的菌落。
丝状菌的生理生化特征丝状菌的生理生化特征是其分类和应用的重要依据之一。
丝状菌的生理生化特征包括代谢途径、酶系统、物质转运等方面。
丝状菌的代谢途径包括糖代谢、脂肪代谢、氨基酸代谢等。
丝状菌的酶系统包括各种水解酶、氧化酶、过氧化物酶等。
丝状菌的物质转运包括吸收、排泄、运输等。
丝状菌的应用价值丝状菌具有广泛的应用价值，在医药、农业、食品等领域中得到了广泛的应用。
丝状菌可以产生各种抗生素、激素、酶类等生物活性物质，被广泛应用于医药领域。
丝状菌可以分解有机质，提高土壤肥力，被广泛应用于农业领域。
丝状菌可以制作各种发酵食品，如酱油、啤酒、豆腐等，被广泛应用于食品领域。
总结丝状菌是一类重要的真菌，其形态特征、生长习性、生理生化特征等方面具有重要的分类和应用价值。
2.4 丝状真菌的特征及营养方式
思考题：
1. 丝状真菌生活史中产生菌丝变态 和组织体有怎样的生物学意义？
2. 名贵中草药---冬虫夏草的形成过 程中，丝状真菌发挥了什么样的 作用？
菌环
菌网
菌环捕捉线虫
菌环和菌网：捕虫霉目和一些半知菌类的真菌用 于捕捉线虫或原生动物的特化的菌丝结构。
9
菌丝形成的组织体
菌索
菌核
子座
菌丝细胞相互结合形成具有特定功能的组织。 菌索: 特殊结构和运输功能； 菌核: 休眠体及营养物质的储藏体，抵御不良环境； 子座: 发育出各种繁殖的结构。
10
气生菌丝的特化形态:无性孢子
分生孢子头 分生孢子器 分生孢子座 分生孢子盘 产无性孢子的子实体
Байду номын сангаас11
气生菌丝的特化形态：有性孢子
闭囊壳
子囊壳
子囊盘
产有性孢子的子实体（子囊果）
12
丝状真菌的营养方式
根据丝状真菌的营养来源，主要分为四种。 腐生：绝大部分的真菌从死亡的动植物残体上获取养分； 寄生：在宿主体内生活，并从宿主体内摄取营养； 共生：不同的生物共同生活，如真菌与植物根系的共生菌根，
4
丝状真菌的细胞形态和构造
菌丝：丝状真菌的营养体是 丝状物，单个丝状物称 为菌丝(2～10 μm)；菌 丝相互交错成菌丝体。
5
菌丝类型：无隔菌丝和有隔菌丝
无隔菌丝：菌丝中没有 横隔膜，内有许多核； 有隔菌丝：菌丝由横隔膜 分隔成成串的多细胞；
封闭隔 多孔隔 单孔隔 桶式隔
6
菌丝类型：营养菌丝和气生菌丝
真菌与藻类形成的地衣； 捕食：借助于菌环菌网等特殊结构捕杀线虫等原生动物；
13
小结
特化的营养菌丝
丝状菌名词解释
丝状菌名词解释
丝状菌是一类真菌，其菌丝分布广泛，可以寄生在大多数生物体上，包括人类、植物等。
这类菌在细胞壁中含有高度的胆固醇，因此被称为“sterol-requiring fungi”。
丝状菌的生长是由孢子开始，孢子落在适宜的宿主上，开始长出细的菌丝，菌丝之间构成了菌丝网络。
如果有足够的营养和水分，它们就会长成菌丝群体，甚至形成肉眼可见的菌丝体。
丝状菌的结构可以分为菌落、菌丝和子实体三个层次。
菌落是指丝状菌在供给了充足营养的培养基上形成的可见团状物。
菌落的颜色、大小、形状等性质都是鉴别不同细菌的重要特征。
菌丝是指丝状菌所形成的类似细胞的结构，相互之间交织成网状菌丝网络。
子实体是指丝状菌繁殖后形成的独立结构，它们被认为是真正的细菌体。
子实体可以分为果实体和分生孢子两种。
果实体是一种多细胞之间共享的结构。
它们长成不同形状和大小的团状物，形状各异。
果实体中含有许多分生孢子。
分生孢子是一种负责繁殖作用的单细胞结构。
它们被封存在果实体内，当有适宜条件出现时，它们就会释放出来，开始生长繁殖。
丝状菌在医学上有重大的研究价值。
它们是一类产生各种药物的真菌，其中最具代表性的是青霉素。
此外，当人类免疫系统低下时，丝状菌会感染人体，引起各种疾病，包括肺炎和念珠菌病等。
总之，丝状菌是一类十分重要的微生物，不仅对人类医学发展有巨大的贡献，也可以作为研究生态环境等领域的重要工具使用。
丝状真菌 毒素检测 标准
丝状真菌毒素检测标准
丝状真菌是一类能够产生毒素的真菌，其中最常见的毒素是黄曲霉毒素、赭曲霉毒素和玉米赤霉毒素等。
为了保障食品安全，对食品中丝状真菌毒素的检测非常重要。
以下是一些常见的丝状真菌毒素检测标准：
1. GB 2762-2017《食品安全国家标准食品中污染物限量》：该标准规定了食品中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2、M1、M2的限量标准。
2. GB/T 5009.168-2002《食品中黄曲霉毒素的测定液相色谱-串联质谱法》：该标准规定了食品中黄曲霉毒素的测定方法，包括样品处理、提取、净化、定量等步骤。
3. GB/T 5009.170-2003《食品中赭曲霉毒素的测定高效液相色谱法》：该标准规定了食品中赭曲霉毒素的测定方法，包括样品处理、提取、净化、定量等步骤。
4. GB/T 5009.171-2003《食品中玉米赤霉毒素的测定气相色谱法》：该标准规定了食品中玉米赤霉毒素的测定方法，包括样品处理、提取、净化、定量等步骤。
5. AOAC Official Method 993.17《Milk and Milk Products-Liquid-Liquid Extraction of Aflatoxins》：该方法规定了乳和乳制品中黄曲霉毒素的提取方法。
以上标准是目前较为常见和权威的丝状真菌毒素检测标准，可以为食品生产和监管部门提供科学、有效的检测手段，保障食品安全。
食品微生物 第2章 丝状真菌—霉菌
双倍体只限于接合子。 d）存在同宗配合（同一菌体的菌丝可自身结合）和异宗配合（
两种不同质的菌才能结合）。 e）霉菌有性孢子包括：接合孢子、子囊孢子、卵孢子、担孢子
1. 卵孢子（oospore)
由大小不同的配子囊 结合后发育而成。 小配子囊称雄器；大 配子囊称藏卵器。 分类地位：卵菌纲
2.3.3丝状真菌——霉菌
引起物品霉变的真菌
什么是霉菌（mould、Mold）？
丝状 真菌（Filamentous fungi）
菌丝体发达而又不产生大型肉质子实体的真菌
分布与人类的关系 霉菌的形态结构 繁殖方式 食品中常见的霉菌
霉菌的分布
分布广泛 有机物==霉菌的踪迹
有机分解者 纤维素和木质素
孢子形态：圆形、柱形等。
举例：总状毛霉。
厚垣孢子
４.分生孢子(Canidinm):
形成特征：由分生孢子梗顶端细胞特化而成的 单个或簇生的孢子。 孢子形态：极多样。 举例：曲霉、青霉。
４.分生孢子(Canidinm):
☆无性孢子结构复杂的子实体
５.孢囊孢子 （sporangiospore）
)：
形成特征：形成于菌丝的特 化结构——孢子囊内。 孢子形态：近圆形。 举例：根霉、毛霉。
子囊壳
子囊盘
(Perthecium) (Apothecium)
菌丝的特化
菌丝球（mycelial bead）
丝状真菌在液体培养基中通气或振荡培养时，往往产 生菌丝球的特殊构造。有利于氧传递、营养物和代谢 产物的输送，有利于生长和产物形成。
霉菌菌丝的细胞结构
霉菌的细胞结构
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丝状真菌（霉菌）分离筛选方法 霉菌生长在偏酸性有机质丰富的环境中，种类多，形态各异，细胞结构多样。
霉菌是一些丝状真菌统称，同酵母菌一样不是分类学的名词。
一.丝状真菌（霉菌）分离筛选
1.培养基：
1.1 PDA 培养基： 马铃薯一葡萄糖培养基（同酵母）并添加80%乳酸数滴（5mL/L ）或0.05 %去氧胆酸钠以抑制细菌生长，葡萄糖改为蔗糖。
注：土壤适于马丁或马玲薯一葡萄糖培养基 ，河泥 霉变材料 生物膜适用于查氏 马丁培养基或PDA 培养基
1.2 察氏培养基：蔗糖30g/L FeSO 4 0.01g/L NaNO 3
2.0g/L MgSO 4 0.5g/L KC1 0.5
g/L K 2HPO 4 1.0g/L PH6.7-7.0
1.3马丁培养基： 葡萄糖10g/L 蛋白胨5g/L KH 2PO 41g/L MgSO 40.5g/L 孟加拉红
（0.1%）3.3mL 灭菌后使用前加入。
临用时每升培养基加入 1.0%链霉素 3.0mL PH 自然。
1.4特定培养基：橘皮培养青霉 甜酒曲培养根霉。
2.分离纯化：混菌和涂布法
将样品梯度稀释（10-4、10-5、10-6），混菌和涂布于平板，25-28℃倒置培养3-7d ， 挑取不同典型单菌落孢子或菌丝进行反复划线纯化。
据菌落质地、颜色是否纯培养物，若有杂菌重复纯化一次。
对于形成固定菌落的（青霉 曲霉等）可用稀释平板混菌法分离纯化，菌落不定型蔓延繁殖的（根霉 毛霉），两菌落及易接触混杂，分离时采取较高稀释度或以培养16-24h 内生长菌丝接种。
根霉菌分离筛选：
属于毛霉目，蔓延繁殖，没有一定的菌落形态，易与其他霉菌混生，故分离时采取大稀释度，早移植，可在培养基添加0.1℅去氧胆酸钠，防止蔓延。
可利用形态特征鉴别。
样品：酒药 培养基：葡萄糖豆芽汁培养基（豆芽汁100mL ，酵母膏2g 葡萄糖3g PH 自然。
豆芽汁制备：黄豆100g ，加水1000mL ，煮30-40min ，取汁备用）。
分离：颗粒菌体分散，梯度稀释至10-8 混菌法25℃ 16-20h ，观察有无菌丝生长，由于菌丝细短，颜色与培养基相似，不易发现，故在光线处斜视才能发现，用接种钩或菌种针挑挖菌丝一段（一小块），移植于斜面培养基25℃培养3d ， 鉴定：根据形态鉴别根霉，必要时通过生理生化予以验证。
性能测定：用米粉或麸皮固体培养测糖化霉活力，以定优劣。
黑曲霉分离筛选：
有固定菌落形态，一般分离法分离，曲霉分生孢子多，团聚紧密较难分散，制备孢子悬液时，加入万分之一至十万分之一月桂基磺酸钠（分散剂），玻璃珠打散效果也可。
黑曲霉糖化霉菌株，选用淀粉琼脂培养基或米曲汁 麦芽汁培养基（1-2℅淀粉），通过测量透明圈直径大小，代表糖化力高低。
种曲分散，梯度稀释至10-7 取不同稀释度涂布于平板，28-30℃培养1-2d ，待初生菌落，切忌长成分生孢子。
在菌落周围滴加碘液，挑取透明圈大的菌落转接于淀粉察氏培养基斜面，28-30℃培养5d.
性能测定：经固体麸皮培养基培养，测各菌株糖化酶活力。
二.产纤维素酶黑曲霉菌种的复壮
1.培养基：
麸皮汁培养基：麸皮150g 加适当水煮沸30min，两层纱布过滤，再加水过滤一次，两次并在一块，加水定溶至1000mL，加2℅琼脂粉，高压灭菌30min。
三角瓶麸皮培养基：麸皮15g，料水比1：1，拌和均匀高压灭菌，摇散，冷却备用。
2.黑曲霉菌种的复壮：
菌种退化指群体中退化个体在群体中占一定数量，表现生产性能的下降。
复壮是通过菌种活化孢子悬液制备初筛复筛等过程，从退化菌体找出未退化的个体。
2.1菌种活化：保存菌种分离前进行菌种活化，待长出孢子后再移植另一斜面，长出孢子后备用。
若新接菌种或新制菌种可省去活化过程。
培养基为麸皮汁斜面培养基，30℃培养至长满孢子后备用。
2.2孢子悬液的制备：生理盐水50mL/250mL三角瓶，高压灭菌，冷却后备用。
挑取菌种孢子1-2环接入三角瓶中，振荡30min，制成孢子悬液。
然后制成梯度孢子菌悬液至10-3 10-4 10-5 10-6 10-7
2.3初筛：取10-3 10-4 两个梯度涂布于麸皮汁平板，30℃培养3-5d至单菌落形成。
选择生长快，菌落大小适中，孢子茂密，边缘整齐中间凸起的菌落涂片，显微镜观察，菌体大小均匀，菌丝粗壮菌落的中心孢子移接于斜面培养保存。
2.4复筛：退化菌种原始菌种初筛菌种三角瓶固体培养，接种从试管斜面接两环孢子，均匀后30℃培养箱培养，长出白色菌丝物料结饼时扣瓶一次，42h 停止培养，自然风干后测纤维素酶活力。
2.5结论：
初筛要保持足够的数量，避免漏掉优良菌株。
黑曲霉多数为诱变菌株，易出现
退化现象。
除对斜面定期复壮外，还可从高产发酵池中直接取样分离筛选优良
菌株。
三.米曲霉（酱油生产菌种）的纯化复壮
1.培养基：
1.1豆汁培养基：豆汁1000mL可溶性淀粉20g，MgSO
40.5g KH2PO
4
1.0g （NH
4
）
2SO
4
0.5g PH6.5-7.0
1.2酪素培养基：酪素 4.0g KH2PO
40.3g MgSO
4
0.5g FeSO
4
0.002g NaCl 1g
ZnCl2 .0015g CaCl2 0.002g PH6.5-7.0
1.3三角瓶培养基：100℅麸皮，加水比1：1.2,三角瓶装入20g/250mL，高压灭菌。
2.2孢子悬液的制备：生理盐水50mL/250mL三角瓶，高压灭菌，冷却后备用。
挑取菌种孢子1-2环接入三角瓶中，振荡30min，制成孢子悬液。
然后制成梯度孢子菌悬液至10-3 10-4 10-5 10-6 10-7
2.3初筛；酪素平板空培24-48h，无菌检查和蒸发表面水分。
将孢子悬液梯度稀释，取10-5 10-6 10-7涂布，30℃培养，随单菌落形成，菌落周围逐渐形成透明圈，培养56h进行观察，以D/d大小为初始-筛的依据，转接于斜面并编号，30℃培养72h，冰箱保存。
要求酪素用量相同，保持厚薄一致。
2.4复筛：
每支接三个三角瓶，28-30℃培养72h，期间摇瓶两次，扣瓶一次，取成熟种曲5g（三瓶的混合样），测定蛋白酶活力和孢子数。